小半夏汤的有效部位及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种小半夏汤的有效部位，该有效部位的理化性质为：黄色油状物，具有一定的挥发性，可溶于热水和乙醇；该有效部位主要含有姜酚类和姜烯酚类成分，其中，6-姜酚含量约为40～50％、6-姜烯酚含量约为12～20％。本发明还公开了上述小半夏汤的有效部位的制备方法及应用。本发明从小半夏汤中提取得到的脂溶性有效部位具有明显的药理药效作用。(1)止呕作用明显。以硫酸铜致家鸽呕吐和化疗药物——顺铂致家鸽呕吐为实验模型，结果表明，脂溶性部位具有显著的止呕活性，能明显减少家鸽呕吐次数。(2)具有抑制正常小鼠胃排空的作用。

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种小半夏汤的有效部位及其制备方法和应 用。

背景技术

呕吐是临床常见现象，特别是肿瘤化疗病人没法避免的疾病，很多病人往往由于害 怕术后呕吐而不得不放弃化疗或放疗，从而耽误病情。目前用于治疗呕吐的药物虽然比 较多，但是效果并不理想，虽然象昂丹司琼、格拉司琼这类药物对化疗呕吐有一定效果， 但是由于这些药物价格昂贵且有一定的副作用，在一定程度上也限制了它们的使用。

呕吐在中医学上属于“气逆”范畴，认为呕吐是由于胃失和降、胃气上逆所引起的， 治疗呕吐应以调理气机，降逆止呕为主。中药具有化学合成药不可替代的优势，价格便 宜，且毒副作用小。但是目前从纯中药制剂中分离出具有良好的治疗呕吐的药物有效部 位及活性成分的方法和相关制剂并不多见。

本发明从具有抗呕吐作用的中医经典名方“小半夏汤”分离出具有抗呕吐活性的有 效部位。

发明内容

本发明所要解决的技术问题，是提供小半夏汤的活性部位。

本发明还要解决的技术问题，是提供上述小半夏汤的活性部位的制备方法。

本发明最后要解决的技术问题，是提供上述小半夏汤的活性部位的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

小半夏汤的有效部位，该有效部位的理化性质为：黄色油状物，具有一定的挥发性， 可溶于热水和乙醇；该有效部位主要含有姜酚类和姜烯酚类成分，其中，6-姜酚含量约 为40～50％(优选40％～46％)、6-姜烯酚含量约为12～20％(优选13％～15％)。上述 含量为重量百分比，100％基准为有效部位总重量，以下相同。

上述小半夏汤的有效部位的制备方法，将半夏和生姜按重量比1∶1混合均匀，加 水提取3～5h，过滤得提取液，药渣继续加水提取2～3h，合并两次提取液；提取液加 乙醇至醇质量百分含量为60～80％，静置8～12h后，离心，取上清液，浓缩至1～2g生 药·mL^-1，浓缩液用乙醚萃取两次，得到乙醚层和水层，将乙醚层浓缩回收乙醚得到脂溶 性部位即得。

其中，两次加水提取时，第一次水的重量为半夏和生姜总重量的5～8倍，第二次水 的重量为半夏和生姜总重量的3～5倍。

其中，乙醚萃取时，萃取两次，每次所用乙醚的体积均为浓缩液体积的0.8～1倍量。

其中，乙醚层浓缩回收乙醚时，采用水浴常压，浓缩温度为39～49℃。

上述小半夏汤的有效部位在制备止呕药物中的应用。

其中，所述的有效部位还可加入药学上可接受的辅料或赋形剂。

其中，所述的有效部位可制成临床上可接受的剂型。

其中，所述的有效部位可制成的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴 丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型中的任意一种。

有益效果：本发明从小半夏汤中提取得到的脂溶性有效部位具有明显的药理药效作 用。

(1)止呕作用明显。以硫酸铜致家鸽呕吐和化疗药物——顺铂致家鸽呕吐为实验 模型，结果表明，脂溶性部位具有显著的止呕活性，能明显减少家鸽呕吐次数。

(2)具有抑制正常小鼠胃排空的作用。

附图说明

图1A为6-姜酚的紫外光谱图。

图1B为6-姜烯酚的紫外光谱图。

图2A为对照品溶液的HPLC色谱图，其中1：6-姜酚；2：6-姜烯酚。

图2B为阴性样品溶液的HPLC色谱图，其中1：6-姜酚；2：6-姜烯酚。

图2C为样品溶液的HPLC色谱图，其中1：6-姜酚；2：6-姜烯酚。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发 明。

实施例1：

将半夏和生姜按重量比1∶1混合均匀，加水(水的重量为半夏和生姜总重量的5～8 倍)提取3～5h，过滤得提取液，药渣继续加水(水的重量为半夏和生姜总重量的3～5 倍)提取2～3h，合并两次提取液；提取液加乙醇至醇质量百分含量为60～80％，静置 8～12h后，离心，取上清液，浓缩至1～2g生药·mL^-1，浓缩液用乙醚萃取两次(每次 用乙醚体积为浓缩液体积的0.8～1倍量)，得到乙醚层和水层，将乙醚层采用水浴常压 浓缩，浓缩温度为39～49℃，得到黄色油状物，脂溶性部位即得。

该黄色油状物，具有一定的挥发性，可溶于热水和乙醇。对该部位进行分析，发现 该部位主要含有一些gingerol、shogaol类成分。HPLC测定6-姜酚含量约为40～50％、 6-姜烯酚含量约为12～20％。

实验例2：本发明有效部位的化学成分含量测定研究。

1.实验材料：

1.1样品：实施例1得到的活性部位即脂溶性部位，制备三个批次的脂溶性部位(Lot 1、 Lot 2、Lot 3)。

1.2仪器：Waters2690型高效液相色谱仪，996PDA检测器，Millennium32色谱管理系统； Sartorius BP211D型电子天平。

1.3试剂：甲醇为色谱纯，水为亚沸蒸馏水(自制)。

1.4对照品：6-姜酚、6-姜烯酚对照品，为由本实验室分离纯化制得的黄色油状物， 经UV、IR、MS、NMR等结构测定，并经HPLC检测为单一成分，纯度达到99％以上。

2.方法与结果：

2.1色谱条件：

2.1.1测定波长的选择：本试验采用紫外区全波长扫描的方法，对6-姜酚、6-姜烯酚 的最大吸收波长进行研究，结果发现，两者均在280nm处呈现最大吸收(见图1)，因 此确定了在280nm进行含量测定的方法。

2.1.2色谱条件色谱柱：Kromasil C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水 (65∶35)；检测波长λ＝280nm，柱温：30℃；体积流量：0.8mL·min^-1；理论塔板数以 6-姜酚计不低于4000，并且6-姜酚、6-姜烯酚与其它组分的分离度均大于1.5，色 谱图见图2。

2.2溶液的制备：

2.2.1对照品溶液的制备：分别取减压干燥至恒重的6-姜酚、6-姜烯酚对照品适量， 精密称定，加甲醇溶解，分别配成含6-姜酚6.365mg·mL^-1、6-姜烯酚2.22mg·mL^-1的对照品贮备液。

2.2.2供试品溶液的制备：精密称取脂溶性部位36mg，加热水40mL溶解，置150mL 分液漏斗中，加入无水乙醚萃取两次，取乙醚层，回收乙醚，残渣用甲醇溶解，定量转 移至25mL容量瓶中，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3线性关系的考察：

分别精密吸取对照品贮备液各0.2，0.6，1.0，1.4，1.8mL置10mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，制得混合对照品溶液系列，即6-姜酚系列对照品溶液(0.1273， 0.3819，0.6365，0.8911，1.1457mg·mL^-1)，6-姜烯酚系列对照品溶液(0.0444，0.1332， 0.222，0.3108，0.3996mg·mL^-1)。取10μL进样，测定。以对照品含量对峰面积平均值 作图，结果经回归分析，6-姜酚在1.273～11.457μg范围内有良好的线性关系，回归方 程为Y＝6.207×10⁵X-1.998×10⁴，r＝0.9999；6-姜烯酚在0.444～3.996μg范围内有良好 的线性关系，回归方程为Y＝Y＝3.273×10⁵X-2.278×10⁴，r＝0.9998。

2.4精密度试验

取供试品溶液(Lot 1)1份重复进样6次，进样量10μL，记录所测各组分积分面积。 结果6-姜酚、6-姜烯酚峰面积积分值的RSD分别为1.54％、1.43％。

2.5重现性试验

取同一批样品，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，依法测定，计算各组分含 量，结果6-姜酚、6-姜烯酚含量的RSD分别为0.43％、1.48％。

2.6稳定性试验

吸取新配制的供试品溶液(Lot 1)1份，分别于0，2，4，6，8，10，12h进样测 定7次，测定6-姜酚、6-姜烯酚的峰面积，结果其RSD分别为1.56％、1.41％，表明 供试品溶液在12h内稳定。

2.7阴性对照试验

按处方比例制得缺生姜的阴性样品，按2.2.2项下制备阴性样品溶液，按上述色谱 条件进样，记录色谱图，结果，在与对照品色谱相对应处未出现色谱峰。表明按本实验 条件，处方中的其它成分不干扰6-姜酚、6-姜烯酚的含量测定。

2.8回收率试验

配制含6-姜酚1.498mg·mL^-1，6-姜烯酚498μg·mL^-1的混合加样对照品储备液。 分别称取已知含6-姜酚、6-姜烯酚含量的样品18mg(Lot 1)，平行5份，精密加入 上述加样对照品储备液5.0mL，依供试品溶液制备方法处理，按上述色谱条件进行HPLC 分析，测定，计算回收率。结果6-姜酚的平均回收率为98.88％，RSD为0.83％；6- 姜烯酚的平均回收率为99.39％，RSD为1.42％。

表1  6-姜酚加样回收率试验结果(n＝5)

表2  6-姜烯酚加样回收率试验结果(n＝5)

2.9样品测定

取不同批号的样品，分别取供试品溶液和对照品溶液各10μL进样测定，以外标一 点法计算含量，结果见表3。

表3小半夏汤脂溶性部位中6-姜酚、6-姜烯酚含量的测定(n＝3)

实验例3：本发明有效部位对呕吐治疗的药理作用。

一、对硫酸铜和顺铂所致家鸽呕吐的影响。

1.实验材料

1.1样品，①实施例1得到的活性部位即脂溶性部位，临用时配制成一定浓度的溶液。 配制方法：取脂溶性部位适量，精密称定，加入一定量0.5％CMC-Na，超声10min，搅 拌，至充分混悬为止；②胃复安；③昂丹司琼。

1.2试剂，硫酸铜(分析纯，南京化学试剂厂)；生理盐水(南京小营制药厂)；注射用 顺铂(冻干型)(山东济南齐鲁制药有限公司生产，20mg/支，批号：6040151)，临用 时用生理盐水溶解配制成1.0mg·mL^-1的溶液；CMC-Na，分析纯。

1.3动物，健康成年家鸽，雌雄兼用，450～500g，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

2.方法与结果

健康家鸽，雌雄各半，按8只一组，随机分组。按表中剂量灌胃给药，模型组给 予0.5％CMC-Na每日2次，连续给药3天。阳性对照组给予胃复安1.0mg·kg^-1，连续 3天。末次给药前禁食12h，给药1h后，每鸽灌服2％硫酸铜0.2g·Kg^-1。记录给硫 酸铜后每只家鸽出现第1次呕吐的时间(呕吐潜伏期)和给予硫酸铜1.5h内的呕吐次 数。结果见表4。

另取健康家鸽，按8只一组，随机分组。按表中剂量灌胃给药，模型组给予 0.5％CMC-Na，每日2次，连续给药3天。阳性对照组每鸽翼下静脉注射昂丹司琼 0.3mg·kg^-1，连续3天。末次给药前禁食12h，给药30min后，每鸽翼下静脉注射顺铂 1.0mg·Kg^-1。记录注射顺铂后每只家鸽出现第1次呕吐的时间(呕吐潜伏期)和注射顺 铂6h内的呕吐次数。结果见表5。

表4  脂溶性部位对硫酸铜所致家鸽呕吐的影响(n＝8)

注：采用方差分析两两比较：与模型组相比，^*P＜0.05。

表5脂溶性部位对顺铂所致家鸽呕吐的影响(n＝8)

注：采用方差分析两两比较，与模型组相比，^*P＜0.05。

结果表明，脂溶性部位的高低剂量组均能明显减少硫酸铜和顺铂所致的家鸽呕吐次 数，止呕作用明显。与模型组相比，有显著性差异。

二、对正常小鼠胃排空的影响

1.实验材料

1.1样品，①脂溶性部位，临用时配制成一定浓度的溶液。配制方法同上。②小半夏汤， 取生姜和半夏等量，加5倍量水煎煮30min，滤过，残渣再加4倍量水煎30min。合 并两次滤液，浓缩至2g生药·mL^-1。

1.2试剂，酚红(上海化学试剂采购供应站，86-12-17)，NaHCO₃、CMC-Na，为分析 纯。

1.3动物，ICR小鼠，体重18～22g，雌雄兼用，上海斯莱克实验动物有限责任公司(SCXK (沪)2007-0005)。

1.4仪器：SPECTRA MAX 190紫外可见微孔板检测仪(美国MOLECULAR DEVICES)； GS-15R型台式冷冻离心机(美国BECKMAN公司)；PHS系列pH计(上海理达仪 器厂)。

2.方法与结果

取健康小鼠只，雌雄各半，随机分组，每组10只。各组分别灌胃给药或等容量 0.5％CMC-Na溶液(10ml·kg^-1)，每天两次，连续3天，于第4天给药前禁食不禁水12h。 给药后40min后，每只小鼠灌胃0.04％酚红溶液0.2ml，15min后处死，取胃置于5ml 蒸馏水的小烧杯中，用眼科剪沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用 NaHCO₃溶液调节pH值至6.0～6.5，取上清液以12000r·min^-1离心3分钟，精密吸取 上清液200μl于96孔板内，用酶标仪测定吸光值(波长560nm)。测得的吸光值为 胃中残留的酚红吸光值。酚红残留率的高低可反映胃排空的快慢。结果见表6。

胃残留率(％)＝(胃中酚红光密度/基准酚红光密度)×100％

表6脂溶性部位对正常小鼠胃排空的影响(n＝10)

注：采用方差分析两两比较，与生理盐水组相比，^*P＜0.05。

结果表明，从小半夏汤中提取得到的脂溶性部位，能明显抑制正常小鼠的胃排空， 与正常对照品相比，有显著性差异；与经典止呕方小半夏汤相比，脂溶性部位未见显著 性差异。说明，脂溶性部位与小半夏汤的作用效果相同。