一种布朗灵芝子实体的人工栽培方法

摘要

本发明涉及一种布朗灵芝子实体的人工栽培方法，其特征是通过将新鲜布朗灵芝(Ganoderma brownii(Murrill)Gilb.)子实体进行组织分离或孢子分离，然后在PDA斜面培养基和斜面综合PDA培养基上培养得到生产用母种，再接种到原种培养基中培养得到原种，其后经过生产种培养基的培养得到生产种，最后将生产种接种到生产用栽培基中，培养至长出成熟的子实体。本发明的人工栽培方法可以使布朗灵芝子实体的生物效率达到30％～90％，即每100g生产用培养料可得30g～90g新鲜的布朗灵芝子实体，可作原料或作研究材料使用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种灵芝子实体的人工栽培方法，具体来说涉及一种布朗灵芝(Ganoderma brownii(Murrill)Gilb.)子实体的人工栽培方法。

背景技术

中国灵芝资源十分丰富，已知的种类就超过100种，民间或文献中记述能利用的灵芝 不少于20种，其中以灵芝(Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.)、紫芝(Ganoderma sinense J.D.Zhao，L.W.Hsu&X.Q.Zhang)和松杉灵芝(Ganoderma tsugae Murrill)为代表。由于这 些灵芝含有丰富的药理成分如灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、氨基酸、蛋白质、甾类、 甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等，因而 具有抑制肿瘤、镇静镇痛、免疫调节、抗放射、保肝解毒、抗过敏、调节血压、降血脂和降 血糖、镇咳祛痰平喘、抗缺氧抗衰老等功效，药食兼用且无毒副作用，从而受到广大消费者 的青眯，市场需求旺盛，且被国家药典收载，是国家批准的新资源食品。

布朗灵芝(Ganoderma brownii(Murrill)Gilb.)又称褐灵芝，在分类上隶属于真菌界 (Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、 灵芝科(Ganodermatacea)、灵芝属(Ganoderma)，在美洲及其世界热带地区均有分 布。野生布朗灵芝的主要特征是菌盖表面无似漆样光泽，菌肉较厚，无黑色壳质层，担孢子 较大，与长管灵芝(G.annulare)的区别是布朗灵芝的菌肉发达，菌管分层，担孢子较大，皮 壳不坚硬，与树舌灵芝(G.applanatum)的区别在于它具有黄色孔面和较大的担孢子。民间常用 布朗灵芝作为灵芝的替代品使用，但其野生资源十分有限，而至今又还没有成功的人工栽培 方法。

发明内容

本发明的目的在于开发出一种布朗灵芝子实体的人工栽培方法。

我们通过将野生或栽培成功后获得的布朗灵芝新鲜子实体进行组织分离或孢子分离，然 后在PDA斜面培养基和斜面综合PDA培养基上培养得到斜面母种，再接种到原种培养基中培 养得到原种，再经过生产种培养基的培养得到生产种，将生产种接种到生产用栽培基中，培 养至长出成熟的子实体，从而实现了本发明的目的。

本发明的布朗灵芝子实体的人工栽培方法，其特征包括以下的步骤：

(1)将布朗灵芝(Ganoderma brownii(Murrill)Gilb.)的新鲜子实体进行组织分离，然后 按培养基质量2％～5％接种量接种到斜面PDA培养基，于22～35℃、湿度50％～75％时培养10～ 30d，至菌丝长满斜面，挑取长势旺盛、粗壮均一的作为母种于4℃保藏备用或进一步培养， 所述的斜面PDA培养基的pH是6～8，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75～ 85份，蔗糖6～10份，琼脂6～10份和松针3～5份，并通过下述方法制得：原料按所述组 成分别称重后，先将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入原料组成总质量3.5～4.5倍的 水，煮沸20～30分钟至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加 水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，冷却到45～50℃倒成 斜面备用；

(2)将步骤(1)得到的母种按培养基质量2％～10％的接种量接种至斜面综合PDA培养基中 继续培养或复壮，于22～35℃，湿度50％～75％时培养10～30d，直至菌丝长满斜面，选取长 势旺盛、粗壮均一的作为生产用母种，所述的斜面综合PDA培养基的pH是6～8，其原料组 成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75～85份，蔗糖6～10份，琼脂6～10份，磷酸二 氢钾0.2～1.5份，硫酸镁0.2～1.5份和VB₁0.002～0.006份，并通过下述方法制得：原料 按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3.5～4.5倍的 水，煮沸20～30分钟至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加 水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB₁搅拌均匀，趁热装于试管灭 菌后，冷却到45～50℃倒成斜面备用；

(3)步骤(2)得到的生产用母种按培养基质量3％～10％的接种量接种至原种培养基中， 于22～35℃，湿度50％～75％时，培养20～50d，直至菌丝长满原种培养基，选取长势旺盛、 粗壮均一的作为生产原种，所述的原种培养基由栽培基料和水按质量比1∶1.1～1.4组成，所 述的栽培基料按总质量分数100％计，由玉米芯30％～50％，木屑20％～40％，麸皮或米糠20％～ 30％，蔗糖1％～5％和石膏粉1％～3％组成；

(4)将步骤(3)得到的生产原种按培养基质量3％～10％的接种量接种至生产种培养基中， 于22～35℃，湿度50％～75％时，培养20～50d，直至菌丝长满生产种培养基，得到布朗灵芝 生产种，所述的生产种培养基由栽培基料和水按质量比1∶1.1～1.4组成，所述的栽培基料按 总质量分数100％计，由玉米芯30％～50％，木屑20％～40％，麸皮或米糠20％～30％，蔗糖1％～ 5％和石膏粉1％～3％组成；

(5)将步骤(4)得到的生产种按培养基质量5％～15％的接种量接种至生产用栽培基中，于 温度22～35℃，相对湿度50％～85％的培菌房中，黑培养40～60d，至菌丝充满生产用栽培基 料，则可移入栽培房，所述的生产用栽培基由栽培基料和水按质量比1∶1.1～1.4组成，所述 的栽培基料按总质量分数100％计，由玉米芯30％～50％，木屑20％～40％，麸皮或米糠20％～30％， 蔗糖1％～5％和石膏粉1％～3％组成；

(6)将步骤(5)获得的长满菌丝的栽培基料，在10～15℃培养3～5d直至出现白色状高 1cm的原基，原基在温度20～35℃，相对湿度75％～90％，散射光光照强度100～1000lx，每 天通风1～2次，每次0.5～1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度85％～98％，每天 通风2～3次，每次0.5～1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到1000～2000lx， 温度20～35℃，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢 子，加大室内光照强度到2000～5000lx，继续培养5～10天，菌盖颜色进一步加深，则得到 布朗灵芝子实体。

步骤(1)所述的新鲜子实体可以从野生子实体或其后人工栽培中得到，所述的接种量最好 是培养基质量3％，培养条件最好是温度25～28℃，湿度65％～70％，培养18～21d。

步骤(3)所述的接种量最好是培养基质量5％，培养条件最好是温度25～28℃，湿度60％～ 70％，培养28～39d，所述原种培养基的制备方法是将各栽培基料组分分别称重后与水并均 匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，所述的栽培基料的组成最好是玉米芯45％，木屑 30％，麸皮或米糠20％，蔗糖3％和石膏粉2％。

步骤(4)所述的接种量最好是培养基质量10％，培养条件最好是温度25～29℃，湿度70％～ 75％，培养36～42d，所述的生产种培养基的制备方法是各组分分别称重并与水均匀搅拌在 一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，所述的栽培基料的组成最好是玉米芯45％，木屑30％，麸皮 或米糠20％，蔗糖3％和石膏粉2％。至菌盖颜色逐步加深至米黄褐色至菌盖颜色逐步加深至米 黄褐色

步骤(5)所述的生产用栽培基的制备方法是将组分分别称重并与水均匀搅拌在一起，栽培 基料和水按质量比最好是1∶1.3，装入高密度聚乙烯袋或聚丙烯袋，常规1.5kg/cm²压力，60 分钟灭菌，冷却备用。

步骤(6)所述的布朗灵芝子实体在采收时可以用锋利刀片或剪刀从菌柄基部处割下或剪 下，注意不要掰伤菌皮，以利再出第二茬菇，采下的子实体于阳光下晒干脱水，则得到成熟、 干燥的布朗灵芝子实体，可包装或于室温保藏或用于研究等用途。

本发明的人工栽培方法可以使布朗灵芝子实体的生物效率达到30％～90％，即每100g生 产用培养料可得30g～90g新鲜的布朗灵芝子实体，可作原料或作研究材料使用。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

称取已去皮去芽眼的马铃薯75g，蔗糖6g，琼脂6g，松针3g，将马铃薯切成小条再与松针 放入锅中，加入405g水，煮沸20分钟至马铃薯软而不烂时，用6层纱布过滤，取滤汁于锅 中，加水补至原水量，加入琼脂熔化，再加蔗糖搅拌均匀，调节pH至6，趁热装于试管灭菌 后，冷却到45℃倒成斜面，得到斜面PDA培养基；

称取已去皮去芽眼的马铃薯75g，蔗糖6g，琼脂6g，磷酸二氢钾0.2g，硫酸镁0.2g和 VB₁0.002g，将马铃薯切成小条放入锅中，加入306g水，煮沸20分钟至马铃薯软而不烂时， 用6层纱布过滤，取滤汁于锅中，加水补至原水量后，加琼脂熔化，再加蔗糖、磷酸二氢钾、 硫酸镁和VB₁搅拌均匀，调节pH至6，趁热装于试管灭菌后，冷却到45℃倒成斜面，得到斜 面综合PDA培养基。

称取玉米芯150g，木屑200g，麸皮110g，蔗糖25g，石膏粉15g混合得到500g栽培基 料，加入600g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。

称取玉米芯1.5kg，木屑2kg，麸皮1.1kg，蔗糖0.25kg，石膏粉0.15kg混合得到5kg 栽培基料，加入6kg水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。

称取玉米芯15kg，木屑20kg，麸皮11kg，蔗糖2.5kg，石膏粉1.5kg混合得到50kg栽 培基料，加入60kg水，均匀搅拌在一起，装入高密度聚乙烯袋，常规1.5kg/cm²压力，60分 钟灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。

将野生布朗灵芝新鲜子实体进行组织分离，取约3g接种于150g斜面PDA培养基，于22℃ 湿度50％时培养30d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。

将10g布朗菌块接种至500g斜面综合PDA培养基中，22℃，湿度50％时培养30d，直至菌 丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为布朗灵芝母种。

将50g母种接种至1100g原种培养基中，于22℃，湿度50％时，培养50d，直至菌丝长满 原种培养基，得到布朗灵芝原种。

将500g布朗灵芝原种接种至12kg生产种培养基中，于22℃，湿度50％时，培养50d，直 至菌丝长满生产种培养基，得到布朗灵芝生产种。

将11kg布朗灵芝生产种接种于110kg生产用栽培基中，于温度22℃，相对湿度50％的培 菌房中，黑培养60d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在10℃培养5d直至出现白色状高 1cm的原基，原基在温度20℃，相对湿度75％，散射光光照强度100lx，每天通风1次，每次 1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度85％，每天通风2次，每次1小时的条件下菌盖 逐渐分化，室内光照强度增强到1000lx，温度20℃，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌 盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到2000lx，继续培养10天，菌 盖颜色进一步加深而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达 到30％，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。

实施例2：

称取已去皮去芽眼的马铃薯850g，蔗糖100g，琼脂100g，松针50g，将马铃薯切成小条再 与松针放入锅中，加入3850g水，煮沸30分钟至马铃薯软而不烂时，用8层纱布过滤，取滤 汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均匀，调节pH至8，趁热装于 试管灭菌后，冷却到50℃倒成斜面，得到斜面PDA培养基。

称取已去皮去芽眼的马铃薯850g，蔗糖100g，琼脂100g，磷酸二氢钾15g，硫酸镁15g 和VB₁0.06g，将马铃薯切成小条放入锅中，加入4905g水，煮沸30分钟至马铃薯软而不烂时， 用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢 钾、硫酸镁和VB₁搅拌均匀，调节pH至8，趁热装于试管灭菌后，冷却到50℃倒成斜面，得 到斜面综合PDA培养基。

称取玉米芯250g，木屑140g，米糠100g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料， 加入550g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。

称取玉米芯2500g，木屑1400g，米糠1000g，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g栽 培基料，加入6000g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。

称取玉米芯10000g，木屑5600g，米糠4000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到20000g 栽培基料，加入28000g水，均匀搅拌在一起，装入聚丙烯袋，常规1.5kg/cm²压力，60分钟 灭菌，冷却后备用，得到生产用栽培基。

将10g野生的布朗灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于200g斜面PDA培养基，于35℃ 湿度75％时培养10d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。

将40g布朗菌块接种至400g斜面综合PDA培养基中，35℃，湿度75％时培养10d，直至菌 丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为布朗灵芝母种。

将100g母种接种至1000g原种培养基中，于35℃，湿度75％时，培养20d，直至菌丝长 满原种培养基，得到布朗灵芝原种。

将1000g布朗灵芝原种接种至10000g生产种培养基中，于35℃，湿度75％时，培养20d， 直至菌丝长满生产种培养基，得到布朗灵芝生产种。

将7200g布朗灵芝生产种接种于48000g生产用栽培基中，于温度35℃，相对湿度85％的 培菌房中，黑培养40d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在15℃培养3d直至出现白色状 高1cm的原基，原基在温度35℃，相对湿度90％，散射光光照强度1000lx，每天通风2次， 每次0.5小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度98％，每天通风3次，每次0.5小时的 条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到2000lx，温度35℃，全天通风，使菌盖和菌柄颜 色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到5000lx，继续培养 5天，菌盖颜色进一步加深而成熟，此时用剪刀将子实体沿菌柄基部处剪下，其生物转化率 可达到90％，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。

实施例3：

称取已去皮去芽眼的马铃薯800g，蔗糖80g，琼脂80g，松针40g，将马铃薯切成小条再与 松针放入锅中，加入4000g水，煮沸25分钟至马铃薯软而不烂时，用7层纱布过滤，取滤汁 于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均匀，调节pH至7，趁热装于试 管灭菌后，冷却到48℃倒成斜面，得到斜面PDA培养基。

称取已去皮去芽眼的马铃薯800g，蔗糖80g，琼脂80g，磷酸二氢钾10g，硫酸镁10g和 VB₁0.04g，，将马铃薯切成小条放入锅中，加入3920g水，煮沸25分钟至马铃薯软而不烂时， 用7层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢 钾、硫酸镁和VB₁搅拌均匀，调节pH至7，趁热装于试管灭菌后，冷却到48℃倒成斜面，得 到斜面综合PDA培养基。

称取玉米芯240g，木屑100g，米糠150g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料， 加入650g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。

称取玉米芯2400g，木屑1000g，米糠1500g，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g栽 培基料，加入7000g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。

称取玉米芯9600g，木屑4000g，米糠6000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到20000g 栽培基料，加入27000g水，均匀搅拌在一起，装入高密度聚乙烯袋，常规1.5kg/cm²压力， 60分钟灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。

将9g野生的布朗灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于300g斜面PDA培养基，于25℃ 湿度65％时培养21d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。

将40g布朗菌块接种至800g斜面综合PDA培养基中，25℃，湿度60％时培养25d，直至菌 丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为布朗灵芝母种。

将50g母种接种至1000g原种培养基中，于25℃，湿度60％时，培养39d，直至菌丝长满 原种培养基，得到布朗灵芝原种。

将900g布朗灵芝原种接种至9000g生产种培养基中，于25℃，湿度70％时，培养42d， 直至菌丝长满生产种培养基，得到布朗灵芝生产种。

将4500g布朗灵芝生产种接种于45000g生产用栽培基中，于温度28℃，相对湿度60％的 培菌房中，黑培养50d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在12℃培养4d直至出现白色状 高1cm的原基，原基在温度25℃，相对湿度80％，散射光光照强度500lx，每天通风1次，每 次1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度90％，每天通风2次，每次1小时的条件下 菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到1500lx，温度30℃，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深， 菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到3000lx，继续培养6天，菌 盖颜色进一步加深而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达 到60％，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。

实施例4：

按实施例1的方法制备斜面PDA培养基和斜面综合PDA培养基。

称取玉米芯225g，木屑150g，米糠100g，蔗糖15g，石膏粉10g混合得到500g栽培基 料，加入819g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。

称取玉米芯2250g，木屑1500g，米糠1000g，蔗糖150g，石膏粉100g混合得到5000g 栽培基料，加入8190g水，均匀搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。

称取玉米芯9000g，木屑6000g，米糠4000g，蔗糖600g，石膏粉400g混合得到20000g 栽培基料，加入26000g水，均匀搅拌在一起，装入聚丙烯袋，常规1.5kg/cm²压力，60分钟 灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。

将9g实施例2得到的布朗灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于300g斜面PDA培养基， 于28℃湿度70％时培养18d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。

将80g布朗菌块接种至1000g斜面综合PDA培养基中，30℃，湿度70％时培养15d，直至 菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为布朗灵芝母种。

将55g母种接种至1100g原种培养基中，于28℃，湿度70％时，培养28d，直至菌丝长满 原种培养基，得到布朗灵芝原种。

将1000g布朗灵芝原种接种至10000g生产种培养基中，于29℃，湿度75％时，培养36d， 直至菌丝长满生产种培养基，得到布朗灵芝生产种。

将4500g布朗灵芝生产种接种于45000g生产用栽培基中，于温度32℃，相对湿度70％的 培菌房中，黑培养55d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在14℃培养4d直至出现白色状 高1cm的原基，原基在温度30℃，相对湿度85％，散射光光照强度800lx，每天通风1次，每 次1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度95％，每天通风2次，每次1小时的条件下 菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到1800lx，温度28℃，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深， 菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到4000lx，继续培养8天，菌 盖颜色进一步加深而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达 到50％，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。