一种连续流动巢式PCR微流控方法

摘要

本发明公开了一种连续流动巢式PCR微流控方法，该方法针对目标检测物的DNA序列设计由两对引物构成的巢式引物，将待测样品DNA加入含外引物的PCR反应体系混匀后注入连续流动式巢式PCR微流控装置中，使PCR反应液沿螺旋缠绕在三个独立控温的恒温铜柱片上的毛细管完成20~35个PCR扩增循环，并由毛细管末端的荧光检测与分析系统对扩增产物进行荧光图像采集与分析。将扩增产物加入包含内引物的PCR反应体系中，如上所述完成巢式PCR第二步扩增与产物检测。通过对两轮扩增产物荧光图像强度的分析，可确定待测样品中目标检测物的存在与否及其相对量。本发明可实现对低丰度DNA样品的低成本高灵敏快速检测，检出限可达1个拷贝数/总体积，所用时间仅为35~45min。