摘要:毛头鬼伞[Coprinus comatus(Mueller.ex Fr.)S.E.Gray 1821],别称鸡腿蘑、毛鬼伞,是一种食、药用真菌.药用味甘滑,性平,有益脾胃,清心安神等功效.据文献报道,毛头鬼伞主要具有降血糖、降血脂、增强免疫、抗肿瘤、抑菌等作用.目前关于毛头鬼伞的研究已经有报道,多集中在其栽培技术的研究,另有关于其药理活性的研究,而其中的药理实验均以其粗提物为研究对象,因此对毛头鬼伞中多糖组分的化学性质和结构的研究鲜有报道;为了系统的研究毛头鬼伞多糖的化学结构和其生物活性,我们先后通过水提醇沉和超滤分级两种分离纯化方式,对毛头鬼伞子实体多糖组分进行了分离纯化,获得了几种均一组份,并对其进行结构鉴定,同时还研究了它们的降血糖及免疫活性.毛头鬼伞子实体经过沸水、碱液提取,并用30%、60%、80%终浓度的乙醇沉淀,得到水提粗多糖CC30、CC60、CC80和碱提水溶性多糖CPB四个组分.CC30、CC60组分经DEAE-Sepharose离子柱和多步凝胶柱层析分离纯化,共得到六个均-多糖.通过糖组成分析、甲基化分析、IR和NMR光谱等方法研究了CC30w-1和CC30w-4的化学结构,两个均一多糖的分子量分别为1.03×104Da、1.96×104Da,但大致结构相同,具体结构如下: a-L-Fucp 1 ↓ 2→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1另外,我们将毛头鬼伞水提后,运用超滤分级、离子层析、凝胶层析等方法对毛头鬼伞子实体提取物中各组份进行分离纯化获得CBW-1、CBW-2、CBS-12、CBS-13四种均一多糖和均一物质CCPS-3,经HPLC鉴定为均一多糖.通过糖组成分析、甲基化分析,NMR解析等方法,研究CBS-12、CBS-13化学结构.CBS-12是以a-1.6半乳糖为主链的,a-岩藻糖为侧链的五个单糖残基组成的重复结构单元其具体结构为: a-L-Fucp 1 ↓ 26)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→CBS-13为含有少量端基葡萄糖的岩藻半乳聚糖,其结构为 a-L-Fucp 1 ↓ 2 6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→6)-a-D-Galp-(1→将水提醇沉后分离得到的毛头鬼伞多糖组份进行四氧嘧啶所致高血糖小鼠血糖的影响实验后发现,给药7天后CC60以1000mg/kg的剂量能显著降低小鼠四氧嘧啶诱发的高血糖,给药21天后粗提物CCP以1OOOmg/kg的剂量、CC30以1000mg/kg的剂量、CC60以1000mg/kg的剂量均能显著降低四氧嘧啶诱发的高血糖和糖化血清蛋白.CC60对四氧嘧啶高血糖小鼠血清胰岛素的影响实验表明CC60在大剂量情况下明显使小鼠低下的血清胰岛素水平回升.对分离纯化过程中的各多糖组分进行的体外免疫活性实验结果表明,除CPB外各粗多糖对淋巴细胞均有很好的增殖作用.在最终获得的均一多糖中,CC30w-1,CC30w-4对刺激淋巴细胞的增殖的作用不显著,而CC30s1-1、CC30w-2,CC30w-3、CC30s1-2在较高浓度下,对刺激淋巴细胞增殖有作用.在超滤分级实验中分离得到的组份中CCPS增殖效果最强;分级得到的CB、CC、CD三种粗多糖经过离子层析后得到的组分:CBW-1、CBS-l、CBS-2、CCW-l、CCS-1、CCS-2、CDS-1、CDS-2单一使用增殖效果均高于原粗多糖,且盐相组分的增殖作用要明显高于水相组分;CCPS中分离得到的组份CCPS-1和CCPS-3是其中的主要活性组分.