公开/公告号CN102439005A
专利类型发明专利
公开/公告日2012-05-02
原文格式PDF
申请/专利权人 杨森制药公司;
申请/专利号CN201080020131.6
申请日2010-05-05
分类号C07D403/12;C07D403/14;C07D413/12;C07D413/14;C07D417/12;C07D471/04;A61K31/416;A61P25/28;
代理机构中国专利代理(香港)有限公司;
代理人李进
地址 美国新泽西州
入库时间 2023-12-18 05:08:35
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2017-06-27
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07D403/12 授权公告日:20150722 终止日期:20160505 申请日:20100505
专利权的终止
2015-07-22
授权
授权
2013-11-20
专利申请权的转移 IPC(主分类):C07D403/12 变更前: 变更后: 登记生效日:20131029 申请日:20100505
专利申请权、专利权的转移
2012-06-27
实质审查的生效 IPC(主分类):C07D403/12 申请日:20100505
实质审查的生效
2012-05-02
公开
公开
发明领域
本发明涉及可用作γ分泌酶调节剂的新的取代的吲唑和氮杂-吲唑 衍生物。本发明还涉及制备此类新的化合物的方法，包含所述化合物 作为活性成分的药用组合物以及所述化合物作为药物的用途。
发明背景
阿尔茨海默氏病(AD)是一种特征是丧失记忆，识别及行为稳定性 的进行性神经退行性疾病。AD折磨6-10％超过65岁的人群且超过85岁 的人群高达50％。这是痴呆症的主要原因和仅次于心血管疾病及癌症 之后的第三大死亡原因。目前对于AD无有效的治疗。在美国涉及AD 的总净成本每年超过一千亿美元。
AD没有一个简单的病因，但是，其与某些风险因素相关，所述风 险因素包括(1)年龄，(2)家族史和(3)头部创伤；其它因素包括环境毒 素及低教育程度。在边缘和大脑皮质的特定神经病理学病变包括由磷 酸化τ蛋白组成的细胞内神经原纤维缠结及淀粉样β肽纤维聚集的细胞 外沉积(淀粉样蛋白斑)。淀粉样蛋白斑的主要成分是不同长度的淀粉 样β(A-β，Abeta或Aβ)肽。其一种为Aβ1-42-肽(Abeta-42)的变体，据认 为是淀粉样蛋白形成的主要致病因子。另一种变体是Aβ1-40-肽 (Abeta-40)。淀粉样β蛋白是前体蛋白的蛋白分解产物，β淀粉样前体蛋 白(β-APP或APP)。
AD的家族，早发性常染色体显性遗传形式在β-淀粉样前体蛋白 (β-APP或APP)及在早老蛋白(presenilin proteins)1和2中与错义突变相 关。在部分患者中，迟发性形式的AD与载脂蛋白E(ApoE)基因的特定 等位基因相关，以及与最近在α2-巨球蛋白中突变的发现相关，这种突 变可能与至少30％的AD人口相关。尽管此异质性，全部形式的AD显 示出类似的病理结果。遗传分析提供逻辑性治疗AD方法的最佳线索。 迄今发现的全部突变，影响生产称为Abeta-肽(Aβ)特别是αβ42的淀粉 样蛋白肽(amyloidogenic peptides)的数量或质量，并提供AD的“淀粉样 蛋白级联假设”的强烈支持(Tanzi and Bertram，2005，Cell 120，545)。Aβ 肽产生及AD病理之间的可能关连，强调需要更加了解Aβ生产的机制 并强力保证在调节Aβ水平的医疗方法。
Aβ肽的释放通过至少两种蛋白水解活性调节，分别称为在Aβ肽的 N-端(Met-Asp键)及C-端(残基37-42)的β-和γ-分泌酶裂解。在分泌途径 中，有证据证明β-分泌酶先裂解，导致s-APPβ(sβ)的分泌及11kDa膜 结合的羧基端片段(CFT)的保留。认为后者在γ-分泌酶裂解后会产生 Aβ肽。较长的同工型Aβ42的量，在特定蛋白(早老蛋白)中带有某些突 变的患者中选择性地增加，而且这些突变是与早发性家族阿尔茨海默 氏病相关。因此，许多研究者都相信Aβ42是阿尔茨海默氏病的发病机 制的主要原因。
现在已经清楚，γ-分泌酶活性不能归因于单一蛋白质，事实上是 与不同的蛋白质的组装相关。
γ(γ)-分泌酶活性位于含有至少四种成分的多重蛋白质复合物中： 早老蛋白(PS)杂二聚体，呆蛋白，aph-1和pen-2。PS杂二聚体由前体蛋 白质经由内切蛋白水解产生的氨基-及羧基端PS片段。催化剂位点的两 个天冬氨酸是位于此杂二聚体的界面。呆蛋白最近被提议作为γ-分泌 酶-基质受体起作用。γ-分泌酶的其它成员的功能尚不知道，但是其全 都是活性是所需的(Steiner，2004.Curr.Alzheimer Research 1(3)： 175-181)。
据此，虽然第二个裂解步骤的分子机制迄今仍是难以捉摸，在寻 找用于治疗阿尔茨海默氏病的化合物中，γ-分泌酶-复合物变成首要目 的之一。
针对阿尔茨海默氏病的γ-分泌酶，已经提出多种策略，包括直接 针对催化位点，研发底物专一性的抑制剂及γ-分泌酶活性的调节剂 (Marjaux et al.，2004.当今药物开发：治疗策略(Drug Discovery Today： Therapeutic Strategies)，第1卷，1-6)。因此，描述了多种以分泌酶作为 标靶的化合物(Larner，2004.阿尔茨海默氏病患者中作为治疗靶标的 分泌酶(Secretases as therapeutics targets in Alzheimer’s disease：patents) 2000-2004.Expert Opin.Ther.Patents 14，1403-1420)。
事实上，此发现经由生化研究证实，其中某些非类固醇抗炎药物 (NSAIDs)对γ-分泌酶的效应得到证明(US 2002/0128319；Eriksen(2003) J.Clin.Invest.112，440)。使用NSAIDs预防或治疗AD的潜在限制是其 环氧合酶(COX)的抑制活性，其可导致不要的副作用，及其低CNS渗 透(Peretto et al.，2005，J.Med.Chem.48，5705-5720)。最近，NSAID R- 氟比洛芬(flurbiprofen)，一种缺乏Cox-抑制活性及相关胃毒性的对映 体，在大的第三期试验中失败，因为与接受安慰剂的患者比较，该药 物未明显改善患者的思考能力及进行日常活动的能力。
WO-2009/032277涉及用作γ分泌酶调节剂的杂环化合物。
US 2008/0280948 A1涉及为淀粉样蛋白β调节剂的氨基苯基衍生 物。
WO-2009/005729是涉及杂环化合物及其作为γ分泌酶调节剂的 用途。
对于可调节γ-分泌酶活性，因而开启新的途径用于治疗阿尔茨海 默氏病的新化合物有强烈的需求。本发明的目的是克服或改善至少一 个现有技术的缺点，或提供有用的替代。因此本发明的目的是提供这 样的新的化合物。
发明简述
已发现本发明化合物可用作γ分泌酶调节剂。根据本发明的化合物 及其药学上可接受的组合物，可以用于治疗或预防阿尔茨海默氏病。
本发明涉及式(I)的新的化合物：
及其立体异构形式，其中
R1是任选地被一或多个各独立地选自卤代基，C1-4烷氧基，C3-7环烷 基，四氢吡喃基，四氢呋喃基和苯基的取代基取代的C1-6烷基； C3-7环烷基，四氢吡喃基，四氢呋喃基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基 或苯基；
其中各苯基独立任选地被一或多个各独立地选自卤代基，氰基，任选 地被一或多个卤代取代基取代的C1-4烷基，及任选地被一或多个卤代 取代基取代的C1-4烷氧基的取代基取代；
R2是氢，氰基或任选地被一或多个各独立地选自C1-4烷氧基，卤代基 和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X1是CH或N；
X2是CR5或N；
R5是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X3是CR6或N；
R6是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
其中各R3独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
其中各R4独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
条件是X1，X2和X3中不超过两个是N；
A1是CR7或N；其中R7是氢，卤代基或C1-4烷氧基；
A2，A3及A4各独立地是CH或N；条件是A1，A2，A3和A4中不超 过两个是N；
Het1是具有式(a-1)，(a-2)，(a-3)或(a-4)的5-员芳族杂环
R8是氢或C1-4烷基；
R9是氢或C1-4烷基；
R10是氢或C1-4烷基；
R11是氢或C1-4烷基；
R12是C1-4烷基；
G1是O或S；
G2是CH或N；
及其药学上可接受的加成盐与溶剂化物。
本发明也涉及式I化合物及含此化合物的药用组合物的制备方 法。
令人惊讶地发现本发明化合物可在试管内及活体内调节γ-分泌酶 活性，且因此可用于治疗或预防阿尔茨海默氏病(AD)，创伤性脑损伤 (TBI)，轻度认知损伤(MCI)，衰老，痴呆，与路易体有关的痴呆，淀 粉样蛋白脑血管病，多梗塞性痴呆，唐氏综合征，与帕金森氏病相关 的痴呆及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选是AD及与β-淀粉样蛋白 病理相关的其它疾病(例如青光眼)。
鉴于式(I)化合物的上述药理，显示其合适作为药物使用。
更确定地说，该化合物适于治疗或预防阿尔茨海默氏病，淀粉样 蛋白脑血管病，多梗塞性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征。
本发明还涉及用于调节γ-分泌酶活性的根据通式(I)的化合物，其 立体异构形式及药学上可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物。
现将进一步说明本发明。在下面的段落中，更详细地定义本发明 的不同方面。如此定义的各方面，可以与任何其它方面或多个方面结 合，除非明确地表示相反。具体地说，举出作为优选或有利的任何特 征可以与举出作为优选或有利的任何特征或多个特征组合。
发明详述
当描述本发明化合物时，使用的术语是根据下面的定义解释，除 非上下文另外表示。
当在本发明中使用术语“取代的”时，除非另外指出或从上下文清 楚表示，意指在使用“取代的”表达所指的原子或基团上的一或多个氢， 特别是从1至4个氢，优选从1至3个氢，更优选是1个氢，被选自 指定的基团取代，条件是不超过正常的价数，而且取代作用导致化学 稳定的化合物，也就是化合物有足够的稳定性可经受住从反应混合物 分离至有用的纯度并配制成治疗剂。
术语“卤代基(halo)”或“卤素”作为基团或基团的一部分时，是泛指 氟代，氯代，溴代，碘代，除非另外指出。
术语“C1-6烷基”作为基团或基团的一部分时，指式CnH2n+1的烃基， 其中n是1至6的数字。C1-6烷基含有1至6个碳原子，优选1至4 个碳原子，更优选1至3个碳原子，甚至更优选1至2个碳原子。烷 基可以是直链或支链且可以如本文所述被取代。当在本文的碳原子后 面使用一个下标时，该下标指所称基团可以含有的碳原子数目。因此， 例如C1-6烷基包括含有1和6个碳原子之间的全部直链或支链烷基， 且因此包括例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，2-甲基-乙基，丁基和 其异构体(例如正丁基，异丁基和叔丁基)，戊基和其异构体，己基和 其异构体等。
术语“C1-4烷基”作为基团或基团的一部分时，指式CnH2n+1的烃基， 其中n是1至4的数字。C1-4烷基含有1至4个碳原子，优选1至3 个碳原子，更优选1至2个碳原子。烷基可以是直链或支链且可以如 本文所述被取代。当在本文的碳原子后面使用一个下标时，该下标指 所称基团可以含有的碳原子数目。因此，例如C1-4烷基包括含有1和 4个碳原子之间的全部直链或支链烷基，且因此包括例如甲基，乙基， 正丙基，异丙基，2-甲基-乙基，丁基和其异构体(例如正丁基，异丁 基和叔丁基)等。
术语“C1-4酰基”单独或组合时指含有1至4个碳原子的基团，其 中羰基连接至氢或含有1至3个碳原子的直链或支链烃基。合适的C1-4酰基的非限制性实例包括甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基和异丁酰 基。
术语“C1-4烷氧基”作为基团或基团的一部分时，指具有式-ORc的 基团，其中Rc是C1-4烷基。合适的C1-4烷氧基的非限制性实例包括甲 基氧基(也即甲氧基)，乙基氧基(也即乙氧基)，丙氧基，异丙氧基，丁 氧基，异丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。
术语“C3-7环烷基”单独或组合时，指含有3至7个碳原子的环状 饱和烃基。合适的C3-7环烷基的非限制性实例包括环丙基，环丁基， 环戊基，环己基和环庚基。
本发明化合物的化学命名是根据化学文摘社(Chemical Abstracts Service)同意的命名规则所生成的。
在互变异构形式中，应该清楚其它没有描述的互变异构形式也包 括在本发明范围内。
当任何变量在任何成分中出现一次以上时，各定义是独立的。
可以意识到，某些式(I)化合物及其药学上可接受的加成盐和立体 异构形式可以含有一或多个手性中心并作为立体异构形式存在。
如上文使用的术语“立体异构形式”限定式(I)化合物具有的所有可 能的异构形式。除非另外提到或指出，化合物的化学命名代表所有可 能的立体化学异构形式的混合物。更确定地说，立体构成中心 (stereogenic centers)可以有R-或S-构型；在二价环状(部分)饱和基团上 的取代基可以有或者顺式-或者反式-构型。含有双键的化合物在所述 双键可以有E-或Z-立体化学。式(I)化合物的立体异构形式包含在本发 明的范围内。
当指出某一特定立体异构形式时，这是指所述形式基本上没有， 也就是与低于50％，优选低于20％，更优选低于10％，甚至更优选 低于5％，进一步优选低于2％，且最优选低于1％的其它异构体相关。
医疗使用时，式(I)化合物的盐是其中抗衡离子是药学上可接受的 那些盐。但是，非药学上可接受的酸和碱的盐也可以找到用途，例如 在药学上可接受的化合物的制备或纯化中。所有的盐，不论是否为药 学上可接受的，都包含在本发明的范围内。
上文或下文中提到的药学上可接受的酸或碱加成盐意指式(I)化 合物可以形成的医疗活性无毒的酸和碱加成盐形式。药学上可接受的 酸加成盐可以通过使用这样的合适酸处理碱形式而方便地获得。合适 的酸包括例如无机酸例如氢卤酸例如氢氯酸或氢溴酸，硫酸，硝酸， 磷酸等酸；或有机酸例如醋酸，丙酸，羟基乙酸，乳酸，丙酮酸，草 酸(也就是乙二酸)，丙二酸，琥珀酸(也即丁二酸)，马来酸，富马酸， 苹果酸，酒石酸，柠檬酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸， 环己酸，水杨酸，对氨基水杨酸，扑酸(pamoic)等酸。相反地，所述 盐形式可以通过使用合适的碱处理而转化成游离碱形式。
含有酸性质子的式(I)化合物经使用合适的有机和无机碱处理，也 可以转化成其无毒的金属或胺加成盐形式。合适的碱盐形式包括例如 铵盐，碱金属及碱土金属盐，例如锂，钠，钾，镁，钙盐等，与有机 碱例如脂族和芳族的伯，仲和叔胺例如甲胺，乙胺，丙胺，异丙胺， 四种丁胺异构体，二甲胺，二乙胺，二乙醇胺，二丙胺，二异丙胺， 二正丁胺，吡咯烷，哌啶，吗啉，三甲胺，三乙胺，三丙胺，奎宁环， 吡啶，喹啉和异喹啉所成的盐；苄星，N-甲基-D-葡糖胺，海巴明盐， 及与氨基酸例如精氨酸，赖氨酸等所成的盐。相反地，该盐形式可以 通过用酸处理而转化成游离酸形式。
术语溶剂化物包括式(I)化合物能够形成的水合物及溶剂加成形 式，以及其盐。这样的形式的实例是例如水合物，醇化物等。
在下文描述的方法中制备的式(I)化合物可以合成为对映体的外 消旋混合物形式，其可以按照本领域已知的拆分方法将它们彼此分 离。一种分离式(I)化合物的对映异构形式的方法包括使用手性固定相 的液相层析法。所述纯的立体化学异构形式也可以衍生自合适的起始 原料的对应的纯立体化学异构形式，条件是反应是立体专一性地发 生。优选如果需要特定的立体异构体时，所述化合物将通过立体专一 性制备方法合成。这些方法将有利于使用对映异构体纯的起始原料。
在此申请的架构中，根据本发明的化合物是固有地意欲包括其化 学元素的全部同位素组合。在此申请的架构中，一种化学元素，特别 是当在根据式(I)的化合物中提到时，包括此元素的全部同位素及同位 素混合物。例如，当提到氢时，可以理解为指1H，2H，3H及其混合 物。
因此，根据本发明的化合物固有地包括含有一或多种元素的一或 多个同位素的化合物，及其混合物，包括放射性化合物，也称为放射 标记的化合物，其中一或多个非放射性原子经其放射性同位素之一替 代。术语“放射标记的化合物”意指根据式(I)的任何化合物或其药学上 可接受的盐，其含有至少一种放射性原子。例如，化合物可以用正子 或γ发射的放射性同位素标记。用于放射配体结合技术，3H-原子或125I- 原子是被取代的原子的选择。用于成像时，最常使用的正子发射(PET) 放射性同位素是11C，18F，15O和13N，其全都是加速器产生且半衰期 分别是20，100，2和10分钟。因为这些放射性同位素的半衰期很短， 唯一可行的是具有加速器的机构可以当场使用它们以用于其生产，因 此限制其使用。这些同位素中最广泛使用的是18F，99mTc，201Tl及123I。 专业技术人员已知这些放射性同位素的操作，其生产，分离及在分子 中的掺入。
具体地说，放射性原子选自氢，碳，氮，硫，氧和卤素。具体地 说，放射性同位素选自3H，11C，18F，122I，123I，125I，131I，75Br，76Br， 77Br和82Br。
在说明书及附录的权利要求中使用时，单数形式”一(a)”，”一(an)” 及”该(the)”也包括复数指称物，除非上下文另有明确表示。例如”一种 化合物”指一种化合物或一种以上的化合物。
上述名词及在说明书中使用的其它名词是本领域技术人员所熟 知的。
现在陈述本发明化合物的优选特征。
本发明特别涉及新的式(I)化合物：
及其立体异构形式，其中
R1是任选地被一或多个各独立地选自卤代基，C1-4烷氧基，C3-7环烷 基，四氢吡喃基，四氢呋喃基和苯基的取代基取代的C1-6烷基；
C3-7环烷基，四氢吡喃基，四氢呋喃基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基 或苯基；
其中各苯基独立任选地被一或多个各独立地选自卤代基，氰基，任选 地被一或多个卤代取代基取代的C1-4烷基，及任选地被一或多个卤代 取代基取代的C1-4烷氧基的取代基取代；
R2是氢，氰基或任选地被一或多个各独立地选自C1-4烷氧基，卤代基 和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X1是CH或N；
X2是CR5或N；
R5是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X3是CR6或N；
R6是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
其中各R3独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
其中各R4独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
条件是X1，X2和X3中不超过两个是N；
A1是CR7或N；其中R7是氢，卤代基或C1-4烷氧基；
A2，A3和A4各独立地是CH或N；条件是A1，A2，A3和A4中不超 过两个是N；
Het1是具有式(a-1)，(a-2)，(a-3)或(a-4)的5-员芳族杂环
R8是氢或C1-4烷基；
R9是氢或C1-4烷基；
R10是氢或C1-4烷基；
R11是氢或C1-4烷基；
R12是C1-4烷基；
G1是O或S；
G2是CH或N；
及其药学上可接受的加成盐与溶剂化物。
本发明的一个实施方案涉及式(I)化合物
及其立体异构形式，其中
R1是任选地被一或多个各独立地选自卤代基，C1-4烷氧基，C3-7环烷 基，四氢吡喃基，四氢呋喃基和苯基的取代基取代的C1-6烷基；
C3-7环烷基，四氢吡喃基，四氢呋喃基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基 或苯基； 其中各苯基独立任选地被一或多个各独立地选自卤代基，氰基，任选 地被一或多个各独立地选自卤代基的取代基取代的C1-4烷基，及任选 地被一或多个各独立地选自卤代基的取代基取代的C1-4烷氧基的取代 基取代；
R2是氢，氰基，任选地被一或多个各独立地选自C1-4烷氧基，卤代基 和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X1是CH或N；
X2是CR5或N；
R5是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
X3是CR6或N；
R6是氢，卤代基，氰基，C1-4烷氧基或任选地被一或多个各独立地选 自卤代基，C1-4烷氧基和NR3R4的取代基取代的C1-4烷基；
其中各R3独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
其中各R4独立地是氢，C1-4烷基或C1-4酰基；
条件是X1，X2和X3中不超过两个是N；
A1是CR7或N；其中R7是氢，卤代基或C1-4烷氧基；
A2，A3及A4各独立地是CH或N；条件是A1，A2，A3和A4中不超 过两个是N；
Het1是具有式(a-1)，(a-2)，(a-3)或(a-4)的5-员芳族杂环
R8是氢或C1-4烷基；
R9是氢或C1-4烷基；
R10是氢或C1-4烷基；
R11是氢或C1-4烷基；
R12是C1-4烷基；
G1是O或S；
G2是CH或N；
及其药学上可接受的加成盐与溶剂化物。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中适用一或多个，优选是全部下面的限 制：
(a)R1是任选地被一或多个各独立地选自卤代基，C1-4烷氧基，C3-7环 烷基和苯基的取代基取代的C1-6烷基；
C3-7环烷基，四氢吡喃基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基或苯基；
其中各苯基独立地被一或多个各独立地选自卤代基，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基取代；
(b)R2是氢，氰基或任选地被一或多个NH2取代基取代的C1-4烷基；
(c)X2是CR5或N；特别X2是CR5；
(d)R5是氢，卤代基，氰基或任选地被一或多个NH2取代基取代的C1-4烷基；
(e)X3是CH或N；
(f)A2是CH或N且A3及A4是CH；特别A2，A3及A4是CH；
(g)Het1是具有式(a-1)，(a-2)，(a-3)或(a-4)的5-员芳族杂环，特别Het1是具有式(a-1)，(a-2)或(a-3)的5-员芳族杂环；
(h)R10是C1-4烷基；
(i)R11是氢；
(j)R8是氢；
(k)R12是C1-4烷基。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中适用一或多个，优选是全部下面的限 制：
(a)R1是任选地被一或多个各独立地选自氟，甲氧基，环丙基和苯基 的取代基取代的C1-4烷基；
环丁基，四氢吡喃基，1，3-苯并二氧杂环戊烯基或苯基；
其中各苯基独立地被一或多个各独立地选自甲氧基，乙氧基，C1-4烷 基和氟的取代基取代；
(b)R2是氢，氰基，任选地被一个NH2取代基取代的甲基；
(c)X2是CR5或N；特别X2是CR5；
(d)R5是氢，氟，氰基，任选地被一个NH2取代基取代的甲基；
(e)X3是CH或N；
(f)R7是氢，氟或甲氧基；
(g)A2是CH或N且A3和A4是CH；特别A2，A3和A4是CH；
(h)Het1是具有式(a-1)，(a-2)，(a-3)或(a-4)的5-员芳族杂环，特别是式 (a-1)，(a-2)或(a-3)；
(i)R10是甲基；
(j)R11是氢；
(k)R8是氢；
(l)R12是甲基。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中适用一或多个，优选是全部下面的限 制：
(a)R1是被一个C1-4烷氧基取代基取代的苯基；或R1是被一或多个卤 代取代基取代的C1-6烷基；
(b)R2是氢；
(c)X1，X2和X3是CH；
(d)A1是CR7；其中R7是C1-4烷氧基；
(e)A2，A3和A4是CH；
(f)Het1具有式(a-1)或(a-2)；
(g)G1是O；
(h)G2是CH；
(i)R8是C1-4烷基；
(j)R10是C1-4烷基；
(k)R9是氢。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中适用一或多个，优选是全部下面的限 制：
(a)R1是被C1-4烷氧基取代基取代的苯基；
(b)R2是氢；
(c)X1，X2和X3是CH；
(d)A1是CR7；其中R7是C1-4烷氧基；
(e)A2，A3和A4是CH；
(f)Het1具有式(a-2)；
(g)G2是CH；
(h)R10是C1-4烷基；
(i)R9是氢。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中适用一或多个，优选是全部下面的限 制：
(a)R1是被一或多个卤代取代基取代的C1-6烷基；特别R1是被3个卤 代取代基取代的C1-6烷基；
(b)R2是氢；
(c)X1，X2和X3是CH；
(d)A1是CR7；其中R7是C1-4烷氧基；
(e)A2，A3和A4是CH；
(f)Het1具有式(a-1)；
(g)G1是O；
(h)R8是C1-4烷基；
(i)R9是氢。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R1是任选地被一或多个各独立地选自任选地被一或多个卤 代取代基取代的C1-4烷基和任选地被一或多个卤代取代基取代的C1-4烷氧基的取代基取代的苯基。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R1是被一或多个各独立地选自C1-4烷基和C1-4烷氧基的取 代基取代的苯基。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R1是任选地被一或多个卤代取代基取代的C1-6烷基。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R1是任选地被一或多个氟取代基取代的C1-6烷基。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R1是2，2，2-三氟乙基。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X1是CH。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X1是N。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X2是CH。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X2是N。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X3是N。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中X3是CR6。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中R6是氢。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中A1是CR7。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中A1是N。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中A2，A3和A4各独立地是CH。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中Het1具有式(a-3)。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中Het1具有式(a-4)。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中G1是S。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据任何其它实施方案的化 合物，其中G2是N。
本发明的另一个实施方案涉及在任何其它实施方案中提到的那 些式(I)化合物或任何亚组，其中1，3-苯并二氧杂环戊烯基被限制为1，3- 苯并二氧杂环戊烯-5-基。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自：
N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-2H-吲 唑-7-胺，
2-[(4-氟苯基)甲基]-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2H-吲 唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基 -2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯 基)-2H-吲唑-7-胺，
2-丁基-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-丁基-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.2HCl，
2-丁基-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-3-甲基-2H-吲唑 -7-胺，
2-丁基-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-3-甲基-2H-吲唑 -7-胺.2HCl，
2-(4-氟苯基)-N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-3-甲基-2H-吲唑 -7-胺，
2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-N-[6-(4-甲基-5-唑基)-3-吡啶基]-2H-吲唑 -7-胺，
2-(4-氟苯基)-3-甲基-N-[6-(4-甲基-5-唑基)-3-吡啶基]-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-氟-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-3-甲基-2-(4，4，4-三氟丁 基)-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-甲基-2H-吲唑-7-胺，
2-(4-氟苯基)-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(4-氟苯基)-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.1.5HCl，
2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(2，4-二氟苯基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-3-甲基 -2H-吲唑-7-胺，
2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-[4-乙氧基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)苯基]-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑 基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(2，4-二氟苯基)-N-[3-氟-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-3-甲基 -2H-吲唑-7-胺，
2-[4-乙氧基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)苯基]-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H- 咪唑-1-基)苯基]-3-甲基-2H-吲唑-7-胺，
2-[4-乙氧基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)苯基]-N-[3-甲氧基-4-(3-甲基 -1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-3-甲基-2H-吲唑-7-胺，
2-(2，4-二氟苯基)-N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-噻唑基)苯基]-3-甲基-2H- 吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-2H- 吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-2H- 吲唑-7-胺.1.9HCl，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3- 甲基-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3- 甲基-2H-吲唑-7-胺.1.9HCl，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-2-甲基-2H-吲唑-7- 胺，
2-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-2H- 吡唑并[3，4-c]吡啶-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2H-吲唑 -7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2H-吲唑 -7-胺.2HCl，
N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吲唑-7- 胺，
N-[4-[2-(1-甲基乙基)-5-唑基]苯基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吲唑-7- 胺，
N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-噻唑基)苯基]-2-甲基-2H-吲唑-7-胺，
2-丁基-7-[[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]氨基]-2H-吲唑-5- 腈，
2-丁基-7-[[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]氨基]-2H-吲唑-5- 腈.2HCl，
2-环丁基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-环丁基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺.1.2HCl，
2-(4-氟苯基)-7-[[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]氨基]-2H-吲唑-3-腈，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.1.5HCl.1.25H2O，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.1.5HCl.0.18H2O，
2-(环丙基甲基)-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺.2HCl，
2-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑 -7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.2HCl，
2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吡唑并 [3，4-c]吡啶-7-胺，
N-[3-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-2H- 吲唑-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2H-吲唑-7- 胺.HCl，
2-(4-氟苯基)-7-[[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]氨基]-2H-吲唑-3-甲胺，
2-丁基-7-[[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]氨基]-2H-吲唑-5- 甲胺，
2-丁基-7-[[3-甲氧基-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]氨基]-2H-吲唑-5- 甲胺.4HCl，
2-(环丙基甲基)-N-[6-(2-甲基-5-唑基)-3-吡啶基1]-2H-吲唑-7-胺，
2-(环丙基甲基)-N-[6-(2-甲基-5-唑基)-3-吡啶基1]-2H-吲唑-7- 胺.2HCl，
N-[4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2H-吲唑-7-胺，
N-[6-(2-甲基-5-唑基)-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-2-(2，2，2-三氟乙 基)-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-5-甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H- 吡唑并[3，4-c]吡啶-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-5-甲基-2-(2，2，2-三氟 乙基)-2H-吡唑并[3，4-c]吡啶-7-胺，
2-(5-甲氧基-2-甲基苯基)-3-甲基-N-[6-(2-甲基-5-唑基)-3-吡啶 基]-2H-吲唑-7-胺，
5-氟-2-(4-氟苯基)-3-甲基-N-[6-(2-甲基-5-唑基)-3-吡啶基]-2H-吲唑 -7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-5-甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H- 吡唑并[4，3-b]吡啶-7-胺，
N-[3-氟-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吲唑-7- 胺，
2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-N-[4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基]-2H-吲唑 -7-胺，
2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-N-[4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基]-2H-吲唑 -7-胺.2HCl.0.5H2O，
N-[6-甲氧基-5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-2-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙 基)-2H-吲唑-7-胺，
N-[3-氟-4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并 [3，4-c]吡啶-7-胺，
N-[3-甲氧基-4-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)苯基]-5-(1-甲基乙 基)-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并[4，3-b]吡啶-7-胺，
N-[6-甲氧基-5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-2-吡啶基]-5-(1-甲基乙 基)-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并[4，3-b]吡啶-7-胺，
包括其任何立体化学异构形式，
及其药学上可接受的加成盐及溶剂化物。
在一个实施方案中，式(I)化合物选自：N-[3-甲氧基-4-(2-甲基-5-唑基)苯基]-2-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吲唑-7-胺，及N-[3-甲氧基-4-(4-甲 基-1H-咪唑-1-基)苯基]-2-(3-甲氧基苯基)-3-甲基-2H-吲唑-7-胺，
包括其任何立体化学异构形式，
及其药学上可接受的加成盐及溶剂化物。
上面举出的有价值实施方案的全部可能组合，都视为包含在本发 明的范围内。
本发明也包括式(I)化合物及其亚组的制备方法。在描述的反应 中，可能需要保护反应性官能团，例如羟基，氨基或羧基，这些官能 团是最终产物所需要，以避免其不必要地参与反应。根据标准实践可 以使用常规的保护基，例如见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“有机化 学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)”，John Wiley and Sons，1999。
式(I)化合物及其亚组可以通过下文叙述的一系列步骤制备。它们 通常是可从市售获得的或通过本领域技术人员熟知的标准方法制备 的起始原料制备。本发明的化合物也可以使用有机化学技术人员经常 使用的标准合成方法制备。
下面示出部分典型实例的一般性制备。除非另外说明，全部的变 量如前述所定义。L被定义为离去基团，例如Cl，Br，I，甲苯磺酸酯 基，甲磺酸酯基或三氟甲基磺酸酯基，特别是Cl，Br或I，除非另外 说明。
实验方法1
通常式(I)化合物可以根据下面流程1的陈述制备，其中全部的变 量如前述所定义：
式(I)化合物可以通过式(II)和(III)中间体之间的偶合反应制备，如 流程1所示，其中全部的变量如前述所定义。此反应可以在合适的碱 例如Cs2CO3或叔丁醇钠存在下进行。此反应可以在反应惰性溶剂例 如甲苯，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，叔丁醇或二烷中进行。此反应 通常是在催化剂系统存在下进行，所述催化剂系统包括合适的催化剂 例如醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)或三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)及配体 例如(9，9-二甲基-9H-呫吨-4，5-二基)双[二苯基膦](Xantphos)，[1，1’-联 萘]-2，2’-二基双[二苯基膦](BINAP)或二环己基[2’，4’，6’-三(1-甲基乙 基)[1，1’-联苯基]-2-基]-膦(X-phos)。优选此反应是在惰性气氛例如N2或Ar气氛下进行。通过微波辅助加热可以增加反应速率及产量。
实验方法2
其中R2限制为C1-4烷基的式(III)中间体，以下称为式(IV)中间体， 可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过式(V)中间体的烷基化 反应而制备。该烷基化反应在合适的碱例如二异丙基氨化锂或双(三甲 基甲硅烷基)氨化锂及烷基化剂例如C1-4烷基-Y(其中Y是反应性基团 例如Cl，Br或I)存在下进行。全部其它的变量如上述所定义。此反应 可以在非质子溶剂例如DMF或四氢呋喃(THF)中进行。
实验方法3
其中R2限制为-CH2NH2的式(III)中间体，以下称为式(VI)中间体， 可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过式(VII)中间体的还原 化而制备。此反应是在合适的还原剂例如阮内镍(Raney Nickel)存在下 进行。此反应可以在质子溶剂例如在氨存在下的甲醇(MeOH)中进行。
在式(VI)中间体中的NH2基可以被进一步烷基化和/或酰基化而 得到其它式(III)中间体。
实验方法4
式(V)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过式 (VIII)中间体的还原而制备。此还原可以在合适的还原剂例如 SnCl2.H2O存在下进行。此反应可以在质子溶剂例如在乙醇(EtOH)中， 在升高的温度通常在40和50℃之间进行。
在其中X1被定义为N且X2和X3被定义为CH的式(V)中间体的 特定情形下，以下称为式(V-a)中间体，可以进行水解或乙醇分解反应 用-OH或乙氧基置换’L’基团。如此获得的中间体可以依据本领域一般 已知的常规反应方法再度转化回到式(V-a)中间体。
实验方法5
式(VIII)中间体可以依据流程5，通过式(IX)中间体的还原性氨基 化作用来制备。该反应在合适的还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠 (NaBH(OAc)3)和伯胺例如R1-NH2的存在下进行。此反应可以在质子 惰性溶剂例如1，2-二氯乙烷中进行。
实验方法6
如流程6所示，式(IX)中间体可以通过式(X)中间体的氧化而制备。 此反应是在合适的氧化剂例如过碘酸钠(NaIO4)存在下进行。此反应可 以在溶剂混合物中进行，例如水/DMF或水/THF。
实验方法7
如流程7所示，式(X)中间体可以通过二甲基甲酰胺缩二甲醇 (DMF-DMA)与式(XI)中间体的缩合而制备。中间体(XI)可以经商业获 得或可以依据本领域一般已知的常规反应方法制备。搅拌和/或升高的 温度(例如介于70-110℃)可以增加反应速率。
实验方法8
或者，式(IX)中间体也可以根据流程8，通过式(XII)中间体的氧 化制备，式(XII)中间体可以经商业获得或可以依据本领域一般已知的 常规反应方法制备。此反应是在合适的氧化剂例如二氧化锰(MnO2)或 氯铬酸吡啶(PCC)存在下进行。此反应可以在溶剂例如二氯甲烷 (DCM)或氯仿(CHCl3)中进行，通常在分子筛存在下干燥。
实验方法9
或者，式(V)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过 式(XIII)中间体的烷基化而制备。此烷基化通常可以在无或有合适的碱 例如碳酸铯或伯胺例如N，N-二环己基-N-甲基胺及烷基化剂例如R1-Y (其中Y被定义为Cl，Br或I)，R1-O-SO2-R(其中R可以选自本领域 技术人员熟知的多种基团；R的典型但非限制性实例是C1-6烷基，全 氟C1-6烷基或任选取代的苯基；R的更特别的实例是甲基或对-甲基苯 基)或R1-O-SO2-R1存在下进行。这些烷基化剂可以经商业获得或可以 依据本领域一般已知的常规反应方法制备。此反应可以在反应惰性溶 剂例如甲苯或DMF中进行。搅拌、升高的温度(例如介于70-110℃) 可以增加反应速率。
实验方法10
式(XIII)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过式 (XIV)中间体的去质子化而制备。此反应通常是在合适的碱例如叔丁醇 钾(KOtBu)存在下，在溶剂例如二甲亚砜(DMSO)中进行。
实验方法11
式(XIV)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过式 (XV)中间体的重氮化而制备。此反应可以在含水酸溶液例如氢氯酸溶 液中，在亚硝酸钠(NaNO2)存在下进行。此反应通常是在低温(＜5℃) 进行。然后在质子溶剂例如EtOH中，在低温(＜5℃)用叔丁基硫醇 (t-BuSH)将重氮物质猝灭。
实验方法12
或者，式(XIII)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法在 单一步骤中通过使式(XV)中间体重氮化而制备。此反应通常可在酸性 溶液例如冰醋酸中，在亚硝酸钠(NaNO2)的水溶液存在下进行。
合成式(XIII)中间体，其中X2代表N，在此称为式(XIII-a)中间体， 需要初步保护式(XV)中间体的氨基官能团，其中X2是N，如WO 2005/016892中所描述。
实验方法13
式(VII)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法，通过还 原式(XVI)中间体而制备。此还原通常可在合适的还原剂例如三氯化磷 (PCl3)或三苯基膦存在下进行。此反应通常可以在反应惰性溶剂例如 CHCl3中，在升高的温度(50和75℃之间)进行。
实验方法14
式(XVI)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法，通过式 (IX)中间体与伯胺R1-NH2之间形成席夫碱而制备。用氰化钠或氰化三 甲基甲硅烷(Trimethylsilyl cyanide)处理，将席夫碱转化成其α-氨基腈 衍生物，其随后进行碱性环化。该环化步骤是在合适的碱例如碳酸钠 水溶液存在下进行。
实验方法15
如流程15所示，式(II)中间体可以通过式(XVII)中间体的还原而 制备，其中全部变量如上述所定义。
(XVII)还原成(II)可以通过常规方法进行，例如使用金属或金属盐 和酸的还原性氢化或还原[例如金属例如铁或金属盐例如SnCl2及酸例 如无机酸(氢氯酸，硫酸等)或有机酸(醋酸等)]，或用于将硝基转化成 对应的胺的其它熟知方法。
实验方法16
根据流程16，式(XVII)中间体，其中Het1被限制为流程16所示 的(a-2)，在此称为式(XVIII)中间体，可以通过中间体(XIX)与式(XX) 的任选取代的咪唑或三唑的亲核芳族取代反应而制备，其中La被定义 为F，Cl或Br且其中全部其它变量如上述所定义。该反应可以在保 护气氛例如N2气氛下进行。搅拌，升温(例如70-170℃之间)和/或加 压可以增加反应速率。该反应通常可在有机溶剂例如DMSO，DMF 或N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，在碱例如K2CO3，Cs2CO3或Et3N存在 下进行。
式(XIX)与式(XX)中间体可以经商业获得或可以通过本领域技术 人员容易地制备。
实验方法17
式(XVII)中间体，其中Het1被限制为流程17所示的在2-位经R8a(C1-4烷基)取代的唑，在此称为式(XXI)中间体，可以通过式(XXII) 中间体(XIX)与式(XXIII)中间体的缩合而制备，后者可以在三氟甲磺 酸存在下用碘苯二乙酸酯(iodobenzene diacetate)活化。搅拌和/或升温 (例如70-100℃之间)可以增加反应速率。在流程17中，R8a被定义为 C1-4烷基且全部其它变量如上述所定义。
实验方法18
根据流程18的说明，式(XXVII)中间体，其中Het1是限制为在4- 位经R9取代的唑，以下称为式(XXIV)中间体，可以通过式(XXV) 中间体(XIX)与式(XXVI)中间体的缩合而制备。中间体(XXVI)可以经 商业获得或可以依据本领域一般已知的常规反应方法制备。此缩合反 应通常可以在合适的碱例如K2CO3或乙醇钠(NaOEt)存在下进行。此 反应可以在质子溶剂例如MeOH或EtOH中进行。搅拌和/或升温(例 如70-110℃之间)可以增加反应速率。在流程18中，全部其它变量如 上述所定义。
或者，在流程18中所述的反应也可以用式(XXVI)中间体的苯甲 醛衍生物进行，其中NO2被Cl，Br或I取代。
实验方法19
根据流程19，式(II)中间体也可以根据熟知的反应方法制备，通 过将式(XXVII)中间体的L-取代基转化成氨基或遮蔽或保护的氨基官 能团，其可以随后转化成氨基。在流程19中，Lx被定义为Cl，Br或 I且全部其它变量如上述所定义。
实验方法20
根据流程20，式(XVII)化合物也可以通过式(XVIII)中间体与式 (XXIX)中间体之间的偶合反应而制备，其中Ly被定义为Cl，Br或I 且全部其它变量如上述所定义。
在流程20中，式(XXIX)中间体可以经商业获得或可以依据本领 域一般已知的常规反应方法制备。该偶合反应通常可以在合适的碱例 如Cs2CO3，Na2CO3或CsF存在下进行。该反应可以在反应惰性溶剂 例如甲苯，DMF或二烷中进行。该反应通常可以在催化剂例如四(三 苯基膦)钯(Pd(PPh3)4)或1，1-双(二苯膦基二茂铁二氯钯II)(Pd(dppf)Cl2) 存在下进行。搅拌，升温(例如70-140℃之间)和/或加压可以增加反应 速率。此反应优选在惰性气氛例如氮气或氩气氛下进行。
或者，式(XXIX)的硼酸频哪醇酯衍生物可以用对应的硼酸衍生物 代替。
实验方法21
根据流程21，式(XVII)中间体，其中Het1被限制为流程21所示， 以下称为式(XXX)中间体，可以通过式(XXXI)中间体与式(XXXII)中 间体之间的偶合反应而制备，其中Lb被定义为I或Br且其中全部其 它变量如上述所定义。在流程21中，式(XXXI)和(XXXII)中间体可以 经商业获得或可以依据本领域一般已知的常规反应方法制备。该偶合 反应可以在合适的碱例如Cs2CO3或Ag2CO3存在下进行。该反应可以 在反应惰性溶剂例如H2O，CH3CN或DMF中进行。该反应通常是在 含有合适的催化剂例如醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)或1，1-双(二苯膦基二茂 铁二氯钯II)(Pd(dppf)Cl2)的催化剂系统及配体例如三苯基膦存在下进 行。搅拌，升温(例如60和140℃之间)可以增加反应速率。
实验方法22
根据流程22所示，式(XXVII)中间体，其中Het1被限制为如流程 22所示，以下称为式(XXXIII)中间体，可以通过式(XXXIV)化合物的 脱羧基化反应而制备，其中Lx被定义为Br，I或Cl且其中全部其它 变量如上述所定义。该反应可以在溶剂例如喹啉或DMF中，在氧化 铜(II)(CuO)存在下的，或在两者都没有CuO的DMF/EtOH混合物或 异丙醇中进行。此反应可以在微波辅助条件下进行。此反应通常需要 高温(达到150℃)。
实验方法23
根据流程23所示，式(XXXIV)中间体可以通过式(XXXV)化合物 的羧酸酯官能团的水解而制备，其中Lx被定义为Br，I或Cl且其中 全部其它变量如上述所定义。此反应可以在酸性条件或碱性条件下进 行。优选在碱例如NaOH或LiOH存在的碱性条件下，在室温的二烷及水的混合物中进行。
实验方法24
根据流程24所示，式(XXXV)中间体可以通过式(XXXVI)中间体 与式(XXXVII)中间体之间的偶合反应而制备，其中Lx被定义为Br，I 或Cl，其中Lc被定义为Br或I，且其中全部其它变量如上述所定义。 式(XXXVI)和(XXXVII)中间体可以经商业获得或可以依据本领域一 般已知的常规反应方法制备。该偶合反应是在合适的碱例如Cs2CO3 或Ag2CO3存在下进行。该反应可以在反应惰性溶剂例如CH3CN，甲 苯或DMF中进行。该反应通常是在含有合适的催化剂例如醋酸钯(II) (Pd(OAc)2)或[1，1-双(二苯膦基二茂铁)二氯钯II)(Pd(dppf)Cl2)的催化 剂系统，及配体例如三苯基膦或三-邻-甲苯基膦存在下进行。搅拌， 升温(例如60和140℃之间)可以增加反应速率。
实验方法25
其中X2限制为CR5且R5是-CH2NH2的式(III)中间体，以下称为 式(XXXVIII)中间体，可以依据本领域一般已知的常规反应方法通过 式(XXXIX)中间体的还原化而制备。此反应是在合适的还原剂例如阮 内镍(Raney Nickel)存在下进行。此反应可以在质子溶剂例如在氨存在 的甲醇(MeOH)中进行。
伯氨基可以被进一步烷基化和/或酰基化而提供其它式(III)中间 体，其中X2限制为CR5且R5是-CH2NR3R4。
实验方法26
根据流程26，其中X2限制为CR5且R5是-CN的式(XV)中间体， 以下称为式(XL)中间体，可以通过其中X2限制为CR5且R5是Ld(其 中Ld是I或Br)的式(XV)中间体(以下称为式(XLI)中间体)的金属介导 的氰化作用而制备。式(XLI)中间体可以经商业获得或可以依据本领域 一般已知的常规反应方法制备。此氰基化反应通常可在合适的试剂例 如氰化锌(Zn(CN)2)存在下进行。该反应通常可以在催化剂例如四(三 苯基膦)钯(Pd(PPh3)4)存在下，在溶剂例如DMF中进行。搅拌和/或升 温(例如50-100℃之间)可以增加反应速率。
实验方法27
或者，式(IX)中间体也可以根据流程27，通过还原其中R被定义 为C1-4烷基的式(XLII)中间体而制备，其可以经商业获得或可以依据 本领域一般已知的常规反应方法制备。此反应可以在合适的还原剂例 如二异丁基氢化铝(DIBAL)存在下进行。此反应可以在溶剂例如DCM 中，在低温(例如-78℃)进行。
实验方法28
式(XLII)中间体，其中R被定义为C1-4烷基，可以依据本领域一 般已知的常规反应方法通过式(XLIII)中间体的烷基化反应而制备。根 据流程28的说明，该烷基化反应是在合适的碱例如Cs2CO3或K2CO3及烷基化剂例如C1-4烷基-Y(其中Y被定义为Cl，Br或I)存在下进行。 全部其它的变量如同上面的定义。此反应可以在非质子溶剂例如DMF 中进行。
实验方法29
式(XLIII)中间体可以通过式(XLIV)中间体的氧化而制备，其可以 经商业获得或可以依据本领域一般已知的常规反应方法制备。该氧化 是在合适的氧化系统例如在三氟醋酸酐(TFAA)中的过氧化氢(H2O2) 存在下，在溶剂例如DCM或CH3CN中进行。
实验方法30
根据流程30所示，式(XIII)中间体，其中
-X1被限制为CH；
-X2被限制为CR5a，其中R5a是任选地被各独立地选自C1-4烷氧 基，氟，氯及NR3R4的一或多个取代基取代的C1-4烷氧基或C1-4烷基；
-X3被限制为N；
-L被定义为Br，I或Cl；
以下称为式(XLV)中间体，可以依据本领域一般已知的常规反应 方法，通过式(XLVI)中间体的卤化而制备。此反应通常是在卤化剂例 如磷酰氯存在下，在溶剂例如CH3CN中进行。搅拌和/或升温(例如 50-100℃之间)可以增加反应速率。
实验方法31
式(XLVI)中间体，其中R5a如同在流程30中的定义，可以依据本 领域一般已知的常规反应方法，通过式(XLVII)中间体的环化而制备。 此反应通常可以在高温(高于220℃)在道氏热载体(Dowtherm)A(联苯 -二苯醚混合物)中进行。
实验方法32
式(XLVII)中间体可以依据本领域一般已知的常规反应方法，通过 式(XLVIII)中间体与式(XLIX)的β-酮酯的缩合而制备，其中R5a如同 在流程30中的定义。此反应通常可在催化量的对甲苯磺酸存在下， 在溶剂例如苯或甲苯中进行。
实验方法33
式(XLVIII)中间体可以通过常规方法制备，例如中间体(L)的还原 性氢化。
实验方法34
式(L)中间体可以通过常规方法制备，例如式(LI)中间体(L)在硫酸 及硝酸混合物中的硝化。
实验方法35
根据流程35，式(II)中间体，其中Het1被限制为流程35所示的 (a-2)，以下称为式(LII)中间体，也可以通过式(LIII)中间体与式(XX) 的(未)取代的咪唑或三唑的铜催化的反应而制备，其中卤代基被定义 为Br或I且其中全部其它变量如上述所定义。此反应可以在保护气氛 例如N2下进行。搅拌，升温(例如70-200℃之间)和/或加压可以增加 反应速率。此反应通常是在有机溶剂例如DMSO或DMF中进行。任 选地，此反应可以在碱例如K2CO3，Cs2CO3或Et3N和/或配体例如 N，N’-二甲基乙二胺或1，10-菲咯啉(phenanthroline)存在下进行。至于铜 催化剂，可以使用催化量或化学计量的量的铜盐例如Cu2O，CuI或 CuBr。根据标准的实践通过使用合适的氨基保护基，在式(LIII)中间体 中的氨基可以在反应前被保护，且可以在反应后去除保护，例如参见 T.W.Greene和P.G.M.Wuts in″有机化学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)″，John Wiley and Sons，1999。
实验方法36
式(XXVII)中间体，其中Het1被限制为(a-2)且其中G2特别为CH， 如流程36所示，以下称为式(LIV)中间体，可以通过中间体(LVIII)的 酰基化得到中间体(LVII)而制备。根据流程36，此酰基化反应可以在 反应惰性溶剂例如THF中，且任选地在合适的碱例如Et3N中或在酸 性条件，例如醋酸酐与甲酸的混合物中进行。随后，式(LV)中间体可 以通过式(LVII)中间体与式(LVI)中间体的烷基化而制备。此反应可以 在反应惰性溶剂例如DMF及合适的碱例如Cs2CO3或K2CO3中，且任 选地在催化量的碘盐例如KI或NaI存在下进行。随后，中间体(LV) 与氨源例如醋酸铵(NH4OAc)的缩合反应得到式(LIV)化合物。在流程 36中，卤代基被定义为Cl或Br，且全部的其它变量如上述所定义。
为构建式(LIV)中间体中的咪唑环，引入R10及R11的顺序可以相 反。此型反应描述于US2006/0004013中的1-(4-溴-2-甲氧基苯基)-4- 甲基-1H-咪唑。
在需要或必要时，可以在任何顺序下进行一或多个下面的步骤：
式(I)化合物，其任何亚组，加成盐，溶剂化物，及立体化学异构 形式，可以使用本领域已知的方法转化成根据本发明的其它中间体及 化合物。
本领域技术人员将理解在上述方法中，中间体化合物的官能团可 能需要通过保护基遮蔽。在中间体化合物的官能团被保护基遮蔽的情 形下，其可以在反应步骤结束后去除保护。
药理学
经发现本发明化合物可以调节γ-分泌酶活性。因此，根据本发明 的化合物及其药学上可接受的组合物可以用于治疗或预防AD，TBI， MCI，衰老，痴呆，与路易体有关的痴呆，淀粉样蛋白脑血管病，多 梗塞性痴呆，唐氏综合征，与帕金森氏病相关的痴呆及与β-淀粉样蛋 白相关的痴呆，优选是AD。
在本文使用时，术语“调节γ-分泌酶活性”指通过γ-分泌酶-复合物 对于处理APP的效应。优选其指其中处理APP的整体速率基本上保 持为没有施用所述化合物时的效应，但是其中处理的产物的相对量改 变，更优选是减少产生的Aβ42-肽的方法。例如可以产生不同的Aβ 种类(例如较短氨基酸序列的Aβ-38或其它Aβ肽物质代替Aβ-42)或产 物的相对量不同(例如Aβ-40对Aβ-42的比例改变，优选增加)。
先前证明γ-分泌酶复合物也涉及处理刻缺(Notch)-蛋白。刻缺蛋 白(Notch)是一种信号传导蛋白，其在发育过程中起关键作用(例如于 Schweisguth F(2004)Curr.Biol.14，R129中评述的)。关于γ-分泌酶调 节剂在医疗中的用途，其似乎特别有利于不干扰γ-分泌酶活性的刻缺 蛋白-处理活性，以避免假定的不必要的副作用。虽然γ-分泌酶抑制剂 因为伴随着抑制刻缺蛋白处理而显现副作用，γ-分泌酶调节剂可能具 有以下优点：选择性降低生产高度聚集且神经毒性形式的Aβ，也即 Aβ42，而不降低生产较小，较不聚集的形式的Aβ，也即Aβ38，且不 会伴随着抑制刻缺蛋白处理。因此，优选的化合物是不影响γ-分泌酶 -复合物的刻缺蛋白-处理活性的化合物。
在本文使用时，术语“治疗”意指全部的过程，其中可以减缓，中 断，阻止或停止疾病的进展，但不需要表明完全消除全部的症状。
本发明涉及用作药物的根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及 其药学上可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物，其用于调节γ-分泌酶活性。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物，其用于治疗或预防选自AD，TBI， MCI，衰老，痴呆，与路易体有关的痴呆，淀粉样蛋白脑血管病，多 梗塞性痴呆或唐氏综合征的疾病或病症。
在一个实施方案中，所述疾病或病症优选是阿尔茨海默氏病。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物，其用于治疗所述疾病。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物，其用于治疗所述疾病。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物，其用于治疗或预防，特别是治疗 γ-分泌酶介导的疾病或病症。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物用于制备药物的用途。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物用于制备供调节γ-分泌酶活性的药 物中的用途。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物用于制备供治疗或预防任何一种 上述疾病状况的药物中的用途。
本发明也涉及根据通式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐及溶剂化物用于制备供治疗任何一种上述疾 病状态的药物中的用途。
在本发明中，特别优选给予这样的式(I)化合物或其任何亚组，其 抑制产生Aβ42-肽的IC50值在根据合适的测试法测定(例如在下面实施 例中使用的测试法)时，小于1000nM，优选小于100nM，更优选小 于50nM，甚至更优选小于20nM。
本发明化合物可以给予哺乳动物，优选是人类，用于治疗或预防 任何一种上述疾病。
鉴于式(I)化合物的用途，提供一种治疗温血动物包括人类罹患任 何一种上述疾病的方法或预防温血动物包括人类罹患任何一种上述 疾病的方法。
所述方法包括给药，也就是全身或局部给药，优选是口服给予温 血动物包括人有效量的式(I)的化合物，其立体异构形式及其药学上可 接受的加成盐及溶剂化物。
本发明也涉及式(I)的化合物用于调节γ-分泌酶活性导致产生的 Aβ42-肽相对量降低的用途。
本发明化合物或一部分的化合物的优点可以是其增强的CNS-穿 透率。
治疗此疾病的有技能的技术人员从下文提出的结果，可以决定有 效治疗的每日量。有效治疗的每日量将从约0.005mg/kg至50mg/kg， 特别是0.01mg/kg至50mg/kg体重，更特别是从0.01mg/kg至25 mg/kg体重，优选从约0.01mg/kg至约15mg/kg，更优选从约0.01 mg/kg至约10mg/kg，甚至更优选从约0.01mg/kg至约1mg/kg，最 优选从约0.05mg/kg至约1mg/kg体重。根据本发明的化合物的量， 在此也称为活性成分，为达到治疗效应所需的量，其当然将随着病例 与病例的基本情况而改变，例如根据特定的化合物，给药途径，接受 者的年龄及病情，及被治疗的特定障碍或疾病。
治疗方法也可包括根据每天一及四次摄入量之间的方案给予活 性成分。在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选在给药前配制。 根据本文下面所述，合适的药物制剂通过已知方法使用熟知且容易获 得的成分制备。
适合治疗或预防阿尔茨海默氏病或其症状的本发明化合物，可以 单独给予或与一或多种其它治疗剂联合给药。联合治疗包括给予单一 药物剂量制剂，其含有式(I)化合物及一或多种其它治疗剂，以及在其 各自分开的药物剂量制剂下给予式(I)化合物及各个另外的治疗剂。例 如，式(I)化合物及治疗剂可以在单一口服剂量组合物例如片剂或胶囊 剂中一起给予患者，或各药物可以以分开的口服剂量制剂给予。
虽然活性成分可以单独给药，其优选作为药用组合物存在。
因此，本发明还提供一种药用组合物，其含有药学上可接受的载 体及作为活性成分的治疗有效量的根据式(I)的化合物。
载体或稀释剂必须是”可接受的”在意义上是指与组合物的其它成 分适配且不对其接受者无害。
为了容易给药，本发明化合物可以配制成不同的药物形式用于给 药目的。根据本发明的化合物，特别是根据式(I)的化合物，其药学上 可接受的酸或碱加成盐，其立体化学异构形式，或其任何亚组或组合， 可以配制成不同的药物形式用于给药目的。合适的组合物可以引用通 常用于全身性给予药物的全部组合物。
为了制备本发明的药用组合物，将作为活性成分的有效量的特定 化合物，任选地以加成盐形式，与药学上可接受的载体密切混合，取 决于所要给药的制剂的形式，所述载体可以采用多种不同的形式。这 些药用组合物需要以单元给药的形式，以适合特别用于口服，直肠， 皮下，胃肠外注射或吸入给药。例如，在制备口服给药形式的组合物 时，在口服液体制剂例如悬浮液，糖浆剂，酏剂，乳液及溶液剂的情 形下，可以使用任何常用的药用介质，例如水，二醇，油，醇等；在 散剂，丸剂，胶囊剂及片剂的情形下，可以使用固体载体例如淀粉， 糖，高岭土，稀释剂，润滑剂，粘合剂，分解剂等。因为其容易给药， 片剂及胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在此情形下明显是使 用固体药用载体。对于胃肠外组合物，载体将通常包括无菌的水，至 少是大部分，虽然可以包括例如用于帮助溶解的其它成分。例如，可 以制备其中该载体包括盐水溶液，葡萄糖溶液或盐水与葡萄糖溶液的 混合物的可注射溶液。例如，可以制备其中该载体包括盐水溶液，葡 萄糖溶液或盐水与葡萄糖溶液的混合物的可注射溶液。含有式(I)化合 物的可注射溶液，可以在油中配制以延长作用。用于此目的的合适的 油，是例如花生油，芝麻油，棉籽油，玉米油，大豆油，长链脂肪酸 的合成甘油酯及这些与其它油的混合物。也可以制备可以注射的悬浮 液，在此情形中可以使用合适的液体载体，助悬剂等。也包括固体形 式制剂，其意欲在临用前不久转化成液体形式制剂。在适合于经皮给 药的组合物中，载体任选地含有穿透增强剂和/或合适的湿化剂，任选 地与少量任何性质的合适添加剂结合，该添加剂在皮肤上不会引起明 显的有害作用。所述添加剂可以促进给药至皮肤和/或可有助于制备所 要的组合物。这些组合物可以在多种方式给药，例如作为经皮贴剂， 作为点剂(spot-on)，作为软膏。式(I)化合物的酸或碱加成盐因为其增 加的水溶解度超过对应的碱或酸形式，因而更合适于制备水性组合 物。
特别有利的是将上述药用组合物配制成单位剂量形式以提供容 易给药及剂量的均一性。单位剂量形式在本文使用时意指适合作为单 一剂量的物理上分开的单位，各单位含有经计算以产生所要的治疗效 应的预定量的活性成分以及与之混合所需的药用载体。这样的单位剂 量形式的实例是片剂(包括刻痕片或包衣片)，胶囊剂，丸剂，粉末包， 糯米纸囊剂，栓剂，可注射的溶液或悬浮液等，及其隔离的多数 (segregated multiples)。
因为根据本发明的化合物是有效的可以口服给药的化合物，口服 给药的含有所述化合物的药用组合物是特别有利的。
为了增加药用组合物中的式(I)化合物的溶解度和/或稳定性，使用 α-，β-或γ-环糊精或其衍生物，特别是羟基烷基取代的环糊精，例如 2-羟基丙基-β-环糊精或磺基丁基-β-环糊精可以是有利的。辅助溶剂例 如醇也可以改善药用组合物中根据本发明的化合物的溶解度和/或稳 定性。
取决于给药模式，该药用组合物将优选含有从0.05至99％重量， 更优选从0.1至70％重量，甚至更优选从0.1至50％重量的式(I)化合 物，及1至99.95％重量，更优选从30至99.9％重量，甚至更优选从 50至99.9％重量药学上可接受的载体，全部的百分比是以组合物的总 重量为基准。
下面的实例说明本发明。
实施例
以下，术语“DCM”指二氯甲烷；“MeOH”指甲醇；“HPLC”指高效 液相层析法；“sat.”指饱和；“aq.”指水溶液；“r.t.”指室温；“AcOH”指 醋酸；“RP”指逆相；“min”指分钟；“h”指小时；“I.D.”指内部直径； “EtOAc”指醋酸乙酯；“NaOAc”指醋酸钠；“KOtBu”指叔丁醇钾；“Et3N” 指三乙胺；“EtOH”指乙醇；“eq”指当量；“r.m.”指反应混合物；“DIPE” 指二异丙醚；“THF”指四氢呋喃；“DME”指二甲氧基乙烷；“DMSO” 指二甲亚砜；“BINAP”指[1，1′-联萘]-2，2′-二基双[二苯基膦](外消旋 性)；“NH4OAc”指醋酸铵；“DMF”指N，N-二甲基甲酰胺；“X-Phos”指 二环己基[2′，4′，6′-三(1-甲基乙基)[1，1′-联苯]-2-基]膦；且“Pd2(dba)3”指三 [μ-[(1，2-η:4，5-η)-(1E，4E)-1，5-二苯基-1，4-戊二烯-3-酮]]二钯。
A.制备中间体
实施例A1
a)制备中间体1
在N2气氛下，将1-氯-2-甲氧基-4-硝基苯(50g，0.26mol)，4-甲 基-1H-咪唑(43.77g，0.53mol)及K2CO3(36.84g，0.26mol)在DMSO (500ml)中的混合物在高压釜内在150℃反应6小时。此反应各与50g 的1-氯-2-甲氧基-4-硝基苯重复两次(总计150g)。随后，合并3个反 应混合物并倒入冰-水(6l)中。滤出固体并用H2O洗涤。将固体溶解在 DCM中并将此溶液用H2O洗涤。将分离的有机层干燥(MgSO4)，过滤 并将溶剂蒸发。将残留物在玻璃滤器上通过硅胶纯化(洗脱液： DCM/MeOH从100/0至97/3)。将产物流分收集并将溶剂蒸发。将残 留物悬浮在DIPE中，过滤并在烘箱中干燥。产量：48.54g的中间体 1(26％)。
b)制备中间体2a及中间体2
将中间体1(13.2g，56.6mmol)溶解在MeOH(250ml)中。将Pd/C (0.5g)加入溶液中并将所得的悬浮液在50℃及H2(大气压力)下搅拌过 夜。消耗H2(1当量)后，滤出催化剂。将有机层蒸发，得到中间体2a (游离碱)。将中间体2a溶解在HCl/EtOH溶液中并搅拌30分钟。真空 除去溶剂。将残留物从含少量石油醚的EtOH中结晶后，得到所要的 产物。产量：4.7g的中间体2(41.0％；.HCl)。
实施例A2
a)制备中间体3及中间体4
将1-氟-2-甲氧基-4-硝基苯(821mg，4.8mmol)，5-甲基-1H-1，2，4- 三唑(800mg，9.63mmol)，K2CO3(4.8mmol)及DMSO(8ml)的混合物 在120℃搅拌1小时。冷却后，将反应混合物倒入冰水中。滤出固体， 用水洗涤并干燥(真空；50℃)。产量：0.554g的中间体3(49％)。将水 层用NaCl饱和化，用DCM萃取并将有机层干燥(MgSO4)，过滤并将 溶剂蒸发。将残留物在硅胶上通过柱层析法纯化(洗脱液：DCM)。收 集所要的部分并将溶剂蒸发。产量：0.147g的中间体4(13％)。
b)制备中间体5
在N2气氛下，将MeOH(50ml)加入Pd/C 10％(150mg)中。随后， 加入在DIPE(1ml)中的0.4％噻吩溶液及中间体3(550mg，2.348 mmol)。将反应混合物在25℃、N2气氛下搅拌至3当量的H2被吸收。 将催化剂通过硅藻土过滤。将滤液蒸发并将残留物悬浮在DIPE中， 过滤并在真空中干燥。产量：0.350g的中间体5(73.0％)。
实施例A3
a)制备中间体6
将K2CO3(9.6g，69.5mmol)及1-甲基-1-甲苯磺酰基甲基异腈(8g， 38.2mmol)加入2-甲酰基-5-硝基茴香醚(6.29g，34.7mmol)在MeOH (150ml)的溶液中并将反应混合物回流4小时。在减压下将反应混合 物浓缩，将残留物溶解在DCM中并将有机相用H2O洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤并在真空将溶剂蒸发。将残留物通过硅胶快速层析法 纯化(洗脱液：正庚烷/EtOAc从100/0至50/50)。收集产物流分并将溶 剂蒸发。产量：6.24g的中间体6(77％)。
b)制备中间体7
在N2气氛下，将MeOH(150ml)加入Pd/C 10％(1g)中。随后， 加入在DIPE中的0.4％噻吩溶液(1ml)及中间体6(6.24g，26.6 mmol)。将反应混合物在25℃的H2气氛下搅拌至3当量的H2被吸收。 将催化剂通过硅藻土过滤并将滤液蒸发。产量：5.4g中间体7(99％)。
实施例A4
a)制备中间体8
在室温及N2气氛下，将碘苯二乙酸酯(Iodobenzene diacetate)(2.47 g，7.68mmol)及三氟甲磺酸(1.35ml，15.3mmol)在CH3CN(40ml)中 搅拌1小时。随后，将混合物加热至回流温度。将2’-甲氧基-4’-硝基- 乙酰苯(1.0g，5.12mmol)一次性加入该溶液中并将反应混合物回流2 小时，然后冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残留物分配在饱和的碳酸 氢钠水溶液(200ml)及EtOAc(200ml)之间。将有机层分离并用盐水洗 涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发后得到棕色固体。将产物通过硅胶快 速层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至99/1)。收集产物流分 并将溶剂蒸发(减压)。产量：0.42g的中间体8(35％)。
b)制备中间体9
在N2气氛下，将MeOH(50ml)加入Pd/C 10％(0.250g)中。随后， 加入在DIPE中的0.4％噻吩溶液(2ml)及中间体8(0.946g，4.04 mmol)。在25℃、H2气氛下，将反应混合物搅拌至3当量的H2被吸 收。将催化剂通过硅藻土过滤并将滤液蒸发。将产物在DIPE中研磨， 过滤并在真空干燥。产量：0.66g中间体9(80％)。
实施例A5
a)制备中间体10
先后将K2CO3(36g，262mmol)和1-甲基-1-甲苯磺酰基甲基异腈 (35g，167mmol)加入5-硝基吡啶-2-醛(20g，131mmol)在MeOH(500 ml)的溶液中并将反应混合物回流4小时。在减压下将反应混合物浓 缩，将残留物溶解在DCM中并将有机相用H2O洗涤，干燥(Na2SO4)， 过滤并在真空将溶剂蒸发。将残留物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱 液：石油醚/EtOAc 4/1)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：15g的 中间体10(56％)。
b)制备中间体11
将中间体10(10g，48.7mmol)在THF(300ml)中的溶液加入 NH4Cl(2.6g，48.7mmol)在H2O(100ml)的溶液中。加入铁(16.3g， 292mmol)并将反应混合物回流4小时。通过过滤将沉淀物移除并将滤 液在真空蒸发。将残留物溶解在EtOAc中并将有机层用H2O洗涤， 干燥(Na2SO4)，过滤并在真空将溶剂蒸发。将残留物溶解在2N HCl 溶液中并将水层用DCM洗涤，通过加入2N NaOH使成为碱性并将产 物用EtOAc萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并在真空将溶剂蒸发， 产量：6g的中间体11(71％)。
实施例A6
a)制备中间体12
将2-碘-5-溴吡啶(13.7g，48.2mmol)，2-甲基-4-唑羧酸甲酯(3.4 g，24.1mmol)，醋酸钯(II)(0.54g，2.41mmol)，三-邻-甲苯基膦(1.47 g，4.81mmol)及Cs2CO3(15.7g，48.2mmol)在甲苯(75ml)中的溶液用 N2吹洗，密封并在110℃搅拌过夜。将催化剂通过硅藻土过滤并将滤 液蒸发。将粗产物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH(NH3) 从100/0至98/2)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：5.64g的中间 体12(64％)。
b)制备中间体13
将中间体12(5.64g，15.4mmol)及LiOH(0.91g，38mmol)溶解在 二烷(40ml)及H2O(10ml)中。将反应混合物在室温搅拌5小时后用 1M HCl溶液处理至pH 2。将沉淀物过滤并在真空干燥。滤液用CHCl3萃取并将有机层干燥(MgSO4)，过滤并在减压下将溶剂移除后得到固 体。将两个固体部分合并。产量：4.75g的中间体13(97％)。
c)制备中间体14
将中间体13(3.3g，11.65mmol)在DMF(75ml)及EtOH(30ml) 混合物中的溶液在150℃的微波条件下加热4小时。冷却后，将溶剂 蒸发后得到中间体14(3.1g，89％)。此部分无需进一步纯化而用在下 一步骤。
d)制备中间体15
将[(R)-1-[(S)-2-(二环己基膦基)二茂铁基]乙基]二叔丁基膦 (Josi-Phos，0.492g，0.89mmol)及Pd(OAc)2在DME(2ml)中预先混合 后加入中间体14(4.25g，17.8mmol)及叔丁醇钠(2.39g，6.69mmol)在 DME(18ml)的溶液中。最后，加入N-苄基胺(2.28g，21.33mmol)并将 反应混合物在100℃搅拌9小时。冷却后，将反应混合物用DCM稀 释并通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层 析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH(NH3)从100/0至98/2)。收集产物流分 并将溶剂减压蒸发。产量：3.23g的中间体15(67％)。
e)制备中间体16
在N2气氛下，将MeOH(50ml)加入Pd/C 10％(0.05g)中。加入 中间体15(0.15g，0565mmol)，并在50℃、H2气氛下，将反应混合物 搅拌至1当量H2被吸收。通过硅藻土过滤催化剂。将滤液蒸发。产量： 0.105g中间体16(95％)。
实施例A7
a)制备中间体17
将1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡唑 (2.83g，13.63mmol)，CsF(3.11g，20.45mmol)及[1，1’-双(二苯基膦基) 二茂铁]二氯化钯(II)(1.99g，13.64mmol)加入4-溴-3-氟硝基苯(3.0g， 4.81mmol)在DMF(60ml)的溶液中。将反应混合物用N2吹洗，密封 并在100℃搅拌8小时。冷却后，将溶剂蒸发。将残留物溶解在DCM 中并将有机相用H2O洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并将滤液减压下浓缩 后得到中间体17。此部分无需进一步纯化而用在下一步骤。
b)制备中间体18
将中间体17(3.0g，13.56mmol)及铁(3.78g，67.8mmol)在AcOH (24ml)中摇动1.5小时。将溶剂蒸发。将残留物溶解在DCM中并将 有机层用饱和的Na2CO3溶液洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓 缩。将残留物在DIPE中研磨并将所得的沉淀物过滤。产量：0.72g 的中间体18(28％)。
实施例A8
a)制备中间体19
将3-溴-2-甲苯(10.0g，42.29mmol)，二甲基甲酰胺缩二甲醇(15.55 g，139mmol)及吡咯烷(3.29g，46.29mmol)在115℃搅拌22小时。将溶 液冷却至室温并原样用于下一步骤。
b)制备中间体20
将来自先前反应步骤的含有中间体19的粗溶液在0℃逐滴加入过 碘酸钠(29.7g，139mmol)在DMF(75ml)及H2O(100ml)的搅拌溶液 中。然后使反应混合物温热至室温并搅拌3小时。将悬浮液通过硅藻 土过滤，将其用EtOAc充分洗涤。将滤液用H2O洗涤并将有机相在 减压下浓缩。将残留物通过硅胶层析法纯化(洗脱液：正庚烷/DCM从 50/50至0/100)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：2.72g的中间体 20(20％产量历经2个反应步骤)。
c)制备中间体21
将三乙酰氧基硼氢化钠(1.38g，6.5mmol)逐滴加入中间体20(1.0 g，4.34mmol)，3-甲氧基苯胺(0.53g，4.34mmol)及醋酸(1.3g，21.7mmol) 在1，2-二氯乙烷(16ml)的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌4小 时，用K2CO3水溶液及盐水洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在 减压下将溶剂移除。将残留物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱液：正庚 烷/DCM等量50/50)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.65g的中 间体21(41％)。
d)制备中间体22
将中间体21(5.68g，16.8mmol)及氯化锡(II)二水合物(7.6g，33.7 mmol)在EtOH(100ml)中的混合物在40℃搅拌过夜。将溶剂蒸发并将 残留物悬浮在H2O中，并将产物用DCM充分萃取。将有机相干燥 (MgSO4)，过滤并将溶剂移除(减压)。将残留物通过硅胶层析法纯化(洗 脱液：正庚烷/DCM从40/60至0/100)。收集产物流分并将溶剂蒸发。 产量：3.63g的中间体22(71％)。
e)制备中间体23
将二异丙基氨化锂在THF中的2M溶液逐滴加入中间体22(3.0 g，9.9mmol)在THF中的-78℃溶液中。使反应混合物温热至0-5℃并搅 拌15分钟。将混合物再度冷却至-78℃并加入CH3I(2.1g，14.8mmol)。 使反应混合物的温度缓慢上升至室温并搅拌16小时。加入H2O并将 产物用乙醚萃取。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并在减压下将溶剂移 除。残留物通过硅胶层析法纯化(洗脱液：正庚烷/DCM从50/50至 0/100)。收集产物流分并蒸发溶剂。产量：3.63g中间体23(71％)。
实施例A9
a)制备中间体24
将2-溴-6-甲基苯胺(1.18g，6.34mmol)在6N HCl水溶液中在60℃ 搅拌30分钟后将反应混合物冷却至0℃。逐滴加入NaNO2(0.481g， 6.98mmol)在H2O(1.5ml)中的溶液并将反应混合物在0℃再搅拌1小 时。通过加入NaOAc饱和水溶液将反应混合物缓冲化(pH在4和5 之间)，且随后将混合物一次整份加入叔丁基硫醇0.63g，6.98mmol) 在EtOH(25ml)的冰冷溶液中。使反应混合物温热至室温并搅拌过夜。 将反应混合物分配于EtOAc(100ml)及H2O(100ml)之间。将水层用 EtOAc萃取并将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并在减压下将溶剂 移除。产量：1.7g的中间体24(70％)。
b)制备中间体25
将中间体24(1.7g，4.44mmol)的DMSO(20ml)溶液逐滴加入 KOtBu(6.64g，59mmol)在DMSO(50ml)的溶液中。将反应混合物在 室温搅拌2小时后倒在含有1N HCl水溶液(300ml)的冰(300g)上。将 混合物用乙醚萃取。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下 将溶剂移除。将残留物通过硅胶层析法纯化(洗脱液：DCM)。收集产 物流分并将溶剂蒸发。产量：0.55g中间体25(63％)。
c)制备中间体26
将中间体25(0.54g，2.74mmol)及硫酸二丁酯(0.493g，2.77mmol) 在甲苯(7ml)中的混合物在110℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至 室温并用NaHCO3饱和水溶液洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并 将溶剂蒸发。将粗油通过硅胶层析法纯化(洗脱液：正庚烷/DCM从 90/10至70/30)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.335g的中间 体26(43％)。
实施例A12
制备中间体27
将中间体25(2g，10.1mmol)，全氟丁基磺酸2，2，2-三氟乙酯(4.9g， 12.84mmol)及Cs2CO3(9.92g，30.45mmol)的溶液在室温搅拌4小时。 将反应混合物用EtOAc稀释并用H2O洗涤。将有机层干燥(MgSO4)， 过滤并将溶剂蒸发。将所得的黄色油通过硅胶层析法纯化(洗脱液：正 庚烷/DCM从80/20至0/100)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：1.08 g的中间体27(38％)。
实施例A13
a)制备中间体28
将氯铬酸吡啶(67g，310mmol)加入3-氯-2-硝基苄基醇(25g， 129mmol)，分子筛(40g)及硅藻土(40g)在DCM(500ml)的悬浮液中。 将反应混合物在室温搅拌2小时后通过硅胶过滤(洗脱液：DCM)。收 集产物流分并在减压下将溶剂移除。将残留物通过硅胶层析法纯化(洗 脱液：DCM)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：22.5g的中间体 28(94％)。
b)制备中间体29
用10分钟将4-氟苯胺(1.83g，16.1mmol)逐滴加入中间体28(3g， 16.1mmol)在AcOH(50ml)的溶液中。逐滴加入氰化三甲基甲硅烷(4.3 ml，32.3mmol)并将反应混合物在室温搅拌16小时。将溶剂蒸发并将 残留物分配在H2O及DCM之间。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过 滤并在减压下将溶剂移除。在温和加热下将残留物溶解在EtOH(100 ml)中并加入0.5M Na2CO3溶液(15ml，0.75mmol)。鲜黄色吲唑氧化 物几乎立即开始结晶。使混合物冷却至室温。将沉淀物过滤并从 EtOH/AcOH再结晶。产量：1.9g的中间体29(40％)。
c)制备中间体30
将三氯化磷(4.72g，34.3mmol)加入中间体29(1.6g，5.56mmol) 于CHCl3(25ml)的悬浮液中并将反应混合物回流1小时。冷却后，将 反应混合物倒入冰-水中。将水层碱化(NaOH)并将产物用DCM萃取。 将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤并在减压下将溶剂移除。将残留 物从CH3CN结晶，过滤并在真空干燥。产量：0.92g的中间体30(61 ％)。
实施例A14
a)制备中间体31
将甲酸(12.8ml，340mmol)及醋酸酐(8.54ml，91mmol)的混合物 在室温搅拌40分钟。随后，将3-氨基-6-溴-2-甲氧基-吡啶(5g，24.6 mmol)在THF(30ml)中的溶液逐滴加入混合物中。将所得的反应混合 物在60℃搅拌过夜，然后冷却并倒入冰-水中，产生固体沉淀。将固 体过滤，用水洗涤，并干燥。产量：5.2g的中间体31(76％)。
b)制备中间体32
将1-氯-丙-2-酮(4.34g，46.9mmol)逐滴加入中间体31(5.2g，18.8 mmol)，KI(0.343g，2.06mmol)及Cs2CO3(21.4g，65.9mmol)在DMF (50ml)的混合物中。将反应混合物在室温搅拌过夜。随后，将反应混 合物倒入冰-水中并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过 滤并在真空浓缩。将残留物悬浮在DIPE中并将所得的固体过滤，用 DIPE洗涤并干燥。产量：443g中间体32(82％)。
c)制备中间体33
将中间体32(4.4g，15.3mmol)加入NH4OAc(5.41g，70.2mmol) 在AcOH(10ml)的混合物中。将反应混合物回流1小时。将反应混合 物冷却至室温并倒入冰-水及EtOAc的混合物中。用50％重量/体积 NaOH水溶液将混合物碱化至pH 9。将有机层分离，干燥(MgSO4)， 过滤并在真空浓缩。将所得的固体产物原样用于下一步骤。产量：3.78 g的中间体33。
d)制备中间体34
将2-甲基-2-丙醇钠盐(0.717g，7.46mmol)、BINAP(464mg，0.746 mmol)，Pd2(dba)3(342mg，0.373mmol)，中间体33(1.0g，3.73mmol) 及二苯甲酮亚胺(0.845g，4.66mmol)在甲苯(20ml；预先脱氧化)中的 混合物在100℃的微波条件下搅拌并加热2小时。将混合物冷却，并 在真空将溶剂移除。将THF(50ml)及1N HCl水溶液(50ml)加入残留 物中，并将混合物在室温搅拌1小时。用10％Na2CO3水溶液将反应 混合物碱化并用EtOAc萃取。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并在真空 中将溶剂蒸发。将产物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH 从100/0至95/5)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.6g的中间体 34(52％历经2个反应步骤)。
实施例A15
a)制备中间体35
将三乙酰氧基硼氢化钠(1.17g，5.5mmol)逐滴加入中间体20(0.8 g，3.69mmol)，4-氟苄基胺(0.46g，3.69mmol)和AcOH(1.1g，18.48 mmol)在1，2-二氯乙烷(12ml)的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅 拌4小时，用K2CO3水溶液及盐水洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过 滤并在减压下将溶剂移除。将残留物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱 液：正庚烷/DCM从30/70至0/100)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产 量：0.70g的中间体35(41％)。
b)制备中间体36
将中间体35(0.6g，1.77mmol)及氯化锡(II)二水合物(0.80g，3.59 mmol)在EtOH(15ml)中的混合物在40℃搅拌过夜。蒸发溶剂并将残 留物悬浮在H2O中，并用DCM充分萃取产物。干燥(MgSO4)有机相， 过滤并将溶剂移除(减压)。将残留物通过RP制备型HPLC纯化[RP Shandon HyperprepC18 BDS(8微米，250g，I.D.5cm)；流动相： 梯度的(在水中的0.25％NH4HCO3溶液)/MeOH/CH3CN]。收集产物流 分并将溶剂蒸发。产量：0.094g中间体36(17％)。
B.制备化合物
实施例B1
制备化合物1
将中间体22(0.28g，0.92mmol)，Pd2(dba)3(0.084g，0.092mmol)， X-Phos(0.097g，0.203mmol)及Cs2CO3(0.90g，2.77mmol)加入中间 体2a(0.187g，0.92mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)的溶液中。将反应 混合物在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O并将产物用DCM萃 取。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过RP 制备型HPLC纯化[RP Shandon HyperprepC18 BDS(8微米，250g， I.D.5cm)；流动相：(在水中的0.25％NH4HCO3溶液，CH3CN)]。收 集产物流分并将减压浓缩。产量：0.156g的化合物1(40％)。
实施例B2
制备化合物2
将中间体23(0.152g，0.48mmol)，Pd2(dba)3(0.044g，0.048mmol)， X-Phos(0.050g，0.105mmol)及Cs2CO3(0.47g，1.43mmol)加入中间 体2a(0.097g，0.48mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)的溶液中。将反应 混合物在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O并将产物用DCM萃 取。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅 胶柱层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至95/5)，收集产物流 分并后处理。将残留物从DIPE中结晶，过滤并在60℃真空干燥。产 量：0.131g的化合物2(62％)。
实施例B3
制备化合物3
将中间体26(0.10g，0.39mmol)，Pd2(dba)3(0.036g，0.039mmol)， X-Phos(0.041g，0.087mmol)及Cs2CO3(0.38g，1.18mmol)加入中间 体2a(0.080g，0.39mmol)在2-甲基-2-丙醇(7ml)的溶液中。将反应混 合物在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O并将产物用DCM萃取。 将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱 层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至96/4)，收集产物流分并 经处理后得到粗化合物3a(化合物3的游离碱)。将产物溶解在DIPE 中并通过加入1ml在2-丙醇中的6N HCl溶液转化成其HCl-盐，过滤 并在60℃的真空下干燥。产量：0.070g的化合物3(39％；.2HCl)。
实施例B4
制备化合物4
将中间体23(0.317g，1mmol)，Pd2(dba)3(0.091g，0.1mmol)， X-Phos(0.095g，0.2mmol)及Cs2CO3(0.98g，3mmol)加入中间体11 (0.175g，1mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)的溶液中，并将反应混合物 在110℃加热14小时。冷却后，加入H2O并将产物用DCM稀释并 通过硅藻土过滤。将滤液用H2O洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在减压 下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH(NH3) 从100/0至98/2)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.198g的化合 物4(48％)。
实施例B5
制备化合物5
将中间体23(0.348g，1.1mmol)，Pd2(dba)3(0.091g，0.1mmol)， X-Phos(0.105g，0.22mmol)及Cs2CO3(0.98g，3mmol)加入中间体5 (0.204g，1mmol)在2-甲基-2-丙醇(12ml)的溶液中，并将反应混合物 在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O并将产物用DCM萃取。 将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱 层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至95/5)。收集产物流分并 经处理后得到粗化合物5a(化合物5的游离碱)。将产物溶解在DIPE 中并通过加入2ml在2-丙醇中的6N HCl溶液转化成其HCl-盐，过滤 并在60℃的真空下干燥。产量：0.344g的化合物5(67％；1.9HCl)。
实施例B6
制备化合物6
将中间体27(0.204g，0.73mmol)，Pd2(dba)3(0.064g，0.07mmol)， X-Phos(0.073g，0.15mmol)及Cs2CO3(0.68g，2.1mmol)加入中间体 9(0.142g，0.7mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)的溶液中，并将反应混 合物在60℃加热16小时。冷却后，加入H2O并将反应混合物用DCM 稀释并通过硅藻土过滤。将滤液用H2O洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并 在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液： DCM/MeOH(NH3)从100/0至99/1)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产 量：0.081g的化合物6(29％)。
实施例B7
制备化合物7
将中间体23(0.222g，0.7mmol)，Pd2(dba)3(0.064g，0.07mmol)， X-Phos(0.073g，0.15mmol)及Cs2CO3(0.684g，2.1mmol)加入中间体 18(0.175g，1mmol)在2-甲基-2-丙醇(12ml)的溶液中，在100℃加热 反应混合物20小时。冷却后加入H2O并用DCM稀释产物并通过硅 藻土过滤。滤液用H2O洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并减压浓缩。残留 物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH(NH3)从100/0至98/2)。 收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.054g化合物7(18％)。
实施例B8
a)制备化合物32
将中间体30(0.198g，0.73mmol)，Pd2(dba)3(0.066g，0.073mmol)， X-Phos(0.076g，0.16mmol)及Cs2CO3(0.714g，2.2mmol)加入4-(2- 甲基-1，3-唑-5-基)苯胺(0.127g，0.73mmol)在2-甲基-2-丙醇(12ml) 的溶液中，并将反应混合物在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O 并将产物用DCM萃取。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。 将残留物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至 98/2)。收集产物流分并经后处理。将产物从CH3CN中结晶，过滤并 干燥(在真空；60℃)。产量：0.098g的化合物32(33％)。
制备化合物8
在N2气氛下，将MeOH/NH3(40ml)加入阮内镍(0.05g)中。随后， 加入化合物32(0.042g，0.10mmol)。将反应混合物在14℃、H2气氛 下搅拌至2当量的H2被吸收。将催化剂通过硅藻土过滤并将滤液蒸 发。将残留物通过硅胶快速层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH(NH3) 95/5)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产量：0.010g的化合物8(23％)。
实施例B9
制备化合物9
将中间体27(0.278g，0.99mmol)，Pd2(dba)3(0.083g，0.09mmol)， X-Phos(0.095g，0.2mmol)及Cs2CO3(0.885g，2.72mmol)加入中间体 34(0.185g，0.91mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)的溶液中，并将反应 混合物在70℃加热16小时。冷却后，加入H2O并将反应混合物用 DCM稀释并通过硅藻土过滤。将滤液用H2O洗涤，干燥(MgSO4)，过 滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液： DCM/MeOH(NH3)从100/0至98/2)。收集产物流分并将溶剂蒸发。产 量：0.092g的化合物9(25％)。
实施例B10
制备化合物10
将中间体36(0.094g，0.308mmol)，Pd2(dba)3(0.028g，0.031 mmol)，X-Phos(0.032g，0.068mmol)及Cs2CO3(0.301g，0.92mmol) 加入中间体2a(0.062g，0.308mmol)在2-甲基-2-丙醇(5ml)的溶液中， 并将反应混合物在110℃加热20小时。冷却后，加入H2O并将产物 用DCM萃取。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并在减压下浓缩。将残留 物通过硅胶柱层析法纯化(洗脱液：DCM/MeOH从100/0至98/2)。收 集产物流分并减压浓缩。产量：0.070g的化合物10(53％)。
在表1a及Ib中的化合物1至57是通过类似于其中一个上述实施 例制备。如果指出没有盐形成，该化合物作为游离碱获得。‘Pr.’指化 合物依据此方案合成的实施例编号。‘Co.No.’指化合物编号。
为了得到HCl盐形式，使用本领域技术人员已知的数种方法。在 一个典型的方法中，例如，将粗残留物(游离碱)溶解在DIPE或Et2O 中，且随后滴加入在2-丙醇中的6N HCl溶液或在Et2O中的1N HCl 溶液。将混合物搅拌10分钟并将产物过滤。将HCl盐在真空中干燥。
表1a
表1b
分析部分
LCMS(液相层析/质谱法)
通用方法A
LC测量是使用包括二元泵(binary pump)，样本整理器(sample organizer)，柱加热器(设定在55℃)，二极管阵列检测器(DAD)及在下 面各方法中指定的柱的Acquity UPLC(超高效液相层析法(Ultra Performance Liquid Chromatography))(Waters)系统进行。从柱的流量分 流至MS光谱仪。MS检测器配置电子喷雾电离源。使用0.02秒的驻 留时间通过在0.18秒内从100扫描至1000而采集(acquired)质谱。毛 细管针电压是3.5kV且源温度是维持在140℃。使用氮气作为雾化气 体。使用Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统进行数据采 集。
通用方法B
HPLC测量是使用包括配备脱气机的四元泵，自动取样器，柱加 热炉(设定在40℃，除非另外指明)，DAD及在下面各方法中指定的柱 的Alliance HT 2790(Waters)系统进行。从柱的流量分流至MS光谱仪。 MS检测器配置电子喷雾电离源。使用0.1秒的驻留时间通过在1秒内 从100扫描至1000而采集质谱。毛细管针电压是3kV且源温度是维 持在140℃。使用氮气作为雾化气体。使用Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统进行数据采集。
LCMS方法1
除了通用方法A外：在桥接的乙基硅氧烷/杂化二氧化硅(BEH) C18柱(1.7微米，2.1x50毫米；Waters Acquity)上使用0.8ml/分钟的 流速进行逆相UPLC。使用两种流动相(25mmol浓度NH4OAc在 H2O/CH3CN 95/5中；流动相B：CH3CN)操作从95％A及5％B至5％ A及95％B在1.3分钟并保持0.3分钟的梯度条件。使用0.5微升的 注射体积。正电离模式的锥体电压是10V且负电离模式是20V。
LCMS方法2
除了通用方法A外：在BEH C18柱(1.7微米，2.1x50毫米；Waters Acquity)上使用0.8ml/分钟的流速进行逆相UPLC。使用两种流动相 (流动相A：0.1％甲酸在H2O/MeOH 95/5中；流动相B：MeOH)操作 从95％A及5％B至5％A及95％B在1.3分钟并保持0.2分钟的梯 度条件。使用0.5微升的注射体积。正电离模式的锥体电压是10V且 负电离模式是20V。
LCMS方法3
除了通用方法B外：在Atlantis C18柱(3.5微米，4.6x100毫米) 上使用1.6ml/分钟的流速进行逆相HPLC。使用两种流动相(流动相A： 70％MeOH+30％H2O；流动相B：0.1％甲酸在H2O/MeOH 95/5)操作 从100％B至5％B+95％A在9分钟并保持这些条件经3分钟的梯度 条件。使用10微升的注射体积。正电离模式的锥体电压是10V且负 电离模式是20V。
LCMS方法4
除了通用方法A外：在BEH C18柱(1.7微米，2.1x50毫米；Waters Acquity)上使用0.8ml/分钟的流速进行逆相UPLC(超高效液相层析法 (Ultra Performance Liquid Chromatography))。使用两种流动相(25mmol 浓度NH4OAc/CH3CN 95/5；流动相B：CH3CN)操作从95％A及5％B 至5％A及95％B在1.3分钟并保持0.3分钟的梯度条件。使用0.5微 升的注射体积。正电离模式的锥体电压是30V且负电离模式是30V。
LCMS方法5
除了通用方法B外：柱加热器设定在60℃。在Xterra MS C18柱 (3.5微米，4.6x100毫米)使用1.6ml/分钟的流速进行逆相HPLC。使 用三种流动相(流动相A：95％25mmol浓度NH4OAc+5％CH3CN； 流动相B：CH3CN；流动相C：MeOH)操作从100％A至50％B及50％ C在6.5分钟，至100％B在0.5分钟并保持这些条件经1分钟并用 100％A再平衡1.5分钟的梯度条件。使用10微升的注射体积。正电 离模式的锥体电压是10V且负电离模式是20V。
熔点
使用DSC823e(Mettler-Toledo)测定数种化合物的熔点(m.p.)。使 用30℃/分钟的温度梯度测量熔点。最高温度是400℃。列出的值是最 高值。
分析测量的结果列在表2。
表2：以分钟表示的滞留时间(Rt)，[M+H]+峰(质子化的分子)，LCMS 方法及m.p.(以℃表示的熔点)。(n.d.系指没有测定)
1H NMR
对于数个化合物，使用CHLOROFORM-d(氘化氯仿，CDCl3)或 DMSO-d6(氘化DMSO，二甲基-d6亚砜)作为溶剂，在配备标准脉冲 序列并分别在360MHz及400MHz操作的Bruker DPX-360或Bruker DPX-400光谱仪上记录1H NMR光谱。化学位移(δ)是以相对于作为内 标的四甲基硅烷(TMS)的每百万之份数报告。
Co.No.1：(360MHz，CDCl3)δppm 2.31(s，3H)，3.84(s，3H)，3.92(s，3H)，6.89(s， 1H)，6.92-7.01(m，4H)，7.02-7.09(m，1H)，7.09-7.15(m，1H)，7.19(d，J＝8.3Hz， 1H)，7.24(d，J＝8.3Hz，1H)，7.39-7.48(m，2H)，7.49-7.56(m，1H)，7.64(s，1H)， 8.38(s，1H).
Co.No.2：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.14(s，3H)，2.64(s，3H)，3.75(s，3H)，3.84 (s，3H)，6.92-7.00(m，2H)，7.01(s，1H)，7.09-7.16(m，3H)，7.19(d，J＝8.5Hz，1 H)，7.23-7.31(m，3H)，7.52(t，J＝8.4Hz，1H)，7.63(d，J＝1.1Hz，1H)，8.33(s，1H).
Co.No.3：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.91(t，J＝7.3Hz，3H)，1.27(sxt，J＝7.3Hz，2 H)，1.92(quin，J＝7.3Hz，2H)，2.34(s，3H)，3.79(s，3H)，4.44(t，J＝6.9Hz，2H)，6.91 -7.01(m，2H)，7.10(d，J＝7.3Hz，1H)，7.16(d，J＝2.2Hz，1H)，7.28(d，J＝8.4Hz，1 H)，7.37(d，J＝8.4Hz，1H)，7.65(s，1H)，8.38(s，1H)，8.54(br.s.，1H)，9.28(d， J＝1.5Hz，1H)，14.84(br.s.，1H).
Co.No.4：(360MHz，CDCl3)δppm 2.61(s，3H)，2.65(s，3H)，3.88(s，3H)，6.89(s， 1H)，6.99-7.06(m，2H)，7.10-7.16(m，2H)，7.20(d，J＝8.1Hz，1H)，7.46(t，J＝8.4 Hz，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，7.83(s，1H)，8.64(d， J＝2.6Hz，1H).
Co.No.5：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.39(s，3H)2.64(s，3H)3.80(s，3H)3.84 (s，3H)6.95-7.04(m，2H)7.09-7.19(m，3H)7.22-7.35(m，3H)7.43(d，J＝8.78 Hz，1H)7.52(t，J＝8.42Hz，1H)9.05(br.s.，1H).
Co.No.6：(360MHz，CDCl3)δppm 2.53(s，3H)3.95(s，3H)5.00(q，J＝8.42Hz，2 H)6.83(s，1H)6.92(d，J＝1.83Hz，1H)6.99(dd，J＝8.42，1.83Hz，1H)7.06(t， J＝7.68Hz，1H)7.14(d，J＝6.95Hz，1H)7.18(d，J＝8.42Hz，1H)7.30(s，1H)7.67 (d，J＝8.42Hz，1H)8.01(s，1H).
Co.No.7：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.63(s，3H)3.84(s，3H)3.87(s，3H)6.98 (t，J＝7.68Hz，1H)7.07(d，J＝7.32Hz，1H)7.09-7.17(m，3H)7.22-7.32(m，3H) 7.48-7.58(m，2H)7.79(s，1H)7.93-8.03(m，1H)8.41(s，1H).
Co.No.8：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.02(br.s.，2H)2.45(s，3H)4.06(s，2H) 6.94-7.02(m，1H)7.08(d，J＝7.32Hz，1H)7.31(s，1H)7.35(m，J＝8.78Hz，2H) 7.43(d，J＝6.22Hz，1H)7.44-7.50(m，2H)7.53(m，J＝8.42Hz，2H)7.84-7.92(m， 2H)8.41(s，1H).
Co.No.9：(360MHz，CDCl3)δppm 2.30(s，3H)，3.82(s，3H)，4.23(s，3H)，6.76(s， 1H)，6.88(s，1H)，6.90-6.96(m，2H)，7.01(t，J＝7.7Hz，1H)，7.11(d，J＝7.3Hz，1 H)，7.14-7.22(m，2H)，7.63(s，1H)，7.88(s，1H).
Co.No.10：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.92(t，J＝7.3Hz，3H)，1.32(sxt，J＝7.3Hz， 2H)，1.85(quin，J＝7.3Hz，2H)，2.34(s，3H)，2.63(s，3H)，3.79(s，3H)，4.37(t， J＝7.3Hz，2H)，6.87-6.99(m，2H)，7.09(d，J＝7.2Hz，1H)，7.14(d，J＝2.2Hz，1H)， 7.26(d，J＝8.3Hz，1H)，7.37(d，J＝8.6Hz，1H)，7.64(s，1H)，8.48(br.s.，1H)，9.28 (d，J＝1.5Hz，1H)，15.01(br.s.，1H).
Co.No.11：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.91(t，J＝7.32Hz，3H)1.28(sxt，J＝7.32 Hz，2H)1.94(quin，J＝7.32Hz，2H)2.35(d，J＝0.73Hz，3H)3.82(s，3H)4.50(t， J＝7.32Hz，2H)7.08-7.15(m，2H)7.27(d，J＝2.20Hz，1H)7.47(d，J＝8.78Hz，1H) 7.68(t，J＝1.10Hz，1H)7.91(d，J＝1.10Hz，1H)8.65(s，1H)8.89(br.s.，1H)9.32 (d，J＝1.46Hz，1H)14.99(br.s.，1H).
Co.No.12：(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.91(t，J＝7.27Hz，3H)1.26(sxt，J＝7.27 Hz，2H)1.92(quin，J＝7.27Hz，2H)2.36(s，3H)3.83(s，3H)4.01(q，J＝5.65Hz，2 H)4.44(t，J＝6.86Hz，2H)7.16(dd，J＝8.68，2.22Hz，1H)7.23(d，J＝1.21Hz，1H) 7.24(d，J＝2.02Hz，1H)7.35(s，1H)7.40(d，J＝8.48Hz，1H)7.63(t，J＝1.21Hz，1H) 8.42(br.s.，2H)8.45(s，1H)8.59(br.s.，1H)9.29(d，J＝1.61Hz，1H)15.04(br.s.，1 H).
Co.No.13：(360MHz，CDCl3)δppm 0.54-0.63(m，2H)0.77-0.85(m，2H)1.47- 1.61(m，1H)2.54(s，3H)3.87(s，3H)4.44(d，J＝7.32Hz，2H)6.94-7.09(m，3H) 7.14-7.23(m，2H)7.30-7.39(m，2H)7.90(br.s.，1H)8.22(s，1H)8.40(br.s.，1 H).
Co.No.14：(360MHz，CDCl3)δppm 1.21(d，J＝6.9Hz，6H)，1.48(t，J＝6.9Hz，3H)， 2.00(s，3H)，2.30(s，3H)，2.42(s，3H)，3.23-3.43(m，1H)，3.80(s，3H)，4.11(q， J＝6.9Hz，2H)，6.80(s，1H)，6.87(s，1H)，6.90-6.96(m，3H)，6.99-7.06(m，1H)， 7.11(s，1H)，7.13-7.21(m，3H)，7.63(d，J＝1.3Hz，1H).
Co.No.15：(360MHz，CDCl3)δppm 2.30(s，3H)，3.81(s，3H)，5.57(s，2H)，6.83 (s，1H)，6.88(s，1H)，6.90-6.97(m，2H)，7.00-7.13(m，4H)，7.14-7.19(m，2H)， 7.23-7.28(m，2H)，7.63(s，1H)，7.87(s，1H).
Co.No.16：(360MHz，CDCl3)δppm 2.31(s，3H)，2.34(t，J＝1.8Hz，3H)，3.83(s，3 H)，6.89(d，J＝5.1Hz，2H)，6.92-6.99(m，2H)，7.01-7.10(m，2H)，7.14(d，J＝6.9 Hz，1H)，7.19(d，J＝8.3Hz，1H)，7.25(d，J＝6.9Hz，1H)，7.64(d，J＝1.1Hz，1H)， 7.81(td，J＝8.8，5.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.7Hz，1H).
Co.No.17：(360MHz，CDCl3)δppm 2.49(s，3H)3.87(s，3H)4.23(s，3H)6.81(s， 1H)6.94-6.99(m，2H)7.03(t，J＝7.68Hz，1H)7.12(d，J＝6.95Hz，1H)7.20(d， J＝8.05Hz，1H)7.58(d，J＝9.15Hz，1H)7.88(s，1H)8.48(s，1H).
Co.No.19：(360MHz，CDCl3)δppm 2.50(s，3H)，3.90(s，3H)，3.93(s，3H)，6.93- 7.09(m，5H)，7.13(d，J＝7.3Hz，1H)，7.24(d，J＝7.3Hz，1H)，7.42-7.48(m，2H)， 7.50-7.53(m，1H)，7.62(d，J＝8.3Hz，1H)，8.38(s，1H)，8.50(s，1H).
Co.No.20：(360MHz，CDCl3)δppm 1.21(d，J＝6.6Hz，6H)，1.48(t，J＝7.0Hz，3H)， 2.00(s，3H)，2.42(s，3H)，2.49(s，3H)，3.33(spt，J＝6.8，6.6Hz，1H)，3.86(s，3H)， 4.11(q，J＝7.0Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.92-6.96(m，2H)，6.97-7.06(m，2H)，7.11 (s，1H)，7.15-7.22(m，2H)，7.56(d，J＝8.8Hz，1H)，8.46(s，1H).
Co.No.22：(360MHz，CDCl3)δppm 2.10-2.32(m，4H)，2.50(s，3H)，2.63(s，2H)， 4.42(t，J＝6.7Hz，2H)，6.79(s，1H)，6.96-7.05(m，1H)，7.05-7.23(m，4H)，7.67(t， J＝8.4Hz，1H)，8.42(d，J＝2.6Hz，1H).
Co.No.23：(360MHz，CDCl3)δppm 2.34(s，3H)，2.51(s，3H)，6.96(s，1H)，7.01- 7.26(m，5H)，7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(t，J＝8.8Hz，1H)，7.80(td，J＝8.8，5.8Hz， 1H)，8.38(d，J＝2.6Hz，1H)，8.44(d，J＝2.6Hz，1H).
Co.No.24：(360MHz，CDCl3)δppm 2.52(s，3H)4.23(s，3H)6.78(br.s.，1H)7.00 (t，J＝7.87Hz，1H)7.07-7.13(m，2H)7.17(d，J＝8.42Hz，1H)7.32(m，J＝8.42Hz，2 H)7.56(m，J＝8.78Hz，2H)7.86(s，1H).
Co.No.25：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.42-0.51(m，2H)0.54-0.63(m，2H) 1.33-1.52(m，1H)2.50(s，3H)4.30(d，J＝7.32Hz，2H)6.91-6.99(m，1H)7.04(d， J＝7.32Hz，1H)7.24(d，J＝8.05Hz，1H)7.34(m，J＝8.78Hz，2H)7.42(s，1H)7.54 (m，J＝8.78Hz，2H)8.41(s，1H).
Co.No.26：(360MHz，DMSO-d6)δppm 1.80-1.98(m，2H)2.47(s，3H)2.48-2.56 (m，2H)2.61-2.76(m，2H)5.16(quin，J＝8.42Hz，1H)6.95(t，J＝8.42，7.32Hz，1 H)7.02(d，J＝7.32Hz，1H)7.20(d，J＝8.05Hz，1H)7.29-7.39(m，3H)7.54(m，2 H)8.44(s，1H).
Co.No.27：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.47(s，3H)3.25(s，3H)3.84(t，J＝5.12Hz， 2H)4.59(t，J＝5.12Hz，2H)6.95(t，J＝8.05，7.32Hz，1H)7.02(d，J＝7.32Hz，1H) 7.22(d，J＝8.05Hz，1H)7.29-7.39(m，3H)7.53(m，2H)8.33(s，1H).
Co.No.28：(360MHz，CDCl3)δppm 2.14-2.38(m，4H)2.52(s，3H)3.62(td， J＝11.25，3.11Hz，2H)4.10-4.27(m，2H)4.57-4.72(m，1H)6.84(s，1H)7.00(t， J＝7.68Hz，1H)7.07-7.13(m，2H)7.18(d，J＝8.05Hz，1H)7.34(m，2H)7.56(m，2 H)7.94(s，1H).
Co.No.29：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.45(s，3H)，2.64(s，3H)，3.84(s，3H)， 6.93-7.00(m，1H)，7.07(d，J＝6.9Hz，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.23-7.29(m，3H)， 7.31(s，1H)，7.35(d，J＝8.8Hz，2H)，7.46-7.58(m，3H)，8.39(s，1H).
Co.No.30：(360MHz，CDCl3)δppm 1.21(d，J＝6.9Hz，6H)，1.47(t，J＝6.9Hz，3H)， 2.00(s，3H)，2.41(s，3H)，2.52(s，3H)，3.33(spt，J＝6.9Hz，1H)，4.11(q，J＝6.9Hz，2 H)，6.79(s，1H)，6.94(br.s.，1H)，6.99-7.05(m，1H)，7.09(s，1H)，7.11(s，1H)， 7.16(d，J＝8.1Hz，2H)，7.32(m，J＝8.4Hz，2H)，7.54(m，J＝8.4Hz，2H).
Co.No.31：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.46(s，3H)，2.61(s，3H)，6.94-7.00(m，1 H)，7.08(d，J＝7.0Hz，1H)，7.26(d，J＝8.3Hz，1H)，7.30-7.39(m，3H)，7.46(t，J＝8.8 Hz，2H)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H)，7.70-7.81(m，2H).
Co.No.32：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.47(s，3H)7.21(dd，J＝6.59，1.46Hz，1H) 7.28-7.38(m，3H)7.42(d，J＝8.78Hz，2H)7.52-7.64(m，4H)7.96-8.08(m，2H) 8.97(s，1H).
Co.No.33：(360MHz，CDCl3)δppm 2.34(t，J＝1.8Hz，3H)，2.53(s，3H)，6.91(s，1 H)，7.00-7.09(m，2H)，7.11(s，1H)，7.13(d，J＝7.3Hz，1H)，7.23(d，J＝8.1Hz，1H)， 7.35(m，J＝8.8Hz，2H)，7.58(m，J＝8.4Hz，2H)，7.82(td，J＝8.8，5.8Hz，1H)，8.36 (d，J＝2.6Hz，1H).
Co.No.34：(360MHz，CDCl3)δppm 2.53(s，3H)6.08(s，2H)6.93(d，J＝8.42Hz，1 H)6.96(s，1H)7.00-7.07(m，1H)7.09-7.13(m，2H)7.20(d，J＝8.05Hz，1H)7.32 (dd，J＝8.42，2.20Hz，1H)7.35(m，2H)7.42(d，J＝2.20Hz，1H)7.57(m，2H)8.25 (s，1H).
Co.No.35：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.47(s，3H)2.60(s，3H)3.85(s，3H)7.09 (d，J＝6.22Hz，1H)7.14-7.20(m，1H)7.27-7.33(m，2H)7.37(s，1H)7.54(t， J＝8.23Hz，1H)7.59(m，2H)7.66(d，J＝6.22Hz，1H)8.22(m，2H)9.43(s，1H).
Co.No.36：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.10(s，3H)3.25(s，3H)3.76(s，3H)3.85 (t，J＝5.31Hz，2H)4.60(t，J＝5.31Hz，2H)6.90-6.99(m，2H)7.06(d，J＝1.83Hz，1 H)7.11(d，J＝6.95Hz，1H)7.20(d，J＝8.42Hz，1H)7.24(d，J＝8.05Hz，1H)8.28(s， 1H)8.34(s，1H).
Co.No.37：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.40-0.53(m，2H)0.53-0.65(m，2H) 1.31-1.53(m，1H)2.10(s，3H)3.76(s，3H)4.30(d，J＝7.32Hz，2H)6.92-7.00(m， 2H)7.06(d，J＝1.83Hz，1H)7.11(d，J＝7.32Hz，1H)7.20(d，J＝8.42Hz，1H)7.24 (d，J＝8.05Hz，1H)8.27(s，1H)8.40(s，1H).
Co.No.38：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.42-0.50(m，2H)0.54-0.63(m，2H) 1.29-1.51(m，1H)2.46(s，3H)3.87(s，3H)4.30(d，J＝7.32Hz，2H)6.92-7.01(m， 2H)7.06-7.11(m，2H)7.21(s，1H)7.23(d，J＝8.05Hz，1H)7.49(d，J＝8.42Hz，1 H)8.39(s，1H).
Co.No.39：(400MHz，DMSO-d6)δppm 2.10(s，3H)2.64(s，3H)3.76(s，3H)3.84 (s，3H)6.94-7.03(m，2H)7.07(d，J＝2.02Hz，1H)7.10-7.18(m，2H)7.21(d， J＝8.07Hz，1H)7.24-7.31(m，3H)7.52(t，J＝8.28Hz，1H)8.25(s，1H).
Co.No.40：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.45(s，3H)，2.62(s，3H)，3.86(s，3H)， 6.98-7.05(m，2H)，7.09(d，J＝2.2Hz，1H)，7.14(d，J＝6.9Hz，1H)，7.19(s，1H)， 7.27(d，J＝8.1Hz，1H)，7.41-7.53(m，3H)，7.71-7.82(m，2H)，8.39(s，1H).
Co.No.42：(360MHz，CDCl3)δppm 2.52(s，3H)2.61(s，3H)3.90(s，3H)4.02(s， 3H)6.93(d，J＝6.22Hz，1H)7.04-7.16(m，3H)7.32(s，1H)7.38(dd，J＝8.42，1.83 Hz，1H)7.49(t，J＝8.23Hz，1H)7.63-7.69(m，2H)7.79(d，J＝6.22Hz，1H)7.98(d， J＝1.83Hz，1H).
Co.No.43：(360MHz，DMSO-d6)δppm 0.38-0.50(m，2H)0.54-0.65(m，2H) 1.30-1.50(m，1H)2.53(s，3H)4.28(br.s.，2H)7.02(t，J＝7.68Hz，1H)7.11(d， J＝6.95Hz，1H)7.42(d，J＝8.05Hz，1H)7.72-7.87(m，2H)7.87-7.98(m，1H)8.43 (s，1H)8.47(s，1H)9.22(br.s.，1H).
Co.No.44：(360MHz，CDCl3)δppm 2.57(s，3H)5.01(q，J＝8.42Hz，2H)6.79(s，1 H)7.01-7.11(m，2H)7.23(dd，J＝7.68，1.83Hz，1H)7.43(s，1H)7.57(d，J＝8.42 Hz，1H)7.71(dd，J＝8.42，2.56Hz，1H)8.03(s，1H)8.61(d，J＝2.56Hz，1H).
Co.No.46：(360MHz，CDCl3)δppm 2.61(s，3H)，2.62(s，3H)，6.85(s，1H)，6.97- 7.07(m，1H)，7.12(d，J＝6.9Hz，1H)，7.19(d，J＝8.1Hz，1H)，7.22-7.32(m，2H)， 7.52-7.61(m，3H)，7.71(dd，J＝8.8，2.9Hz，1H)，7.83(s，1H)，8.64(d，J＝2.6Hz，1 H).
Co.No.48：(360MHz，CDCl3)δppm 1.41(d，J＝6.95Hz，6H)3.15(spt，J＝6.95Hz，1 H)5.00(q，J＝8.29Hz，2H)6.82(s，1H)7.05(t，J＝7.68Hz，1H)7.10(d，J＝6.95Hz，1 H)7.13(s，1H)7.17(d，J＝8.05Hz，1H)7.34(m，J＝8.42Hz，2H)7.59(m，J＝8.42Hz， 2H)8.01(s，1H).
Co.No.49：(360MHz，CDCl3)δppm 2.71(s，3H)3.90(s，3H)4.22(s，3H)6.81(s， 1H)6.88-6.96(m，2H)7.02(t，J＝7.68Hz，1H)7.13(d，J＝7.68Hz，1H)7.17(d， J＝8.42Hz，1H)7.49(d，J＝8.42Hz，1H)7.86(s，1H)7.90(s，1H).
Co.No.50：(360MHz，CDCl3)δppm 2.34(t，J＝2.0Hz，3H)，2.72(s，3H)，3.92(s，3 H)，6.90-6.95(m，2H)，6.97(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.01-7.08(m，2H)，7.16(d， J＝6.9Hz，1H)，7.24(dd，J＝8.4，0.7Hz，1H)，7.51(d，J＝8.1Hz，1H)，7.82(td，J＝8.5， 6.0Hz，1H)，7.92(s，1H)，8.36(d，J＝2.6Hz，1H).
Co.No.51：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.43(s，3H)2.47(s，3H)3.91(s，3H)5.46 (q，J＝9.03Hz，2H)6.85(s，1H)7.15(dd，J＝8.42，1.83Hz，1H)7.22(d，J＝1.83Hz，1 H)7.30(s，1H)7.61(d，J＝8.42Hz，1H)8.47(s，1H)9.11(s，1H).
Co.No.52：(360MHz，CDCl3)δppm 2.31(d，J＝0.73Hz，3H)5.00(q，J＝8.42Hz，2 H)6.84(s，1H)6.93(q，J＝1.46Hz，1H)7.03-7.09(m，2H)7.13(dd，J＝7.32，0.73 Hz，1H)7.20(dd，J＝12.62，2.38Hz，1H)7.23-7.30(m，2H)7.66(t，J＝1.46Hz，1H) 8.03(s，1H).
Co.No.53：(360MHz，DMSO-d6)δppm 2.64(s，3H)3.84(s，3H)3.86(s，3H)6.34 (d，J＝1.83Hz，1H)6.98(t，J＝7.86Hz，1H)7.06-7.16(m，2H)7.23-7.29(m，3H) 7.35-7.43(m，4H)7.45(d，J＝1.83Hz，1H)7.52(t，J＝8.23Hz，1H).
Co.No.54：(360MHz，CDCl3)δppm 2.30(d，J＝0.73Hz，3H)4.07(s，3H)5.01(q， J＝8.42Hz，2H)6.60(d，J＝8.05Hz，1H)6.89(t，J＝1.10Hz，1H)7.12(dd，J＝8.60， 7.50Hz，1H)7.22-7.29(m，1H)7.44(d，J＝8.42Hz，1H)7.56(s，1H)7.64(d， J＝1.10Hz，1H)8.03(s，1H)8.05(d，J＝7.32Hz，1H).
Co.No.55：(360MHz，CDCl3d)δppm 2.31(s，3H)5.06(q，J＝8.05Hz，2H)6.58(s， 1H)6.94(s，1H)7.10(dd，J＝8.60，2.38Hz，1H)7.19(dd，J＝12.26，2.38Hz，1H) 7.30(t，J＝8.60Hz，1H)7.68(s，1H)8.25(s，1H)8.33(s，1H)8.83(s，1H).
Co.No.56：(360MHz，CDCl3)δppm 1.32(d，J＝6.95Hz，6H)2.51(s，3H)2.96- 3.13(m，J＝13.79，6.89，6.89，6.89，6.89Hz，1H)3.93(s，3H)4.98(q，J＝8.29Hz，2H) 6.87(s，1H)7.02-7.14(m，3H)7.75(d，J＝8.42Hz，1H)8.15(s，1H)8.58(s，1H).
Co.No.57：(360MHz，DMSO-d6)δppm 1.27(d，J＝6.95Hz，6H)2.16(s，3H)3.05 (spt，J＝6.95Hz，1H)4.06(s，3H)5.47(q，J＝9.15Hz，2H)7.13(s，1H)7.16(d， J＝8.42Hz，1H)7.74(d，J＝8.42Hz，1H)7.77(d，J＝1.10Hz，1H)8.26(s，1H)8.57 (s，1H)9.82(s，1H).
药理学
A)用于γ-分泌酶-调节活性的本发明化合物的筛选
A1)方法1
使用在通过含有补充1％非必需氨基酸的5％血清/Fe的Gibco(cat no.31330-38)提供的Dulbecco′s改良Eagle′s培养基/营养素(Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium/Nutrient)混合物F-12(DMEM/NUT-mix F-12) (HAM)中生长并带有APP695-野生型的SKNBE细胞进行筛选。细胞 生长至接近汇合。
使用在Citron等(1997)Nature Medicine 3：67中描述的测试进行筛 选。简要地说，加入化合物的前一天，将细胞以约105个细胞/ml放 入96-孔平板上。用18小时将化合物加入在补充1％谷氨酰胺 (Invitrogen，25030-024)的Ultraculture(Lonza，BE12-725F)中的细胞中。 通过两个夹层ELISAs(sandwich ELISAs)测试培养基的Aβ42和总Aβ (Aβtotal)。根据制造商的方案，通过WST-1细胞增殖剂(Roche，1 644 807)测试化合物的毒性。
为了定量在细胞上清液中的Aβ42量，使用可市售获得的酶联免 疫吸附试验(Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assay，ELISA)试剂盒 (Innotestβ-Amyloid(1-42)，Innogenetics N.V.，Ghent，Belgium)。基本根 据制造商的方案进行Aβ42ELISA。简要地说，在聚丙烯Eppendorf 中制备标准品(合成的Aβ1-42的稀释液)且最终浓度是8000下降至3.9 皮g/ml(1/2稀释步骤)。将样本，标准品及空白(100微升)加入随着试 剂盒供应的抗-Aβ42-涂覆的平板(捕获抗体选择性地辨识抗原的C-末 端)。使平板在25℃培养3小时以便容许形成抗体-淀粉样蛋白复合物。 经此培养及后续洗涤步骤后，加入选择性的抗-Aβ-抗体共轭物(生物素 化的3D6)并培养至少1小时，以便容许形成抗体-淀粉样蛋白-抗体复 合物。经培养及适当的洗涤步骤后，加入链霉抗生物素-过氧化物酶- 轭合物(Streptavidine-Peroxidase-Conjugate)，30分钟后加入3，3’，5，5’- 四甲基联苯胺(TMB)/过氧化物混合物，导致将酶作用物转化成有颜色 的产物。通过加入硫酸(0.9N)使反应停止并通过配备450nm滤器的 ELISA-读出仪的光度计测量颜色强度。
为了定量在细胞上清液中的总Aβ(Aβtotal)量，将样本及标准品 加入6E10-涂覆的平板中。使平板在4℃培养过夜以便容许形成抗体- 淀粉样蛋白复合物。经此培养及后续洗涤步骤后，加入选择性抗-Aβ- 抗体共轭物(生物素化的4G8)并培养至少1小时，以便容许形成抗体- 淀粉样蛋白-抗体复合物。经培养及适当的洗涤步骤后，加入链霉抗生 物素-过氧化物酶-轭合物(Streptavidine-Peroxidase-Conjugate)，30分钟 后根据制造商的使用说明书加入Quanta Blu荧光过氧化酶作用物 (Pierce Corp.，Rockford，Il)。
为了得到在表3a中报导的值，通过计算机化的曲线-拟合分析S 形剂量反应曲线，抑制作用的百分比相对于化合物浓度绘图。使用在 XLfit中的4-参数方程(模型205)测定IC50。将曲线的顶端及底部分别 固定在100和0，且坡度斜率固定在1。IC50代表50％抑制生物效应 所需的化合物的浓度(在此，其为Aβ肽的水平降低50％的浓度)。
IC50值示于表3a：
A2)方法2
使用在通过含有补充1％非必需氨基酸，1-谷氨酰胺2mM，Hepes 15mM，青霉素50U/ml(单位/ml)及红霉素50μg/ml的5％血清/Fe 的Invitrogen(cat no.10371-029)提供的Dulbecco′s改良Eagle′s培养基 /营养素(Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium/Nutrient)混合物F-12 (DMEM/NUT-mix F-12)(HAM)中生长并带有APP 695-野生型的 SKNBE2细胞进行筛选。细胞生长至接近汇合。
使用在Citron等(1997)Nature Medicine 3：67中描述的测试的修饰 进行筛选。简要地说，在不同试验浓度的测试化合物存在下，将细胞 以104个细胞/孔放入补充1％谷氨酰胺(Invitrogen，25030-024)，1％非 必需氨基酸(NEAA)，青霉素50U/ml及红霉素50μg/ml的的384-孔 平板中。将细胞/化合物混合物在37℃及5％CO2下培养过夜。第二 天通过两个夹层免疫-测试法测试培养基的Aβ42和总Aβ(Aβtotal)。
使用Aphalisa technology(Perkin Elmer)定量细胞上清液中的Aβ42 和总Aβ(Aβtotal)浓度。Aphalisa是一种夹层测试法，使用附接于链霉 抗生物素涂覆的供体珠的生物素化的抗体且共轭至受体珠的抗体。在 抗原存在下，珠粒紧密接近。供体珠的激发导致单态氧分子的释出， 单态氧分子引发在受体珠中的能量转移级联而导致发光。为了定量在 细胞上清液中的Aβ42量，将Aβ42的C-端专一性单克隆抗体 (JRF/cAβ42/26)偶合至受体珠并使用对Aβ的N-端给予专一性的生物 素化的抗体(JRF/AβN/25)与供体珠反应。为了定量在细胞上清液中的 总Aβ(Aβtotal)量，将对Aβ的N-端给予专一性的单可隆抗体 (JRF/AβN/25)偶合至受体珠并使用对Aβ中间域给予专一性的生物素 化的抗体(生物素化4G8)与供体珠反应。
为了得到在表3b中报告的值，计算在无测试化合物存在下测量 的淀粉样蛋白β42的最大量的百分比的数据。使用非线性回归分析， 分析S形剂量反应曲线，以对照组的百分比相对于化合物的对数浓度 绘图。使用4-参数方程测定IC50。
IC50值示于表3b中(‘n.d.’表示没有测定)：
B)活体内功效的证明
本发明的Aβ42降低剂可以用于在哺乳动物例如人类中治疗AD 或者是在动物模式例如但不限于小鼠，大鼠或豚鼠中证明功效。该哺 乳动物可能没有诊断出患有AD，或可能没有对AD的遗传倾向，但 是可能有转基因使得过度产生且最后以在罹患AD的人的所见的类似 方式沉积Aβ。
Aβ42降低剂可以使用任何标准方法以任何标准形式给予。例如 但不限于Aβ42降低剂可以为被口服或通过注射给予的液体，片剂或 胶囊剂形式。Aβ42降低剂可以在足以明显降低血液，血浆，血清， 脑脊液(CSF)或大脑中的Aβ42水平的任何剂量给药。
为了测定急性给予Aβ42降低剂是否将在活体内降低Aβ42的水 平，使用非转基因的啮齿动物例如小鼠或大鼠。或者，可以使用含有” 瑞典(Swedish)”变种的表达APP695的二至三个月龄的Tg2576小鼠或 Dr.Fred Van Leuven(K.U.Leuven，Belgium)与同事开发的转基因小鼠 模型，具有神经元特异性表达人类淀粉样前体蛋白[V717I]的临床突变 (Moechars et al.，1999 J.Biol.Chem.274，6483)。年幼的转基因小鼠在 大脑内有高水平的Aβ，但是无可检测到的Aβ沉积。在约6-8个月龄时， 转基因小鼠在大脑开始显现β-淀粉样蛋白(Aβ)的自发的，进行性累积， 最终导致脑下脚(subiculum)，海马及皮层内的淀粉样蛋白斑。检查使 用Aβ42降低剂治疗的动物并与未经治疗或用介质治疗的那些动物比 较，通过标准技术例如使用ELISA定量大脑内的可溶性Aβ42及总Aβ 水平。治疗期变化从几小时至数天并根据Aβ42降低的结果进行调整 (一旦确定起效的时程)。
举出一种在活体内测量Aβ42下降的典型方案，但是其只是许多 可以用于最适化可检测的Aβ水平的变化中的一种。例如，Aβ42降低 的化合物被配制成在水中的20％Captisol(一种β-环糊精的磺基丁 基醚)或20％羟基丙基β环糊精。Aβ42降低剂是作为单一口服剂量给 予或通过任何可以接受的给药途径至禁食过夜的动物。经4小时后， 将动物杀死并分析Aβ42水平。
通过断头术及放血将血液收集至经EDTA处理的收集试管内。将 血液在4℃以1900g离心10分钟(min)并将血浆回收且快速冷冻供后 续分析。从颅骨及后脑取出大脑。取出小脑并将左及右半球分离。将 左半球储存在-18℃供定量分析测试化合物的水平。将右半球用磷酸盐 缓冲盐水(PBS)缓冲液洗涤并在干冰上立即冷冻且储存在-80℃直到均 匀化用于生化测试法。
将小鼠大脑再悬浮在10倍体积的0.4％DEA(二乙胺)/50mM NaCl pH 10(用于非转基因的动物)或在tris缓冲盐水(TBS)中的0.1％ 3-[(3-胆酰胺丙基(cholamidopropyl))二甲氨基(ammonio)]-1-丙磺酸酯 (CHAPS)(用于转基因的动物)中，每克组织含蛋白酶抑制剂 (Roche-11873580001或04693159001)，例如0.158g大脑加入1.58ml 的0.4％DEA。全部样本在冰上及20％功率输出(脉冲模式)下超声处理 30秒。匀浆以221.300xg离心50分钟。然后将所得的高速上清液转 移至新的试管内并任选地在下一个步骤前进一步纯化。将一部分的上 清液用10％0.5M Tris-HCl中和并用于定量总Aβ(Aβtotal)。
在后续Aβ检测前，将所得的上清液用Water Oasis HLB逆相柱 (Waters Corp.，Milford，MA)纯化，使非专一性免疫反应性物质从大脑 溶胞产物中移除。使用真空歧管，将全部溶液在约每分钟1ml的速率 下通过柱，所以相应地在整个程序中调整真空压力。将柱用100％ MeOH预稳定(preconditioned)，然后用1ml的H2O平衡。将未经中和 的大脑裂解溶胞液装填在柱中。然后将填入的样本用1ml的5％ MeOH进行第一次洗涤，重复洗涤两次，并用1ml的30％MeOH进 行第二次洗涤。最后，使用含有2％NH4OH的90％MeOH将Aβ从柱 洗提至100x30mm玻璃试管内。然后将洗脱液转移至1.5ml试管内 并在70℃的高温下在速度-真空浓缩器内浓缩约1.5-2小时。然后根据 制造商的建议将浓缩的Aβ再悬浮在UltraCULTURE通用无血清培养 基(General Purpose Serum-Free Medium)(Cambrex Corp.，Walkersville， MD)中并加入蛋白酶抑制剂。
为了定量在大脑匀浆可溶解部分中的Aβ的量，使用市售获得的 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assay)(ELISA)试 剂盒(例如Innotestβ-Amyloid(1-42)，Innogenetics N.V.，Ghent， Belgium)。只使用伴随试剂盒提供的平板进行Aβ42ELISA。简要地说， 在1.5ml Eppendorf试管的Ultraculture中制备标准品(合成的Aβ1-42 的稀释液)，最终浓度范围是从25000至1.5pg/ml。将样本，标准品及 空白(60微升)加入抗-Aβ42-涂覆的平板(捕获抗体选择性地辨识抗原 的C-末端)。使平板在4□培养过夜以便容许形成抗体-淀粉样蛋白复 合物。经此培养及后续洗涤步骤后，加入选择性的抗-Aβ-抗体共轭物 (生物素化的检测抗体例如生物素化的4G8)(Covance Research Products，Dedham，MA)并培养至少1小时，以便容许形成抗体-淀粉样 蛋白-抗体复合物。经培养及适当的洗涤步骤后，加入链霉抗生物素- 过氧化物酶-轭合物(Streptavidine-Peroxidase-Conjugate)，50分钟后根 据制造商的使用说明书(Pierce Corp.，Rockford，Il)加入Quanta Blu荧光 过氧化酶作用物。每5分钟进行动态读取，历经30分钟(激发320nm/ 发射420nm)。为了定量在大脑匀浆的可溶解部分中的总Aβ(Aβtotal) 量，将样本及标准品加入JRF/rAβ/2-涂覆的平板中。使平板在4℃培 养过夜以便容许形成抗体-淀粉样蛋白复合物。然后进行ELISA用于 Aβ42检测。
在此模式中，与未经处理的动物比较，至少20％Aβ42下降将是 有利的。
结果列在表4：
C)γ-分泌酶-复合物对于缺刻(Notch)-加工活性的效应
无缺刻(Notch)细胞测试法
缺刻(Notch)跨膜域通过γ分泌酶的裂解而释出缺刻(Notch)细胞内 C-端域(NICD)。缺刻(Notch)是一种信号传导蛋白，其在发展过程中起 重要作用，且因此优选对于γ-分泌酶-复合物的缺刻(Notch)-加工活性 没有显现效应的化合物。
为了监测化合物对NICD生产的作用，制备重组的缺刻(Notch)底 物(N99)。缺刻(Notch)底物，含有小鼠缺刻(Notch)片段(V1711-E1809)， N-端蛋氨酸及C-端FLAG序列(DYDDDDK)，表达在大肠杆菌中并在 含有抗-FLAG M2亲和性基质的柱上纯化。
典型的无缺刻(Notch)细胞测试法由0.3-0.5μM的缺刻(Notch)底 物，丰富制备的γ-分泌酶及1μM的测试化合物(本发明的化合物45) 组成。对照品包括γ-分泌酶抑制剂(GSI)，例如(2S)-N-[2-(3，5-二氟苯基) 乙酰基]-L-丙氨酰基-2-苯基-甘氨酸1，1-二甲基乙酯(DAPT)或(2S)-2- 羟基-3-甲基-N-[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-[[(1S)-2，3，4，5-四氢-3-甲基-2-氧 代-1H-3-苯并氮杂-1-基]氨基]乙基]-丁酰胺(Semagacestat)，及 DMSO，且DMSO的最终浓度是1％。重组的缺刻(Notch)底物用17μM DTT(1，4-二硫苏糖醇)及0.02％SDS(十二烷基硫酸钠)预先处理并在 65℃加热10分钟。将底物，γ-分泌酶及化合物/DMSO的混合物在37℃ 培养6至22小时。6小时的培养足以产生最大量的NICD且裂解的产 物保持稳定另外16小时。将反应产物加工用于SDS PAGE(十二烷基 硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)及蛋白质印迹法。印迹依序用抗-Flag M2 抗体及LI-COR红外光二次抗体探针测定并用奥地赛红外成像系统 (Odyssey Infrared Imaging System)(LI-CORBiosciences)分析。
在无缺刻(Notch)细胞测试法中，无测试化合物(本发明化合物45) 抑制C99通过γ-分泌酶的裂解，然而NICD的生产通过对照GSI(DAPT 或Semagacestat)阻止。因此证明化合物45对于γ-分泌酶-复合物的缺 刻(Notch)-加工活性(产生NICD)不显示出效应。
组合物实施例
在这些实施例中使用的”活性成分(a.i.)”涉及式(I)化合物，包括其 任何立体化学异构形式，其药学上可接受的盐或其溶剂化物；特别是 任何一种举例的化合物。
本发明制剂的典型实施例如下：
1.片剂
2.悬浮液
制备用于口服给药的水性悬浮液，以使各ml含有1至5mg的活 性成分，50mg的羧甲基纤维素钠，1mg的苯甲酸钠，500mg的山梨 糖醇及加入水以调至1ml。
3.注射液
通过将1.5％(重量/体积)的活性成分在0.9％NaCl溶液或在10体 积％丙二醇的水溶液中搅拌来制备胃肠外组合物。
4.软膏
在此实施例中，活性成分可以使用相同量的根据本发明的任何化 合物代替，特别是相同量的任何其中一种举例的化合物。
合理的变化不能视为偏离本发明的范围。因此描述的本发明明显 地可以由本领域技术人员以许多方式进行修改。
机译： 取代的吲唑和氮杂吲唑衍生物作为γ分泌酶调节剂。
机译： 新型取代的吲唑和氮杂吲唑衍生物作为γ分泌酶调节剂
机译： 新型取代的吲唑和氮杂吲唑衍生物作为分泌γ的酶调节剂
