强龙益肾胶囊在制备抑制MDA-MB-157细胞增殖药物中的应用

摘要

本发明公开了强龙益肾胶囊在制备抑制MDA-MB-157细胞增殖药物中的应用，强龙益肾胶囊处方为牡蛎、龙骨、花椒目、丁香、黄芪、阳起石、鹿茸、防风、海螵蛸，能补肾壮阳，安神定志。用于肾阳不足，阳痿早泄，腰腿酸痛，记忆衰退，口服，一次2～3粒，一日3次，每粒装0.4g，现发现其能抑制MDA-MB-157细胞增殖。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中成药的新用途，尤其涉及强龙益肾胶囊在制备抑制MDA-MB-157细胞增殖药物中的应用。 

背景技术

乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤。2011年美国CA:ACancer Journal for Clinicians杂志(2010年影响因子94.262)公布的最新统计数据显示，美国2011年预计将有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的30%，排名女性恶性肿瘤发病率第一位。在我国北京、上海、天津等大城市的统计显示乳腺癌同样是我国女性最常见的恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势。 

强龙益肾胶囊是亚宝药业大同制药有限公司的独家产品，目前还没有其抑制乳腺癌（MDA-MB-157）细胞增殖的文献报道。 

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供强龙益肾胶囊在制备抑制MDA-MB-157细胞增殖药物中的应用。 

技术方案：强龙益肾胶囊在制备抑制MDA-MB-157细胞增殖药物中的应用。 

强龙益肾胶囊处方为牡蛎、龙骨、花椒目、丁香、黄芪、阳起石、鹿茸、防风、海螵蛸，能补肾壮阳，安神定志。用于肾阳不足，阳痿早泄，腰腿酸痛，记忆衰退，口服，一次2～3粒，一日3次，每粒装0.4g，现发现其能抑制MDA-MB-157细胞增殖。 

有益效果：强龙益肾胶囊抑制MDA-MB-157细胞增殖，效果良好。 

具体实施方式

强龙益肾胶囊抑制MDA-MB-157细胞增殖的实验研究资料 

1实验材料 

1.1实验用细胞株 

乳腺癌（MDA-MB-157），来自本公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。 

1.2实验药物 

研究药物：强龙益肾胶囊，亚宝药业大同制药有限公司，批号：20110423 

药液储液：称取100mg强龙益肾胶囊内容物，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。 

1.3实验试剂 

DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司批号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）； 

1.4实验器材 

莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。 

2实验方法 

1）MDA-MB-157细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。 

2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。 

3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入强龙益肾胶囊溶液，继续培养24h。 

4）24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。 

5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。 

6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。 

7）结果以药物对细胞的抑制率表示： 

细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。 

3统计处理 

采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。 

4实验结果 

MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对MDA-MB-157细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。 

表1强龙益肾胶囊对MDA-MB-157细胞增殖抑制影响研究(X±SD) 

注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001 

5实验结论 

强龙益肾胶囊可以抑制MDA-MB-157细胞增殖，减少MDA-MB-157细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。