学习积极性改善剂

摘要

本发明提供不存在副作用的问题、安全性优异的抗抑郁剂。且还提供对改善学习积极性有用且可持续摄取的学习积极性改善剂。提供以2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽为有效成分含有的抗抑郁剂及学习积极性改善剂。

说明书

技术领域

本发明涉及以2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽为有效成分的抗抑郁剂或学 习积极性改善剂。

背景技术

在高度复杂化的现代社会，积极性降低已成为问题。例如有被称作“动机 危机（motivation crisis）”的词语，年轻人的动机（motivation）降低已成 为很大的问题。此外，通常多数抑郁症患者都显示出积极性降低症状，所以希 望开发出可改善积极性降低的药剂。

目前，作为抑郁症的治疗或预防药，不仅有三环类抗抑郁药及四环类抗抑 郁药，还在临床上引入了选择性血清素再摄取抑制剂（以下为“SSRI”）和血 清素·去甲肾上腺素再摄取抑制剂（以下为“SNRI”）。SSRI和SNRI是大幅度改 善了以往的三环类抗抑郁药的副作用的抗抑郁药（Journal of clinical and  experimental medicine(Igaku no Ayumi),Vol.219,No.13,963-968,2006）。 但是，虽说副作用有所改善，但仍然有报道说SSRI及SNRI有副作用。

从安全性的观点来考虑，已报道了各种以从天然物中提取的成分为有效成 分的抑郁症的治疗或预防剂。例如，虽已报道了作为从银杏叶中提取的成分的 银杏叶提取物（日本特开2007－99660号公报）、啤酒花提取物（日本特开2002 －58450号公报）等，但由于原料不是通常摄取的食品材料，在用量上也缺乏 食用经验，所以，很难说可确立安全性。

另一方面，已知2，5－二酮哌嗪环化合物等的环状二肽具有各种生理活性， 且可预测今后在医疗·药理领域的需求会扩大。二肽可赋予单体氨基酸中不具 有的物理性质和新型功能，所以期待具有氨基酸以上的应用范围。此外，还已 知即使二肽的直链状或环状等的结构不同，也能赋予物理性质和新型功能。

有关环状二肽有如下报道。例如有如下报道，在经过烘焙的可可中（J. Agric.Food Chem.2005,53,7222-7231）或咖啡中（J.Agric.Food Chem. 2000,48,3528-3532）生成的吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1-甲基乙 基)-,(3S,8aS)、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(2-甲基丙基)-,(3S,8aS) 作为苦味成分发挥功能，鸡肉的加热处理物中有21种环状二肽生成（Eur.Food  Res.Technol.(2004)218:589-597）。此外还有如下报道，2,5-哌嗪二酮,3,6- 双(1H-吲哚-3-基甲基)-,(3S,6S)及吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(苯 基甲基)-,(3S,8aS)具有抗癌作用（J.Pharm Pharmacol.2000 Jan;52(1):75-82），吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1H-吲哚-3-基甲 基)-,(3S,8aS)及吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(苯基甲基)-,(3S,8aS) 具有抗菌作用，吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1H-吲哚-3-基甲 基)-,(3S,8aS)及2,5-哌嗪二酮,3,6-双(1H-吲哚-3-基甲基)-,(3S,6S)具有抗 霉作用（Pharmazie 1999Oct;54(10):772-5）。但是，至今为止还没有环状二 肽对抑郁症的治疗、预防有用及具有学习积极性改善效果的报道。

发明内容

本发明的目在于提供不存在副作用的问题、安全性优异的抗抑郁剂。且本 发明的目在于提供对改善学习积极性有用且可持续摄取的学习积极性改善剂。

本发明者为解决上述课题而进行深入研究的结果，发现鸡提取物中含有具 有SSRI或SNRI活性的成分、具有学习积极性改善作用的成分。进而，本发明 者将这些活性成分特定为2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽，从而完成了本发明。

即本发明如以下［1］～［8］。

［1］一种抗抑郁剂，其特征在于，以2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽为有 效成分。

［2］根据［1］中所述的抗抑郁剂，其特征在于，环状二肽选自2,5-哌嗪 二酮,3,6-双(苯基甲基）-,(3S,6S)、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1H- 咪唑-4-基甲基)-,(3S,8aS)及吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1H-吲哚 -3-基甲基)-,(3S,8aS)中的一种以上。

［3］根据［2］中所述的抗抑郁剂，其特征在于，进一步含有选自2,5- 哌嗪二酮,3,6-双(1H-吲哚-3-基甲基)-,(3S,6S)、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮, 六氢-3-(2-甲基丙基)-,(3S,8aS)及吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1- 甲基乙基)-,(3S,8aS)中的一种以上。

［4］根据［1］～［3］中任一项所述的抗抑郁剂，其特征在于，为口服 剂。

［5］根据［1］～［4］中任一项所述的抗抑郁剂，其特征在于，为抑郁 症、老年期抑郁症、抑郁情绪、积极性降低、不安或伴随这些症状的失眠、食 欲不振的预防及／或治疗剂。

［6］一种学习积极性改善剂，其特征在于，以2,5-二酮哌嗪结构的环状 二肽为有效成分。

［7］根据［6］中所述的学习积极性改善剂，其特征在于，环状二肽为2,5- 哌嗪二酮,3,6-双(苯基甲基）-,(3S,6S)。

［8］根据［6］或［7］中所述的学习积极性改善剂，其特征在于，为口 服剂。

本发明提供具有SSRI活性或SNRI活性的抗抑郁剂及学习积极性改善剂。 本发明的抗抑郁剂及学习积极性改善剂不仅在这些作用上优异，安全性极高， 且因精制品无味无臭、呈白色，所以适合配合在饮食品中。

附图说明

图1表示通过摄取试验样品，小鼠到达逃生平台的时间（逃避潜伏期）是 否因重复试验而缩短的试验结果。

图2表示通过摄取试验样品，小鼠到达逃生平台的时间（逃避潜伏期）是 否因重复试验而缩短的试验结果。

图3表示通过摄取试验样品，小鼠到达逃生平台的时间（逃避潜伏期）是 否因重复试验而缩短的试验结果。

具体实施方式

以下对本发明的实施方式进行详细说明。

本发明涉及以2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽为有效成分含有的抗抑郁剂 或学习积极性改善剂。

本说明书中所述的抗抑郁剂是对抑郁症、老年期抑郁症、抑郁情绪、生活 积极性及学习积极性等的积极性降低、不安或伴随这些症状的失眠、食欲不振 具有预防及／或治疗效果的药剂。

特别是2,5-哌嗪二酮,3,6-双(苯基甲基）-,(3S,6S)（CA登记号（CA Registry Number）:2862-51-3）（以下称为“化合物A”。）、吡咯[1,2-a]吡嗪 -1,4-二酮,六氢-3-(1H-咪唑-4-基甲基)-,(3S,8aS)（CA登记号（CA Registry  Number）:53109-32-3）（以下称为“化合物B”。）、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二 酮,六氢-3-(1H-吲哚-3-基甲基)-,(3S,8aS)（CA登记号（CA Registry Number）: 38136-70-8）（以下称为“化合物C”。）具有血清素转运蛋白结合抑制活性，2,5- 哌嗪二酮,3,6-双(1H-吲哚-3-基甲基)-,(3S,6S)（CA登记号（CA Registry  Number）:20829-55-4）（以下称为“化合物D”。）、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二 酮,六氢-3-(2-甲基丙基)-,(3S,8aS)（CA登记号（CA Regi stry Number）: 2873-36-1）（以下称为“化合物E”。）、吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(1- 甲基乙基)-,(3S,8aS)（CA登记号（CA Registry Number）:2854-40-2）（以 下称为“化合物F”。）具有去甲肾上腺素转运蛋白结合抑制活性。前者作为SSRI 抗抑郁剂，而后者通过与前者的任一个组合，作为SNRI抗抑郁剂而有用。

其中，在使用小鼠的单次给药（急性）毒性试验中，即使投给2g/kg化合 物A也不显示毒性，在使用大鼠的28天重复给药毒性试验中，最大无明显作 用水平为2g/kg/day以上。而且，作为遗传毒性试验，即使在Ames试验、染 色体异常试验及小鼠微核试验中化合物A也未显示致突变性，所以是安全性极 优异的抗抑郁剂。

在此，SSRI抗抑郁剂是与血清素转运蛋白选择性结合，通过该血清素转运 蛋白而具有抑制血清素再摄取的作用的药剂。血清素转运蛋白结合抑制活性例 如可用Eur.J.Pharmacol.,368:277-283,1999中记载的方法测定。即测 定³H标记的米帕明（imipramine）是否抑制与在CHO细胞中表达的人血清素转 运蛋白的结合。化合物A的50%抑制与血清素转运蛋白结合的浓度(IC₅₀)为 8.1μM。

SNRI抗抑郁剂是与血清素转运蛋白及去甲肾上腺素转运蛋白结合，具有抑 制血清素及去甲肾上腺素的再摄取的作用的药剂。去甲肾上腺素转运蛋白结合 抑制活性例如可用Nature,350:350-354,1991中记载的方法测定。即测定 ³H标记的尼索西汀（nisoxetine）是否抑制与在CHO细胞中表达的人去甲肾上 腺素转运蛋白的结合。

此外,Morris水迷宫被报道是测定空间认知的记忆学习的方法(Learn. Motiv.12,239-260(1981))。小鼠记忆周围的风景，凭借其记忆寻找目标逃 生平台的位置而在放满水的池内来回游动从而到达逃生平台，所以，将到逃生 平台的到达时间（逃避潜伏期）作为评价参数。因本试验中的小鼠是在进行 Morris水迷宫试验之前使其在无逃生平台的池内游动从而降低了其积极性的 小鼠，所以，使到达逃生平台的时间缩短即可看做改善了学习积极性。

作为2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽的化合物A等的有效成分也可使用市 售的合成试剂，但从安全性的观点来看，优选使用从天然物中提取的化合物A。 作为从天然物中得到化合物A等的方法的例示，可列举包含以下工序的方法：

（1）以鸟兽肉类、鱼贝类或贝类为原料，通过在液体中加热而除去这些 原料中含有的水溶性蛋白质的预处理工序；

（2）在所述预处理后交换液体，再次进行加热的工序；及

（3）过滤所得到的液体样品的工序。

在上述预处理工序（1）中使用的原料优选富含作为有用成分的化合物A 等的2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽的天然物，特别优选鸟兽肉类、鱼贝类或贝 类。在鸟兽肉类中，包含作为畜肉的牛、猪、马、羊及山羊、作为兽肉的畜肉 以外的肉，例如野猪、鹿，作为家禽肉的鸡、火鸡、鹌鹑、鸭子及绍兴麻鸭(Anas  platyrhyncha var.domestica）、作为野鸟肉的家禽肉以外的鸟类的肉，如野 鸭、雉、麻雀及斑鸫等。此外，还可使用通常饮食生活中所食用的鱼贝类及贝 类。其他，作为植物体，也可使用咖啡、可可等。在这些鸟兽肉、鱼贝类及贝 类中优选使用可高效、高浓度得到化合物A等的鸡肉。

使用鸡肉时可大量得到化合物A的理由还不明了，但推测因鸡肉的蛋白质 大量具有连续的苯丙氨酸（-Phe-Phe-）结构，大量生成二肽（Phe-Phe），结 果可大量得到目的化合物A。

作为预处理工序（1），只要进行减少畜肉中含有的水溶性蛋白质的处理即 可，例如只要在水中100℃～160℃下煮（boil）30分钟～数小时（优选为3 小时～8小时左右、进一步优选为3小时～4小时左右）即可。作为加热装置， 可根据条件使用压力锅、高压灭菌器等。

此外，加热工序（2）优选在高温高压（100℃以上、1大气压以上）下进 行，例如优选为100℃以上，进一步优选为125℃以上。同样作为加热装置， 可根据条件使用压力锅、高压灭菌器等。

且也可不进行液体交换而连续进行预处理工序（1）及加热工序（2）的工 序，也可在预处理工序后暂时取出原料，在进行液体交换之后再进一步进行加 热工序。在预处理工序（1）之后进行液体交换，而后进行加热工序（2）的方 法能得到白利度（Brix）更低的样品，所以优选进行液体交换。

另外，为了防止植物体及动物体会烤焦，工序（1）及工序（2）中的加热 处理优选在溶剂中进行。作为溶剂，优选使用水、乙醇或这些的混合物等。即 通过在含有蛋白质（优选大量具有连续的苯丙氨酸（-Phe-Phe-）结构的蛋白 质）的植物体或动物体中混合溶剂进行加热处理，回收该溶剂，从而得到大量 含有化合物A的溶液。且化合物A的浓度可用各种方法定量，例如可通过高效 液相色谱法（HPLC）定量。

也可将含有所得到的化合物A等的2,5-二酮哌嗪结构的环状二肽的溶液 直接作为本发明的药剂使用，也可根据需要进行精制或浓缩，提高有效成分浓 度后再使用。浓缩可通过蒸发器、冷冻干燥等实施。

过滤工序可根据药剂的形态确定适当的过滤强度，可用本领域技术人员熟 知的方法进行。

本发明的抗抑郁剂及学习积极性改善剂中，也可适当加入载体、赋形剂、 稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、表面活性剂等的添加剂。可根据疾病的严重度、 年龄、性別、体重等适当确定准确的给药量，为人的情况下，例如将有效成分 按每次0.002～20mg/kg、1天数次给药。优选1天1～3次给药，但给药时间 无特别限定。

给药方法可为口服给药或非口服给药等的任一种给药方法，但从给药的容 易度来看，优选口服剂。口服剂的形态可为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、液 剂、酏剂等的任一种。且为口服剂的情况下，通常将有效成分与赋形剂同时制 成片剂等或在无赋形剂的情况下制成片剂等。作为此时使用的赋形剂，可列举 明胶、乳糖、葡萄糖等的糖类、小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉等的淀粉类、硬 脂酸钙、硬脂酸镁等的脂肪酸盐、滑石粉、植物油、硬脂醇、苯甲醇等的醇、 橡胶、聚亚烷基二醇等。

口服剂含有本发明的有效成分的含量为0.01～80重量%，优选为0.01～60 重量%。作为液剂，例举含有本发明的有效成分为0.01～20重量%的悬浮剂或 糖浆。此时，作为载体，使用香料、糖浆、制剂学上的胶束体等的水溶性赋形 剂。

实施例

各种环状肽的转运蛋白结合抑制活性的测定

各种环状二肽的血清素转运蛋白及去甲肾上腺素转运蛋白的结合抑制活 性根据前述已报道的（血清素转运蛋白结合抑制活性；Eur J Pharmacol,368, 277-283,1999及去甲肾上腺素转运蛋白结合抑制活性；Nature,350,350-354, 1991）测定。化合物C可委托株式会社肽研究所合成，其他环状二肽由Bachem AG(Bubendorf,Switzerland)购入。用50%抑制与各转运蛋白的结合的各种环 状肽浓度(IC₅₀)表示（表1）。

表1

实施例2

学习积极性改善作用（1）

对于抗抑郁作用及学习积极性增加作用，用该技术领域中已知的方法、即 Morris水迷宫学习（Morris Water Maze：MWM）评价。

首先，在直径90cm、高度35cm的圆筒状箱内，加入用墨汁染成黑色的水 至水深20cm，水温为22±1℃。在该箱内放入C57BL/6小鼠（雄性、9周龄） 进行旷场游泳实验（OSS）。进行OSS时，小鼠的行动发生了变化即陷入相当于 抑郁状态的状态。进行5天的OSS试验后，将小鼠分为7组。

而后，在上述的直径90cm、高度35cm的圆筒状箱内，设置直径10cm的逃 生平台并使水深为0.5cm。将化合物A（Bachem AG(Bubendorf,Switzerland)） 或对比药物马来酸氟伏沙明（fluvoxamine maleate）悬浮于生理盐水中对上 述分为7组的小鼠口服给药。在给药60分钟后，在设置有上述逃生平台的箱 内放入小鼠，测定直到找到设置在水面下的不可视的逃生平台为止的时间（逃 避潜伏期），评价空间认知的记忆学习力（MWM）。作为对照小鼠，将生理盐水 对未进行OSS的动物给药，以进行MWM。MWM为1天5次，进行10天。

结果如图1所示。图1表明，未进行OSS的小鼠（no OSS-Vehicle）逃避 潜伏期因重复试验而缩短，但进行了OSS的小鼠的学习积极性降低，逃避潜伏 期未缩短（OSS-Saline）。另一方面，在将化合物A给药的组中，随着给药量 增加，逃避潜伏期缩短。在0.02mg/kg给药组中，与将生理盐水对未进行OSS 的动物给药的对照组（OSS-Vehicle）相比，进行MWM试验10天后的逃避潜伏 期缩短了20%左右。此外，在20mg/kg给药组中，与大量使用SSRI的马来酸氟 伏沙明给药组（OSS-Fluvoxamine）相比，进行MWM试验10天后的到达时间基 本为相同程度。由此表明，化合物A具有学习积极性增加作用。

实施例3

学习积极性改善作用（2）

用与实施例3同样的方法，将20mg/kg的化合物A对小鼠给药后进行MWM 试验。作为对比，在将直链状的二肽（Phe-Phe）给药20mg/kg后进行MWM试 验。

结果图2所示。图2表明，未能确认出直链状的二肽（Phe-Phe）具有显 著的作用，但与对照组（OSS－Vehicle）相比，化合物A可看出显著的学习积 极性改善作用。即可知学习积极性改善作用需要有环状二肽结构。

实施例4

学习积极性改善作用（3）

用与实施例2同样的方法，进一步追加0.002mg/kg给药组，同样进行MWM 试验。

进行MWM试验7天后的到逃生平台的到达时间如图3所示。给药0.02mg/kg 以上时可确认出化合物A的效果。由动物的有效量推算对人的给药量时，使用 考虑到动物品种差别的系数10（食品的安全性评价、栗饭原景昭、内山充编著、 学会出版中心（日语原名：食品の安全性評価、栗飯原景昭、内山充編著、学 会出版センタ一）、1987），人给药量为小鼠给药量的1／10。因此，上述有效 的0.02mg/kg在人（50kg）中为0.1mg／人。将含有化合物A的食品制成饮料， 其容量为100ml时，其有效浓度为1.0μg/ml。

本发明提供具有SSRI活性或SNRI活性的抗抑郁剂及学习积极性改善剂。 本发明的抗抑郁剂及学习积极性改善剂不仅其作用优异，安全性极高，且因精 制品无味无臭、呈白色，所以适合配合在饮食品中。