一种含有GLP-1类似物和DPP-4抑制剂的药物组合物及其制备方法

摘要

本发明属于药物制备技术领域，公开了一种含有治疗有效量的胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类似物和二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制剂的药物组合物及其制备方法。该组合物可以有效预防、减缓以及治疗II型糖尿病，尤其可以有效控制血糖的浓度，因此也可以用于治疗与血糖浓度升高相关的疾病。此外，本发明的组合物可以降低GLP-1类似物和DPP-4抑制剂的使用剂量，从而有效降低它们的副作用，提高患者的耐受度。

说明书

技术领域

本发明涉及药物制备技术领域，具体涉及一种含有GLP-1类似物和DPP-4抑制剂的药物组合物及其制备方法。

背景技术

胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是由肠道细胞分泌，能促进胰岛素分泌的一类激素。人吃进食物后，肠道受到刺激就会分泌这种激素，从而降低血糖。为了将GLP-1制成药物用于临床，科学家对人体GLP-1的肽链进行了精准的修改，这样其半衰期就从2分钟延长到了13个小时，由此制成的长效人GLP-1类似物，名为“利拉鲁肽”。

利拉鲁肽，是丹麦诺和诺德公司研制出的一种治疗II型糖尿病的药物，是GLP-1的受体激动剂，作为一种皮下注射制剂，每日需注射一次，能起到良好的降低血糖和体重作用。其肽序为H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。利拉鲁肽于2010年FDA批准上市，商品名为诺和力（Victoza）。制剂规格为18mg/ml。

DPP-Ⅳ抑制剂通过抑制DPP-Ⅳ的活性，在提高GLP-1浓度，促使胰岛β细胞产生胰岛素的同时，降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖。与传统口服降血糖药不同，DPP-Ⅳ抑制剂的问世无疑为Ⅱ糖尿病患者控制血糖提供了新的选择。

DPP-Ⅳ抑制剂可单独用于治疗Ⅱ型糖尿病，亦可与其它传统口服糖尿病药物联合使用。临床研究表明：单用DPP-Ⅳ抑制剂可降低餐后血糖及HbA1c，改善胰岛β细胞功能，提高机体对胰岛素的敏感性。DPP-Ⅳ抑制剂具有良好的降血糖效果，而且不良反应轻微，不会引起体重增加及水肿，导致低血糖风险也非常小。

西格列汀，是一种新型降糖药二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂，可提高人体自身降低过高血糖水平的能力，是美国默克公司研制的一种治疗II型糖尿病的药物，2006年获得FDA批准上市。商品名为捷诺维。其结构为：

维格列汀是由瑞士诺华公司研发的一种DPP-4抑制剂，2008年2月获得EMA批准上市，其结构为：

沙格列汀，是美国百时美施贵宝公司研发的一种DPP-4抑制剂，2009年7月获得FDA批准上市，其结构为：

利那列汀，是德国勃林格殷格翰制药公司研发的一种DPP-4抑制剂，2011年5月获得FDA批准上市，其结构为：

阿格列汀，是日本武田制药公司研发的一种DPP-4抑制剂，2013年1月获得FDA批准上市，其结构为：

吉格列汀是韩国LG生命科学公司研发的一种DPP-4抑制剂，2012年6月在韩国上市，其结构为：

特力列汀，是日本三菱田边制药公司研发的一种DPP-4抑制剂，2012年8月在日本上市，其结构为：

目前利拉鲁肽为每天一次皮下注射给药，虽然利拉鲁肽肽序经过侧链十六烷酸修饰，延长了半衰期，但是由于利拉鲁肽属于GLP-1，在人体内会被DPP-4酶迅速降解，导致需要每天注射一次，胃肠道副作用等给病人造成了较大痛苦。

由于DPP-Ⅷ和DPP-Ⅸ与DPP-4属于同一酶家族，因此DPP-Ⅳ抑制剂在抑制DPP-Ⅳ的同时，也可能对这些酶产生抑制作用。

II型糖尿病是慢性和进行性疾病，起因于复杂的病理生理，涉及抗胰岛素性和胰岛素分泌受到损害的双重内分泌缺陷。II型糖尿病的治疗典型地起始于饮食和锻炼，而后进行口服抗糖尿病药的单疗法。对于许多患者，这些方案在长期治疗期间不能充分地控制血糖，导致在诊断之后几年之内的联合治疗的要求。然而，两种或多种口服抗糖尿病药物的共同处方对于许多患者可能产生复杂和很难遵循的治疗方案。

目前糖尿病治疗药物主要存在以下问题：疗效不佳，HbA1c随着病程进展升高；低血糖；患者心血管风险高。因此，需要找到安全性高、高疗效和低风险的药物制剂是当务之急。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，一方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类似物、治疗有效量的二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制剂、pH调节剂、等渗调节剂和防腐剂。

在本发明优选的实施方案中，GLP-1类似物为利拉鲁肽或其盐，DPP-4抑制剂选自西格列汀、维格列汀、沙格列汀、利那列汀、阿格列汀、特力列汀和吉格列汀中的一种或其可药用的盐，更优选为西格列汀、沙格列汀、利那列汀和阿格列汀中的一种或其可药用的盐，再优选为西格列汀、沙格列汀和利那列汀中的一种或其可药用的盐，最优选为西格列汀和利那列汀中的一种或其可药用的盐。

在本发明的药物组合物中，可药用的盐选自磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐、氢硫酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、谷氨酸盐和天冬氨酸盐。

在本发明优选的实施方案中，GLP-1的剂量为单独使用GLP-1的剂量的20%-100%，DPP-4抑制剂的剂量为单独使用DPP-4抑制剂剂量的20%-100%；GLP-1的剂量更优选为0.1-10mg/ml，再优选为0.1-5mg/ml，最优选为0.2-3.6mg/ml；DPP-4抑制剂的剂量更优选为0.1mg-100mg/ml，再优选为0.25-50mg/ml，最优选为0.25-20mg/ml。

在本发明的药物组合物中，pH调节剂选自盐酸、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠和磷酸氢二钠，优选选自磷酸氢二钠、碳酸钠和氢氧化钠。

在本发明的药物组合物中，等渗调节剂选自丙二醇、甘露醇、氯化钠、葡萄糖、果糖、氯化镁、聚乙二醇、甘油、乳糖、半乳糖和木糖醇，优选选自甘露醇和丙二醇。

在本发明的药物组合物中，防腐剂选自三氯叔丁醇、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐、间甲酚、苯酚中的一种或组合，优选为三氯叔丁醇、间甲酚、苯酚中的一种或组合，更优选为三氯叔丁醇。

在本发明优选的实施方案中，防腐剂的剂量为1-10mg/ml，等渗调节剂的剂量为5-20mg/ml，pH范围为7.0-9.0，优选为7.5-8.5，更优选为7.8-8.4。

在本发明一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物为注射剂剂型，制剂形式优选为安剖瓶或者预填充注射笔。

本发明另一方面还提供了制备本发明所述的药物组合物的方法，包括如下步骤：

1、称取处方量的防腐剂和等渗调节剂，加入到配料罐中；

2、加入适量注射用水完全溶解；

3、取适量注射用水将处方量的GLP-1类似物和DPP-4抑制剂完全溶解，加入到上述配料罐中；

4、用注射用水定容；

5、调节到目标pH值；

6、采用0.22μm滤膜过滤除菌，分装，制成注射液。

在本发明优选的实施方案中，组合物的剂量制备成以每天1次或者以合适的时间间隔的合适剂量存在，例如3天2次或者2天1次。

在本发明优选的实施方案中，组合物注射液的制备是在无菌条件下进行的。

与单独使用GLP-1类似物或者DPP-4抑制剂相比，本发明的包含GLP-1类似物和DPP-4抑制剂的药物组合物可以显著改善血糖。对于单独使用GLP-1类似物或者DPP-4抑制剂，通常剂量较高、肠道副作用较大、病人耐受性差、无法使所有的患者达到控制血糖目的。并且随着糖尿病的持续发展，糖尿病患者会出现许多并发症，如动脉血管硬化、足病（足部坏疽、截肢）、肾病（肾功能衰竭、尿毒症）、眼病（模糊不清、失明）、脑病（脑血管病变）、心脏病、皮肤病、性病等。与单独用药相比，本发明的药物组合物可以有效控制血糖浓度，使血糖水平降到6%水平以上。由此可知，本发明的药物组合物可以有效预防、减缓以及治疗II型糖尿病，尤其可以有效控制血糖的浓度，因此也可以用于治疗与血糖浓度升高相关的疾病。同时，由于本发明的药物组合物利用了GLP-1类似物的GLP-1活性，因此还可以有效降低患者的体重。

此外，本发明的组合物可以降低GLP-1类似物和DPP-4抑制剂的使用剂量，从而有效降低它们的副作用，提高患者的耐受度。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。

实施例1：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取300mg三氯叔丁醇，1500mg甘露醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取30mg利拉鲁肽，3000mg磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入0.1N氢氧化钠，调节溶液的pH值为8.0，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例2：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取3000mg三氯叔丁醇，2500mg丙二醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取1080mg利拉鲁肽，3000mg磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入0.1N氢氧化钠，调节溶液的pH值为8.4，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例3：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取3000mg三氯叔丁醇，2500mg丙二醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取600mg利拉鲁肽，600mg磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入0.1N氢氧化钠，调节溶液的pH值为8.4，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例4：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取3000mg三氯叔丁醇，5000mg丙二醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取600mg利拉鲁肽，600mg磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量10%碳酸钠水溶液，调节溶液的pH值为7.6，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例5：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取1500mg苯酚，4000mg甘露醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取600mg利拉鲁肽，600mg磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量10%碳酸钠水溶液，调节溶液的pH值为7.6，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例6：利拉鲁肽与利那列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取2000mg间甲酚，6000mg甘露醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取300mg利拉鲁肽，600mg利那列汀（以利那列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量10%碳酸钠水溶液，调节溶液的pH值为8.2，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例7：利拉鲁肽与沙格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取2000mg间甲酚，6000mg甘露醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取300mg利拉鲁肽，600mg沙格列汀（以沙格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量10%碳酸钠水溶液，调节溶液的pH值为8.0，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例8：利拉鲁肽与阿格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取2000mg间甲酚，6000mg甘露醇，加入150mL注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取300mg利拉鲁肽，600mg苯甲酸阿格列汀（以阿格列汀计算），加入50mL注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量10%碳酸钠水溶液，调节溶液的pH值为8.4，补充剩余注射水量定容，采用0.22μm滤膜过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共100支。

实施例9：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取200g三氯叔丁醇，600g甘露醇，加入15L注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取30g利拉鲁肽，45g磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入5L注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量0.1N氢氧化钠水溶液，调节溶液的pH值为8.4，补充剩余注射水量定容，过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共10000支。

实施例10：利拉鲁肽与西格列汀注射液的制备

1、注射液配方

2、制备工艺

在万级洁净室内及洁净室内的百级超净工作台上，称取300g三氯叔丁醇，450g甘露醇，加入15L注射用水搅拌溶解后，加入到配料罐中；称取75g利拉鲁肽，45g磷酸西格列汀（以西格列汀计算），加入5L注射用水溶解，加入到上述配液罐溶液中，搅拌溶解至溶液澄清，加入适量0.1N氢氧化钠水溶液，调节溶液的pH值为8.4，补充剩余注射水量定容，过滤除菌；分装至注射笔中，每支3ml，共10000支。

实施例11：稳定性检测

将本发明实施例1-10制备的利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液分别在强光高温条件下40℃放置5天和10天，然后分别取样，检测其纯度变化，溶液澄明度及细菌生长情况，检测结果如表1所示。

表1本发明提供的射液稳定性检测

由表1可知，本发明实施例1、实施例3，实施例6，实施例7及实施例10提供的利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液中利拉鲁肽纯度下降速度最慢。

取本发明实施例1、实施例6及实施例10提供的利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液在2-8℃温度，相对湿度60%贮藏条件下，进一步检测本发明提供的利拉鲁肽注射液的长期稳定性，溶液澄明度变化及细菌生长情况，检测结果如表2所示。

表2利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液稳定性考察结果

由表2可知，本发明实施例1、实施例6和实施例10提供的利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液在贮藏12个月后在含量、澄明度、及细菌生长情况均合格，质量稳定。

本发明其他实施例提供的利拉鲁肽注射液的检测结果与此相似。

综合表1和表2可知，本发明提供的利拉鲁肽注射液具有良好的稳定性，缓冲pH调节系统使本发明提供的利拉鲁肽注射液的pH维持在6～7.5之间，保证利拉鲁肽保存在最适pH条件下；且抑菌剂的使用使细菌无法生长，从而避免了细菌对利拉鲁肽的降解；表明pH调节剂和抑菌剂的使用保证了利拉鲁肽的稳定性。

实施例12：降糖效果检测

取本发明实施例10提供的利拉鲁肽与西格列汀注射液，进行降糖效果检测，取市售的利拉鲁肽注射液和捷诺维（磷酸西格列汀片）作为对照。

取雄性健康SD大鼠50只，体重200g～250g，清洁级。随机选取其中10只作为正常组，喂食基础饲料，用1.5mL注射用水灌胃。其余大鼠适应性喂养5d后，即开始喂食高脂饲料，配合普通饲料，7天后，过夜禁食，次日正常组用生理盐水代替链脲佐菌素腹腔注射，其余用链脲佐菌素以50mg/kg腹腔注射(用0.1mol/L的无菌柠檬酸缓冲液配制，pH值为4.5)，72小时后剪尾测血糖，以空腹血糖>11.1mmol/L作为糖尿病大鼠的造模成功标志。

造模成功后，分为正常组A；模型对照组B；口服给药磷酸西格列汀片每日早晚两次给药组C，每次2mg·Kg^-1；利拉鲁肽与西格列汀注射液颈背部皮下给药每周一次给药组D，每次0.4mg·Kg^-1；利拉鲁肽注射液颈背部皮下给药每日一次给药组E，每次0.6mg·Kg^-1。给药后第0周，1周，2周，3周，4周，5周，6周收集尾静脉血，用血糖仪检测血糖值，本实验各数据采用SPSS16.0软件进行处理分析，各组比较采用t检验，检测结果如表3所示。

表3实验大鼠血糖值（mmol/L)

组别动物数注射前注射1周注射2周注射3周注射4周注射5周注射6周A组10只5.1±1.05.2±1.15.3±1.55.3±1.35.5±2.05.6±2.55.4±1.4B组10只15.8±3.118.0±3.520.3±4.023.7±3.824.6±4.426.0±2.528.7±3.3C组10只17.3±2.213.8±1.312.2±1.29.8±2.08.7±1.47.6±1.76.0±2.1

D组10只17.5±1.59.6±2.07.9±2.56.8±1.16.0±1.05.2±1.54.8±1.0E组10只17.4±2.012.7±1.011.0±1.08.4±2.47.0±1.16.0±1.65.6±1.3

由表3可知，与A组相比，B组P<0.01，有显著性差异；与B组相比，C、D、E组P<0.01，有显著性差异；与C组相比，D、E组P>0.05，无显著性差异，总降糖效果相当。但从上表可以看出，利拉鲁肽与西格列汀注射液与利拉鲁肽注射液降糖效果要稍快于口服磷酸西格列汀。

从表3还可以看出，虽然本发明提供的利拉鲁肽与西格列汀注射液与市售现有降糖注射液相比，降糖效果相当，都具有显著的降糖效果。但是本发明提供的利拉鲁肽与西格列汀注射液降糖速度稍快于市售的口服磷酸西格列汀片和利鲁拉肽注射液。

本发明其他实施例提供的利拉鲁肽与DPP-4抑制剂注射液的检测结果与实施例10的结果相似。