一种粉花长寿花试管花卉的制作方法

摘要

本发明涉及一种粉花长寿花试管花卉的制作方法，包括如下步骤：（1）以粉花长寿花茎段为材料，在快繁培养基中继代培养，在生根培养基中进行繁殖，获得无菌苗；（2）在温度13～18℃，光周期6～10hrs/d的条件下培养无菌苗，使花芽分化；（3）将带有花芽的茎段接种在生根培养基中，并添加色素，培养后获得长寿花试管花卉，观赏期可持续观赏6-10个月。

说明书

技术领域

本发明涉及一种粉花长寿花的栽培方法，特别涉及一种粉花长寿花试管花卉的制作方法。

背景技术

试管花卉是当前市场上较为流行的迷你携带花卉，因其植株小，培养在精致的小试管或玻璃瓶内而得名。它是利用植物克隆技术，在人工控制的相对或绝对无菌环境条件下，将事先培养好的植物幼苗植株在拇指大的透明试管或艺术化的玻璃瓶等相对密封空间里生长的一系列迷你微型植物总称。外形美观的试管玻璃瓶等容器为幼小植物提供了安全的生长空间，试管花卉又被称为“天使花房”或“试管花屋”。它是建立在组织培养技术之上的新兴花卉。目前被称为“手指玫瑰”的迷你花卉在韩国、英国都很流行，甚至远销日本和新加坡等地。但试管花卉的发展仍然受到培养材料的限制，不是所有材料均适合做试管花卉，因此只有不断丰富迷你花卉的植物材料，才能推动试管花卉的产业快速发展。

长寿花(Kalanchoe blossfeldiana)是景天科伽蓝菜属的观叶和观花植物，又名矮生伽蓝菜、寿星花、假川莲，一直深得消费者喜爱。长寿花为短日照植物，花期为冬、春两季；植株形态矮小、株型紧凑，多分支；株高l5-20 cm，株幅l0-20 cm；叶对生，肉质、肥厚，叶色深绿或红绿色；花较小，有红、橙红、桃红、黄、白色及杂色等花色品种。每个聚伞花序着生l0-20个小花，形成一个个花团，整体观赏效果好。

长寿花通过扦插繁殖，受季节影响远远不能满足市场需求，因此，利用组织培养方法可大大加快繁殖速度，并已成为一种育苗手段。如，关艳清等人以长寿花幼嫩叶片为材料，以2,4-D，6-BA，NAA为主要研究因子，研究不同激素配比对长寿花愈伤组织生长、分化及其芽增殖情况的影响（长寿花叶片愈伤组织培养及植株再生的研究[J]. 辽宁农业职业技术学院学报，2008，10(3)：19-22）。李玉梅也公开了一种长寿花的快速繁殖方法（长寿花的快速繁殖[J]. 广西热带农业，2009，(4)：65-66）。

然而，目前粉花长寿花试管花卉的制作在现有技术中未见报道。

发明内容

鉴于长寿花具有花色多、花期长、植株矮小和生长速度慢等特点，因此本发明的目的在于提供一种粉花长寿花试管花卉的制作方法。通过本发明，我们建立了粉花长寿花试管内花芽诱导的方法，制作了粉花长寿花试管花卉，为试管花卉产业进一步发展奠定基础。

本发明的目的是这样实现的：

一种粉花长寿花试管花卉的制作方法，包括如下步骤：

（1）以粉花长寿花茎段为材料，在快繁培养基中继代培养，在生根培养基中进行繁殖，获得无菌苗；

（2）在温度13～18℃，光周期6～10hrs/d的条件下培养无菌苗60天～90天，使花芽分化；

（3）将带有花芽的茎段接种在生根培养基中，并在培养基中添加色素，培养后获得彩色长寿花试管花卉；

其中，所述的快繁培养基的配制方法为：在1升 MS培养基中，分别添加浓度为0.5mg/mL的6-苄氨基嘌呤2毫升、浓度为0.5mg /mL 的萘乙酸 0.2毫升；所述的生根培养基的配制方法为：在1升MS培养基中，添加浓度为0.5mg/mL 的萘乙酸 0.4毫升。

所述的粉花长寿花试管花卉的制作方法，其中步骤（1）所述的继代培养次数为4～5次。

所述的粉花长寿花试管花卉的制作方法，其中步骤（3）中所述的色素为柠檬黄、葡萄紫、苹果绿或胭脂红。

优选地，所述的色素浓度为柠檬黄0.05g/mL，或葡萄紫0.05 g/ mL，或苹果绿5g/ mL，或胭脂红0.05g/mL。

进一步优选地，步骤（3）中每升培养基添加色素的量为2～10mL。

所述的粉花长寿花试管花卉的制作方法，其中继代培养前对粉花长寿花茎段灭菌处理。

本发明任何地方所述的培养基中，其中：

MS 是国际通用的培养基，其成分和配制方法参见文献（谭文澄、戴策刚主编，观赏植物组织培养技术，北京：中国国林业出版社，1991）

BA也缩写为6-BA，化学成分为6-苄氨基嘌呤，使用时配置成高浓度母液，即0.5mg/mL。具体配置方法：称取50毫克6-BA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸馏水定容至100毫升，即可使用。

NAA的化学成分为萘乙酸，使用时配置成0.5mg /mL的母液。具体配置方法：称取50毫克NAA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸馏水定容至100毫升，即可使用。

与现有技术相比，本发明涉及的粉花长寿花试管花卉的制作方法具有如下优点和显著地进步：

（1) 粉花长寿花试管花卉观赏期较长。通过试验结果分析，长寿花观赏期与容器的大小相关，250mL容器中，开花观赏期2个月，从蕾期到花朵凋谢可达6个月。500mL容器中观赏期达2.5个月，从蕾期到花朵凋谢可持续观赏10个月之久。

（2）环保型强。粉花长寿花茎段消毒采用84消毒液消毒，培养基均是常用培养基，彩色培养基的颜色均是用食品色素调配，因此长寿花试管花制作及培养过程所用的试剂对环境没有任何污染。

（3）生根率高，内生菌感染率小。在生根培养基中培养茎段2周左右即可全部生根，同时内生菌感染的几率较小。

（4）经济效益和社会效益高。建立了粉花长寿花试管内花芽诱导的方法，制作了粉花长寿花试管花卉，为试管花卉产业进一步发展奠定基础。

 

具体实施方式

以下是本发明涉及的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

 

实施例1 粉花长寿花试管花卉的栽培条件筛选与制作

1材料和方法

1.1 试验材料

实验材料购买于湖北省武汉市雄楚大街花卉市场，盆栽粉花长寿花。

1.2试验方法

1.2.1 外植体消毒

取粉花长寿花带腋芽茎段在流水下冲洗，揉搓掉叶表面的泥土，用75%酒精浸泡1min后，再用20% 84消毒液（市售，产于温州）灭菌20min，放在无菌水中清洗3次。

1.2.2 无菌苗的获得

将消毒过的茎段剪去变色的伤口部分，剪成带有一个腋芽的茎段，分别接种在扩繁培养基MS1：MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L和生根培养基MS2： MS+NAA 0.2mg/L 中继代培养，每瓶一枝，各接种50枝，40天继代一次，每次继代后观察并记录污染情况，4次继代后获得无菌苗。

1.2.3 花芽诱导培养

将长寿花无菌苗在生根培养基MS2中培养40天，材料生根后，分3组实验，第I组：温度22°C，光周期12hrs/d；第II组：温度22°C  光周期8hrs/d；第III组：温度16°C，光周期8hrs/d，其余条件一样，定期观察花芽分化情况，计算分化率。

1.3试管花卉的培养基制备

在生根培养基MS+NAA0.2mg/L中添加四种不同色素即柠檬黄（0.05g/mL）、葡萄紫（0.05g/ mL）、苹果绿（5g/mL）和胭脂红（0.05g/mL），每升培养基添加量分别为4 mL、4mL、5mL和8mL，获得具有观赏价值的彩色培养基，所有色素均是食品添加剂，对环境没有污染。

1.4 制作试管花卉

将带有花蕾的长寿花花枝接种在配有彩色培养基的250mL和500mL容器当中，根据花枝实际生长情况保留叶片4-6枚，培养基填加量为容器的1/3，观察记录长寿花在容器中的观赏时间。

1.5 培养基和培养条件

除实验特殊要求培养条件外，其余培养条件是基本培养基为MS，扩繁培养基白糖为30g/L，生根培养基白沙糖为50g/L，琼脂6g/L，pH5.8-6.2，培养温度22°C，光强2000xl，光照周期12hrs/d。

2 结果与分析

2.1 无菌苗获得结果分析

将茎段接种在不同培养基中，随着继代次数增加，污染率逐渐降低，如表1。

观察发现污染物为细菌，并且每次污染菌最先出现在茎段切口周围，然后再扩散。因此判断长寿花植株带有内生菌。

在扩繁培养基MS1中，随着继代次数增加，污染率逐渐降低，四次继代后污染率为0%，获得无菌苗。而在生根培养基MS2中，随着继代次数增多，污染率也在下降，但由于快速生根阻止切口处菌类扩散，虽然污染率降低，但脱毒速度较慢，四次继代后仍有污染。因此无菌苗获得应在扩繁培养基中进行，可以在4-5次继代后得到完全脱毒的无菌苗，之后再接种在生根培养基中进行繁殖。

表1 长寿花茎段污染率统计表

2.2 温度及光周期对花芽诱导的影响

无菌苗在22°C，光周期12小时条件下在生根培养基培养2周生根，继续培养三个月没有花芽分化。再将植株分别培养在第I组、第II组和第III组培养条件下，两个月后，观察花芽分化结果。每组材料15株，培养两个月后，第1组和第II组均没有花芽分化，只有第III组有5株材料有明显花苞，诱导花芽率为45.5%。但随着培养时间增长，90天后第III组15株材料均产生花芽，花芽诱导率达100%。

从表2可以看出，长寿花花芽分化必须满足两个条件，即低温和短日照。但由于起始实验材料成熟程度不同，导致花芽分化时间长短不同，有些植株培养40多天就有花芽分化，而有些植株培养90天才看见花芽，其间还要继代一次。

表2 花芽诱导率统计表

将带有花蕾的长寿花茎段接种在彩色培养基中，放在自然条件下，花蕾会慢慢绽放。由于长寿花具有生长速度慢的特点，因此试管花卉观赏期较长。通过观察结果分析，长寿花观赏期与容器的大小相关，250mL容器中，开花观赏期2个月，从蕾期到花朵凋谢可达6个月。500mL容器中观赏期达2.5个月，从蕾期到花朵凋谢可持续观赏10个月之久。容器越大，培养基越多，长寿花观赏期越长。

3 结论与讨论

    粉花长寿花茎段消毒采用84消毒液消毒，培养基均是常用培养基，彩色培养基的颜色均是用食品色素调配，因此长寿花试管花制作及培养过程所用的试剂对环境没有任何污染。

以茎段为材料，在扩繁培养基(MS1)MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L和生根培养基(MS2) MS+NAA 0.2mg/L培养中，获得长寿花的繁殖体系。在生根培养基中培养茎段2周左右即可全部生根，同时内生菌感染的几率较小，但需要通过多次继代才能完全脱毒。因此，在材料选择时选择幼嫩茎段可减少内生菌污染，并且经过2-3次继代即可得到无菌苗，使获得无菌苗时间缩短。

    长寿花属短日照植物，自然条件每年三月份有花芽分化，因此花芽需要低温和短日照条件。成熟枝条培养1个月即可看见花蕾。本实验选用的是16°C、8hrs/d，培养基为生根培养基MS2，符合长寿花生物学特性，因此诱导长寿花试管花卉开花。但在培养的材料当中，有些植株形成花芽需要40天，有些植株培养90天左右才开始有花芽出现，虽然花芽诱导率达到100%，但花芽诱导周期长短不一，这种结果与枝条起始材料的成熟度有关，起始材料越成熟，花芽诱导周期越短，否则就会延长。