一种毛头鬼伞大分子多糖及其制备方法

摘要

本发明公开了一种毛头鬼伞大分子多糖及其制备方法。本发明的毛头鬼伞大分子多糖是通过毛头鬼伞子实体的提取、提取液的浓缩、乙醇沉淀及洗涤、干燥的方法制备得到的。本发明的毛头鬼伞大分子多糖中多糖纯度高，含量达95%以上。

说明书

技术领域

本发明涉及食药用真菌提取领域，具体的说是涉及一种毛头鬼伞大分子多糖及其制备方法。

背景技术

毛头鬼伞（Coprinus comatus）又名鸡腿菇，其味甘滑性平，具有益脾胃、清心安神等功效，经常食用有助消化、增加食欲和治疗痔疮的作用。毛头鬼伞多糖是其主要活性成分之一，具有增强机体免疫、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化等作用。

目前从毛头鬼伞中分离纯化水溶性多糖普遍采用乙醇沉淀法粗分离，离子交换柱、凝胶柱纯化。得到的多糖纯度高，但操作过程复杂，耗时长，且得率非常低，很难用于规模化生产。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种毛头鬼伞大分子多糖，该毛头鬼伞大分子多糖是由如下方法制备得到的：

①毛头鬼伞子实体的提取：将毛头鬼伞子实体于50-60℃烘干后粉碎至粉末，加入15-20倍重量的蒸馏水浸泡20-30min，加热至100℃，保持温度120-180min，高速离心，沉淀重复上述步骤，再提取1-2次，合并上清液；

②上述提取液的浓缩：选择分子量截留值为75万道尔顿的超滤膜，压力低于0.3 Mpa，对上述提取液进行超滤，大于75万道尔顿的部分浓缩至料液比为1:4-6（原料重量（克）：提取液体积（毫升））；

③乙醇沉淀及洗涤：向上述浓缩液里加入无水乙醇，至乙醇重量百分比含量为40%，充分搅匀后静置4-6小时，离心去除上清，沉淀用50-60%的乙醇洗涤2-3次；

④干燥：沉淀加水溶解后，70-80℃水浴挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得毛头鬼伞大分子量多糖。

本发明还提供了一种制备上述毛头鬼伞大分子多糖的方法，该方法包括如下步骤：

①毛头鬼伞子实体的提取：将毛头鬼伞子实体于50-60℃烘干后粉碎至粉末，加入15-20倍重量的蒸馏水浸泡20-30min，加热至100℃，保持温度120-180min，高速离心，沉淀重复上述步骤，再提取1-2次，合并上清液；

②上述提取液的浓缩：选择分子量截留值为75万道尔顿的超滤膜，压力低于0.3 Mpa，对上述提取液进行超滤，大于75万道尔顿的部分浓缩至料液比为1:4-6（原料重量（克）：提取液体积（毫升））；

③乙醇沉淀及洗涤：向上述浓缩液里加入无水乙醇，至乙醇重量百分比含量为40%，充分搅匀后静置4-6小时，离心去除上清，沉淀用50-60%的乙醇洗涤2-3次；

④干燥：沉淀加水溶解后70-80℃水浴挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得毛头鬼伞大分子量多糖。

本发明的原理为：将毛头鬼伞子实体烘干后粉碎提取，使其胞壁多糖尽可能完全的释放；选择合适的超滤膜进行浓缩并去除小分子多糖与杂质，再以乙醇沉淀得到纯度较高的多糖。此方法制备的毛头鬼伞多糖纯度高，多糖得率高，且是均一多糖，色泽纯白，杂质极少，多糖含量超过95%，是一种简便、快速、高效、成本低、无污染、多糖纯度高的纯化毛头鬼伞大分子多糖的方法。

具体实施方式：

实施例1

1.毛头鬼伞（购自上海百信生物科技有限公司，批号110101）的提取：将毛头鬼伞子实体于60℃烘干后粉碎至粉末，称取100g，加入15倍重量的蒸馏水浸泡30min，加热至100℃，保持温度120min，9600rpm离心20min，沉淀重复上述步骤，再提取1次，合并上清液。

2.毛头鬼伞提取液的浓缩：选择分子量截留值为75万道尔顿的超滤膜（型号UFP-750-E-4MA中空纤维超滤膜，通用电气），压力低于0.3 Mpa，对上清液超滤浓缩，浓缩至500ml，从而使得大于75万的部分浓缩至料液比1:5。

3.乙醇沉淀及洗涤：向上述浓缩液里缓慢加入无水乙醇330ml，至乙醇含量为40%，充分搅匀后静置6小时，离心去除上清，沉淀用60%的乙醇洗涤3次。

4.干燥：沉淀加水溶解后75℃水浴挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得毛头鬼伞胞壁多糖1.54g。

5.多糖含量的检测：用苯酚－浓硫酸法，称取本品6.1mg置25 ml容量瓶中，加热充分溶解后稀释10倍，取1ml于15ml试管中，分别加入苯酚、硫酸试剂，沸水反应15min，在490 nm处测定吸收度A。以葡萄糖为标准品计算多糖的含量。制备所得灵芝多糖的多糖含量为95.4%。

实施例2

1.毛头鬼伞的提取：将毛头鬼伞子实体于60℃烘干后粉碎至粉末，称取50g，加入20倍重量的蒸馏水浸泡20min，加热至100℃，保持温度120min，9600rpm离心20min，沉淀重复上述步骤，再提取1次，合并上清液。

2.毛头鬼伞提取液的浓缩：选择分子量截留值为75万道尔顿的超滤膜，压力低于0.3 Mpa，对上清液超滤浓缩，浓缩至300ml，使得大于75万的部分浓缩至料液比1:6。

3.乙醇沉淀及洗涤：向上述浓缩液里缓慢加入无水乙醇200ml，至乙醇含量为40%，充分搅匀后静置6小时，离心去除上清，沉淀用55%的乙醇洗涤3次。

4.干燥：沉淀加水溶解后75℃水浴挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得毛头鬼伞胞壁多糖0.82g。

5.多糖含量的检测：用苯酚－浓硫酸法，称取本品5.4mg置25 ml容量瓶中，加热充分溶解后稀释10倍，取1ml于15ml试管中，分别加入苯酚、硫酸试剂，沸水反应15min，在490 nm处测定吸收度A。以葡萄糖为标准品计算多糖的含量。制备所得灵芝多糖的多糖含量为96.7%。