对百里香酚及其盐或酯类衍生物作为动物饲料添加剂的应用

摘要

本发明公开了对百里香酚及其盐或酯类衍生物作为动物饲料添加剂的应用。对百里香酚为百里香酚的同分异构体，化学名称为3-甲基-4-异丙基苯酚。其盐类衍生物包括对百里香酚与金属离子所形成的盐、对百里香酚与氨形成的对百香酚铵以及对百里香酚与阴离子树脂形成的树脂盐等等；其酯类衍生物包括对百里香酚与不同的羧酸形成的酯。本发明首次发现对百里香酚及其盐类衍生物或酯类衍生物较百里香酚和香芹酚有更强的抗菌活性、更低的挥发性和更高的安全性及低刺激性。将对百里香酚及其盐或酯类衍生物作为动物促生长饲料添加剂时，较百里香酚或香芹酚具有更好的适口性及促生长效果。

说明书

技术领域

本发明特别涉及对百里香酚及其盐或酯类衍生物作为动物饲料添加剂的应用，属于饲料领域。

背景技术

饲用抗生素(AGPs)的使用曾被认为是20世纪畜牧业生产中最伟大的生物技术，1946年首次报道了链霉素可刺激雏鸡生长，1950年美国食品与药物管理局(FDA)首次批准抗生素用作饲料添加剂。此后，抗生素在大量地用作治疗和预防细菌性疾病的同时，还作为饲料添加剂被大范围的推广和应用，对控制畜禽感染性疾病、推动现代养殖业的健康发展发挥了极其重要的作用。但是，随着抗生素越用越多、越用越滥，其种种弊端也逐渐被人们所认识。抗生素作为饲料添加剂的负面效应主要包括以下几个方面：首先是导致耐药菌株的产生，大量耐药菌菌株尤其是多重耐药菌株的出现引起人们对细菌耐药性传递的顾虑，从而引起人对公共卫生问题的关注；其次，由于耐药株的出现导致抗生素的促生长效果明显下降，因此在临床使用时常常出现超剂量的使用，从而导致细菌致耐药性更趋严重，而超剂量抗生素的毒副作用反而会抑制动物的生产性能、影响动物正常的生理功能；此外，饲料用抗生素的长期使用及滥用常导致畜产品和环境中的残留、危害人类身体健康。基于多方面的考虑，欧盟已于2006年开始全面禁止使用饲料用抗生素作为动物生长促进剂，韩国也于2010年8月开始在饲料中使用包括恩拉霉素在内的8种饲料用促生长抗生素。特别是2010年“超级细菌”事件之后，对饲料用抗生素的使用的质疑及禁用的呼声越来越多。因此，有效的抗生素替代产品的研究开发正成为饲料添加剂工业发展的一个重要方向。

在饲料用抗生素替代产品的研究方面已开展了大量的研究工作，在食用精油、有机酸、酶制剂、低聚糖类和微生态制剂等替代品类中，精油成分替代抗生素类生长促进剂的呼声最高。

牛至，又名止痢草、土香薷、小叶薄荷，为唇形科牛至属多年生草本植物。来源于天然植物牛至的精油提取物——牛至油为淡黄色的澄清油状液体。目前已被批准用作饲料添加剂用于提高畜禽生产性能，作为抗生素类生长促进剂的替代品在欧盟国家大量应用。

牛至油含有30多种组份，其中主要成分是香芹酚和百里香酚，分别点牛至油总量的60～70％和10～20％。进一步的研究已证实牛至油的抗菌活性和作为动物生长促进剂的效果主要源自百里香酚和香芹酚的作用。百里香酚又名麝香草酚，化学名称是5-甲基-2-异丙基苯酚，熔点51.5℃，沸点232℃，对大鼠的口服半数致死量(LD50)为980mg/kg体重。香芹酚是百里香酚的同分异构体，化学名称为2-甲基-5-异丙基苯酚，熔点约0℃，沸点237～238℃，对大鼠的口服半数致死量(LD50)为810mg/kg体重。

虽然以百里香酚和香芹酚为主要成份的牛至油作为饲料添加剂应用时可以部分提高动物的生产性能，但其存在三方面的缺陷限制了其在饲料工业中的应用：①强烈的刺激性性气味既影响饲料加工又会降低动物采食量；②其挥发性强，使得其在饲料保存过程中易挥发损失必须加大剂量使用；③百里香酚和香芹酚对动物的毒性比较强(对大鼠的口服半数致死量分别为980mg/kg和810mg/kg体重)，安全范围窄，且具弱致突变性。

发明内容

本发明的目的在于克服以百里香酚和香芹酚为主要成分的牛至油作为动物促生长饲料添加剂的不足之处，提供对百里香酚及其盐或其酯类衍生物作为动物饲料添加剂的应用。对百里香酚(p-Thymol)是百里香酚(Thymol)的同分异构体，化学名称为3-甲基-4-异丙基苯酚。

本发明的目的通过下述技术方案实现：对百里香酚及其盐类衍生物或酯类衍生物作为动物促生长饲料添加剂的应用。

所述的对百里香酚包括：(1)从植物中提取的对百里香酚；(2)化学方法合成的对百里香酚。

所述的对百里香酚的盐类衍生物包括对百里香酚与金属离子所形成的盐、对百里香酚与氨形成的对百香酚铵以及对百里香酚与阴离子树脂形成的树脂盐等等；

所述的金属包括钾、钠、钙、镁、铜、铁、锰、锌、钴、铬等；

所述的对百里香酚的酯类衍生物包括对百里香酚与不同的羧酸形成的酯；

所述的羧酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等；

所述的动物包括各种养殖动物，如：猪、鸡、鸭、鹅、肉牛、奶牛、羊、兔、各种鱼虾类、狐、貂、貉等各种人工饲养动物。

所述的对百里香酚及其盐类衍生物或酯类衍生物作为动物促生长饲料添加剂的应用，应用于动物的所有生长、生产、繁殖阶段。

所述对百里香酚及其盐类衍生物或酯类衍生物作为动物饲料添加剂的应用，包括以抗生素类生长促进剂替代物、生长促进剂、饲料用香味剂、调味剂等各种用途名义作为饲料添加剂应用于动物饲料中。

所述的动物饲料为全价配合饲料时，添加对百里香酚及其盐或酯类衍生物作为生长促进剂时，用量为全价配合饲料质量的5～500ppm；更优选为50～250ppm。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：本发明首次发现对百里香酚及其盐类衍生物或酯类衍生物具有促进动物生长的效果，而且对百里香酚较百里香酚和香芹酚具有挥发性低、毒性低、刺激性小、抗菌活性强等特点，因此对百里香酚及其盐或酯类衍生物更适于作为动物的促生长饲料添加剂，替代饲料用抗生素。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1对百里香酚盐类衍生物或酯类衍生物的合成

(1)对百里香酚钠的合成：取75.1克对百里香酚溶于500ml四氢呋喃溶液中，在冰浴条件下边搅拌边加入氢化钠(60％wt)20克，反应2小时后，将反应物真空减压蒸馏去掉溶剂即得对百里香酚钠。

(2)对百里香酚铵的合成：取75.1克对百里香酚溶于500ml四氢呋喃溶液中，在连续搅拌(200rpm)条件下连续通入氨气，6h后停止反应，将反应物真空减压蒸馏去掉溶剂即得对百里香酚铵。

(3)对百里香酚树脂盐的合成：取50克对百里香酚钠溶于1000ml水中，加入经预处理过的强碱性聚苯乙烯阴离子树脂200克，室温下连续搅拌反应6小时后，过滤，用去离子水洗涤树脂颗粒。烘干至恒重后称重计算载药量，结果在树脂盐中对百里香酚的含量为21.5％。粉碎过筛取100目以下组份即得对百里香酚树酯盐。

(4)对百里香酚乙酯的合成：取40克对百里香酚和40ml乙酰氯溶于500ml四氢呋喃溶液中，在室温条件下边搅拌边滴加40ml三乙胺。反应4小时后加入500ml水搅拌均匀，然后再加入1000ml乙酸乙酯搅拌萃取。取乙酸乙酯相经真空减压蒸馏去掉乙酸乙酯即得对百里香酚乙酯。

实施例2对百里香酚与百里香酚和香芹酚挥发性比较试验

(1)试验材料

对百里香酚、百里香酚和香芹酚：购自SIGMA公司；

真空干燥箱和循环水泵：上海一恒试验设备厂。

(2)试验方法

①对百里香酚、百里香酚和香芹酚的挥发性比较

分别精确称取10.0克对百里香酚、百里香酚和香芹酚后置于真空干燥箱中，分别在50℃、70℃和90℃下减压干燥1h。然后称量残留的重量，比较不同化合物的挥发性差异。

②对百里香酚、百里香酚和香芹酚在饲料中保存过程中的变化

制备分别含有100ppm(质量)对百里香酚、百里香酚或香芹酚的鸡全价配合饲料，并在室温条件下(25～30℃)长期保存。保存不同时间后(1、15、30、45、60天)取样分别用乙醇提取回收相应样品中的对百里香酚、百里香酚或香芹酚。然后用气相色谱测定保组份相应的含量，比较在饲料保存过程中各组份的变化情况。

(3)试验结果：

①步骤(2)①的试验结果为：在减压干燥条件下，百里香酚和香芹酚很容易挥发，在不同温度条件下经过1h的减压干燥后，香芹酚损失最大，在70℃及以上条件下，1小时之内就全部挥发；百里香酚在70℃减压干燥下，1小时挥发89.8％；而对百里香酚的挥发性最低，在70℃和90℃减压条件下干燥1小时，挥发部分分别仅占11.4％和36.6％(表1)。

表1对百里香酚、百里香酚和香芹酚在减压干燥条件下的损失情况

  样品 起始重量(g)  50℃  70℃  90℃  对百里香酚  10.0  9.84  8.86  6.34  百里香酚  10.0  6.12  1.02  0  香芹酚  10.0  4.84  0  0

注：表中数值代表经过减压干燥后剩余的重量(单位：克)

②步骤(2)②的试验结果为：在全价饲料中添加对百里香酚、百里香酚和香芹酚时，对百里香酚的稳定性最好，放置2个月后其损失少于5％，而香芹酚和百里香酚的损失超过50％(表2)。

表2对百里香酚、百里香酚和香芹酚在减压干燥条件下的损失情况

  样品 起始浓度(ppm)  1天  15天  30天  45天  60天  对百里香酚  100  99.8  99.2  98.3  97.5  96.4  百里香酚  100  100.4  90.2  78.9  63.7  49.7  香芹酚  100  99.6  87.7  73.1  58.5  42.6

注：表中数值从全价配合饲料中提取后测定的浓度(单位：ppm)。

实验例3对百里香酚等的安全性测定(大鼠LD₅₀测定、改进寇氏法)

①试验材料

Wistar大鼠，购自南方医科大学实验动物中心，体重120～150克，雌雄各半。

供试验样品：对百里香酚、百里香酚和香芹酚。

器材：注射器、灌胃针头、鼠笼

②试验方法

A、通过预实验得到引起动物0％(Dn)和100％(Dm)死亡的剂量，其中对百里香酚、百里香酚和香芹酚的Dn和Dm见表3。

表3对百里香酚、百里香酚和香芹酚等对大鼠LD50预试验结果(Dn和Dm)

  化合物  Dn(mg/kg体重)  Dm(mg/kg体重)  对百里香酚  4000  8000  百里香酚  400  1800  香芹酚  400  1800

B、本实验要求最大反应率为100％，最小反应率为0％，或至少反应率接近100％或0％；组间剂量比值用根据上述各化合物的Dn和Dm值，在Dn至Dm间平均设置8个剂量，每组10只大鼠。如实验中出现相邻剂量有重复的100％和0％反应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100％的反应率，小剂量组也只有一个0％的反应率；分组完毕后，分组灌服不同剂量的对百里香酚、百里香酚和香芹酚；给药后观察7天，观察期间逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。

C、计算方式根据正式实验各组死亡率按下列公式按计算对百里香酚、百里香酚和香芹酚对大鼠的LD50和(可信限P＝0.95)

a、当最小剂量组的死亡率为0％，最大剂量组的死亡率为100％时，按下列公式计算LD50：

LD₅₀＝lg^-1[Xm-i(∑p-0.5)]

b、当最小剂量组的死亡率大于0％而又小于30％，或最大剂量组的死亡率小于100％而又大于70％时，可按下列校正公式计算LD₅₀：

${\mathrm{LD}}_{50}={\lg }^{-1}[\mathrm{Xm}-i(\mathrm{\Sigma p}-\frac{3-\mathrm{Pm}-\mathrm{Pn}}{4})]$

LD₅₀的标准误：$S_{x50}=i\sqrt{\frac{P-P^2}{n-1}}$

LD₅₀的平均可信限：LD₅₀±4.5S_x50LD₅₀(P＝0.95)；

上式中，Xm为最大剂量组剂量的对数，i为相邻两组对数剂量之差值(大剂量组减小剂量组)，Pm为最大剂量组死亡率，Pn为最小剂量组死亡率，P为各组死亡率，n为每组动物数。

D、试验结果

大鼠对所有受试样品的口服半数死剂量(LD50)见表4，结果显示对百里香酚比百里香酚和香芹酚的安全性分别提高30倍和25倍左右。

化合物毒性判断标准(化合物经口急性毒性分级标准，以LD50计)：

＜1，极毒；1～50，剧毒；51～500，中等毒力；501～5000，低毒；5001～50000，相对无毒；＞50000，无毒。

表4对百里香酚、百里香酚和香芹酚对大鼠的口服半数致死量研究结果

  受试样品  LD50(mg/kg体重)  毒性判断  对百里香酚  920  低毒  百里香酚  800  低毒  香芹酚  6400  相对无毒

实施例4对百里香酚及其盐或酯类衍生物的体外抗菌活性测试

(1)试验材料：

①培养基：

I、LB液体培养基：用于大肠杆菌和沙门氏菌的培养，配方如下：

酵母提取物            5克

胰蛋白胨          10克

氯化钠            10克

加水至            1000ml

pH                7.0-7.2；

II、TSB液体培养基，使用时添加体积百分比2％小牛血清，用于金黄色葡萄球菌的培养，配方如下：

Tryptone                  17g

大豆蛋白胨                3g

Yeast Extract             6g

NaCl                      5g

K₂HPO₄.3H₂O               2.5g

葡萄糖                    2.5g

H₂O至                     1L

pH                        7.0-7.4；

III、液体硫乙醇酸盐培养基(FT培养基)：用于产气荚膜梭菌的培养，配方如下：

胰蛋白胨            15g

酵母浸出粉          5g

葡萄糖              5g

硫乙醇酸钠          0.5g

L-胱氨酸            0.5g

氯化钠              2.5g

刃天青              0.001g

琼脂                0.75g

pH值                7.1±0.2；

②菌株：大肠杆菌CAU0159、大肠杆菌CAU0195、大肠杆菌CAU0020、大肠杆菌CAU0053、大肠杆菌CAU0147、鸡伤寒沙门氏菌CAU0206、鸡伤寒沙门氏菌CAU0205、鸡伤寒沙门氏菌QAU0399、鸭沙门氏菌CAU0118、猪霍乱沙门氏菌CEC19940146、猪霍乱沙门氏菌CEC19940141、金黄色葡萄球菌CAU0871、金黄色葡萄球菌CAU0868、金黄色葡萄球菌CAU0869、金黄色葡萄球菌CAU0866、金黄色葡萄球菌CAU0804、金黄色葡萄球菌CAU0810、金黄色葡萄球菌CAU0837、产气荚膜梭菌CAU0859、产气荚膜梭菌CAU0855、产气荚膜梭菌CAU0795、产气荚膜梭菌CAU0591、产气荚膜梭菌HNAU166和产气荚膜梭菌HNAU16：购自国家兽医微生物菌种保存中心。

③测试样品：

对百里香酚钠、对百里香酚树脂盐、对百里香酚铵和对百里香酚乙酯：实施例1制备；

对百里香酚、百里香酚和香芹酚：购自SIGMA公司。

(2)试验方法(试管二倍稀释法)

试验方法采用试管二倍稀释法，以对百里香酚对金黄色葡萄球菌的抗菌活性测试为例(测试不同化合物对不同细菌抗菌活性的方法相同)。若测试样品对大肠杆菌和沙门氏菌的抗菌活性时，培养基用LB液体培养基。而测试产气荚膜梭菌s)时用新鲜的FT培养基，培养时表面覆盖一层石蜡油，以维持厌氧环境。具体的试验方法如下：

A、挑选12支无菌试管编号1～12；

B、无菌加入9.5毫升TSB液体培养基至第1管内，无菌加入5.0毫升TSB液体培养基至第2到11管内；

C、在第1管中加入对百里香酚(质量体积比2％)溶液0.5毫升，然后将第1管混合均匀后取5.0毫升至第2管，依次至第10管，再从第10管取5.0毫升丢去，第11管为不加测试样品作阳性对照；

D、另准备TSB液体培养基管(第12管)5.0毫升不加测试样品、细菌，作为阴性对照；

E、第1～11管分别加入待测试的细菌(细菌浓度约为10⁸cfu/ml)菌液50.0微升(细菌菌龄为16-18h)；

F、37℃静止培养16h。

G、结果判定：肉眼观察有无细菌生长，阳性可见混浊生长，阴性可见澄清(阴性和阳性对照必须正确)。按试管编号，不出现细菌生长的最后一管中药物浓度即对百里香酚对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(μg/mL)。

(3)试验结果

对百里香酚及其盐或酯类衍生物均具有广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和产气荚膜梭菌)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌和沙门氏菌)均有较强的抑制活性，最小抑菌浓度在125-250μg/mL，且抗菌活性较百里香酚和香芹酚强1-2倍，详细结果见表5-8。

表5对百里香酚及其衍生物对金黄色葡萄球菌的抑制活性(单位：μg/mL)

表6对百里香酚及其衍生物对产气荚膜梭菌的抑制活性(单位：μg/mL)

表7对百里香酚及其衍生物对大肠杆菌的抑制活性(单位：μg/mL)

表8对百里香酚及其衍生物对沙门氏菌的抑制活性(单位：μg/mL)

实施例5对百里香酚对鸡的促生长效果试验

(1)试验材料

1日龄岭南黄快大肉鸡，广东省农业科学院畜牧研究种鸡场提供。

102型肉鸡饲料：不含抗生素，广东省农业科学院畜牧研究所提供。

对百里香酚、百里香酚和香芹酚购自SIGMA公司。

(2)试验方法

①不同剂量对百里香酚对肉鸡的促生长效果试验

400只1日龄随机分成8组，每组50只。各组在饲料中添加不同药物(表9)，统计1-21日龄各组试验鸡存活率、增重及饲料报酬。试验过程为网上笼养。

表9不同剂量对百里香酚对肉鸡的促生长效果试验分组

  组别  动物数量  药物 剂量(ppm)  不加抗生素对照组  50  -  0  试验组1  50  对百里香酚  5  试验组2  50  对百里香酚  10  试验组3  50  对百里香酚  20  试验组4  50  对百里香酚  50  试验组5  50  对百里香酚  100  试验组6  50  对百里香酚  200  试验组7  50  对百里香酚  500

(2)对百里香酚、百里香酚和香芹酚对肉鸡促长效果的比较

200只1日龄随机分成4组，每组50只。各组在饲料中添加不同药物(表10)，统计1-21日龄各组的存活率、增重及饲料报酬。试验过程为网上笼养。

表10对百里香酚、百里香酚及香芹酚对肉鸡的促生长试验分组

  组别  动物数量(只)  药物 剂量(ppm)  不给药对照组  50  -  -  试验组1  50  对百里香酚  100  试验组2  50  百里香酚  100  试验组3  50  香芹酚  100

(3)试验结果

①不同剂量对百里香酚对肉鸡的促生长试验结果

通过试验鸡1-21龄饲养实验结果分析，不同剂量对百里香酚均有不同程度的促生长效应。与不加药物对照组相比，各试验组的存活率均为100％，但添加对百里香酚的试验组的增重较对照组有1.32～7.39％的提高，且和添加的剂量呈一定相关性。此外，添加对百里香酚的试验组还能不同程度改善饲料报酬，相对不给药物对照组而言，降低料肉比0.003～0.108(表11)。

表11不同剂量对百里香酚对肉鸡促生长试验的结果

②对百里香酚、百里香酚和香芹酚对肉鸡促生长效应的比较试验结果

通过试验鸡1-21龄饲养实验结果分析，在饲料中分别添加各100ppm的对百里香酚、百里香酚或香芹酚后，与不加药物对照组相比，对百里香酚有明显的促生长作用，相对增重率分别提高6.82％，料肉比降低了0.066。而百里香酚和香芹酚试验组的促生长效应差于对百里香酚试验组，相对增重率仅分别提高了3.78％和3.19％，料肉比分别降低了0.026和0.021(与不加药物试验组相比，表12)。

表12对百里香酚、百里香酚和香芹酚对肉鸡促生长效应的比较试验结果

实施例6对百里香酚对猪的促生长效果试验

(1)试验材料

120头三元杂断奶仔猪，广东民丰种猪场。

303型猪用全价配合饲料，不含抗生素，广东民丰畜牧发展有限公司饲料厂。

对百里香酚、百里香酚和香芹酚，购自SIGMA公司。

(2)试验方法

120头断奶仔猪如表13分组，每组30头。各组在饲料中添加不同的生长促进剂后，自由采食，统计断奶后30天各试验组试验猪的增重及饲料报酬，并比较对百里香酚与百里香酚及其香芹酚对猪的促生长效应的差异。

表13对百里香酚与百里香酚、香芹酚对肉猪的促生长试验分组

  组别  动物数量  平均初重(kg)  生长促进剂 浓度(ppm)  1  30  8.15  -  -

  2  30  8.20  对百里香酚  100  3  30  8.08  百里香酚  100  4  30  8.22  香芹酚  100

(3)试验结果

通过断奶猪饲养实验结果分析，在全价配合饲料中分别添加对百里香酚、百里香酚或香芹酚后，与不加药物对照组相比均有不同程度的促生长作用，相对增重率分别提高7.17％、4.96％和4.69％，料肉比分别降低了0.133、0.097和0.085，对百里香酚的促生长效果及对饲料报酬的改善优于百里香酚和香芹酚试验组(表14)。

表14对百里香酚与百里香酚、香芹酚对肉猪的促生长试验结果

实施例7对百里香酚对鸭的促生长效果试验

(1)试验材料

1日龄樱桃谷肉鸭，广州农丰种鸭场。

807型全价肉鸭料：不含任何抗生素类生长促进剂，广州惠农饲料厂。

对百里香酚、百里香酚和香芹酚，购自SIGMA公司。

(2)试验方法

400只1日龄樱桃谷肉鸭随机分成4组，每组100只。各组在饲料中添加不同生长促进剂(表15)，统计1-46日龄各组的存活率、增重及饲料报酬。试验过程为网上笼养。

表15对百里香酚、百里香酚及香芹酚对肉鸭的促生长试验分组

  组别  动物数量(只)  药物 剂量(ppm)  不给药对照组  100  -  -  对百里香酚组  100  对百里香酚  100  百里香酚组  100  百里香酚  100  香芹酚组  100  香芹酚  100

(3)试验结果

饲养实验结果显示，在饲料中分别添加对百里香酚、百里香酚或香芹酚后，与不加药物对照组相比均有明显的促生长作用，相对增重率分别提高6.65％、4.38％和2.51％，料肉比分别降低了0.112、0.062和0.049，但对百里香酚的促生长效果及对对饲料报酬的改善优于百里香酚和香芹酚试验组(表16)。

表16对百里香酚、百里香酚及香芹酚对肉鸭促生长效应的比较试验结果

实施例8对百里香酚在水产料中的应用

(1)试验材料

试验用鱼：所用试验鱼为青鱼，当年鱼种，由广东省惠州市大丰鱼种场。健康活泼、规格一致的青鱼种在大网箱中(4×2×1.5m³)饲养4周后才用于正式养殖试验，实验体系为浮性小网箱(规格1.1×1.1×1.1m³)，每个小网箱均置有一个充气头，每天24h充气。小网箱与暂养网箱均置于试验场一个3500m²的池塘中，池塘水深～1.5m，池塘水为充分曝气底下水。试验时，将饥饿1d的青鱼192尾随机分成4组，每组设4个重复，每个重复放12尾鱼，整体称重后随机放入12个网箱中，分别饲喂不同的试验饲料。

试验饲料：试验用饲料按表17配方配自行配制，不同试验组按表18分别加入不同的生长促进剂。所用饲料原料经超微粉碎后通过江苏牧羊膨化机组制成粒径3mm浮性膨化饲料，出模温度130℃，通过喷油设备外喷3％豆油，阴凉处密封保存备用。

表17试验用青鱼饲料配方及化学成分(％wt.)

  原料组成  含量(％)  原料组成  含量(％)  鱼粉  9.0  豆油  3.0  肠衣粉  3.0  磷脂菜粕  9.0  豆粕  12.0  谷朊粉  4.0  菜粕  12.0  血球粉  2.0  味精蛋白  3.0  Vc-磷酸酯  0.1  次粉  12.6  磷酸二氢钙  1.8  面粉  17.0  氯化胆碱  0.2  膨润土  0.70  多维  0.1

  米糠  10.0  微矿预混剂  0.5

表18对百里香酚、百里香酚及香芹酚对鱼的促生长试验分组

  组别  药物 剂量(ppm)  不给药对照组  -  -  对百里香酚组  对百里香酚  100  百里香酚组  百里香酚  100  香芹酚组  香芹酚  100

(2)试验方法

试验管理：试验采用人工限食投喂，投食量每周调整一次，两组投喂水平(按初始体重)完全一致，每天投喂两次(7:30及15:00)。试验为期8周。试验期间定时对水质进行监控，养殖全程水温26.88±3.08℃、DO＞5.0mg O L^-1、pH7.8、氨氮＜0.50mg N L^-1、亚硝酸盐氮＜0.05mg N L^-1。

参数统计：试验时，停喂1d后对各网箱鱼进行整体称重，计算其增重率(WG，％)、饲料系数(FCR)和存活率(SR，％)。计算公式如下：

增重率(WG，％)＝100×(平均末重-平均初重)/平均初重；

饲料系数(FCR)＝摄食量/鱼体增重；

存活率(SR，％)＝100×试验结束时鱼数量/试验开始时鱼数量。

(3)试验结果

对百里香酚、百里香酚及香芹酚对鱼的促生长试验结果见表19。结果显示添加对百里香酚、百里香酚和香芹酚的试验组在增重、饲料系数及存活率方面均优于不给药物对照组，具有明显的促生长效应，其中平均增重分别提高7.47％、4.53％和3.52％，饲料系数降低5.37％、3.36％和2.68％。结果提示，对百里香酚在促生长及饲料报酬改善方面优于百里香酚和香芹酚试验组。

表19对百里香酚在水产料中的应用试验结果

  参数  对照组  对百里香酚组  百里香酚组  香芹酚组 初重(g)  251.20±2.43  251.60±2.73  251.40±2.35  251.30±2.18 末重(g)  586.20±25.40  611.61±26.03  601.58±28.02  598.08±27.11 增重率(％)  133.36±7.97  143.09±8.22  139.29±7.37  138.0±7.78

 饲料系数(FCR)  1.49±0.11  1.41±0.09  1.44±0.08  1.45±0.06 存活率SR(％)  100  100  100  100

实施例9对百里香酚及其盐或酯类衍生物对动物对猪的促生长效果研究

(1)试验材料

试验动物：140头50日龄健康小猪，三元杂，广东民丰种猪场提供。

304型猪用全价配合饲料，不含抗生素，广东民丰畜牧发展有限公司饲料厂。

对百里香酚钠、对百里香酚树脂盐、对百里香酚铵和对百里香酚乙酯为实施例1制备，对百里香酚、百里香酚购自SIGMA公司。

(2)试验方法

140头50日龄小猪如表20分组，每组20头。各试验组在饲料中添加不同的测试样品后，自由采食，统计试验开始后30天各试验组试验猪的增重及饲料报酬，比较不同对百里香酚的衍生物对试验猪生产性能的影响。

表20对百里香酚衍生物对猪生产性能试验影响的试验分组

(3)实验结果

动物饲养试验结果显示，对百里香酚及其盐或酯类衍生物对试验猪的生长性能均有显著改善，对百里香酚钠、对百里香酚树脂盐、对百里香酚铵和对百里香酚乙酯试验组较不添加生长促进剂对照组的平均增重提高9.4％、9.1％、8.9％和10.7％，料肉比分别降低0.199、0.199、0.197和0.190。对百里香酚及其盐或酯类衍生物的促生长效果与相同剂量的对百里香酚试验组的效果相当，但优于百里香酚试验组(表21)。

表21对百里香酚及其盐或酯类衍生物对猪生产性能试验影响的试验结果

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。