一种制备欧李仁提取物的方法

摘要

本发明公开了一种制备欧李仁提取物的方法。该方法，包括如下步骤：1)将欧李仁进行干燥，使所述欧李仁的水分活度为0.10-0.70；2)粉碎至10目-120目；3)在保持水分活度不变的条件下，提取欧李仁油；4)用质量百分浓度为50％-95％的乙醇水溶液对欧李仁粕进行分离提取，得到苦杏仁苷和欧李仁蛋白。该方法在欧李仁粉碎和欧李仁油萃取时，通过控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性；继而在苦杏仁苷和欧李仁蛋白分离提取时，通过控制乙醇浓度和操作温度来降低苦杏仁苷酶活性并防止欧李仁蛋白过度变性，实现了欧李仁油、欧李仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，为欧李仁精深加工与综合利用奠定了基础。

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备欧李仁提取物的方法。

背景技术

欧李(Prunus humilis Bunge)为蔷薇科樱桃属落叶小灌木，是一种抗寒、耐旱、 耐瘠薄、耐盐碱、适应性强的野生果树，是我国特有的果药兼用野生树种。欧李主要 分布在山西、辽宁、河北、山东、内蒙古、东北、陕西等地。在三北地区，海拔500-1500m 的范围内，每667m2定植500株，一般第三年进入盛果期，亩产可达500-1000kg，产 果周期短，产量高。

欧李仁的主要成分包括苦杏仁苷、欧李仁油和欧李仁蛋白。欧李仁中含有2％-5％ 的苦杏仁苷，苦杏仁苷具有镇咳平喘、抗肿瘤、降血糖以及抗凝血等作用，迄今它已 成为医药上常用的祛痰止咳剂、辅助性抗癌药物，另外，临床上用其治疗气滞、肠燥 便秘、水肿胀满、支气管哮喘、水肿、脚气、小便不利等也取得了很好的效果。欧李 仁中含有46％-74％的油脂，油脂中的不饱和脂肪酸含量达90％以上，同时含有V_E、 V_A、角鲨烯、甾醇等生物活性物质。欧李仁油的碘值和皂化值与一般油脂接近，但酸 值和不皂化物含量很低，接近高级烹调油的标准，因此欧李仁油是一种品质很高的天 然油脂。欧李仁含有30％左右的蛋白质。欧李仁蛋白的氨基酸组成与大豆蛋白和花生 蛋白相近，但欧李仁蛋白谷氨酸含量很高，占近1/3，远高于花生蛋白和大豆蛋白。欧 李仁蛋白的氨基酸组成比例与青少年的需求比例较接近，必需氨基酸总质量分数占总 氨基酸质量分数的24.0％。

人们已对欧李仁三种主要成分的分离提取进行了一些研究。在欧李仁油的分离提 取方面，薛勇等采用正己烷和甲醇作为非极性和极性相，确定了双相溶剂法提取欧李 仁油的最佳工艺条件为：料烷比1∶5、料醇比1∶7、碱浓度0.10％、醇浓度94％、 温度60℃和时间4.5h，该工艺在得到欧李仁油的同时，还实现了欧李仁饼粕中苦杏 仁苷的脱除(薛勇，陈玮，程霜等.双相溶剂浸出法提取欧李仁油的研究[J].郑州工程 学院学报，2003，24(1)：20-23)。由于甲醇具有毒性，限制了欧李仁油在食品领域的应 用，肖咏梅等结合欧李仁的特点和双相溶剂浸出法工艺，用乙醇代替甲醇作为极性相， 对双相溶剂浸出法提取欧李仁油进行了研究，并提出以正己烷和乙醇作为非极性和极 性相的最佳工艺条件：乙醇浓度75％、料醇比1∶3、料烷比1∶4、时间4h、温度40℃、 碱浓度0.15％，在此条件下，提油率为46.6％，粕中苦杏仁甙残余量为0.44％(肖咏 梅，陈玮，王多荣等.己烷-乙醇-水双相溶剂浸出法提取欧李仁油的研究[J].中国油脂， 2004，29(4)：14-17)。此方法的改进，克服了甲醇的残留问题，大大提高了欧李仁油的 应用价值。为了避免欧李油中有机溶剂残留，吴素萍等(吴素萍.超临界CO₂萃取欧李 仁油工艺条件的探讨[J].油脂工程技术，2008(6)：51-53)研究了超临界CO₂萃取欧李仁 油的生产工艺，该工艺出油率高、杂质含量低、色泽浅并且可以省去减压蒸馏和脱臭 等精炼工序。在欧李仁蛋白的分离提取方面，陈玮等使用碱溶酸沉法提取欧李仁蛋白， 即先用1mol/L氢氧化钠溶液调节脱毒的欧李仁粕粉溶液的pH至碱性(pH＝9.5)，使 可溶性蛋白质、碳水化合物等溶解出来，然后利用离心的方法分离除去不溶性的纤维 及残渣，再在已经溶解的蛋白质溶液中加入适量的1mol/L盐酸溶液，调节pH至蛋白 质的等电点，使其中的大部分蛋白质沉淀析出，只有少量的蛋白质仍留在溶液中，此 时离心分离即得到分离蛋白(陈玮，王宏雁，薛勇等.欧李仁蛋白的提取与性能研究[J]. 食品科学，2005，26(3)：138-141)。在苦杏仁苷的分离提取方面，对欧李仁进行高温、 脱脂等处理后，采用60％-90％的乙醇水溶液从脱脂后的饼粕中分离提取苦杏仁苷。此 外，段洪东还提出采用树脂吸附后洗脱的方法对欧李仁中的苦杏仁苷进行分离、提取 和纯化(段洪东.一种欧李仁中苦杏仁苷纯化方法[P].200910230090)。

如上所述，人们对欧李仁中欧李仁油、欧李仁蛋白和苦杏仁苷的分离提取进行了 一些研究。但以上研究均未实现欧李仁油、欧李蛋白和苦杏仁苷三种成分的全利用， 仅仅能利用其中的两种成分：要么利用欧李仁油和欧李仁蛋白(欧李仁粉碎前不经高 温处理)，要么利用苦杏仁苷和欧李仁油(欧李仁粉碎前需经高温处理)。这是因为， 欧李仁中含有苦杏仁苷酶，在欧李仁形态完整的情况下，由于细胞膜及细胞器膜等的 分工分室功能，苦杏仁苷酶不会发生作用。一旦欧李仁破碎，苦杏仁苷酶即可与底物 苦杏仁苷相接触，将其水解为葡萄糖、苯甲醛和氢氰酸，如图1所示。

为了提取苦杏仁苷，欧李仁在粉碎前需要进行高温处理，以达到“灭酶保苷”的 目的。但高温处理又导致欧李仁蛋白的严重变性，影响了欧李仁蛋白的深度开发与利 用。因此，如何开发一条科学合理、简便易行的工艺技术路线，实现欧李仁油、欧李 仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，已成为欧李仁精深加工与综合利用中亟需解决的难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备欧李仁提取物的方法。

本发明提供的一种制备欧李仁提取物的方法，包括如下步骤：

1)将欧李仁进行干燥，使所述欧李仁的水分活度为0.10-0.70，得到干燥后的欧 李仁；

2)在保持所述干燥后的欧李仁的水分活度为0.10-0.70的条件下，将所述干燥后 的欧李仁粉碎至10-120目，得到粉碎后的欧李仁；

3)在保持所述粉碎后的欧李仁的水分活度为0.10-0.70的条件下，提取所述粉碎 后的欧李仁中的欧李仁油，得到所述欧李仁油和欧李仁粕；

4)用质量百分浓度为50％-95％的乙醇水溶液对所述欧李仁粕进行分离提取，得 到苦杏仁苷和欧李仁蛋白；所述提取步骤中，温度为5-60℃；

所述欧李仁提取物选自a、b和c中的三种、任意两种或任意一种，其中，所述a 为所述步骤3)所得欧李仁油，所述b为所述步骤4)所得苦杏仁苷，所述c为所述步 骤4)所得欧李仁蛋白。

该方法步骤1)干燥步骤中，干燥方式选自晒干、风干、烘干、冻干和脱水剂干 燥中的至少一种。所述烘干可为常压或真空烘干，所述常压烘干温度可为50℃、时间 可为36小时，所述真空烘干的真空度可为0.09Mpa，温度可为40℃，时间可为1.5h； 各种常用的冻干方法均适用。所述脱水剂干燥方法中，脱水剂选自甲醇、乙醇、甘油、 葡萄糖和食盐中的至少一种，优选乙醇。该步骤中，欧李仁的水分活度可为0.40-0.60、 0.40-0.53、0.40-0.50、0.50-0.60、0.50-0.53或0.53-0.60。

所述步骤2)中，所述干燥后的欧李仁的水分活度可为0.40-0.60、0.40-0.53、 0.40-0.50、0.50-0.60、0.50-0.53或0.53-0.60。

所述步骤3)提取步骤中，提取方法选自有机溶剂萃取、超临界CO₂流体萃取和 压榨提取中的至少一种。所述有机溶剂萃取方法中，所述有机溶剂选自正己烷、环己 烷和植物油抽提溶剂中的至少一种，优选植物油抽提溶剂，该植物油抽提溶剂是按照 国家标准GB 16629-2008制备所得溶剂。所述粉碎后的欧李仁与所述有机溶剂的用量 比为1Kg∶1-7L，优选1Kg∶4L。所述超临界CO₂流体萃取中，CO₂的压力为20-50MPa， 优选30MPa，温度为35-60℃，优选40℃，时间为20-200min，优选110min。所述压 榨萃取方法中，压力为20-60MPa，优选42MPa，温度为20-65℃，优选62℃。该步骤 中，粉碎后的欧李仁的水分活度可为0.40-0.60、0.40-0.53、0.40-0.50、0.50-0.60、0.50-0.53 或0.53-0.60。

所述步骤4)中，提取温度优选为40℃，时间为70-110min，具体可为70-80min、 70-90min、80-90min、90-110min或80-110min；该步骤中，所用乙醇水溶液的质量百 分浓度可为50-80％、50-70％、50-65％、50-60％、60-80％、60-70％、60-65％、65-80％、 65-70％或70-80％；

所述分离提取的步骤为：

a)将所述欧李仁粕于质量百分浓度为50％-95％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；

b)将所述步骤a)得到的提取液减压浓缩后，于无水乙醇中进行重结晶，干燥后 得到所述苦杏仁苷和提取完苦杏仁苷的粗品，再将所述提取完苦杏仁苷的粗品真空干 燥后得到所述欧李仁蛋白。

该分离提取的步骤b)减压浓缩步骤中，压力为20-100kPa，时间为20-120min， 温度为20-80℃；所述干燥步骤中，温度为80-140℃，时间为1-4h；所述真空干燥步 骤中，真空度为50-120kPa，优选75-80kPa，时间为40-180min，优选90-120min，温 度20-80℃，优选50-60℃。

由于苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶分解(如图1所示)，因此，降低欧李仁油、苦杏 仁苷和欧李仁蛋白分离提取过程中的苦杏仁苷酶活性是实现三者全利用的关键。在欧 李仁粉碎和欧李仁油萃取时，通过控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性，适宜的水 分活度为0.10-0.70；继而在苦杏仁苷和欧李仁蛋白分离提取时，通过控制乙醇浓度和 操作温度来降低苦杏仁苷酶活性并防止欧李仁蛋白过度变性，乙醇浓度以50％-95％、 操作温度不超过65℃为适宜。本发明提供的方法，实现了苦杏仁苷、欧李仁油和欧李 仁蛋白的全利用，为欧李仁精深加工与综合利用奠定了基础。

附图说明

图1为苦杏仁苷酶的水解催化作用。

图2为苦杏仁苷的HPLC谱图，其中，a为苦杏仁苷标准样品的HPLC谱图，b 为实施例1制备所得苦杏仁苷的HPLC谱图。

图3为用HPLC方法测定苦杏仁苷纯度时所用标准曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。下 述方法如无特别说明，均为常规方法。所述测定方法如无特别说明，均为常规方法。 下述实施例中，欧李仁油均采用索氏抽提法测定，苦杏仁苷均采用高效液相色谱法测 定，欧李仁蛋白均采用凯氏定氮法测定。其中，测定苦杏仁苷时所用高效液相色谱的 检测条件均如下所示：色谱柱：SunfireTMC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲 醇和水以体积比30∶70混匀而得的混合液；流速：1ml/min；检测波长：210nm；柱 温：30℃；进样量：10μl；分离度：1.2nm，所用标准曲线如图3所示，回归方程为y ＝8946.4x-30118，y为峰面积，x为苦杏仁苷浓度，单位为μg/ml，相关系数R²＝0.9998。

实施例1、

1)将欧李仁100g用晒干的方法进行干燥，使该欧李仁的水分活度为0.70，得到 干燥后的欧李仁；

按照索氏抽提法对作为原料的欧李仁中的欧李仁油进行测定，采用高效液相色谱 法测定对作为原料的欧李仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的欧 李仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为 39.8％、3.45％和28.6％；

2)在保持步骤1)所得干燥后的欧李仁的水分活度为0.70的条件下，将该干燥 后的欧李仁粉碎至10目，得到粉碎后的欧李仁97.1g；

3)在保持步骤2)所得粉碎后的欧李仁的水分活度为0.70的条件下，在50℃下 用有机溶剂提取该粉碎后的欧李仁中的欧李仁油，得到欧李仁油38.8g和欧李仁粕 57.9g；所用有机溶剂为正己烷；该步骤2)所得粉碎后的欧李仁与有机溶剂正己烷的 用量比为1Kg∶4L；

按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、 GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油 脂过氧化值测定，对精炼后的欧李仁油进行检测，所得结果如下所示：该欧李仁油澄 清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.07％，不溶性杂质的质量百分含量为0.04％， 酸值(KOH)为0.37mg/g，过氧化值为0.31mmol/kg。

4)用质量百分浓度为60％的乙醇水溶液对步骤3)所得欧李仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2.80g和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.3g，完成欧李仁的提取；

该分离提取的具体步骤为：

a)将步骤3)所得欧李仁粕于质量百分浓度为60％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；该提取步骤中，温度为40℃，时间为90min；

b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为20kPa，时间为120min，温度为 20℃)后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10℃用无水乙醇进行重结 晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为1Kg∶20L)，并用无水乙醇洗 涤后，再于120℃干燥2小时后得到苦杏仁苷2.80g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该 提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为80kPa，干燥时间为120min，温度为60℃) 后得到欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.3g。

由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得欧李仁油、步骤4)所得苦 杏仁苷和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)。

按照该实施例提供的方法进行欧李仁的提取，欧李仁油和苦杏仁苷的提取率分别 为97.49％和81.16％。

对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得结果如图2所示，该苦 杏仁苷的纯度为96.1％。

按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009.3-2010食品中水分的测定方法，分别 对步骤4)所得欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示：该欧 李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为66.1％，脂肪的质量百分含量 为0.6％，水分的质量百分含量为7.2％。

实施例2、

1)将欧李仁100g用20mL脱水剂乙醇进行脱水，使欧李仁的水分活度为0.53， 得到干燥后的欧李仁；

按照索氏抽提法对作为原料的欧李仁中的欧李仁油进行测定，采用高效液相色谱 法测定对作为原料的欧李仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的欧 李仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为 39.8％、3.45％和28.6％；

2)在保持步骤1)所得干燥后的欧李仁的水分活度为0.53的条件下，将该干燥 后的欧李仁粉碎至120目，得到粉碎后的欧李仁95.26g；

3)在保持步骤2)所得粉碎后的欧李仁的水分活度为0.53的条件下，在42℃下 用超临界CO₂流体萃取的方法提取该粉碎后的欧李仁中的欧李仁油，得到欧李仁油 38.6g和欧李仁粕56.56g；该超临界CO₂流体萃取步骤中，CO₂的压力为30MPa，温 度为40℃，时间为110min。

按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、 GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油 脂过氧化值测定，对精炼后的欧李仁油进行检测，所得结果如下所示：该欧李仁油澄 清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.07％，不溶性杂质的质量百分含量为0.03％， 酸值(KOH)为0.86mg/g，过氧化值为0.33mmol/kg。

4)用质量百分浓度为80％的乙醇水溶液对步骤3)所得欧李仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2.52g和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)42.56g，完成欧李仁的提取；

该分离提取的具体步骤为：

a)将步骤3)所得欧李仁粕于质量百分浓度为80％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；该提取步骤中，温度为40℃，时间为110min。

b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为100kPa，时间为20min，温度为 50℃)后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10℃用无水乙醇进行重结 晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为1Kg∶20L)，并用无水乙醇洗 涤后，再于120℃干燥2小时后得到苦杏仁苷2.45g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该 提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为50kPa，，干燥时间为180min，温度为80℃) 后得到欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)42.56g。

由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得欧李仁油、步骤4)所得苦 杏仁苷和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)。

按照该实施例提供的方法进行欧李仁的提取，其中欧李仁油和苦杏仁苷的提取率 分别为96.98％和73.04％。

对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差 别，该苦杏仁苷的纯度为95.8％。

按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009.3-2010食品中水分的测定方法，分别 对步骤4)所得欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示：该欧 李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为67.2％，脂肪的质量百分含量 为0.91％，水分的质量百分含量为9.1％。

实施例3、

1)将欧李仁100g用冻干的方法进行干燥，使欧李仁的水分活度为0.40，得到干 燥后的欧李仁；该冻干步骤中，先使物料预冻至-40℃，然后开启真空泵，使真空度在 20-40Pa进行真空冻干操作，当物料温度接近室温时冻干完成。

按照索氏抽提法对作为原料的欧李仁中的欧李仁油进行测定，采用高效液相色谱 法测定对作为原料的欧李仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的欧 李仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为 39.8％、3.45％和28.6％；

2)在保持步骤1)所得干燥后的欧李仁的水分活度为0.40的条件下，将干燥后 的欧李仁粉碎至60目，得到粉碎后的欧李仁94.68g；

3)在保持步骤2)所得粉碎后的欧李仁的水分活度为0.40的条件下，在55℃下 用压榨的方法提取该粉碎后的欧李仁中的欧李仁油，得到欧李仁油35.0g和欧李仁粕 59.46g；该压榨萃取步骤中，压力为42Mpa，时间为60min。

按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、 GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油 脂过氧化值测定，对精炼后的欧李仁油进行检测，所得结果如下所示：该欧李仁油澄 清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.06％，不溶性杂质的质量百分含量为0.07％， 酸值(KOH)为0.62mg/g，过氧化值为0.36mmol/kg。

4)用质量百分浓度为70％的乙醇水溶液对步骤3)所得欧李仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2.24g和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.42g，完成欧李仁的提取；

该分离提取的具体步骤为：

a)将步骤3)所得欧李仁粕于质量百分浓度为70％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；该提取步骤中，温度为40℃，时间为80min。

b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为60kPa，时间为70min，温度为70℃) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10℃用无水乙醇进行重结晶(室 温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为1Kg∶20L)，并用无水乙醇洗涤后， 再于120℃干燥2h后得到苦杏仁苷2.06g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦 杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为120kPa，干燥时间为40min，温度为20℃)后得到 欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.42g。

由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得欧李仁油、步骤4)所得苦 杏仁苷和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)。

按照该实施例提供的方法进行欧李仁的提取，其中欧李仁油和苦杏仁苷提取率分 别为87.9％和64.9％。

对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差 别，可知该苦杏仁苷的纯度为95.7％。

按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009.3-2010食品中水分的测定方法，分别 对步骤4)所得欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示：该欧 李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为65.8％，脂肪的质量百分含量 为0.79％，水分的质量百分含量为8.6％。

实施例4、

1)将欧李仁100g用烘干的方法进行干燥，使该欧李仁的水分活度为0.60，得到 干燥后的欧李仁；该烘干步骤中，温度为50℃，时间为36h；

按照索氏抽提法对作为原料的欧李仁中的欧李仁油进行测定，采用高效液相色谱 法测定对作为原料的欧李仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的欧 李仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为 39.8％、3.45％和28.6％；

2)在保持步骤1)所得干燥后的欧李仁的水分活度为0.60的条件下，将该干燥 后的欧李仁粉碎至80目，得到粉碎后的欧李仁96.12g；

3)在保持步骤2)所得粉碎后的欧李仁的水分活度为0.60的条件下，在40℃下 用超临界CO₂流体萃取的方法提取该粉碎后的欧李仁中的欧李仁油，得到欧李仁油 38.9g和欧李仁粕57.02g；该超临界CO₂流体萃取步骤中，CO₂的压力为30MPa，温 度为40℃，时间为110min。

按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、 GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油 脂过氧化值测定，对精炼后的欧李仁油进行检测，所得结果如下所示：该欧李仁油澄 清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.05％，不溶性杂质的质量百分含量为0.04％， 酸值(KOH)为0.71mg/g，过氧化值为0.33mmol/kg。

4)用质量百分浓度为50％的乙醇水溶液对步骤3)所得欧李仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2.39g和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.73g，完成欧李仁的提取；

该分离提取的具体步骤为：

a)将步骤3)所得欧李仁粕于质量百分浓度为50％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；该提取步骤中，温度为40℃，时间为70min。

b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为100kPa，时间为20min，温度为 20℃)后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10℃用无水乙醇进行重结 晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为1Kg∶20L)，并用无水乙醇洗 涤后，再于120℃干燥2小时后得到苦杏仁苷2.39g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该 提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为80kPa；干燥时间为120min，温度为60℃) 后得到欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)43.73g。

由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得欧李仁油、步骤4)所得苦 杏仁苷和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)。

按照该实施例提供的方法进行欧李仁的提取，其中欧李仁油和苦杏仁苷的提取率 分别为：97.7％和69.3％。

对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差 别，可知该苦杏仁苷的纯度为95.3％。

按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009.3-2010食品中水分的测定方法，分别 对步骤4)所得欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示：该欧 李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为65.4％，脂肪的质量百分含量 为0.81％，水分的质量百分含量为9.1％。

实施例5、

1)将欧李仁100g用真空烘干的方法进行干燥，使该欧李仁的水分活度为0.50， 得到干燥后的欧李仁；该真空烘干步骤中，真空度为0.09Mpa，温度为40℃，时间为 1.5h；

按照索氏抽提法对作为原料的欧李仁中的欧李仁油进行测定，采用高效液相色谱 法测定对作为原料的欧李仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的欧 李仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为 39.8％、3.45％和28.6％；

2)在保持步骤1)所得干燥后的欧李仁的水分活度为0.50的条件下，将该干燥 后的欧李仁粉碎至50目，得到粉碎后的欧李仁95.18g；

3)在保持步骤2)所得粉碎后的欧李仁的水分活度为0.50的条件下，在50℃下 用有机溶剂提取该粉碎后的欧李仁中的欧李仁油，得到欧李仁油38.5g和欧李仁粕 56.57g；所用有机溶剂为植物油抽提溶剂；该步骤2)所得粉碎后的欧李仁与有机溶剂 植物油抽提溶剂的用量比为1Kg∶4L；

按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、 GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油 脂过氧化值测定，对精炼后的欧李仁油进行检测，所得结果如下所示：该欧李仁油澄 清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.08％，不溶性杂质的质量百分含量为0.07％， 酸值(KOH)为0.72mg/g，过氧化值为0.37mmol/kg。

4)用质量百分浓度为65％的乙醇水溶液对步骤3)所得欧李仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2.55g和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)42.88g，完成欧李仁的提取；

该分离提取的具体步骤为：

a)将步骤3)所得欧李仁粕于质量百分浓度为65％的乙醇水溶液中进行回流提取， 收集提取液；该提取步骤中，温度为40℃，时间为80min。

b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为60kPa，时间为70min，温度为50℃) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10℃用无水乙醇进行重结晶(室 温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为1Kg∶20L)，并用无水乙醇洗涤后， 再于120℃干燥2小时后得到苦杏仁苷2.55g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完 苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为80kPa，干燥时间为120min，温度为60℃)后得 到欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)42.88g。

由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得欧李仁油、步骤4)所得苦 杏仁苷和欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)。

按照该实施例提供的方法进行欧李仁的提取，其中欧李仁油和苦杏仁苷的提取率 分别为：96.7％和73.9％。

对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差 别，可知该苦杏仁苷的纯度为96.1％。

按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009.3-2010食品中水分的测定方法，分别 对步骤4)所得欧李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示：该欧 李仁蛋白(欧李仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为66.7％，脂肪的质量百分含量 为0.73％，水分的质量百分含量为8.2％。