一种Prestin基因突变致聋小鼠模型的制备方法

摘要

本发明公开了一种Prestin基因突变致聋小鼠模型的制备方法，是构建出Prestin突变基因打靶载体pLP-KI；然后将其线性化后转染129/S6的ES细胞，利用PCR法扩增并测序鉴定ES克隆是否发生突变，筛选出发生正确同源重组的ES细胞克隆；再利用显微注射技术将鉴定正确的ES细胞注入C57BL/6小鼠的囊胚中，获得嵌合体小鼠，再将其与C57BL/6小鼠交配，产生出棕色和黑色后代小鼠；对棕色小鼠用Long PCR方法筛选出阳性小鼠，再将阳性小鼠与EIIa-Cre小鼠交配，通过PCR筛选得到杂合型F1代小鼠；将杂合型F1代小鼠自交得到F2代小鼠，再筛选出纯合F2代小鼠，即为Prestin点突变致聋小鼠模型；本发明的Prestin基因突变致聋小鼠模型可用于研究Prestin突变致聋的分子病理机制，解答尚待解决的Prestin功能的基础问题。