化合物及其用于治疗炎症和调节免疫反应的用途

摘要

本发明提供化合物及其药物组合物。所述化合物具有免疫调节活性和/或抗炎活性。

说明书

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求2012年3月8日提交的美国临时申请系列号 61/608,347的优先权，所述申请全文以引用的方式纳入本文。

背景技术

人对损伤、癌症、微生物侵入等反应时，进行炎性反应以控制所述 病理状态并且以开始修复过程。在炎症过程中，多种免疫细胞——包括T 淋巴细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞——被募集至感染部位并产生细胞因 子以促进免疫应答。在这些细胞因子中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是介导 所述免疫防御的一种重要促炎性蛋白。

除急性期反应外，TNF-α已被表明参与多种慢性疾病——包括肿瘤 发生和类风湿性关节炎(RA)——的发展。TNF-α生成失调被证明参与 肿瘤发生——包括肿瘤生长¹、细胞增殖²和侵入³的起始——的不同阶 段。对于肿瘤细胞增殖，TNF-α上调特定生长因子从而介导恶性生长。 所述细胞因子促进有利于血管生长的血管发生，以支持肿瘤迁移，并因此 在肿瘤转移中起到关键功能。例如，胶质母细胞瘤迁移和金属蛋白酶的诱 导在对TNF-α效应的应答中显著增强⁴。

TNF-α介导的慢性疾病发病机理的实例包括类风湿性关节炎和炎性 肠病。类风湿性关节炎患者在滑膜组织中有低级隐性炎症。已经知道， TNF-α在发炎关节处过量生成导致对关节软骨和周围骨的慢破坏。

在感染的急性期中——例如在脓毒病的情况下，公知TNF-α不受控 制的生成可造成对宿主的有害效应。脓毒病是非冠心病加强监护病房中 的第二常见死亡诱因，和高收入国家中的第10大死亡诱因⁵。导致脓毒 病的感染的临床结果主要与细菌性内毒素(例如脂多糖[LPS])过度刺 激宿主免疫细胞——特别是单核细胞或巨噬细胞——有关^6-8。LPS过度 刺激的巨噬细胞还产生高水平的介导物，例如白细胞介素-1(IL-1)、IL-6 和TNF-α⁹。这些介导物牵涉在脓毒病发病机理之中，并且被发现是对宿 主死亡起作用的因素。开发定向抑制TNF-α生成的新型疗法可有助于协 助对上述这些急性病和慢性病的治疗。

在暴露于病原体和内毒素后，细胞内信号传递通路——包括特异性 的激酶和转录因子——被活化，以诱导TNF-α表达。有丝分裂原激活蛋 白(MAP)激酶和核因子κB(NF-κB)参与病原体诱导的TNF-α表达已 被证实^10-12。分枝杆菌、禽流感和HIV-1Tat蛋白是通过MAP激酶的 TNF-α诱导物^13-15。

在人中有三种已知的MAP激酶亚型——包括细胞外信号调节的激酶 -1/2(ERK1/2)、p38MAP激酶和c-Jun N末端激酶(JNK)^16-20。它们可 通过导致转录因子例如NF-κB活化的蛋白质磷酸化级联转导多种细胞外 刺激。NF-κB活化在细胞因子——包括IL-6和TNF-α——生成中是至关 重要的^13-15。该过程通过如下方式发生：经I-κB激酶(IKK)信号体复 合物在Ser32和Ser36磷酸化I-κB，然后是蛋白体降解²¹以及因此的I-κB 和NF-κB亚基解离²²。然后，活化的NF-κB从细胞质移位至细胞核，它 在细胞核中结合至反应性基因的启动子区中的κB结合位点，导致促炎介 导物的转录起始。因为NF-κB的不适当活化与很多人疾病相关²³，它已 被认为是治疗介入的可能靶标。

目前，在类风湿性关节炎、牛皮癣、银屑病关节炎和强直性脊柱炎 的治疗中，单克隆TNF-α抗体在疾病进展的控制中起着重要的作用。 同样地，在患有克罗恩病的患者中进行了几个随机双盲安慰剂对照临床 试验。这些临床试验的结果表明，TNF-α抗体(英夫利昔单抗)对所述 患者具有有益的效果²⁴。

此外，最近的研究表明，炎症应答(包括TNF-α的生成)可能在 心血管疾病(CVD)的发病机理中起重要作用。已经表明，TNF-α可 能使动脉粥样硬化生成和动脉硬化斑块失去稳定性从而导致它们破裂， 导致CVD患者的心肌梗塞或中风。

在微生物感染期间，巨噬细胞被激活以产生细胞因子来介导免疫应 答。取决于侵入的微生物及其生物学特性，宿主的免疫系统利用不同组 的细胞因子来局部地和全身地对抗侵入的病原体。

一个很好的例子是分枝杆菌感染，其中促炎细胞因子TNF-α在宿 主生存中起着至关重要的作用，所述TNF-α通过使炎症扩散以通过形 成肉芽肿而将所述微生物包含在其中²⁵。通过在接受TNF-α抗体治疗 的患者中重新出现肺结核，示例出TNF-α在控制分枝杆菌生长中的保 护性作用²⁶。

虽然促炎细胞因子的效果是保护性的，但是它们的过量生成可能对 宿主会有不利效应。事实上，不受控制的促炎细胞因子的诱导可引起并 发症，如低血压、器官衰竭和甚至死亡^27，28。实际上，内毒素血症患者 中的TNF-α的过量生成导致严重的有害症状。在慢性疾病如类风湿性 关节炎中，TNF-α的过表达已知是损伤因素，且与进行性关节破坏有关 ²⁹。

近年来，已开发了免疫疗法，旨在中和TNF-α及抑制其不需要的 促炎效应。这些包括可溶性TNF-α受体(Enbrel)和TNF-α抗体(英 夫利昔单抗)。尽管它们在阻止疾病进展方面具有新颖性和效能，但是 它们是非常昂贵的治疗方案。此外，非甾体类抗炎药物(NSAID)(包 括阿司匹林、布洛芬和吲哚美辛)在改善与炎性疾病有关的急性和慢性 疼痛是众所周知的，所述炎性疾病例如类风湿性关节炎和炎性肠病。然 而，它们在类风湿性关节炎和相关自身免疫性疾病晚期的治疗中没有效 果。同时，这些药物与严重的不利效应有关，包括胃肠刺激、严重出血 和骨髓抑制。因此，需要用于治疗炎性疾病和免疫障碍的疗法。

发明内容

本发明提供了具有免疫调节活性和/或抗炎活性的化合物以及包含 这些化合物的组合物。

在一个实施方案中，本发明提供了式(I)所代表的化合物，及其 盐：

其中

R₁-R₅和R₁₀-R₁₄独立地为H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基 (例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、仲 丁基或叔丁基)、C₂至C₆烯基、C₂至C₆炔基、C₁至C₆烷氧基、卤素、 氨基、烷基氨基、酰基、氰基、硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、 -COCH₃或-COOH；

R₆和R₇独立地是H、直链或支链的C₁至C₆烷基、卤素、氨基、 烷基氨基、酰基或-COOH；

R₈和R₉独立地是H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基、烷氧基、 卤素、氨基、烷基氨基、酰基或-COOH；

A是氧原子、碳原子、硫原子或氮原子；并且

所述烷基、烯基、炔基、烷基氨基和烷氧基可被取代或未被取代。

在某些实施方案中，本发明提供了基本上由式(I)所代表的化合 物，条件是下列中的至少一个是真的：

a)R₁选自H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基、C₂至C₆烯基、 C₂至C₆炔基、C₁至C₆烷氧基、卤素、氨基、烷基氨基、酰基、氰基、 硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、-COCH₃或-COOH；

b)R₂、R₁₂和R₁₃中至少一个选自H、直链或支链的C₁至C₆烷基、 C₂至C₆烯基、C₂至C₆炔基、卤素、氨基、烷基氨基、酰基、氰基、 硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、-COCH₃或-COOH；

c)A是碳原子、氧原子、硫原子或氮原子；和

d)R₆和R₇中至少一个不是H。

在一个具体实施方案中，本发明提供了具有下列结构的化合物A1：

在另一具体实施方案中，本发明提供具有以下结构的化合物A2：

有利的是，在一个实施方案中，本发明的化合物可以抑制LPS诱 导的TNF-α生成。

本发明还涉及包含可药用载体和本发明化合物的药物组合物。在一 个优选的实施方案中，所述组合物含有本发明化合物作为活性成分。

本发明还涉及使用所述化合物或包含它们的组合物用于抑制动物 的炎症的方法，所述动物优选哺乳动物，包括人类。本发明还涉及使用 所述化合物或包含所述化合物的组合物用于调节动物的免疫活性的方 法，所述动物优选哺乳动物，包括人类。

附图说明

图1示出了化合物A1、化合物A2和升麻消旋体(Cimiracemate) A(Cim A)的化学结构。

图2(A-C)示出了化合物A1、化合物A2和Cim A对LPS诱导的 TNF-α生成的抑制。将PBMac细胞与(A)25和50μg/ml A1或(B) 25和50μg/ml A2或(C)25和50μg/ml Cim A孵育18小时，然后加入 10ng/ml LPS再孵育24小时。收集培养物上清液并用酶联免疫吸附试 验(ELISA)测定TNF-α生成。所示的结果是至少三个使用从不同捐 赠者获得的细胞的独立实验的平均值±标准偏差(S.D.)。与对照组相 比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

图3示出了化合物A1、化合物A2和Cim A几乎没有细胞毒性效 应。与对照组相比，PBMac细胞与不同浓度的化合物的孵育在细胞的 代谢活性方面没有产生显著的差异。在48小时的时程中，通过 MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四唑溴化物)试验测定化合物 A1、A2和Cim A(25-75ug/ml)对PBMac的细胞毒性效应。

具体实施方式

本发明提供了具有有益的免疫调节和/或抗炎活性的化合物。本发 明还提供了包含这些化合物的组合物以及用于治疗受试者中的炎症和 免疫病症的方法。

化合物

在一方面，本发明提供具有有效抗炎和免疫调节作用的化合物。

在一个实施方案中，本发明提供了式(I)所代表的化合物，及其 盐：

其中

R₁-R₅和R₁₀-R₁₄独立地为H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基 (例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、仲 丁基或叔丁基)、C₂至C₆烯基、C₂至C₆炔基、C₁至C₆烷氧基、卤素、 氨基、烷基氨基、酰基、氰基、硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、 -COCH₃或-COOH；

R₆和R₇独立地是H、直链或支链的C₁至C₆烷基、卤素、氨基、 烷基氨基、酰基或-COOH；

R₈和R₉独立地是H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基、烷氧基、 卤素、氨基、烷基氨基、酰基或-COOH；

A是氧原子、碳原子、硫原子或氮原子；并且

所述烷基、烯基、炔基、烷基氨基和烷氧基可被取代或未被取代。

在某些实施方案中，本发明提供了基本上由式(I)所代表的化合 物，条件是下列中的至少一个：

a)R₁选自H、OH、直链或支链的C₁至C₆烷基、C₂至C₆烯基、 C₂至C₆炔基、C₁至C₆烷氧基、卤素、氨基、烷基氨基、酰基、氰基、 硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、-COCH₃或-COOH；

b)R₂、R₁₂和R₁₃中至少一个选自H、直链或支链的C₁至C₆烷基、 C₂至C₆烯基、C₂至C₆炔基、卤素、氨基、烷基氨基、酰基、氰基、 硝基、卤代烷基、羰基、三氟甲基、酯、-COCH₃或-COOH；

c)A是碳原子、氧原子、硫原子或氮原子；和

d)R₆和R₇中至少一个不是H。在某些实施方案中，R₁-R₁₄的烷基 独立地是C₁-C₄烷基、C₁-C₃烷基、乙基或甲基，所有这些都可任选地 被取代。在某些实施方案中，R₁-R₁₄中至少一个选自H、OH、OCH₃或CH₃。

在一个实施方案中，A是氧原子。在一个实施方案中，R₆-R₉中一 个或多个是H。

在一个实施方案中，R₁、R₂和R₁₃中至少一个是OH。在另一个 实施方案中，R₁和R₂都是OH。在一个实施方案中，R₁为OCH₃。在 一个实施方案中，R₂是H。在另一个实施方案中，R₁₂和R₁₃之一或两 者是OH。

在一个实施方案中，R₁-R₁₄中一个或多个不是H。在另一个实施 方案中，R₃-R₁₄中一个或多个不是H。

在一个具体的实施方案中，本发明提供了具有以下结构的化合物 A1：

在另一个具体的实施方案中，本发明提供了具有以下结构的化合物 A2：

有利地，本发明的化合物具有抗炎和免疫调节活性。在某些实施方 案中，本发明的化合物抑制TNF-α生成。由于TNF-α的过量生成是有 毒的，并且可导致严重的并发症，限制这种极强的炎症反应可对临床治 疗中的患者有利。

此外，本发明的化合物使MAP激酶和/或NF-κF激活作用无效。 TNF-α、MAP激酶和NF-κB是在细胞因子生成和一些免疫反应调节过 程中发挥关键作用的介导物。因此，本发明的化合物也可以用来调节 TNF-α的下游效应因子。

此外，本发明的化合物抑制5-脂氧合酶(5-LOX)活性和阻断白三 烯例如LTB₄的生物合成。据报道，5-LOX抑制阻断了大量促炎介导物 的生物合成和活性，所述促炎介导物包括脂氧素、白三烯类、前列腺素 和血栓烷。特别是，已经记载了5-LOX的抑制阻断了白三烯的生物合 成。因此，本发明化合物用于预防、逆转或缓解由白三烯诱导的病理症 状。

如在本发明中举例说明的，化合物A1和化合物A2有效地降低LPS 诱导的TNF-α生成。

本文使用的术语“烷基”指的是含有碳和氢的直链或支链饱和单价 基团。在一些实施方案中，烷基含有1至约8个碳原子，且可包含可为 直链的具有1-4或1-3个碳原子的烃基。烷基的代表性实例包括，但不 限于甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基和戊基。

术语“烯基”或“亚烯基”分别指的是有至少一个双键的单价或二 价烃基。所述烯基或亚烯基可为环状、支链非环状或直链非环状的。在 一些实施方案中，烯基或亚烯基只含有一个双键。在其他的实施方案中， 烯基或亚烯基含有两个以上双键。在其他实施方案中，烯基或亚烯基可 为主链上含有2-8个碳原子的较低级的烯基或亚烯基，例如乙烯基、丙 烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基等。

术语“炔基”或“亚炔基”分别指的是有至少一个三键的单价或二 价烃基。在一些实施方案中，炔基或亚炔基只含有一个三键。在其他实 施方案中，炔基或亚炔基含有两个以上三键。在其他实施方案中，炔基 或亚炔基可以是主链上含有2-8个碳原子的较低级的炔基或亚炔基，例 如乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、己炔基等。

术语“烃”或“烃基”是指只由碳和氢元素组成的有机化合物或基 团。烃基包括烷基、烯基和炔基部分。

术语“酰基”意指-C(O)R基团，其中R是氢、烷基或环烷基、或 杂环烷基。在一个实施方案中，基团-C(O)R的R基团是C₁-C₄烷基。 酰基的例子包括，但不限于甲酰基、乙酰基和乙基羰基。

术语“卤素”意指氟、氯、溴和碘。

术语“羟基”意指基团-OH。

本文使用的术语“取代的”是指化合物或化学部分的至少一个氢原 子被第二化学部分替代。取代基的非限制性实例是本文公开的示例性化 合物和实施方案中的那些，以及卤素；烷基；烯基；炔基；羟基；烷氧 基；氨基；卤代烷基(例如三氟甲基)；和-COOH。除非另有具体说明， 本文公开的所有化学基团都可被取代。例如，本文所述的“取代的”烷 基、烯基或炔基部分，是被第二化学部分取代的基团，所述第二化学部 分例如烃基部分、卤素、烷氧基和-COOH。取代的烷基包括，但不限 于，卤代烷基、羟基烷基、羧基烷基和氨基烷基。

术语“卤代烷基”意指被一个或多个相同或不同的卤原子取代的烷 基。卤代烷基的代表性实例包括，但不限于，-CH₂Cl、-CH₂Br、-CF₃、 -CH₂CH₂Cl和-CH₂CCl₃。

本文使用的术语“氨基”指的是-NH₂。

术语“烷基氨基”指的是基团-NHR或-NR₂，其中每个R独立地 是烷基。在某些实施方案中，烷基氨基的烷基是C₁-C₄烷基。烷基氨基 的代表性实例包括，但不限于，甲氨基、(1-甲基乙基)氨基、甲氨基、 二甲氨基、甲基乙基氨基和二(1-甲基乙基)氨基。

术语“羟基烷基”指的是被一个或多个，优选一个、两个或三个羟 基取代的本文所定义的烷基。在某些实施方案中，羟基烷基是被一个或 多个羟基取代的C₁-C₆烷基，或优选C₁-C₄烷基。羟基烷基的代表性实 例包括，但不限于羟甲基、2-羟乙基、2-羟丙基、3-羟丙基、1-(羟甲 基)-2-甲基丙基、2-羟丁基、3-羟丁基、4-羟丁基、2，3-二羟基丙基、 2-羟基-1-羟甲基乙基、2，3-二羟基丁基，3，4-二羟基丁基和2-(羟甲基) -3-羟基-丙基，优选2-羟乙基、2，3-二羟基丙基和1-(羟甲基)2-羟基 乙基。

本文使用的术语“烷氧基”指的是基团-OR_X，其中R_X是C₁-C₆烷基。在一个实施方案中，R_X是C₁-C₄烷基。示例性的烷氧基包括，但 不限于，甲氧基、乙氧基和丙氧基。

在某些实施方案中，本发明提供了由式(I)所代表的基本纯的化 合物。本文使用的“基本纯的”指的是超过99％的纯度。

本发明的化合物可以从植物中分离的或可以被合成的。本文所使用 的“分离的”指已从任何它们可天然存在的环境中移除的化合物。例如， 分离的化合物X不指存在于化合物X可从其中分离的植物中的化合物 X。在优选的实施方案中，本发明的化合物是至少75％纯的，优选至少 90％纯的，更优选超过95％纯的，最优选是超过99％纯的(基本纯的)。

本发明还包含式(I)的化合物的立体异构体。术语“立体异构体”包 含本文公开的所有对映异构体/立体异构体上纯的和对映异构体/立体异 构体上富集的化合物。

在一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物的对映异构体形 式。本发明化合物的对映异构体形式基本不合另一对映异构体(即，对 映异构体过量)。换句话说，″R″构型的化合物基本上不含″S″构型的 化合物，因此为″S″构型的对映异构体过量。相反，″S″构型的化合物 基本不合″R″构型的化合物，因此为″R″构型的对映异构体过量。在本 发明的一个实施方案中，对映异构体化合物为至少约80％对映异构体 过量。在一个优选实施方案中，所述化合物为至少约90％对映异构体 过量。在一个更优选实施方案中，所述化合物为至少约95％对映异构 体过量。在一个更加优选的实施方案中，所述化合物为至少约97.5％对 映异构体过量。在一个最优选的实施方案中，所述化合物为至少约99％ 对映异构体过量。

在某些实施方案中，式(I)的化合物不包括记载于国际申请 PCT/IB2009/055970和国际申请PCT/IB2011/002582中公开的任何化合 物。

在一个具体实施方案中，式(I)的化合物不包括具有以下结构的升麻 消旋体A(Cim A)：

在某些实施方案中，式(I)的化合物不包括下列化合物：

1)式(X)的化合物

其中R₁是H，R₂是CH₃，且R₃是H；

其中R₁是CH₃，R₂是H，且R₃是H；

其中R₁是CH₃，R₂是H，且R₃是OCH₃；

其中R₁是H，R₂是CH₃，且R₃是OCH₃；或

其中R₁是H，R₂是H，R₃是H；

2)式(XI)的化合物

其中R₁是OCH₃，R₂是OH，R₃是OCH₃，且R₄是OH；

其中R₁是H，R₂是OH，R₃是OCH₃，且R₄是OH；

其中R₁-R₃独立地是OCH₃，且R₄是OH；

其中R₁-R₂是OCH₃，且R₃-R₄是OH；或

其中R₁-R₂是H，R₃是OCH₃，且R₄是OH；和

其中R₁是H，R₂是CH₃。

在某些实施方案中，式(I)的化合物不包括记载于以下参考文件 中的化合物：He等，Cimicifuga species identification by high  performance liquid chromatography-photodiode array/mas  spectrometric/evaporative light scattering detection for quality control of  black cohosh products，Journal of Chromatography A，1112(2006)241-254； 日本专利申请公开号JP2005-029571；Mizushina等，Petasiphenol：a DNA  polymeraseλinhibitor，Biochemistry(2002)，4114463-14471；Burdette等， Black Cohosh(Cimicifuga Racemosa L.)protects against  menadione-induced DNA damage through scavenging of reactive oxygen  species：bioassay-directed isolation and characterization of active  principles，J.Agric.Food Chem.(2002)，50，7022-7028；Fache等Total  synthesis of cimiracemate B and analogs，Tetrahedron 61(2005)5261-5266； Mizushina等，Some anti-chronic inflammatory compounds are DNA  polymeraseλinhibitors，Biochemistry Phamacology 66(2003)，1935-1944； Takeuchi等，Structural relationship of curcumin derivatives binding to  the BRCT domain of human DNA polymeraseλ，Genes to Cells(2006)11， 223-235；和Phytochemistry(2002)Vol.61No.4pages 409-413。

本发明的化合物可以用本领域已知的技术制备，所述本领域已知的 技术包括记载于国际申请PCT/IB2009/055970和国际申请 PCT/IB2011/002582和以下出版物的技术，所述出版物包括He等， Cimicifuga species identification by high performance liquid  chromatography-photodiode array/mas spectrometric/evaporative light  scattering detection for quality control of black cohosh products，Journal  of Chromatography A，1112(2006)241-254；日本专利申请公开号 JP2005-029571；Mizushina et al，Petasiphenol：a DNA polymeraseλ inhibitors，Biochemistry(2002)，4114463-14471；Burdette et al，Black  Cohosh(Cimicifuga Racemosa L.)protects against menadione-induced  DNA damage through scavenging of reactive oxygen species： bioassay-directed isolation and characterization of active principles，J. Agric.Food Chem.(2002)，50，7022-7028；Fache et al.Total synthesis of  cimiracemate B and analogs，Tetrahedron 61(2005)5261-5266；Mizushina  et al，Some anti-chronic inflammatory compounds are DNA polymeraseλ inhibitors，Biochemistry Phamacology 66(2003)，1935-1944；Takeuchi et  al.，Structural relationship of curcumin derivatives binding to the BRCT  domain of human DNA polymeraseλ，Genes to Cells(2006)11，223-235； 和Phytochemistry(2002)Vol.61No.4pages 409-413，以上所有参考文献 都以引用的方式全文纳入。

炎性疾病和/或免疫障碍的治疗

本发明提供了本发明化合物以及包含这些化合物的组合物用于治 疗炎性疾病和免疫障碍的用途。在某些实施方案中，本发明提供了对炎 症、变应性反应、与细胞增殖、新生血管发生(neoangiogenesis)相关的 疾病，以及心血管疾病的治疗。在一个具体实施方案中，本发明的化合 物可用于治疗关节炎。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗炎性疾病和免疫障碍的 方法，其中所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效量的式(I) 的化合物，或其前药或代谢物。

在优选实施方案中，本发明涉及化合物A1和A2用于治疗炎症和 免疫障碍的用途。

本文使用的术语“治疗”或其任何语法变化，包括但不限于，减轻 或改善疾病或病症的症状，和/或降低疾病或病症的严重性。

本文使用的术语“有效量”指的是能够治疗或改善疾病或病症或者 能够产生预期治疗效果的量。

本文使用的术语“受试者”或“患者”，描述生物，包括哺乳动 物如灵长类动物，可向其提供使用本发明的组合物的治疗。可得益于所 述公开的治疗方法的哺乳动物物种包括，但不限于，猿、黑猩猩、猩猩 、人类、猴；驯化的动物，如狗、猫；家畜如马、牛、猪、绵羊、山羊 、鸡；和其它动物如小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠。

在一个实施方案中，需要治疗的受试者被诊断患有可根据本发明治 疗的炎性疾病或免疫障碍。在一个实施方案中，本发明包括：诊断受试 者是否患有可根据本发明治疗的炎性疾病或免疫障碍。

本发明的化合物和药物组合物可用于治疗或改善在任何疾病、健康 状况或病症——其中免疫和/或炎症的抑制是有益的——中的炎性症 状。其中本发明化合物和组合物可用于抑制不需要的免疫反应和炎症的 炎性疾病、病症或障碍，包括但不限于类风湿性关节炎以及关节或骨骼 肌系统的其他疾病、病症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑制是有利的。

而且，所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病有关的炎 症：动脉粥样硬化；动脉硬化；动脉粥样硬化性心脏病；再灌注损伤；心 跳停止；心肌梗塞；血管炎性病，包括脑血管疾病(中风)；呼吸窘迫综 合征和这样的其他心肺疾病、病症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑制将 是有利的。

另外，所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病有关的炎 症：消化性溃疡；溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠应激综合征、其他炎性肠 病、以及这样的其他胃肠道疾病、病症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑 制将是有利的；肝纤维化；肝硬化和这样的其他肝疾病、病症或障碍，即 其中免疫和/或炎症抑制将是有利的；甲状腺炎和这样的其他腺疾病、病 症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑制将是有利的；以及肾小球肾炎和这 样的其他肾和泌尿系统疾病、病症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑制将 是有利的。

另外，所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病有关的炎 症：创伤后炎症；败血症性休克；这样的传染性疾病，即其中免疫和/或 炎症抑制将是有利的；这样的炎症并发症和手术副作用，即其中免疫和/ 或炎症抑制将是有利的；骨髓移植和这样的其他移植并发症和副作用，即 其中免疫和/或炎症抑制将是有利的；炎症并发症和/或免疫并发症以及基 因治疗的副作用，例如由于病毒载体的感染；以及与获得性免疫缺陷综合 征(AIDS)相关的炎症。

在某些实施方案中，本发明的化合物和药物组合物可用于治疗或改 善哮喘和哮喘相关的疾病(例如，运动诱发的哮喘)、鼻炎、慢性阻塞 性肺病、间质性肺病、慢性荨麻疹、特应性皮炎、变应性真菌性疾病、 鼻息肉病和鼻窦疾病。

此外，本发明的化合物和药物组合物可用于治疗或改善非哮喘相关 的疾病，包括偏头痛、呼吸道合胞体病毒细支气管炎(respiratory  syncytial virus postbronchiolitis postbronchiolitis)、全身性肥大细胞增 多症、囊性纤维化、胰腺炎、外阴阴道念珠菌病、癌症、动脉粥样硬化、 嗜酸细胞膀胱炎、中耳炎、被膜挛缩(capsular contracture)和嗜酸性胃 肠疾病(eosinophilic gastrointestinal disorders)。

此外，本发明的化合物和药物组合物可用于治疗或改善疾病，所述 疾病包括脑血管及心血管疾病，如心肌梗塞、急性心肌梗塞、中风、动 脉粥样硬化、血栓症、冠状动脉血管成形术(coronary angioplasty)、 主动脉瘤、血管炎症、内膜增生、高脂血症依赖性主动脉瘤 (hyperlipidemia-dependent aortic aneurysm)；囊性纤维化肺病；睡眠 呼吸障碍、阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)；和慢性阻塞性肺疾(COPD)。

此外，本发明的化合物和药物组合物可用于治疗或改善疾病，所述 疾病包括肺疾病包括如哮喘、慢性支气管炎、和相关的呼吸道阻塞疾病； 变态反应和超敏反应例如变应性鼻炎、接触性皮炎、变应性结膜炎等； 炎症例如关节炎或炎性肠病；疼痛；皮肤病例如银屑病、特应性湿疹等； 心血管疾病例如心绞痛、心肌缺血、高血压、血小板聚集等；由免疫学 病因或化学(环孢霉素)病因所诱导的缺血引起的肾功能不全；偏头痛 或丛集性头痛；眼病例如葡萄膜炎；化学刺激、免疫刺激或传染性刺激 引起的肝炎；外伤或休克状态例如烧伤、内毒素血症等；同种异体移植 排斥；慢性肺病，如囊性纤维化、支气管炎和其它小的和大的气管疾病； 和胆囊炎。

此外，所述化合物和组合物也可用于抑制与炎症无关但与巨噬细胞 和T细胞相关的免疫反应方面。这些化合物和组合物能抑制巨噬细胞和 T细胞活性，包括但不限于，巨噬细胞抗原递呈活性、巨噬细胞细胞因 子生成、T细胞细胞因子生成、T细胞粘附活性，T细胞增殖等。因此， 所述肽、肽衍生物和组合物可用于压制或抑制体液和/或细胞免疫反应。

所述化合物和组合物还可用于通过减少单核细胞和淋巴细胞的数 量来治疗或改善单核细胞和白细胞增殖性疾病，如白血病。

本发明的化合物和药物组合物还可用于在移植天然的或人造的细 胞、组织和器官的情况下预防和/或治疗移植物排斥，所述细胞、组织 和器官例如角膜、骨髓、器官、晶状体、起搏器、天然和人造的皮肤组 织等。

所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病相关的炎症：耳 炎和这样的其他耳鼻咽喉疾病、病症或疾患，即其中免疫和/或炎症抑制 将是有利的；皮炎和这样的其他皮肤疾病、病症或疾患，即其中免疫和/ 或炎症抑制将是有利的；牙周病和这样的其他牙科疾病、病症或疾患，即 其中免疫和/或炎症抑制将是有利的。

另外，所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病相关的炎 症：后葡萄膜炎、中间葡萄膜炎、前葡萄膜炎、结膜炎、脉络膜视网膜炎、 葡萄膜视网膜炎、视神经炎、眼内炎症例如视网膜炎和黄斑囊样水肿、交 感性眼炎、巩膜炎、色素性视网膜炎、退行性眼底病的免疫和炎症成分、 眼外伤的炎症成分、感染造成的眼部炎症、增生性玻璃体视网膜病变、急 性缺血性视神经病变、过度疤痕形成例如青光眼滤过手术后、抗眼移植物 的免疫和/或炎症反应以及这样的其他免疫和炎症相关的眼疾病、病症或 疾患，即其中免疫和/或炎症抑制将是有利的。

而且，所述化合物和组合物还可用于治疗或改善与以下疾病相关的炎 症：自身免疫疾病、病症或障碍，即其中在中枢神经系统(CNS)以及在 任何其他器官中免疫和/或炎症抑制都将是有利的；帕金森病；治疗帕金 森病的并发症和/或副作用；AIDS相关痴呆复合病(HIV相关脑病)；德 维克病；西德纳姆舞蹈；阿耳茨海默病和这样的其他中枢神经系统退行性 疾病、病症或障碍，即其中免疫和/或炎症抑制将是有利的；中风的炎症 成分；小儿麻痹症后期综合征；精神病症的免疫和炎症成分；脊髓炎；脑 炎；亚急性硬化性全脑炎；脑脊髓炎；急性神经病变；亚急性神经病变； 慢性神经病变；Guillaim-Barre综合征；西德纳姆舞蹈病；重症肌无力； 假脑瘤；唐氏综合征；亨廷顿氏病；肌萎缩性脊髓侧索硬化症；中枢神经 系统(CNS)压抑或CNS创伤或脑血管意外(中风)或CNS感染或缺氧 缺血的炎症成分；肌萎缩和营养不良的炎症成分；以及这样的中枢和外周 神经系统疾病、病症或障碍相关的免疫和炎症，即其中免疫和/或炎症抑 制将是有利的。

还在另一个实施方案中，本发明的化合物和组合物可用于在已失去免 疫赦免的免疫赦免部位例如脑、眼和睾丸恢复免疫赦免。

治疗组合物和制剂

本发明还提供了治疗性或药物组合物，所述组合物包含可与可药用 载体结合的形式的本发明化合物。在上下文中，所述化合物可以是例如 分离的或基本纯的。术语“载体”是指与所述化合物一起给药的稀释剂、 佐剂、赋形剂或媒介物。这种药物载体可以是无菌的液体，例如水和油， 所述油包括石油的那些(例如矿物油)、植物油(例如花生油、大豆油 和芝麻油)、动物油或合成来源的油。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油 溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。用于治疗或缓解中 枢神经系统中的炎症的特别优选的药物载体是可穿透血-脑屏障的载 体。本文使用的载体不包括以天然形态存在的天然植物材料。

本发明还涉及所述化合物的前药和代谢物的用途。本文使用的术语 “前药”指的是本发明化合物或其可药用形式的代谢前体。通常，前药 包含化合物的功能性衍生物，所述衍生物在给予受试者时可能是无活性 的，但在体内可以很容易地转化为活性代谢化合物。用于选择和制备合 适的前药衍生物的常规步骤记载于，例如，H.Bundgaard，Elsevier 1985 年编辑的“Design of Prodrugs”中。优选地，本发明的前药提高了本发 明化合物的所需特性，所述所需特性包括但不限于溶解度、生物利用度 和稳定性。因此，如果需要的话，在本方法中采用的化合物可以以前药 的形式递送。以常规操作方法或在体内通过修饰所述化合物中存在的官 能团使得所述修饰物被裂解为母体化合物，来制备本发明中采用的化合 物的前药。

术语“代谢物”是指具有药理活性的产品，包括例如，通过本发明 的化合物在受试者体内代谢而产生的活性中间体或最终产物。例如，代 谢物可能来自所述被给药的化合物在受试者体内合成代谢和/或分解代 谢过程，所述合成代谢和/或分解代谢过程包括但不限于氧化作用、还 原作用、水解作用、酰胺化作用、脱酰胺基作用、酯化作用、脱酯作用、 酶解作用等。

通常通过制备本发明化合物的放射性标记的同位素(例如，¹⁴C 或.³H)，将其以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)胃肠外给予 动物(如大鼠、小鼠、豚鼠、猴子)或给予人，允许足够的时间进行代 谢(通常约30秒至约30小时)，并从尿、血液或其它生物样本中分离 其转化产物来鉴定代谢物。因为这些产品被标记，所以很容易被分离(通 过使用能够结合存在于代谢物中的表位的抗体来分离其它产物)。可以 用常规的方式测定代谢物的结构，例如，通过MS、LC/MS或NMR分 析。通常，根据药物代谢研究领域中技术人员熟知的技术进行代谢物分 析。

适宜的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、 大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、 干燥过的脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要的话， 所述治疗组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。这 些组合物可以采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、胶囊剂、粉末、缓释制 剂等形式。所述组合物可与传统的粘结剂和载体配制，所述载体如甘油 三酯。合适的药物载体的实例记载于E.W.Martin的“Remington′s  Pharmaceutical Sciences”中。这样的组合物包含治疗有效量的所述治 疗组合物，以及适量的载体，以提供适于向患者给药的形式。制剂应该 适合给药模式。

在一个实施方案中，根据常规程序将所述组合物配制成适于向人类 局部注射给药的药物组合物。通常，用于局部注射给药的组合物是在无 菌等渗水性缓冲液形式的溶液。在必要时，所述组合物还可以包括增溶 剂和局部麻醉剂，局部麻醉剂如利多卡因，以减轻注射部位的疼痛。通 常，以单独或混合在一起的单位剂量形式提供所述成分，例如，作为冻 干粉末或在密闭容器中的无水浓缩物，所述密闭容器例如标明活性试剂 的量的安瓿或囊剂。在通过注射给予所述组合物的情形下，可提供一安 瓿的注射用无菌水或盐水，使得所述成分可在给药前混合。

本发明的治疗组合物或药物组合物可以被配制成中性或盐形式。可 药用的盐包括与无氨基基团形成的那些，例如衍生自盐酸、磷酸、乙酸、 草酸、酒石酸等的那些，以及与无羧基基团形成的那些，如衍生自钠、 钾、铵、钙、铁的氢氧化物，异丙胺，三乙胺，2-乙基氨基乙醇，组氨 酸、普鲁卡因等的那些。

本发明还提供了所述化合物的修饰，使得所述化合物被给予受试者 后能够更加稳定，即，给药后，与未修饰的化合物相比，其具有更长时 间的效力。这样的修饰是本领域技术人员公知的，例如，微胶囊化等。 治疗特定的疾病、病症或障碍有效的本发明的治疗组合物或药物组合物 的量取决于该疾病、病症或障碍的性质，并且可以通过常规临床技术测 定。通常，剂量范围为约0.001mg/kg-约500mg/kg。

此外，可任选地采用体外实验以帮助鉴定最佳剂量范围。制剂中待 采用的精确剂量也取决于给药途径，和疾病、病症或障碍的严重性，并 且应该根据执业医生的判断和每个患者的情况来决定。可以从来自体外 或动物模型测试系统的剂量-反应曲线推断有效剂量。例如，为了基于 大鼠研究得到的数据来获得对于人的有效mg/kg剂量，将大鼠有效 mg/kg剂量除以六。

例如，合适的单位剂量可为约0.01至约500mg、约0.01至约300 mg、约0.01至约200mg、约0.01至约100mg、约0.01至约50mg、 约0.01至约30mg、约0.01至约20mg、约0.01至约10mg、约0.01 至约5mg、约0.01至约3mg、约0.01至约1mg、或约0.01至约0.5mg。 这样的单位剂量可被一天给予超过一次，如一天两次或三次。

本发明还提供了包含一个或多个装满一种或多种本发明药物组合 物的成分(如化合物、载体)的容器的药物包装或试剂盒。

本发明的化合物也可以配制为符合中药惯例。通过常规临床技术， 治疗具体的疾病、病症或障碍有效的制剂的组成和剂量，取决于所述疾 病、病症或障碍的性质。

处方量的中药可被轻易地制作为适于给予人或动物的任何形式的 药物。合适的形式包括，例如，酊剂、煎剂和干提出物。这些可口服， 通过静脉注射或粘膜应用。活性成分也可以被配制成胶囊、颗粒、粉末、 小丸剂、锭剂、栓剂、口服液剂、巴氏消毒胃肠混悬注射剂(pasteurized  gastroenteric suspension injection)、小量注射剂或大量注射剂、冷冻粉 末注射剂、巴士消毒粉末注射剂等。上述所有方法是本领域技术人员知 晓的、记载于书中的以及中药的执业医生经常使用的。

在优选实施方案中，将本发明的化合物制备成分散单位，如颗粒剂 (如湿颗粒剂，干颗粒剂)；胶囊剂、扁囊剂或片剂，各自包含预定量 的活性成分。

与载体材料结合以产生单一剂量形式的活性成分的量根据病症类 型和待治疗的受试者的不同而改变。通常，治疗组合物含有约5％-约 95％的活性成分(w/w)。更具体地，治疗组合物含有约20％(w/w)-约 80％、或约30％-约70％的活性成分(w/w)。

通过将草药悬浮在醇溶液中来制备酊剂，例如酒剂或液剂。在悬浮 一段时间之后，可将所述液体(醇溶液)给药，例如，一天两次或三次， 每次一茶匙。

煎剂是常用形式的草药制剂。传统上在陶罐中制备煎剂，但也可在 玻璃容器、釉质容器或不锈钢容器中制备。可在水中浸泡该配方一段时 间，然后煮沸，然后温火慢煮至水的量减少为，例如，一半。

提出物是药草的必要组分的浓缩制剂。通常，通过将药草悬浮在适 当选择的溶剂中(通常，所述溶剂为水、乙醇/水混合物、甲醇、丁醇、 异丁醇、丙酮、己烷、石油醚或其它有机溶剂)，从药草中提取所述必 要组分。可通过浸渍、渗滤、再渗滤、逆流萃取、涡轮萃取方法或通过 二氧化碳超临界(温度/压力)提取而进一步有利于提取过程。在过滤 除去药草碎片后，可将提取的溶液进行进一步蒸发从而浓缩而产生软浸 膏(流浸膏(extractum spissum))和/或通过喷雾干燥、真空烘箱干燥、 流化床干燥或冷冻干燥最后得到干提出物，流浸膏。软浸膏或干提出物 可进一步溶解于合适的液体中得到用于给药的理想浓度，或加工成如丸 剂、胶囊剂或注射剂等的形式。

以下是说明实施本发明的程序和实施方案的实施例。该实施例不应 被解释为限制性的。除非另有说明，所有百分比是重量百分比，并且所 有溶剂混合物比例都是按体积计。

材料和方法

化学品

来自大肠杆菌(E.coli)的内毒素(脂多糖，LPS)购自Sigma且 用作TNF-α表达的诱导物。地塞米松(Sigma)用作对照药物以抑制 TNF-α的LPS诱导。

细胞培养和原代血液巨噬细胞的分离

如在我们之前报告中记载的，通过Ficoll-Paque(Amersham  Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)密度梯度离心法，从香港红十字会 提供的健康捐赠者血液的血沉棕黄层中分离出人外周血单核细胞 (PBMC)。简言之，血沉棕黄层在以每分钟3000转(rpm)旋转15 分钟，以分离血细胞和血浆。对热灭活的血清进行过滤以备后用。

用磷酸盐缓冲盐水(PBS)以1∶1的比例稀释细胞层。将稀释后的 细胞缓慢上样到Ficoll-Paque上，以2300rpm离心20分钟将单核细胞 与红细胞分离。移出单核细胞层，用RPMI 1640培养液洗涤直至上清 液澄清。

最后，将这些细胞重悬于补充有5％自体血清的RPMI 1640培养液 中，培养1小时。然后移除非黏附细胞，在37℃在5％的二氧化碳(CO₂) 中将剩余的黏附细胞再培养24小时。

分离黏附单核细胞并将其接种到组织培养板上再孵育7-14天，以 区分原代血液巨噬细胞(PBmac)和原代血液单核细胞。

酶联免疫吸附试验(ELISA)

在不同时间间隔收集用Cim A、化合物A1或化合物A2预处理的 或未用Cim A、化合物A1或化合物A2预处理的LPS-处理的PBMac 培养物上清液于-70℃下保存。通过对细胞因子具有特异性的ELISA试 剂盒(R&D系统，Minneapolis，MN)测量分泌的TNF-α的水平。

实施例1

这个实施例表明本发明的化合物具有优异的抗炎活性。如图1所 示，化合物A1、化合物A2和升麻消旋体A(Cim A)在LPS浓度为 10ng/ml下显著地抑制LPS诱导的TNF-α蛋白质生成，分别抑制了 26±15％、67±10％和50±19％(图2A至C)。特别是，在浓度50μg/ml 时，化合物A2抑制LPS诱导的TNF-α生成的活性比Cim A高34％。 并且，如图3所示，化合物A1、化合物A2和Cim A几乎没有细胞毒 性效应。

本文中引用的包括出版物、专利申请和专利的所有参考文献，通过 引证的方式纳入到相同的程度，仿佛每篇参考文献是单独地和具体地指 明以引用的方式被纳入且在此以其全文的方式阐述。

用于描述本发明上下文的术语“一”和“一个”和“该”及类似的 指示词，被解释为涵盖单数和复数，除非在此另有说明或上下文明显矛 盾。

本文中数值范围的列举仅旨在分别指代落在所述范围内每个单独 的速记方法，除非在此另有说明，每个单独数值被纳入到说明书中，犹 如它被在此单独列举。除非另有说明，在此提供的所有精确数值代表对 应的近似值(例如，关于具体因素或测量方法提供的所有精确示例性数 值也可被看作提供相应的近似测量值，在适当的情形下由“约”修饰)。

在此使用的任何和所有实例，或示例性语言(如“如”)，仅旨在更 好地说明本发明，并不构成对本发明范围的限制，除非另有说明。说明 书中的语言不应被解释为任一元素是本发明的实践中必不可少的，除非 明确说明。

在此说明书中本发明的任一方面或实施例使用的关于一个元素或 多个元素的术语，如“包含”、“具有”、“包括”或“含有”，旨在为“由...... 组成”、“基本由......组成”、或“实质上包含”具体元素或多个元素的 本发明相似的方面或实施方案提供支持，除非另有说明或与上下文明显 矛盾(例如，作为在此描述的包含具体元素的组合物，应该理解为也描 述了由该元素组成的组合物，除非另有规定或上下文明显矛盾)。

应该理解，在此描述的实例和实施方案仅用于说明的目的，据此的 各种修饰或改变将给予本领域普通技术人员启发，且都被包括在本专利 申请的精神和范围内。

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