抗病毒化合物及其制备和使用方法

摘要

本文所述的是显示抗病毒活性，尤其是抗流感病毒活性的化合物及其制备和使用方法。在一实施方案中，该化合物是包含哌嗪和异噁唑环的杂环酰胺且被一个或多个取代基任选地取代。该化合物可与一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适于肠内和胃肠外给药的组合物。所述的化合物优选用于治疗或预防流感病毒感染，诸如H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3和H10N7。

说明书

引用的相关申请

本申请要求2009年8月5日提交的名称为“抗病毒化合物”的美国专 利申请61/231,431号；2010年5月28日提交的名称为“用于病毒感染治 疗的化合物和方法”的美国专利申请61/349,525号；及2010年5月28日 提交的名称为“用于增生性疾病治疗的化合物和方法”的美国专利申请 61/349,565号的优先权，在此通过引用将所有这些申请全文并入。

发明领域

本发明属于具有抗病毒活性，尤其是抗流感病毒的小分子及其制备 和使用方法的领域。

发明背景

流感由正粘病毒(orthomyxoviridae)科的RNA病毒所引起。存在三种 类型的流感病毒：甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒感染哺乳动物(例 如人类、猪、雪貂、马)和鸟类。甲型流感病毒是全球性的健康关注， 自1900年以来在世界范围内已引起了三次主要的大流行，导致5000多万 人丧生。例如，1918年毁灭性的“西班牙流感”(H1N1甲型流感病毒)在 世界范围内杀死了超过2000万人。随后的大流行，包括1957年亚洲流 感大流行(H2N2)、1968年香港流感大流行(H3N2)、1970年H1N1(俄 罗斯流感)的再度出现，连同1997年和2003年禽流感病毒H5N1一起， 表明大流行性流感或可能的流感病毒生物恐怖袭击仍然是全球健康和安 全的主要威胁。纵观历史，尽管流感病毒对公共卫生影响深远，但是对 流感病毒感染的标准疗法仍然不足。

基于小分子疗法对抗流感病毒毒力的最常见的靶标包括质子选择性 M2离子通道和蛋白神经酰胺酶(NA)。M2离子通道是维护甲型流感病 毒病毒包膜所必不可少的，而NA则促进初生的病毒颗粒自宿主细胞内 出芽。在针对这两种靶标的抑制剂中，耐药性是很常见的，而且已在临 床分离中变得普遍。几乎100％的2008年流感H1N1病毒(猪流感)样 品对神经酰胺酶抑制剂奥司他韦(达菲)(oseltamivir(Tamiflu))耐药，而超 过90％的H3N2病毒对M2通道阻断剂金刚烷耐药。

除了耐药性以外，包括给药途径和环境冲击的因素也会影响有效的 流感病毒治疗的研发。例如，扎那米韦(瑞乐沙)(Zanamivir(Relenza))只能 吸入性给药，因此可能到达不了受感染的通气不良的肺组织。而且，广 泛使用和储备的药物奥司他韦在正常的污水处理过程中不被降解，就此 造成环境问题。

存在着对抑制流感病毒复制、减少流感病毒感染的毒力，和/或预防 流感病毒感染的抗病毒化合物的需求。

因此，本发明的目标是提供有效治疗或预防病毒感染，尤其是流感 病毒感染的抗病毒化合物，该化合物的制备方法以及使用该化合物的方 法。

发明概述

本文描述了有抗病毒活性，尤其是抗流感病毒的化合物以及制备和 使用该化合物的方法。在一实施方案中，所述的化合物具有通式I-VI或 其药学上可接受的盐。

在一优选的实施方案中，NP抑制剂具有通式I的结构：

Ar¹-Y-Ar²-X-W-Z-Ar³

(通式I)

其中，Ar¹、Ar²和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳 基基团；

X、Y和Z独立地缺失(即直接连接)或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、 -N(R₁)-、-C(R₂)＝C(R₃)-和-C(R₄R₅)_n-，

其中n为0至6，R₁-R₅为各自独立地选自氢、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基或直链和支链 的C₁-C₆烷氧基；并且

W为直链基团或5-7元取代或未取代的环状或杂环基团(Cy)。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； Ar²被甲基基团取代；X为C＝O；Y和Z缺失；Cy为哌嗪；和/或Ar³被 卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组合取代。

在一些实施方案中，Cy为包含2个氮原子的取代的5-7元不饱和环， 其中一个氮原子与X结合而另一个氮原子与Z结合。

在一优选的实施方案中，Cy为一取代的哌嗪，其中N1(1位的N)与 X结合而N4(4位的N)与Z结合。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式II的结构

其中Ar¹和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₃R₁₄)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

T、Q和R为独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硅、硫和砷；

A和D独立地各自为CR₁₅R₁₆或NR₁₇；

其中R₄和R₈-R₁₇独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚，或其中-CR₁₅R₁₆-、-NR₁₇或其组合当与任选地桥接亚甲基在一起时形成5-8元环状结构。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； X为-C＝O；Y和Z缺失，且Ar³被卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组 合取代。

在一优选的实施方案中，R₄为甲基。

在一些实施方案中，Q为碳，T为氧，R为氮。

在一些实施方案中，g和m为1而A和D为NR₁₇，其中所述的A-D 定义为哌嗪。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式III的结构：

其中Ar¹和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₄R₁₅)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

A、D、T、Q和R独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硫、硅和砷；

其中R₄和R₈-R₁₅独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； X为-C＝O；Y和Z缺失，且Ar³被卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组 合取代。

在一优选实施方案中，Q为碳，T为氧，R为氮。

在一些实施方案中，A和D为氮。

在一些实施方案中，R₄和R₁₃为独立地氢或甲基。在优选实施方案中， R₄为甲基而R₁₃为氢。

在一些实施方案中，NP抑制剂组合物具有通式IV的结构：

其中X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₃R₁₄)_n-；

其中n为0至6。

T、Q和R独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硫、硅和砷；并且

Cy为4-7元取代的或未取代的环状或杂环基团；并且

其中R₁-R₁₄独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、 直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支链的 C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧酸酯、 尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Cy为包含2个氮原子的取代的5-7元不饱和环， 其中一个氮原子与X结合而另一个氮原子与Z结合。

在一优选的实施方案中，Cy为取代的哌嗪，其中N1与X结合而N4 与Z结合，Y和Z缺失，X为C＝O，T为氧，Q为碳以及R为氮。

在一些实施方案中，R₁-R₃和R₅-R₇独立地选自卤代基，硝基、或卤 代基与硝基的组合。

在一优选的实施方案中，R₄为甲基基团。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式V的结构：

其中Ar¹、Ar²和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基 基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁)＝O、 -C＝C和-C(R₂R₃)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

Q和T独立地选自氮或CR₄；并且

R₁-R₄、R₁₀和R₁₁独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Q和T都是氮。

在一些实施方案中，R₁₀为甲基而R₁₁为氢。在另一实施方案中，R₁₀和R₁₁都是氢。

在一些实施方案中，Y和Z缺失而且X为C＝O。

在一些实施方案中，g和m为1。

在一优选的实施方案中，Ar¹和Ar³为取代的苯基，Ar²为取代的异噁 唑，Y和Z缺失，X为C＝O，Q和T为氮，g和m是1，R₁₀为甲基而 R₁₁为氢。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式VI的结构：

其中X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₂)-、 -C(R₁₃)＝C(R₁₄)-和-C(R₁₅R₁₆)_n-，

n、g和m为独立地0至6；

Q和T独立地选自氮或CR₁₇；并且

R₁-R₁₇独立地选自氢、卤代基、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直 链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧酸酯、尿 素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Q和T都是氮。

在一些实施方案中，R₁₀为甲基基团而R₁₁为氢。在另一实施方案中， R₁₀和R₁₁都是氢。

在一些实施方案中，Y和Z缺失而且X为C＝O。

在一些实施方案中，g和m是1。

在一些实施方案中，R₁-R₃和R₅-R₇独立地选自卤代基，硝基、或卤 代基与硝基的组合。

在本文所述的一些实施方案中，Ar²为在1，2或1，3位具有两个杂原 子的5元杂环芳基，包括碳和所述的杂原子(例如氮)之间的双键。

在本文所述的一些实施方案中，Ar²为在1，2或1，3位具有氮原子和 氧原子的5元杂环芳基，其中碳和所述的氮之间有双键。

在本文所述的一些实施方案中，Ar¹和Ar³为被1、2、3、4或5个取 代基取代的苯基，优选被2，4或2，6位上的2个取代基取代，和/或优选被 2位上的1个取代基取代。

给予所述的化合物能够预防和/或治疗病毒感染，诸如流感病毒。所 述的化合物可经胃肠外给药，诸如以溶液或悬浮液的形式，或经肠内给 药，诸如以片剂或胶囊的形式。

药物组合物包含有效量的本文所述的一种或多种化合物。有效量的 范围因人而已；然而最佳剂量易于由诸如处方医师的本领域技术人员确 定。剂量可通过给予的总量(例如每剂量或每日)或浓度来测量。在一实施 方案中，0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 15、20、25、30、40、50、100、250、500和1000mg/kg/日的剂量可适 用于治疗。在另一实施方案中，每日剂量为0.2-250mg/kg。

附图简要说明

图1a为化合物1的化学结构。

图1b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物1的浓度的函数的 图。

图2a为化合物2的化学结构。

图2b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物2的浓度的函数的 图。

图3a为化合物3的化学结构。

图3b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物3的浓度的函数的 图。

图4a为化合物4的化学结构。

图4b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物4的浓度的函数的 图。

图5a为化合物5的化学结构。

图5b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物5的浓度的函数的 图。

图6a为化合物6的化学结构。

图6b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物6的浓度的函数的 图。

图7a为化合物7的化学结构。

图7b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物7的浓度的函数的 图。

图8a为化合物8的化学结构。

图8b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物8的浓度的函数的 图。

图9a为化合物9的化学结构。

图9b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物9的浓度的函数的 图。

图10a为化合物10的化学结构。

图10b为显示空斑形成单位(PFU)减少率与化合物10的浓度的函数 的图。

发明的详细描述

1.定义

本文所用的“烷基”或其部分通常包括直链的烷基、支链的烷基、环 烷基、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。除非另有说明，所述的 烷基通常具有1-30个碳原子、1-20个碳原子、1-10个碳原子、1-6个碳 原子、1-5个碳原子，优选甲基、乙基或丙基。直链或支链的烷基在其主 链中通常具有30个或更少的碳原子(例如对直链而言C₁-C₃₀，对支链而言 C₃-C₃₀)，优选20个或更少，优选10个或更少，更优选6个或更少，最 优选5个或更少。同样地，环烷基在它们的环结构中具有3-20个碳原子， 优选它们的环结构中具有3-10个碳原子，最优选环结构中具有5、6或7 个碳原子。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正 丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙甲基以及 例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和同分异构体。

术语“烷基”在烃基及杂环烷基的一个或多个碳原子上包含一个或多 个取代。合适的取代基包括但不限于卤素，诸如氟、氯、溴或碘；羟基； -NR₁R₂，其中R₁和R₂为独立地氢、烷基或芳基，而且其中的氮原子任选 地季胺化；-SR，其中R为氢、烷基或芳基；-CN；-NO₂；-COOH；羧酸 酯；-COR、-COOR或-CONR₂，其中R为氢、烷基或芳基；叠氮化物、 芳烷基、烷氧基、亚氨基、膦酸酯、亚磷酸酯、甲硅烷基、乙醚、磺酰、 磺酰胺基、杂环、芳族或杂环芳族部分、-CF₃；-NCOCOCH₂CH₂； -NCOCOCHCH；-NCS及其组合。

本文所用的“烯基”或其部分包括直链或支链的烯基、环烯基、烷基 取代的环烯基并且本文所用的“炔基”或其部分包括直链或支链的炔基基 团或环炔基(脂环族的)基团、烷基取代的环炔基、环炔基基团或环烷基取 代的炔基基团。除非另有说明，烯基和炔基通常具有2-30个碳原子，2-20 个碳原子，2-10个碳原子，2-6个碳原子，2-5个碳原子。直链或支链的 烯基或炔基在其主链中通常具有30个或更少的碳原子(例如对直链而言 C₁-C₃₀，对支链而言C₃-C₃₀)，优选20个或更少，优选10个或更少，更优 选6个或更少，最优选5个或更少。烯基或炔基在其链中通常具有2-30 个碳，优选2-20个碳，优选2-10个碳，更优选2-6个碳，最优选2-5个 碳。同样地，环烯基或环炔基在其环结构中具有3-20个碳原子，优选3-10 个碳原子，最优选5、6或7个碳。环烯基或环炔基基团的实例包括但不 限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁间二烯基)、2，4-烯丙 基、3-(1，4-烯丙基)、乙炔基、1-丙炔基和3-丙炔基以及3-丁炔基。

术语“烯基”和“炔基”在烃基的一个或多个碳原子上包括一个或多个 取代。合适的取代基包括但不限于卤素，诸如氟、氯、溴或碘；羟基； -NR₁R₂，其中R₁和R₂为独立地氢、烷基或芳基，而且其中的氮原子任选 地季胺化；-SR，其中R为氢、烷基或芳基；-CN；-NO₂；-COOH；羧酸 酯；-COR，-COOR或-CONR₂，其中R为氢、烷基或芳基；叠氮化物、 芳烷基、烷氧基、亚氨基、膦酸酯、亚磷酸酯、甲硅烷基、乙醚、磺酰、 磺酰胺基、杂环、芳族或杂环芳族部分、-CF₃；-NCOCOCH₂CH₂； -NCOCOCHCH；-NCS及其组合。

本文所用的“芳基”或其部分通常指的是具有6-30个碳原子，优选 6-18个碳原子的碳基芳香环，而且由一个芳香环或多个融合的芳香环组 成，例如其包括苯基、联苯基、萘基、苊基、苊烯、蒽基、芴基、phenalenyl、 菲基。芳基基团能够任选地被一个或多个部分取代，所述的部分选自由 以下组成的基团：烷基、-NR₁R₂，其中其中R₁和R₂为独立地氢、烷基或 芳基，而且其中的氮原子任选地季胺化；叠氮化物、羟基、酰基、氨基、 卤素、烷氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸酯、磷酸、 磷酸酯以及未保护或必要时保护的膦酸酯，其为本领域中技术人员已知 的，例如在Greene等Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中 的保护性基团)，John Wiley and Sons，第三版，2002中所教导的。在一些 实施方案中，所述的烷基包括C₁-C₁₀烷基、C₁-C₆烷基、C₁-C₃烷基、甲 基、乙基和/或丙基等。术语“芳基”在烃基的一个或多个碳原子包括一个 或多个取代。合适的取代基包括但不限于卤素，诸如氟、氯、溴或碘； 羟基；-NR₁R₂，其中R₁和R₂为独立地氢、烷基或芳基，而且其中的氮原 子任选地季胺化；-SR，其中R为氢、烷基或芳基；-CN；-NO₂；-COOH； 羧酸酯；-COR，-COOR或-CONR₂，其中R为氢、烷基或芳基；叠氮化 物、芳烷基、烷氧基、亚氨基、膦酸酯、亚磷酸酯、甲硅烷基、乙醚、 磺酰、磺酰胺基、杂环、芳族或杂环芳族部分、-CF₃、-NCOCOCH₂CH₂； -NCOCOCHCH；-NCS及其组合。

本文所用的“结合袋”或“结合位点”通常指的是分子或分子复合体的 区域，该区域由于其构型而利于相同分子或分子复合体的区域或部分， 或不同分子、分子复合体和/或化合物的区域或部分与其关联或占位。本 领域中技术人员应当理解，结合袋内空腔的性质因分子不同而有所差异。

本文所用的“Nucleozin结合位点”通常指的是在甲型流感病毒NP背 面位于主体结构域内的甲型流感病毒核蛋白(NP)上的位点。在这种构象 中，nucleozin位于凹槽内残基280-311间。本领域中的技术人员应当理 解nucleozin结合位点因其中所结合的化合物的不同而稍微有所不同而且 能够合并其他接触物，所述的接触物为代替和/或除了本文所公开的这些 以外其他的化合物。

本文所用的“杂环”或“其部分”或“杂环的”通常指的是一个或多个 5-12个原子的环，优选5-7个原子，带有或不带有不饱和性或芳香族的 特征而且具有至少一个不是碳的环原子。优选的杂原子包括硫、氧和氮。 多个环可以融合，如在喹啉或苯并呋喃中。特别优选的杂环基团为具有 1-3个选自O、S、P、Si、As和N的杂原子的5-10元环。所述的杂环化 合物包括但不限于吡咯烷、吡咯、四氢呋喃、呋喃、四氢噻吩、噻吩、 磷杂环戊烷、磷杂环戊二烯、硅烷、硅杂环戊二烯、砷酰烷、砷唑、咪 唑啉、吡唑烷、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噁唑烷、异噁唑烷、噁 唑、噁唑啉、异噁唑、异噁唑啉、噻唑烷、异噻唑烷、噻唑、噻唑啉、 异噻唑、异噻唑啉、二氧杂环戊烷、氧硫杂环戊烷、二噻茂烷、噻唑、 二噻唑、呋咱、噁唑、噻二唑、四唑、哌啶、嘧啶、吡喃、四氢吡喃、 噻烷、噻喃、哌嗪、二嗪、吗啉、噁嗪、噻嗪、二噻烷、二噁烷、二噁 英、三嗪、三氧杂环己烷、四嗪、氧杂环庚、吖庚因、氧杂环庚、庚英、 噻烷、噻庚英、偶氮烷、吖辛因、氧杂环丁烷和硫代烷。杂环或杂环的 也指取代环，如“芳基”或“烷基”中所定义的。在一些实施方案中，“杂环” 或“杂环的”包括碳与诸如氮的所述杂原子之间的双键。

术语“杂环”在一个或多个碳或杂原子上包括一个或多个取代。合适 的取代基包括但不限于卤素，诸如氟、氯、溴或碘；羟基；-NR₁R₂，其 中R₁和R₂为独立地氢、烷基或芳基，而且其中的氮原子任选地季胺化； -SR，其中R为氢、烷基或芳基；-CN；-NO₂；-COOH；羧酸酯；-COR， -COOR或-CONR₂，其中R为氢、烷基或芳基；叠氮化物、芳烷基、烷 氧基、亚氨基、膦酸酯、亚磷酸酯、甲硅烷基、乙醚、磺酰、磺酰胺基、 杂环、芳族或杂环芳族部分、-CF₃、-NCOCOCH₂CH₂；-NCOCOCHCH； -NCS及其组合。

本文所用的“杂环芳基”或其部分通常指的是包含1-4个选自N、O、 P、Si、As或S原子或其组合的杂原子的芳香族基团，其杂环芳基基团在 碳或氮原子上任选地被取代。杂环芳基环也可与一个或多个环状烃、环 状芳基或杂环芳基环融合。杂环芳基包括但不限于具有1个杂原子的5 元杂环芳基(例如噻吩、吡咯、呋喃)；具有在1，2或1，3位上两个杂原子 的5元杂环芳基(例如噁唑、吡唑、咪唑、噻唑、嘌呤)；具有3个杂原子 的5元杂环芳基(例如三唑、噻二唑)；具有3个杂原子的5元杂环芳基； 带有1个杂原子的6元杂环芳基(例如吡啶、喹啉、异喹啉、菲、5，6-环 庚烯吡啶)；带有2个杂原子的6元杂环芳基(例如哒嗪、噌啉、酞嗪、吡 嗪、嘧啶、喹唑啉)；带有3个杂原子的6元杂环芳基(例如1，3，5-三嗪) 和带有4个杂原子的6元杂环芳基。特别优选的杂环芳基基团为带有1-3 个选自O、S和N的杂原子的5-10元环。在一些实施方案中，“杂环芳基” 包括包括碳与诸如氮的所述杂原子之间的双键。

术语“杂环芳基”在一个或多个碳或杂原子上包括一个或多个取代。 合适的取代基包括但不限于卤素，诸如氟、氯、溴或碘；羟基；-NR₁R₂， 其中R₁和R₂为独立地氢、烷基或芳基，而且其中的氮原子任选地季胺化； -SR，其中R为氢、烷基或芳基；-CN；-NO₂；-COOH；羧酸酯；-COR， -COOR或-CONR₂，其中R为氢、烷基或芳基；叠氮化物、芳烷基、烷 氧基、亚氨基、膦酸酯、亚磷酸酯、甲硅烷基、乙醚、磺酰、磺酰胺基、 杂环、芳族或杂环芳族部分、-CF₃、-NCOCOCH₂CH₂；-NCOCOCHCH； -NCS及其组合。

本文所用的“甲型流感病毒”通常指的是哺乳动物的甲型流感病毒， 例如H3N2、H1N1、H2N2、H7N7和H5N1(家禽流感病毒)病毒株及其 变种。

本文所用的“低能稳定的复合体”通常指的是一种复合体，药物在其 中通过由弱到强的分子间作用力结合在核蛋白的结合位点中，所述的分 子间作用力包括但不限于共价键、氢键、二硫键、盐桥、离子键、金属 配位、疏水作用力、范德华相互作用、阳离子-pi相互作用、pi-堆叠及其 组合。

本文所用的“核蛋白”或“NP”通常指的是结构上与核酸相关的任一蛋 白。在某些流感病毒株中鉴定和测序了示例性核蛋白。许多核蛋白的序 列能够在NCBI(美国国家生物技术信息中心)数据库中找到。一些来源于 甲型流感病毒的示例性NP序列的GenBank登录号对HIN1亚型而言为 NP040982(AAA43467)，对H3N2亚型而言为AAZ38620(YP308843)，对 H5N1亚型而言为AY856864和AAF02400。

NP 040982(AAA43467)[SEQ ID NO：5]：

MASQGTKRSYEQMETDGERQNATEIRASVGKMIGGIGRFYIQMC TELKLSDYEGRLIQNSLTIERMVLSAFDERRNKYLEEHPSAGKDPKK TGGPIYRRVNG

KWMRELILYDKEEIRRIWRQANNGDDATAGLTHMMIWHSNLNDAT YQRTRALVRTGMD

PRMCSLMQGSTLPRRSGAAGAA VKGVGTMVMELVRMIKRGINDRN FWRGENGRKTRIA

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本文提及的“Nucleozin”通常具有如下的化学结构：

本文所用的“药学上可接受的”通常指的是那些化合物、材料、组合 物和/或剂型，其在充分的医疗判断范围内适用于接触人和动物的组织而 没有过多的毒性、刺激、过敏反应或其他的问题或并发症，具有合理的 效益/风险比。

本文所用的“药学上可接受的盐”通常指的是所公开的化合物的衍生 物，其中母体化合物通过形成其酸性或碱性盐而被修饰。所述的药学上 可接受的盐的实例包括但不限于诸如胺类的碱性残基的无机酸盐或有机 酸盐；诸如羧酸的酸性残基的碱金属盐或有机盐。药学上可接受的盐包 括例如自无毒性无机或有机酸中所形成的母体化合物的常规无毒性盐或 季铵盐。例如，此类常规的无毒性盐包括衍生自诸如盐酸、氢溴酸、硫 酸、氨磺酰基、磷酸、硝酸等无机酸的那些盐，以及自诸如乙酸、丙酸、 琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、 双羟萘酸、马来酸、丙醇二酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺 胺吡啶、2-乙酸基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、萘磺酸、甲基磺酸、 乙烷二磺酸、草酸和羟乙磺酸的有机酸制备的盐。

本文所用的“取代的”通常指的是被一个或多个取代基所取代的一部 分(例如烷基基团)，所述的取代基包括但不限于：烷基、烯基、炔基、C₃-C₈环烷基、卤素，例如氟、氯、溴和碘；氰基；烷氧基；羟基、苯基；以 及取代的苯基。

本文所用的“取代的芳基”通常指的是具有一个或多个互不干扰的基 团作为取代基的芳基基团。对苯环上的取代而言，取代基可在任何方向 上(即邻位、间位和/或对位的)。在一些实施方案中，所述的取代的芳基 包括2，6-双取代的苯基，其中这两个取代基如所定义的，优选其中一个为 卤素，尤其是氯(Cl)，而另一个为硝基(NO₂)或它们两个都为卤素，尤其 是氯(Cl)。

II 化合物

本文所述的为具有抗病毒活性，尤其是抗流感病毒的化合物。

在一些实施方案中，化合物具有以下的通式I-VI或其药学上可接受 的盐。

在优选的实施方案中，NP抑制剂具有通式I的结构：

Ar¹-Y-Ar²-X-W-Z-Ar³

(通式I)

其中，Ar¹、Ar²和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基 基团；

X、Y和Z独立地缺失(即直接连接)或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、 -N(R₁)-、-C(R₂)＝C(R₃)-和-C(R₄R₅)_n-，

其中n为0至6，R₁-R₅为各自独立地选自氢、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基或直链和支链 的C₁-C₆烷氧基；并且

W为直链基团或5-7元取代或未取代的环状或杂环基团(Cy)。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； Ar²被甲基基团取代；X为C＝O；Y和Z缺失；Cy为哌嗪；和/或Ar³被 卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组合取代。

在一些实施方案中，Cy为包含2个氮原子的取代的5-7元不饱和环， 其中一个氮原子与X结合而另一个氮原子与Z结合。

在一优选的实施方案中，Cy为一取代的哌嗪，其中N1(1位的N)与 X结合而N4(4位的N)与Z结合。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式II的结构

其中Ar¹和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₃R₁₄)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

T、Q和R为独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硅、硫和砷；

A和D独立地各自为CR₁₅R₁₆或NR₁₇；

其中R₄和R₈-R₁₇独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚，或其中-CR₁₅R₁₆-、-NR₁₇或其组合当与任选地桥接亚甲基在一起时形成5-8元环状结构。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； X为-C＝O；Y和Z缺失，且Ar³被卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组 合取代。

在一优选的实施方案中，R₄为甲基。

在一些实施方案中，Q为碳，T为氧，R为氮。

在一些实施方案中，g和m为1而A和D为NR₁₇，其中所述的A-D 定义为哌嗪。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式III的结构：

其中Ar¹和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₄R₁₅)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

A、D、T、Q和R独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硫、硅和砷；

其中R₄和R₈-R₁₅独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Ar¹被氢、羟基、硝基、氨基或叠氮化物取代； X为-C＝O；Y和Z缺失，且Ar³被卤代基、硝基、或卤代基与硝基的组 合取代。

在一优选实施方案中，Q为碳，T为氧，R为氮。

在一些实施方案中，A和D为氮。

在一些实施方案中，R₄和R₁₃为独立地氢或甲基。

在优选实施方案中，R₄为甲基而R₁₃为氢。

在一些实施方案中，NP抑制剂组合物具有通式IV的结构：

其中X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₀)-、 -C(R₁₁)＝C(R₁₂)-和-C(R₁₃R₁₄)_n-；

其中n为0至6。

T、Q和R独立地选自C(R₈R₉)、氮、氧、磷、硫、硅和砷；并且

Cy为4-7元取代的或未取代的环状或杂环基团；并且

其中R₁-R₁₄独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、 直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支链的 C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧酸酯、 尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Cy为包含2个氮原子的取代的5-7元不饱和环， 其中一个氮原子与X结合而另一个氮原子与Z结合。

在一优选的实施方案中，Cy为取代的哌嗪，其中N1与X结合而N4 与Z结合，Y和Z缺失，X为C＝O，T为氧，Q为碳以及R为氮。

在一些实施方案中，R₁-R₃和R₅-R₇独立地选自卤代基，硝基、或卤 代基与硝基的组合。

在一优选的实施方案中，R₄为甲基基团。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式V的结构：

其中Ar¹、Ar²和Ar³各自为独立地取代或未取代的芳基或杂环芳基 基团；

X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁)＝O、 -C＝C和-C(R₂R₃)_n-；

n、g和m为独立地0至6；

Q和T独立地选自氮或CR₄；并且

R₁-R₄、R₁₀和R₁₁独立地选自氢、卤素、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支 链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧 酸酯、尿素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Q和T都是氮。

在一些实施方案中，R₁₀为甲基而R₁₁为氢。在另一实施方案中，R₁₀ 和R₁₁都是氢。

在一些实施方案中，Y和Z缺失而且X为C＝O。

在一些实施方案中，g和m为1。

在一优选的实施方案中，Ar¹和Ar³为取代的苯基，Ar²为取代的异噁 唑，Y和Z缺失，X为C＝O，Q和T为氮，g和m是1，R₁₀为甲基而 R₁₁为氢。

在一些实施方案中，NP抑制剂具有通式VI的结构：

其中X、Y和Z独立地缺失或选自-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO₂-、-N(R₁₂)-、 -C(R₁₃)＝C(R₁₄)-和-C(R₁₅R₁₆)_n-，

n、g和m为独立地0至6；

Q和T独立地选自氮或CR₁₇；并且

R₁-R₁₇独立地选自氢、卤代基、羟基、直链或支链的C₁-C₆烷基、直 链或支链的C₁-C₆烯基、直链或支链的C₁-C₆炔基、或直链和支链的C₁-C₆烷氧基、氨基、叠氮化物、氰基、硝基、腈、异腈、酰胺、羧酸酯、尿 素、胍、异氰酸酯、异硫氰酸酯和硫醚。

在一些实施方案中，Q和T都是氮。

在一些实施方案中，R₁₀为甲基基团而R₁₁为氢。在另一实施方案中， R₁₀和R₁₁都是氢。

在一些实施方案中，Y和Z缺失而且X为C＝O。

在一些实施方案中，g和m是1。

在一些实施方案中，R₁-R₃和R₅-R₇独立地选自卤代基，硝基、或卤 代基与硝基的组合。

在一优选的实施方案中，R₄为甲基基团。

本文所述的引用的示例化合物为：

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(4-羟基-苯基-甲基异噁唑-4-基]- 甲酮(化合物1，结构通式显示于图1a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-苯基-5-甲基-异噁唑-4-基]-甲酮 (化合物2，结构通式显示于图2a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(4-氨基-苯基)-甲基异噁唑-4- 基]-甲酮(化合物3，结构通式显示于图3a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(4-叠氮基-苯基)-5-甲基异噁唑 -4-基]-甲酮(化合物4，结构通式显示于图4a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(2-氯-苯基)-5-甲基异噁唑-4-基]- 甲酮(化合物5，结构通式显示于图5a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-[3-(2-氯-苯基)-5-甲基-异噁 唑-4-基]-甲酮(化合物6，结构通式显示于图6a中)；

[4-(2-氯-4-硝基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-[3-苯基-5-甲基异噁唑-4- 基]-甲酮(化合物7，结构通式显示于图7a中)；

[4-(4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(2-氯-苯基)-5-甲基-异噁唑-4-基]-甲 酮(化合物8，结构通式显示于图8a中)；以及

[4-(4-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(2，6-二氯-苯基)-5-甲基-异噁唑-4-基]- 甲酮(化合物9，结构通式显示于图9a中)；

[4-(2-硝基-6-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-[3-(2-二氯-苯基)-5-甲基-异噁唑-4- 基]-甲酮(化合物10，结构通式显示于图10a中)。

本文所述的化合物能够作为游离酸或游离碱或药学上可接受的盐给 药。可通过常规化学方法自包含碱性或酸性部分的母体化合物中合成化 合物的药学上可接受的盐。通常，可通过将游离酸或碱形式的这些化合 物与适当的碱或酸在水或有机溶剂或这两者的混合物中起反应来制备此 类盐，通常优选非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。 合适的盐的名单可在Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th ed.， Lippincott Williams & Wilkins，Baltimore，MD，2000，p.704(雷明顿的药物 科学，20版，利平科特.威廉斯&威尔金斯，巴尔的摩，医学博士，2000， p.704)中找到。

B.药物组合物

利用本领域中已知的技术，本文所述的化合物和/或它们药学上可接 受的盐可配制成适于肠内及胃肠外给药的剂型。

药物组合物包含有效量的一种或多种本文所述的化合物。本文所用 的“有效量”通常指的是一种在常规给予或开具处方的范围内的数量或剂 量以显示如体外或体内的抗病毒活性。有效量的范围因人而已；然而最 佳剂量易于由诸如处方医师的本领域技术人员所确定。在常规的临床实 践中此类范围被很好地确立下来，因而易于为本领域技术人员所确定。 剂量可通过给定的总量(例如每剂量或每日)或浓度来测定。0.01、0.05、 0.1、0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、 50、100、250、500和1000mg/kg/日的剂量适合于治疗。在一实施方案 中，每日剂量为0.2-250mg/kg。

本文所述的化合物可与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂 结合，所述的载体和赋形剂被认为是安全有效的而且可给药于个体而不 会引起不良的生物学副作用或不需要的相互作用。载体是存在于药物制 剂中除了活性成分以外所有的组分。

1.胃肠外制剂

可配制本文所述的化合物用于胃肠外给药。本文所用的“胃肠外给 药”意指通过除了经由消化道以外的任一方法或非侵袭性局部或区域性 的途径给药。例如。胃肠外给药可包括通过注射或输液对患者进行静脉 内、皮内、腹膜内、胸膜内、气管内、肌肉内、皮下给药。

利用本领域已知的技术可将胃肠外制剂制备成水性组合物。通常此 类组合物可制备成可注射的制剂，例如溶液或悬浮液；用于制备溶液或 悬浮液的固体形态取决于注射前重组介质的添加，诸如微或纳米颗粒； 乳剂，诸如油包水(w/o)乳剂、水包油(o/w)乳剂以及其微乳剂、脂质体或 乳脂体。

载体可以是溶剂或分散介质，例如其包含水、乙醇、一种或多种多 元醇(例如丙三醇、丙烯、乙二醇和液态聚乙二醇)、油类，诸如植物油(例 如花生油、玉米油、芝麻油等)以及其组合。例如可通过使用诸如卵磷脂 的包被，通过维持分散液情况下所需要的颗粒大小和/或通过表面活性剂 的使用，维持适当的流动性。在许多情况下，将优选包含等渗剂，例如 糖或盐，诸如氯化钠。

可在水或其他的溶剂或适于与一种或多种药学上可接受的赋形剂混 合的分散介质中制备作为游离酸或碱或其药学上可接受的盐的活性化合 物的溶液和分散液。所述的赋形剂包括但不限于表面活性剂、分散剂、 乳化剂、pH改性剂以及其组合。

合适的表面活性剂可以是阴离子的、阳离子的、两性的或非离子的 表面活性剂。合适的阴离子表面活性剂包括但不限于那些包含羧酸盐、 磺酸盐和硫酸根离子的表面活性剂。阴离子表面活性剂的实例包括长链 烷基磺酸和烷基芳基磺酸的钠、钾、铵盐，例如十二烷基苯磺酸钠；二 烃基磺基丁二酸钠，诸如十二烷基苯磺酸钠；二烃基磺基丁二酸钠，例 如双(2-乙基硫氧基)磺化琥珀酸钠；以及烷基硫酸盐，诸如十二烷基硫酸 钠。阳离子表面活性剂包括但不限于季铵化合物，诸如苯扎氯铵、苄索 氯铵、西曲溴铵、硬脂酰二甲苯基氯化铵、聚乙二醇和椰油胺。所述的 非离子表面活性剂的实例包括乙二醇单硬脂酸酯、丙二醇肉豆蔻酸酯、 单硬脂酸甘油酯、甘油硬脂酸酯、聚甘油-4-油酸酯、酰化山梨糖醇酐、 酰化蔗糖、聚乙二醇(150)月桂酸酯、聚乙二醇(400)单月桂酸酯、聚氧乙 烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚乙二醇(1000)十六 醚、聚氧乙烯十三基醚、聚丙二醇丁基醚、泊洛沙姆(Poloxamer)401、 硬脂酰单异丙胺以及聚氧乙烯氢化油脂胺。两性表面活性剂的实例包括 N-十二烷基丙氨酸钠、N-月桂酰-亚胺二丙酸钠、肉豆蔻酰两性醋酸盐、 月桂基甜菜碱以及月桂基硫代甜菜碱。

所述制剂可包含防腐剂以防止微生物生长。合适的防腐剂包括但不 限于苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸和硫柳汞。这一制剂也可包含抗 氧化剂以防止活性剂降解。

组合物通常被缓冲至pH 3-8以用于重组后胃肠外给药。合适的缓冲 液包括但不限于磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。

经常在制剂中使用水溶性聚合物以用于胃肠外给药。合适的水溶性 聚合物包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、羧甲基纤维素和聚乙 烯乙二醇。

通过将所需数量的活性化合物掺入到带有一种或多种以上所列举的 赋形剂的适当的溶剂或分散介质中来制备无菌的可注射的溶液，根据需 要，随后过滤灭菌。通常通过将各种已灭菌的活性成分掺入到包含基础 分散介质和以上列举的那些中所需要的其他成分的无菌媒介中来制备， 分散液。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选的制备方法 为真空干燥和冷冻干燥技术，这可产生活性成分加上任一额外期望的来 自早前已消毒过滤的溶液的成分的粉末。以如此方式制备粉末可使得颗 粒本质上是多孔的，这可以促进颗粒的溶解。制造多孔颗粒的方法是本 领域所熟知的。

本文所述的胃肠外制剂可配制用于控释，所述的控释包括即刻释放、 延迟释放、延长释放、脉冲式释放以及其组合。

对胃肠外给药而言，一种或多种NP抑制剂以及任选地一种或多种额 外的活性剂可掺入到微粒、纳米粒子或其提供控释的组合物中。在其中 制剂包含两种或多种药物的实施方案中，所述的药物可配制用于相同类 型的控释(例如延迟的、延长的、即刻的或脉冲的)或所述的药物可独立地 配制用于不同类型的释放(例如即刻和延迟的、即刻和延长的、延迟和延 长的、延迟和脉冲的等)。

例如，化合物和/或一种或多种额外的活性剂可掺入到提供药物控释 的聚合微粒中。药物释放受药物从微粒里向外的扩散和/或聚合微粒通过 水解作用和/或酶促降解的降解所控制。合适的聚合物包括乙基纤维素和 其他天然或合成的纤维素衍生物。

缓慢可溶的并且可在水性环境中形成凝胶的聚合物，诸如羟丙甲纤 维素或聚乙烯氧化物也可适用作包含微粒的药物的材料。其他聚合物包 括但不限于聚酸酐、聚(酯酐)、多烃酸，诸如聚交酯(PLA)、聚乙二醇 (PGA)、聚(丙交酯-和-乙交酯)(PLGA)、聚-3-烃基丁酸(PHB)及其共聚物、 聚-4-烃基丁酸(P4HB)及其共聚物、聚已酸内酯及其共聚物以及其组合。

可选择地，药物可掺入到由以下物质制备的微粒中：在水溶液中不 可溶的或在水溶液中缓慢可溶但是能够在胃肠消化道中经由包括酶促降 解、胆汁酸的表面活性剂作用和/或机械侵蚀被降解。如本文所用的，术 语“在水中缓慢可溶的”指的是在30分钟时间段内不溶解于水中的物质。 优选的实例包括脂类、脂质、蜡类、蜡样物质及其混合物。合适的脂类 及脂质包括脂肪醇(诸如月桂基、肉豆蔻基硬脂酰、十六烷基或十八醇十 六醇混合物)、脂肪酸及衍生物，其包括但不限于脂肪酸酯、脂肪酸甘油 酯(单、双和三-甘油酯)和氢化脂肪。具体实例包括但不限于氢化植物油、 氢化棉籽油、氢化蓖麻油、可获得的商标名为Sterotex的氢化油、硬脂 酸、可可油以及硬脂醇。合适的蜡类和蜡样物质包括天然或合成的蜡、 碳氢化合物和常规的蜡。所述的蜡类的具体实例包括蜂蜡、糖蜡、蓖麻 蜡、巴西棕榈蜡、石蜡和小烛树蜡。如本文所用的，蜡样物质被定义为 在室温下通常是固态的，具有约30-300℃熔点的任一物质。

在某些情况下，可能需要改变水渗入到微粒中的速率。为此，速率 控制(毛细作用)剂可随以上所列举的脂类或蜡类一同配制。所述的速率控 制物质的实例包括某些淀粉衍生物(例如蜡状麦芽糖糊精和鼓干玉米淀 粉)、纤维素衍生物(例如羟丙基甲基纤维素、烃基丙基纤维素、甲基纤维 素和羧甲基纤维素)、褐藻酸、乳糖和滑石。额外地，可添加药学上可接 受的表面活性剂(例如卵磷脂)以促进此类微粒的降解。

非水溶性的蛋白，诸如玉米蛋白，也可用作合成包含药物的微粒的 物质。额外地，水溶性的蛋白、多糖及其组合物可与药物一同配制于微 粒中并且随后交联以形成非水溶性网络。例如，环糊精可与单个药物分 子复合并随后交联。

通过已知的药物配制技术可实现药物胶囊化或将药物掺入到载体物 质中以产生包含微粒的药物。在制剂含脂类、蜡类或蜡样物质的情况下， 通常将载体物质加热至它的熔解温度以上并添加药物以形成混合物，其 包含悬浮在载体物质中的药物颗粒、溶解在载体物质中的药物或其混合 物。随后通过以下的几种方法配制微粒：其包括但不限于凝结、挤压、 喷雾冷冻或水分散体过程。在一优选的过程中，加热蜡类至其熔解温度 以上，添加药物并在不断搅拌下随着混合物冷却而凝结炽热的蜡-药物混 合物。可选择地，挤压并将炽热的蜡-药物混合物团成球状以形成丸或珠。 这些过程的详细描述可在“Remington-The science and practice of  pharmacy”(雷明顿-药物科学与实践)，20th Edition(第20版)，Jennaro et.al.， (Phila，Lippencott，Williams，and Wilkens，2000)中找到。

对一些载体物质而言，使用溶剂蒸发技术以产生包含微粒的药物可 能是可期望的。在这种情况下，将药物和载体物质共同溶解于互溶剂中， 随后通过几种技术产生微粒，所述的技术包括但不限于形成水或其他适 当的介质中的乳剂，喷雾干燥或通过蒸发除去本体溶液中的溶剂并研磨 由此得到的物质。

在一些实施方案中，颗粒形式的药物均匀地分散在非水溶性或缓慢 水溶性的物质中。为使组合物中的药物颗粒大小最小化，可在配制之前 研磨药物粉末其自身以产生细小的颗粒。为此可使用药学领域中已知的 喷射研磨过程。在一些实施方案中，通过加热蜡类或蜡样物质至其熔点 以上，添加药物颗粒同时搅拌混合物，使颗粒形式的药物均匀地分散在 蜡类或蜡样物质中。在这种情况下，可添加药学上可接受的表面活性剂 至混合物以促进药物颗粒的分散。

颗粒也可以裹上一种或多种缓释包衣。被脂酶水解的脂肪酸的固态 酯可喷裹在微粒或药物颗粒上。玉米蛋白是一天然非水溶性的蛋白的实 例。通过喷裹或湿法制粒技术可将其裹在包含微粒的药物或药物颗粒上。 除了天然的非水溶性的物质以外，一些消化酶的底物可用交联方法处理， 由此导致非水溶性网络的产生。已报道了许多由化学和物理的方式开启 的交联蛋白的方法。获得交联的最常规的办法之一就是使用化学交联剂。 所述的化学交联剂的实例包括醛类(戊二醛和甲醛)、环氧化合物、碳二亚 胺、京尼平(genipin)。除了这些交联剂以外，氧化的和天然的糖已用于交 联明胶((Cortesi，R.，et al.，Biomaterials 19(1998)1641-1649)。也可利用酶 促方式实现交联；例如转谷酰胺酶已被认可为是一种可用于交联海产品 的公认安全的(GRAS)物质。最后，可通过物理方式诸如热处理、紫外线 (UV)照射和伽马射线照射开启交联。

为产生一围绕包含药物的微粒或药物颗粒的交联蛋白的包衣层，可 将水溶性蛋白喷裹在微粒上并随后通过以上所述的方法之一进行交联。 可选择地，可通过凝聚相分离法(例如通过盐的添加)及随后交联将包含药 物的微粒微封入蛋白内。一些合适的用于这一目的的蛋白包括明胶、白 蛋白、酪蛋白和谷蛋白。

多糖也可被交联以形成非水溶性的网络。对许多多糖而言，可通过 与钙盐或交联聚合物主链的多价阳离子起反应实现这一目的。在多价阳 离子存在的情况下，果胶、藻朊酸盐、右旋糖酐、直链淀粉和瓜尔豆胶 易于交联。在电性相反的多糖间也可形成复合体；例如果胶和壳聚糖可 经由静电相互作用复合在一起。

2.肠内制剂

合适的口服剂型包括片剂、胶囊、溶液、悬浮液、糖浆和含片。使 用本领域中熟知的压缩或成型技术制造片剂。利用本领域中熟知的技术， 明胶或非明胶胶囊可被制备为硬或软的胶囊壳，其可封装液体、固体和 半固体填料。

可使用药学上可接受的载体制备制剂。如本文通常所用的“载体”包 括但不限于稀释剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、膨胀剂、填充 剂、稳定剂及其组合。

载体也包括包衣组合物的所有组分，其可包括增塑剂、染料、着色 剂稳定剂和助流剂。延迟释放剂量制剂可如以下标准参考文献中所述的 制备，诸如“Pharmaceutical dosage form tablets”，eds.Liberman et.al.(New  York，Marcel Dekker，Inc.，1989)，“Remington-The science and practice of  pharmacy”，20th ed.，Lippincott Williams & Wilkins，Baltimore，MD，2000和 “Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems”，6th Edition，Ansel  et al.，(Media，PA：Williams and Wilkins，1995)。这些参考文献提供了用于 制备片剂、胶囊以及片剂、胶囊和颗粒剂的延迟释放剂型的载体、材料、 设备和过程的信息。

合适的包衣物质的实例包括但不限于纤维素聚合物，诸如醋酸纤维 素酞酸醋、羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羟丙甲纤维素酞酸醋和醋酸羟 丙甲纤维素琥珀酸酯；聚醋酸乙烯酞酸酯、丙烯酸聚合物及共聚物、可 商购获得的商标名为EUDRAGIT(罗氏制药，Westerstadt，德国)的甲基 丙烯酸树脂、玉米蛋白、紫胶和多糖。

额外地，包衣物质可包含常规的载体，诸如增塑剂、染料、着色剂、 助流剂、稳定剂、造孔剂和表面活性剂。

可选择的药学上可接受的赋形剂包括但不限于稀释剂、粘合剂、润 滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂和表面活性剂。稀释剂，也称为“填充剂” 通常为增加固体剂型体积所必需的，从而可提供有实用性的大小用于片 剂的压缩或珠或颗粒的形成。合适的稀释剂包括但不限于碳酸氢钙二水 合物、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、微晶纤维素、 高岭土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预胶凝淀粉、有机硅二氧化碳、 氧化钛、镁铝硅酸盐和糖粉。

粘合剂被用于给予固体剂型粘聚性，从而确保在剂型形成后片剂或 珠剂或颗粒剂仍保持完好。合适的粘合剂物质包括但不限于淀粉、预胶 凝淀粉、明胶、糖类(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨醇)、聚乙 二醇、蜡类、天然的及合成的树胶诸如阿拉伯树胶、黄芪胶、褐藻酸钠、 纤维素、其包括羟丙甲纤维素、羟丙纤维素、乙基纤维素和硅酸镁铝、 合成聚合物诸如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基 丙烯酸甲酯共聚物、氨烷基甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙 烯酸以及聚乙烯吡咯烷酮。

润滑剂被用于促进片剂生产。合适的润滑剂的实例包括但不限于硬 脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、甘油山萮酸酯、聚乙二醇、滑石和矿物油。

崩解剂被用于促进剂型在给药后崩解或“解体”，其通常包括但不限 于淀粉、羧基乙酸淀粉钠、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤 维素、预胶凝淀粉、黏土、纤维素、藻蛋白碱、树胶或交联的聚合物、 诸如交联的PVP(PolyplasdoneXL来自于GAF化工有限公司)。

稳定剂被用于抑制或延迟药物分解反应，所述的药物分解反应其包 括，举例来说，氧化反应。合适的稳定剂包括但不限于抗氧化剂、丁基 羟基甲苯(BHT)、抗坏血酸、其盐及酯类、维生素E、生育酚及其盐、亚 硫酸盐诸如焦亚硫酸钠、半胱氨酸及其衍生物、柠檬酸、没食子酸丙酯 以及丁基羟基茴香醚(BHA)。

口服剂型，诸如胶囊、片剂、溶液和悬浮液，可被配制用于控制释 放。例如，一种或多种化合物与可选择的一种或多种额外的活性剂可被 配制到纳米微粒、微粒及其组合物中，并被封入到软或硬的明胶胶囊或 非明胶胶囊或分散在分散介质中以形成口服的悬浮液或糖浆。颗粒可形 成药物和控释的聚合物或基质。可选择地，在掺入到最终剂型之前，药 物颗粒可裹上一层或多层控释的包衣。

在另一实施方案中，一种或多种化合物与可选择的一种或多种额外 的活性剂被分散在基质物质中，所述的基质物质一旦与诸如生理体液的 水性介质接触就会胶化或乳化。在胶化情况下，夹住活性剂的基质膨胀， 所述的活性剂随着时间的流逝通过扩散和/或基质物质的降解而被缓慢释 放出来。此类基质可被配制为片剂或填料用于硬或软的胶囊。

还在另一实施方案中，一种或多种化合物与任选地一种或多种额外 的活性剂被配制到固体口服剂型中，诸如片剂或胶囊，而且固体剂型被 一层或多层诸如延迟释放的包衣或延长释放的包衣的控释的包衣裹上。 包衣或包衣们也可包含化合物和/或额外的活性剂。

延长释放制剂通常被制备成扩散或渗透系统，例如如“Remington- The science and practice of pharmacy”(20th ed.，Lippincott Williams &  Wilkins，Baltimore，MD，2000)中所述。通常扩散系统由两种装置类型，储 存器和基质组成，本领域中对其熟知且有所描述。通常通过将带有缓慢 溶解的聚合物载体的药物压缩成片剂形式制备基质装置。三种主要的用 于基质装置制备的物质类型为不溶性塑料、亲水聚合物和脂肪族化合物。 塑料基质包括但不限于丙烯酸甲酯甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯和聚乙烯。 亲水聚合物包括但不限于纤维素聚合物例如甲基和乙基纤维素，羟烷基 纤维素例如羟丙基纤维素，羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和 Carbopol934，聚氧化乙烯及其混合物。脂肪族化合物包括但不限于各 种蜡类，例如巴西棕榈蜡和三硬脂酸甘油酯，以及蜡型物质，包括氢化 蓖麻油或氢化植物油或其混合物。

在某些优选的实施方案中，塑性材料为药学上可接受的丙烯酸聚合 物，其包括但不限于丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯、甲 基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、氰乙基甲基丙烯酸酯、 氨烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸 烷基胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸)(酸酐)、聚甲基丙 烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚(甲基丙烯酸酸酐)以及甲基丙烯酸缩水甘油酯共 聚物。

在某些优选的实施方案中，丙烯酸聚合物由一种或多种异丁烯酸铵 共聚物组成。异丁烯酸铵共聚物为本领域中所熟知的，且在NF XVII被 描述为丙烯酸和带有低含量季铵基团的甲基丙烯酸酯的完全聚合的共聚 物。

在一优选的实施方案中，丙烯酸聚合物为丙烯酸树脂漆诸如那些可 自Rohm Pharma商购获得的，商标名为Eudragit在另外优选的实施方 案中，丙烯酸聚合物由两种丙烯酸树脂漆的混合物组成，所述的丙烯酸 树脂漆可自Rohm Pharma商购获得的，商标分别为EudragitRL30D和 EudragitRS30D。EudragitRL30D和EudragitRS30D为丙烯酸和带 有低含量季铵基团的甲基丙烯酸酯的聚合物，铵基基团与剩余的中性(甲 基)丙烯酸酯的摩尔比率在EudragitRL30D为1∶20，在EudragitRS30D 中为1∶40。平均分子量约为150,000。也优选EdragitS-100和EudragitL-100。代码命名RL(高渗透性)和RS(低渗透性)指的是这些试剂的渗透特 性。EudragitRL/RS混合物在水和消化液中是不可溶的。然而，所形成 的包括相同物质的多微粒系统在水性溶液和消化液中是可膨胀的且可渗 透的。

以上所述的聚合物诸如EudragitRL/RS可以任一所需的比例混合 在一起以最终获得具有理想的溶解属性的持续释放制剂。例如理想的持 续释放多微粒系统可自100％EudragitRL、50％ EudragitRL和50％  EudragitRS和10％ EudragitRL和90％ EudragitRS获得。本领域中 技术人员应当理解，也可使用其他的丙烯酸聚合物，例如诸如EudragitL。

可选择地，可利用渗透系统或通过将半渗透性的包衣应用到剂型中 来制备延长释放制剂。对于后一种情况，所需的药物释放属性可通过将 低渗透性的与高渗透性的包衣物质以合适的比例组合来获得。

以上所述的带有不同药物释放机制的装置可在包含单一的或多重的 单元的最终剂型中进行组合。所述的多重单元的实例包括但不限于包含 片剂、珠或颗粒的多层片剂和胶囊。可借助于使用包被或压缩过程在延 长释放核心顶部应用即刻释放层或在多元系统诸如包含延长和即刻释放 珠的胶囊中，添加即刻释放部分至延长释放系统。

通过本领域中常规已知的技术，诸如直接压缩、湿法制粒或干法制 粒制备包含亲水聚合物的延长释放片剂。它们的制剂通常掺入聚合物、 稀释剂、粘合剂、润滑剂以及活性药物成分。通常所述的稀释剂包括惰 性粉状物质诸如淀粉、粉状纤维素、尤其是结晶和微晶纤维素、糖类诸 如果糖、甘露醇和蔗糖、预拌粉以及相似的可食用粉末。典型的稀释剂 包括，例如各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、 无机盐诸如氯化钠和糖粉。粉状纤维素衍生物也是可用的。典型的片剂 粘合剂包括诸如淀粉、明胶以及诸如乳糖、果糖和葡萄糖的糖类物质。 天然的和合成的树胶，包括阿拉伯树胶、褐藻酸酯、甲基纤维素和聚乙 烯吡咯烷酮也是可用的。聚乙二醇、亲水聚合物、乙基纤维素和蜡类也 可用作粘合剂。润滑剂在片剂制剂中是必需的以防止片剂和打孔器粘附 模具上。从此类湿滑的固体如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸以及 氢化植物油中选取润滑剂。

通常利用本领域中已知的方法，诸如直接混合方法、凝结方法和水 分散体方法制备包含蜡类物质的延长释放片剂。在凝结方法中，药物与 蜡类物质混合且或被喷射凝结或被凝结、筛选及处理。

可通过用聚合物膜包被固体剂型来制造延迟释放制剂，所述的聚合 物膜在胃的酸性环境中是不可溶的而在小肠的中性环境中是可溶的。

例如可通过用挑选出来的包被物质包被药物或包含药物的组合物来 制备延迟释放剂量单位。例如包含药物的组合物可为用于掺入到胶囊的 片剂，用作“包被核心”剂型中内核的片剂或多个用于掺入到片剂或胶囊 的包含药物的珠、微粒或颗粒。优选的包被物质包括可生物消化的、可 逐渐水解的、可逐渐溶于水的和/或可酶促降解的聚合物，而且可为常规 的“肠溶的”聚合物。如本领域中技术人员应当理解，肠溶的聚合物随着 剂型穿过胃肠道，在下胃肠道较高的pH环境中变得可溶或缓慢地侵蚀， 同时可酶促降解的聚合物被存在于下胃肠道尤其是结肠内的细菌性酶降 解。合适的用于影响延迟释放的包衣物质包括但不限于纤维素聚合物， 诸如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、 羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素酞酸酯、甲基纤维 素、乙基纤维素、纤维素醋酸酯、醋酸纤维素酞酸酯、醋酸纤维素偏苯 三甲酸酯和羧甲基纤维素钠、丙烯酸聚合物和共聚物、优选形成于丙烯 酸、甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或乙基 丙烯酸甲酯以及其他的可商购获得的商标为Eudragit(Rohm Pharma； Westerstadt，Germany)的甲基丙烯酸树脂，其包括EudragitL30D-55和 L100-55(pH 5.5及以上可溶)、EudragitL-100(pH 6.0及以上可溶)、 EudragitS(pH 7.0及以上，高度酯化的结果)以及EudragitsNE、RL 和RS(具有不同程度渗透性和膨胀性的非水溶性聚合物)；乙烯基聚合物 和共聚物诸如聚乙烯基吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、醋酸乙烯酯酞酸酯、醋 酸乙烯酯巴豆酸共聚物和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；酶促降解的聚合物诸 如偶氮聚合物、果胶、壳聚糖、直链淀粉和瓜尔豆胶；玉米蛋白以及紫 胶。也可使用不同包衣物质的组合。也可应用使用不同聚合物的多层包 衣。

对具体的包衣物质而言，优选的包衣重量易于由本领域中技术人员 通过评估用各种不同数量的包衣物质制备的片剂、珠和颗粒的个体释放 属性而确定。产生所需释放特征的材料、方法和应用形式的组合，只能 由技术人员通过临床研究确定。

包衣组合物可包括常规的添加剂，诸如增塑剂、染料、着色剂、稳 定剂、助流剂等。增塑剂正常存在以减少包衣的脆性，通常占相对于聚 合物干重的约10-50wt.％。典型的增塑剂的实例包括聚乙二醇、丙二醇、 三醋精、酞酸二甲酯、酞酸二乙酯、酞酸二丁酯、癸二酸二丁酯、柠檬 酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三乙酯、蓖麻油以及乙酰甘油单 酯。稳定剂优选用于稳定分散中的微粒。典型的稳定剂为非离子乳化剂 诸如山梨醇酐酯、聚山梨醇酯和聚乙烯吡咯烷酮。助流剂被推荐用于减 少膜形成和干燥期间的粘附效应，通常占大约包衣溶液中聚合物重量的 25-100wt.％。一种有效的助流剂是滑石。也可使用其他的助流剂诸如硬 脂酸镁和单硬脂酸甘油脂。也可使用染料诸如二氧化钛。也可添加少量 的消泡剂诸如硅酮(例如二甲基硅油)至包衣组合物。

III.制备化合物的方法

本文所述的化合物合成的实施例显示于附加的方案1-3。在所有情况 下，起始物质为1，2-二氯-4-硝基苯和哌嗪，其起反应而形成适用于制备 本文所述的化合物的1-(4-硝基-1-氯苯基)哌嗪。

苯反应物上的取代基是不同的，相应地与待被制备的终产物相一致。 如此形成的取代哌嗪与3-苯基-4-羧基-异噁唑化合物起反应，根据待形成 的终产物适当地被取代。通过受保护的1，4-二羟苯与盐酸羟胺起反应及随 后通过示例的方案1-3中的化学反应步骤制备3-苯基-4-羧基-异噁唑化合 物。实施例中描述了制备化合物1-10的方法。

方案1.化合物1(YD-04)的合成

方案2.化合物2(YD-01)的合成)：

方案3.化合物3(YD-03)和化合物4(YD-07)的合成

IV.使用方法

本文所述的抗病毒剂可用于减少病毒生长、感染性、负担、散发、 抗病毒耐药性的发展和/或增强传统的抗病毒治疗的功效。

所有的带有反义RNA基因组的病毒都编码单链RNA结合核蛋白 (NP)。核蛋白是结构上与核酸(DNA或RNA)有关系的蛋白。流感病毒核 蛋白是感染期间表达最丰富的蛋白，其带有多重功能，包括在细胞核和 细胞质间梭动以及壳体化病毒基因组用于RNA转录、复制和包装。NP 与各种各样的病毒和宿主的细胞大分子相互作用，所述的细胞大分子包 括它本身、RNA、病毒RNA依赖性RNA聚合酶以及病毒基质蛋白。NP 也与宿主多肽(诸如肌动蛋白)、核输入和输出装置组分以及核RNA解旋 酶相互作用。三个潜在的甲型流感病毒NP上的结合新的结合位点包括小 槽、RNA结合袋槽和尾部环形槽。

不受任何特定的理论约束，假设本文所述的化合物作用机制涉及结 合病毒的核蛋白(NP)，诸如流感病毒，以干扰病毒在体内复制。

在一实施方案中，本文所述的抗病毒剂与甲型流感病毒体背面的小 槽(nucleozin结合槽)结合并涉及残基280-311(VYGSAVASGYDFEREGYS  LVGIDPFRLLQNSQ)(SEQ ID NO：1)。这些残基的二级结构包括三个短的 螺旋(280-287、291～294和301-309)，其通过螺旋间残基所形成的环相连 接。

NP抑制剂可位于体背面的小槽并通过氢键与残基N309，通过疏水 作用与Y289相互作用，其中化合物的苯环可与Y289的苯环平行，而且 这两个环间的距离为约3.2-4.3之间。

在一具体的实施方案中，NP抑制剂结合在小槽内，而且化合物与残 基S287形成氢键。在一些实施方案中，抗病毒剂可产生结合接触，单独 地或与以上所列举的接触组合。尤其是抗病毒剂可与残基465-470(序列： ELSDEK)(SEQ ID NO：2)、残基22-26(序列：ATEIR)(SEQ ID NO：3)、残 基A22-47L(序列：ATEIRASVGKMIDGIGRFYIQMCTEL)(SEQ ID NO：4)、 R55或其组合接触。

在另一实施方案中，NP抑制剂与甲型流感病毒核蛋白的RNA结合 槽结合。在这一实施方案中，NP抑制剂位于RNA结合结构域内，并与 残基Q364和V363形成氢键，从而阻止RNA进入富含精氨酸的凹槽， 所述结合结构域贯穿了核蛋白体和头之间的内部槽。Y148被认为其功能 是固定RNA的第一个碱基。

在另一实施方案中，示例性的NP抑制剂与流感病毒的尾部环形槽结 合。在这一实施方案中，NP抑制剂位于靠近残基E339的尾部环形槽结 合域内，并与残基V186、R267和G268形成氢键。在这一结合袋内的 NP抑制剂破坏了来自于另一单体的E339和R416间所形成的盐桥。

B.待被治疗的病症

可利用本文所述的化合物或组合物预防或治疗由包膜和无包膜的病 毒所引起的病毒感染，包括感染动物、脊椎动物、哺乳动物和人类患者 的那些病毒。所述的化合物适用于治疗感染脊椎动物，尤其是人类的所 有病毒，尤其是动物和人类病原的病毒。可治疗的病毒感染和由此产生 的相关疾病包括但不限于CMV、RSV、沙粒病毒和HIV感染，以及肝炎、 流感、肺炎、拉萨热和AIDS疾病。国际病毒分类委员会包含本领域中已 知的病毒株的完整列表，在此通过引用将其全部并入。

在一些实施方案中，待预防或治疗的疾病包括病毒感染。在优选的 实施方案中，所述的化合物和制剂被用于治疗或预防甲型流感病毒感染。 可用本发明方法的制剂预防或治疗的甲型流感病毒包括H1N1、H2N2、 H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3和H10N7。在优选 的实施方案中，本发明的制剂对由H1N1或H3N2所引起的甲型流感病 毒株的治疗是有作用的。

C.剂量

抗病毒制剂阻止病毒生长和增殖所需的剂量取决于许多因素，包括 可能存在的病毒类型、制剂所被引入的环境以及设想制剂停留在给定区 域内的时间。

优选的化合物是被虚拟筛选所鉴定的那些化合物。示例性化合物属 于通式I-VI。病毒感染治疗的典型剂量为大约0.1-250mg/kg/日，优选 0.2-250mg/kg/日。

化合物通过口服或胃肠外途径给予人类用于病毒感染的治疗而且可 以以大约0.1-大约500mg/kg的剂量水平口服给药，优选大约0.5-250 mg/kg/日，每日给予一次或两次。

基于被治疗患者的体重和状况以及如本领域中技术人员已知的所选 择的特定给药途径将产生剂量和制剂的差异。

实施例

材料和方法

病毒

在Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞中增殖A\WSN\33流感病毒。在感 染的MDCK细胞培养中形成完全的细胞病变效应后，收获病毒颗粒并储 存在-70℃冰箱里直到使用为止。甲型流感病毒株A/越南/1194/04生长于 鸡胚中生长，收获的包含病毒的尿囊液等分储存于-70℃直到使用为止。

空斑减少测定

使用空斑减少测定确定化合物在MDCK细胞上抗流感病毒A H1N1YWSNY33的保护效应。

在24孔组织培养板上一式三份地进行PRA测定。病毒添加前一天 使用带有10％胎牛血清(FBS)的伊格尔氏最低必需培养基(EMEM)以1 ×10⁵个细胞/孔接种MDCK细胞。16-24小时后，将100-200个流感 A/WSN/33病毒的空斑形成单位(PFU)添加到带有或不带有化合物的单层 细胞。不同实验中化合物1-10每个的浓度都是不同的。吸引除去未结合 的病毒颗粒前，在37℃，5％CO₂下允许病毒感染细胞1.5-2小时。用EMEM 洗涤单层细胞一次然后用含1％低熔点琼脂糖的包含1％FBS的EMEM和 1μg/ml TPCK胰蛋白酶覆盖。当需要时化合物也存在于琼脂糖覆盖层中。

在37℃、5％CO₂下，平板孵育72小时。在感染后72小时，用10％ 甲醛固定细胞3小时并将平板浸在1％卫可(Virkon)消毒剂中5分钟。然 后除去琼脂糖塞并用0.7％结晶紫将单层细胞染色。计数病毒感染所形成 的空斑。对每个化合物浓度而言，确定相对于对照(未添加化合物)空斑抑 制的百分比。对于每个化合物，绘制相对于抑制剂不存在时对照的空斑 形成单位(PFU)(PFU减少％)与测试化合物的浓度的函数的曲线图。通过 绘制的图计算半数有效浓度EC₅₀，其代表减少50％的病毒PFU所需要的 药物浓度。结果表示为化合物不存在时对照的百分比并显示于图中。显 示带有标准差的平均值。

细胞毒性测定

通过3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴(MTT，Sigma-Aldrich， USA)测定测量化合物1-10的细胞毒性。通过在平底96孔微滴定平板上 将Vero细胞或MDCK细胞以20,000个细胞/孔接种于总体积为100μl带 有10％胎牛血清的EMEM进行该测定。孵育24小时后，用PBS洗涤细 胞两次，然后在添加化合物前用新鲜的EMEM重新装满。添加化合物后， 在37℃、5％CO₂下再孵育细胞24小时。向每孔添加MTT达到0.5mg/ml 的最终浓度。在37℃、5％CO₂下再孵育平板4小时。孵育期最后，向每 一孔添加含10％月桂烷硫酸酯的0.01M盐酸(HCl)100μl以使细胞溶解。 孵育过夜后，640nm作为参考波长，在570nm处读取平板。自MTT数 据中估算半数中毒浓度TC₅₀，其代表减少50％的MTT读取所需要的化合 物浓度。

实施例1.化合物1(YD-04)的合成

根据方案1显示的合成方案合成化合物1。化合物2、3和4合成的 合成方案的变化实施例显示于方案2和3以解释在合成其他的化合物1 的类似物中的轻微不同。

YD-041合成

逐滴添加含叔丁基二甲基氯硅烷(6.8g，45.0mmol)的无水二氯甲烷 (50ml)溶液至含对羟基苯甲醛(3.7g，30.0mmol)和三乙胺(6.3ml，45.0 mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液。室温下搅拌由此得到的混合物2小时 然后添加水(100ml)。分离有机层，用二氯甲烷萃取水层。用水及饱和盐 水洗涤合并的有机层并用硫酸镁干燥。过滤浓缩后，通过柱层析法(石油 醚∶乙酸乙酯＝9∶1)进一步纯化所获得的残余物，从而产生黄色油状粗产 物YD-041(7.29g)。

化合物YD-042的合成

室温下将YD-041(1.18g，5mmol)与盐酸羟胺(1.15g，16.5mmol)溶 解于无水乙醇(10mL)中，然后逐滴添加嘧啶(20mL)并同时搅拌。室温下 搅拌由此得到的混合物30分钟然后加热至回流40分钟。完成后就将反 应混合物冷却至室温并添加37％盐酸溶液(2mL)和水(7.5mL)的混合物。 将由此得到的混合物浓缩至剩余总体积的三分之一。二氯甲烷萃取后， 用饱和盐水洗涤有机层并用硫酸镁干燥。除去溶剂后，通过柱层析法(石 油醚∶乙酸乙酯＝11∶1)纯化剩下的残余物，从而产生黄色油状YD-042 (0.862g，78％)。¹H NMR(400MHz，CDCL₃)，δ8.48(br s，1H，-OH)，8.10(s， 1H，N＝CH)，7.45(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)， 0.98(s，9H，-C(CH₃)₃)，0.21(s，6H，2SiCH₃)。

化合物YD-043的合成

将YD-042(810mg，3.2mmol)溶解于无水二甲基甲酰胺(4mL)然后冷 却至0℃。逐份添加N-氯代琥珀酰亚胺(NCS，452mg，3.2mmol)并搅拌。 移除冷水浴并在室温下搅拌反应混合物1小时。完成后即添加数量为反 应混合物体积4倍的水并用乙醚萃取由此得到的混合物。用水洗涤有机 层3次并用硫酸镁干燥。过滤浓缩后获得黄色油状粗制YD-043(884mg， 96％)。

化合物YD-044的合成

0℃下逐滴添加含粗制YD-043(884mg，3.1mmol)的乙腈(8mL)溶液 至YD-06(737mg，3.8mmol)的乙腈(40mL)溶液。0℃下搅拌由此得到的 混合物2小时。完成后，即添加冰水(4mL)并在减压下除去绝大多数的溶 剂。添加水并用乙醚萃取由此得到的混合物。用水洗涤有机层3次，饱 和盐水洗涤1次并用硫酸镁干燥。过滤浓缩后，减压下通过柱层析法(石 油醚∶乙酸乙酯＝15∶1)纯化残余物，从而产生黄色油状YD-044(627mg， 52％).IH NMR(400MHz，CDCl₃)，δ7.48(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，6.89(d， J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，2.69(s，3H，-CH₃)，1.44(s，9H，O-C(CH₃)₃)，0.99(s， 9H，Si-C(CH₃)₃)，0.21(s，6H，2SiCH₃).

化合物YD-045的合成

将YD-044(3.23g，8.3mmol)溶解于三氟乙酸(10mL)并在室温下搅 拌由此得到的溶液30分钟。减压下除去三氟乙酸并将残余物溶解于乙醚 中。添加石油醚以使产物结晶。过滤及真空干燥后，获得白色片状结晶 YD-045(1.327g，48％)，熔点146-148℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)，δ 7.54(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，6.89(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，2.75(s，3H， -CH₃)，1.00(s，9H，Si-C(CH₃)₃)，0.23(s，6H，2SiCH₃)。

化合物YD-046的合成

依次添加N，N-二异丙基乙胺(DIEA，103mg，0.80mmol)、YD-05(128 mg，0.53mmol)及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺(EDCI，406mg， 2.13mmol)至含YD-045(177mg，0.53mmol)的无水二氯甲烷(8mL)的溶 液。室温下搅拌由此得到的混合物3小时然后用二氯甲烷稀释。分离有 机层，用2M氢氧化钠溶液、水、和饱和盐水洗涤，硫酸镁干燥、过滤 及浓缩。通过柱层析法(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)进一步纯化由此得到的残 余物，从而产生淡黄色针状晶体YD-046(141mg，48％).¹H NMR(400 MHz，CD₃COCD₃)，δ8.19(d，J＝2.7Hz，1H，Ar-H)，8.12(dd，J＝9，2.7Hz， 1H，Ar-H)，7.61(d，J＝8.7Hz，2H，Ar-H)，7.19(d，J＝9Hz，IH，Ar-H)，7.02 (d，J＝8.7Hz，2H，Ar-H)，3.91(br s，2H，CH₂)，3.44(br s，2H，CH₂)，3.27 (br s，2H，CH₂)，2.86(br s，2H，CH₂)，2.50(s，3H，-CH₃)，0.97(s，9H， Si-C(CH₃)₃)，0.23(s，6H，2SiCH₃)。

化合物1(YD-04)的合成

将YD-046(67mg，0.12mmol)溶解于无水四氢呋喃(4mL)并添加四 正丁基氟化铵(TBAF，63mg，0.24mmol)。室温下搅拌由此得到的混合物 30分钟。浓缩后，通过柱层析法(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化残余物，从 而产生亮黄色粉末YD-04(31mg，58％)。235-240℃分解。

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ9.96(br s，1H，-OH)，8.23(d，J＝2.6 Hz，1H，1′-H)，8.14(dd，J＝9，2.6Hz，1H，2′-H)，7.44(d，J＝8.7Hz，2H， 2-H，3-H)，7.21(d，J＝9Hz，1H，3′-H)，6.89(d，J＝8.3Hz，2H，1-H，4-H)， 3.82(br s，2H，CH₂)，3.36(br s，2H，CH₂)，3.21(br s，2H，CH₂)，2.89(br s，2 H，CH₂)，2.46(s，3H，-CH₃)。

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ168.3，161.5，159.3，159.2，154.0， 141.8，128.7，126.3，125.9，123.6，120.6，118.5，115.8，110.4，50.1，49.7，46.2， 41.2，11.3；LRMS(API-ES)：443(M⁺+H)。

实施例2：化合物2(YD-01)的合成

方案2中显示了化合物2(YD-01)在结构上的合成。

化合物YD-011的合成

将苯甲醛(10.60g，0.10mol)和盐酸羟胺(22.94g，0.33mol)溶解于 90％乙醇(330mL)。通过添加氢氧化钠粉末将该溶液的pH调至5。室温 下搅拌由此得到的溶液30分钟并再加热至回流30分钟。将反应混合物 冷却至室温，添加浓缩的盐酸(40mL)和水(50mL)的混合物，并将其浓缩 至原体积的三分之一。用二氯甲烷萃取浓缩的混合物并用饱和盐水洗涤 有机层，无水硫酸镁干燥，真空蒸发，产生黄色的粗制油。通过真空蒸 馏(40mmHg，150-155℃)纯化粗制油，从而产生淡黄色油状YD-011(9.87g， 82％产率)，其一旦凝固就会形成灰白色晶体。顺式和反式的同分异构体 都可被TLC检测到。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.01(br s，IH，-OH)，8.17(s，IH，＝CH)， 7.59-7.56(m，2H，Ar-H)，7.40-7.35(m，3H，Ar-H)。

化合物YD-012的合成

0℃下按份添加N-氯琥珀酰亚胺(NCS，8.79g，66mmol)至含 YD-011(2g，16.53mmol)的无水二氯甲烷溶液并搅拌。将混合物加热至室 温并搅拌2小时。添加水(50mL)至反应混合物并分层。用二氯甲烷(20 mL*3)萃取水层，用饱和盐水洗涤合并的有机层，无水硫酸镁干燥、过滤 及真空浓缩。粗产物通过柱层析法，用梯度递减的石油醚(100∶150∶1)的乙 酸乙酯洗脱，从而产生YD-012(1.02g，40％产率)。顺式和反式的同分异 构体都可被TLC检测到。由于YD-012的不稳定性它被直接用于下一步 骤而不进一步纯化。

化合物YD-06的合成

逐滴添加含六甲基二硅钾(1M，28.64mL)的四氢呋喃(THF)溶液至乙 酰乙酸叔丁酯(5.2mL)的乙醚(100ml)溶液。通过添加正己烷浓缩及沉淀 反应混合物。过滤沉淀物并干燥产生粗产物YD-06。

化合物YD-013的合成

将粗制YD-06(1.0g，5.1mmol)溶解于乙腈(50mL)并将混合物冷却 至0℃。逐滴添加含化合物YD-012(0.65g，4.2mmol)的乙腈(10mL)溶液 至YD-06溶液并搅拌。0℃下搅拌反应混合物2小时并添加冰水(4mL)。 真空蒸发混合物。将残余物再溶解于水中并用二氯甲烷萃取。用饱和盐 水洗涤有机层、无水硫酸钠干燥、过滤及真空浓缩以产生粗制的残余物， 其通过石油醚(60-90℃)作为洗脱液的柱层析法产生灰白色的固体 YD-013(510mg，47％产率)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.59-7.56(m，2H， Ar-H)，7.47-7.40(m，3H，Ar-H)，2.71(s，3H，-CH₃)，1.41(s，9H，-C(CH₃)₃)。

化合物YD-014的合成

将化合物YD-013(186mg，0.718mmol)溶解于三氟乙酸(5mL)并在 室温下搅拌溶液4小时。真空蒸发由此得到的溶液以除去三氟乙酸。添 加二氯甲烷并将溶液再蒸馏两次。将残余物溶解于乙醚，并通过添加石 油醚进行再结晶。通过过滤及真空干燥分离白色晶体化合物YD-014。浓 缩母液，通过柱层析法，用含1％体积的冰醋酸的石油醚-乙酸乙酯(3∶1) 洗脱，从而产生白色固体YD-014。晶体化合物的结合重量为115mg(79％ 产率)。¹H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.65-7.62(m，2H，Ar-H)，7.51-7.42(m， 3H，Ar-H)，2.77(s，3H，-CH3)。

化合物YD-05的合成

逐滴添加含3，4-二氯硝基苯(1.64g，8.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺 (15mL)溶液至含哌嗪(3.73g，43.4mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(11mL)溶 液并在室温下搅拌。将由此得到的混合物加热至100℃并维持在此温度5 小时。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩以除去N，N-二甲基甲酰胺。 用二氯甲烷(25mL)稀释由此得到的残余物。用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤 有机层，无水硫酸钠干燥，过滤及浓缩。残余物在氯仿和甲醇(3∶1)中再 结晶，产生黄色晶体化合物YD-05(1.77g，85％产率).¹H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.24(d，J＝2.6Hz，1H，Ar-H)，8.09(dd，J＝9，2.6Hz，1H，Ar-H)， 7.04(d，J＝9Hz，1H，Ar-H)，3.20-3.18(m，4H，2CH2)，3.08-3.06(m，4H， 2CH₂)，1.93(br s，1H，NH)。

化合物2(YD-01)的合成

依次添加二异丙基乙胺(DIEA，305mg，2.36mmol)、YD-05(380mg， 1.58mmol)和1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCl，1.2g，6.30mmol) 至含YD-014(320mg，1.58mmol)的无水二氯甲烷(10mL)溶液。室温下搅 拌由此得到的混合物2小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，依次用氢氧 化钠水溶液(2M)、水和饱和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥、过滤 及浓缩。残余物通过柱层析法，用石油醚的乙酸乙酯(3∶1)洗脱，从而产 生淡黄色固体YD-01(290mg，43％产率)。

¹H-NMR(400MHz，DMS0-d6)δ8.23(d，IH，J＝2.6Hz，1′-H)，8.15(dd， IH，J＝9，2.6Hz，2′-H)，7.63-7.60(m，2H，1-H，5-H)，7.55-7.52(m，3H，2-H， 3-H，4-H)，7.20(d，IH，J＝9Hz，3′-H)，3.81(br s，2H，CH₂)，3.39(br s，2H， CH₂)，3.20(br s，2H，CH₂)，2.85(br s，2H，CH₂)，2.50(s，3H，-CH₃)；

¹³C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ168.8，161.2，159.6，153.9，141.9， 130.2，129.1，127.9，127.3，126.3，125.9，123.7，120.6，110.7，50.1，49.7，46.3， 41.3，11.4；LRMS(API-ES)：427(M⁺+H)。

实施例3.化合物3(YD-07)的合成

方案3中显示了化合物3(YD-07)在结构上的合成。

化合物YD-031的合成

室温下将对硝基苯甲醛(4.53g，0.03mol)和盐酸羟胺(6.87g，0.099 mol)溶解于90％乙醇(100ml)。通过添加氢氧化钠粉末将反应混合物的pH 调至5，室温下搅拌由此得到的溶液30分钟，然后加热至回流4小时。 完成后，就将反应混合物冷却至室温并在减压下除去乙醇。添加水并用 二氯甲烷萃取由此得到的混合物。用饱和盐水洗涤合并的有机层并用硫 酸镁干燥。除去溶剂后，获得光谱纯的黄色非晶体粉末YD-031。熔点 127-129℃；1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.26(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)， 8.21(s，1H，N＝CH)，7.98(s，1H，-OH)，7.75(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)。

化合物YD-032的合成

将YD-031(887mg，5.3mmol)溶解于无水二甲基甲酰胺(4.6mL)并将 溶液冷却至0℃。逐份添加N-氯琥珀酰亚胺(800mg，6.0mmol)并搅拌。 移除冷水浴并在室温下搅拌由此得到的混合物4小时。完成后，即添加 冰水(20mL)并用乙醚萃取由此得到的混合物。用水洗涤有机层3次，用 饱和盐水洗涤1次，用硫酸镁干燥。过滤后除去溶剂从而产生白色固体 YD-032(1.064g，100％).¹H NMR(400MHz，CDCl₃)，δ8.37(s，1H，-OH)， 8.27(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，8.04(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)。

化合物YD-033的合成

0℃下添加含粗制YD-032(1g，5.0mmol)的乙腈(25ml)溶液至含粗制 YD-06(1.213g，6.2mmol)的乙腈(60ml)溶液并同时搅拌。0℃下搅拌由此 得到的溶液2小时。完成后，即添加冰水(4ml)并在减压下除去绝大多数 的溶剂。用水稀释剩余的液体并用二氯甲烷萃取。用饱和盐水洗涤有机 层并用硫酸镁干燥。过滤和除去溶剂后，通过柱层析法(石油醚∶乙酸乙酯 ＝10∶1)纯化残余物，从而产生淡黄色立方晶体YD-033(1.239g，78％)。熔 点86-87℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.31(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)， 7.81(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，2.75(s，3H，-CH₃)，1.46(s，9H，O-C(CH₃)₃)。

化合物YD-034的合成

将YD-033(100mg，0.33mmol)和氯化亚锡二水合物(371mg，1.64 mmol)溶解于无水乙醇(7mL)并将由此得到的溶液加热至回流1.5小时。 将反应混合物冷却至室温并添加适量的冰水。通过添加20％无水碳酸钠 溶液将由此得到的混合物的pH调至8。用乙酸乙酯萃取后，用盐水洗涤 有机层并用硫酸钠干燥。过滤浓缩后使用硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1) 将所获得的残余物纯化，从而产生白色针状晶体YD-034(72mg，80％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.42(d，J＝8.6Hz，2H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.6 Hz，2H，Ar-H)，3.78(br s，2H，NH₂)，2.66(s，3H，-CH₃)，1.47(s，9H， O-C(CH₃)₃)。

化合物YD-038的合成

将YD-034(1.0g，3.65mmol)溶解于三氟乙酸(5mL)并在室温下搅拌1 小时。减压下除去三氟乙酸并将残余物与二氯甲烷共沸两次，从而产生 粗制的白色固体YD-038(810mg)。

化合物3(YD-03)的合成

依次添加N，N-二异丙基乙胺(DIEA，138mg，1.08mmol)、YD-05(207 mg，0.86mmol)和EDCI(550mg，2.88mmol)至含粗制YD-038(157mg， 0.72mmol)的无水二氯甲烷(8mL)溶液。在室温下将由此得到的混合物搅 拌4小时然后用二氯甲烷稀释。用2M氢氧化钠溶液、水和饱和盐水洗 涤该混合物。有机层用硫酸钠干燥、过滤及浓缩。通过柱层析法(石油醚∶ 乙酸乙酯＝2∶1)纯化所获得的残余物，从而产生亮黄色粉末YD-03(173mg， 49％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ8.24(d，J＝2.7Hz，1H，1‘-H)，8.15 (dd，J＝9，2.7Hz，1H，2’-H)，7.28(d，J＝8.6Hz，2H，2-H，3-H)，7.19(d，J＝ 9Hz，1H，3’-H)，6.63(d，J＝8.6Hz，2H，1-H，4-H)，5.60(br s，2H，NH₂)， 3.81(br s，2H，CH₂)，3.34(br s，2H，CH₂)，3.20(br s，2H，CH₂)，2.86(br s，2 H，CH₂)，2.42(s，3H，-CH₃)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d6)，δ167.9，161.8，159.5，154.0，150.7， 141.9，128.2，126.4，125.9，123.7，120.6，114.5，113.7，110.2，50.0，49.8，46.3， 41.2，11.4；LRMS(API-ES)：442(M++H)。

实施例4.化合物4(YD-07)的合成

将化合物YD-03(50mg，0.1134mmol)溶解于6M硫酸(1ml)并将由 此得到的溶液冷却至0℃。逐滴添加亚硝酸钠(7.2mg，0.136mmol)的水溶 液(0.5mL)并同时搅拌。将由此得到的混合物再搅拌30分钟同时维持温 度在5℃以下。添加叠氮化钠(125mg，1.923mmol)的水溶液(1mL)并将 温度升高至室温。在用水稀释前将混合物再搅拌2小时。乙酸乙酯萃取 后，用饱和盐水洗涤合并的有机层并用硫酸镁干燥。浓缩后，通过柱层 析法(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化所获得的残余物，从而产生亮黄色粉末 YD-07(38mg，72％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ8.24(d，J＝2.7Hz， 1H，1′-H)，8.16(dd，J＝9，2.7Hz，1H，2′-H)，7.66(d，J＝8.6Hz，2H，2-H， 3-H)，7.28(d，J＝8.6Hz，2H，1-H，4-H)，7.24(d，J＝9Hz，1H，3′-H)，3.83 (br s，2H，CH₂)，3.44(br s，2H，CH₂)，3.24(br s，2H，CH₂)，2.95(br s，2H， CH₂)，2.49(s，3H，-CH₃)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ168.7，161.1，158.9，154.0，141.8， 141.4，128.9，126.3，125.9，124.5，123.7，120.7，119.9，110.5，50.3，49.7，46.3， 41.3，11.4；LRMS(API-ES)：468(M⁺+H)。

实施例5.化合物5-10的合成

根据方案2制备化合物5，但是用邻氯苯甲醛代替苯甲醛作为起始。

根据用于化合物5的方案2制备化合物6，但是使用制备自2-甲基哌 嗪的YD-05的2-甲基衍生物代替哌嗪。

根据用于使用方案2的化合物6的方案2制备化合物7，但是用苯甲 醛代替邻氯苯甲醛作为起始。

根据用于化合物2的方案2制备化合物8，但是使用4-硝基氯苯代替 3，4-二氯硝基苯。

根据用于化合物2的方案2制备化合物9，但是使用2，6-二氯苯甲醛 代替苯甲醛作为起始物质。

根据用于化合物8的方案2制备化合物10，但是使用2，3-二氯硝基 苯代替3，4-二氯硝基苯作为起始物质。

实施例6.化合物1-10的抗病毒活性

为量化测量化合物1-10所给予的保护作用，进行空斑减少测定。这 些化合物抑制MDCK细胞中病毒空斑的形成，对于化合物1-10，EC₅₀分别为0.05、0.06、0.56、0.25、0.04、0.21、0.8、5.1、12和25μM(见 图1b、2b、3b、4b、5b、6b、7b、8b、9b和10b)。

测定化合物1-10对MDCK和Vero细胞的细胞毒性。测试的化合物 浓度范围为0-250μM，且结果显示于表1中。所述的结果表明化合物1-10 在MDCK和Vero细胞中的TC₅₀都在250μM以上。对于化合物1-10， 由MDCK细胞中TC₅₀/EC₅₀的比率所定义的选择性指数(SI)显示于表1中。 结果表明这一酰胺类家族通常对于哺乳动物细胞是无毒的。

表1.化合物1-10的抗病毒活性

除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语都具有属于所公 开发明领域的技术人员通常理解的含义。本文所引用的出版物及它们所 被引用的材料根据参考特异地合并。

本领域技术人员应当理解或能够确定本文所述的仅仅使用了常规实 验，许多相当于本发明的具体实施方案。意欲在以下的权利要求中包含 此类等同物。