4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基氧基}喹唑啉的富马酸盐

摘要

本发明披露了4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{[1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基]氧基}喹唑啉富马酸氢盐、含有所述富马酸氢盐的药物组合物、所述富马酸氢盐在治疗超增殖性疾病(例如癌症)中的用途和用于制备所述富马酸氢盐的方法。

说明书

本发明涉及4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{[1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基]氧基}喹唑啉(下称“化合物(I)”)的盐，更具体地讲涉及化合物(I)的富马酸氢盐。预期该盐可用于治疗或预防单独或部分由erbB受体信号传导介导的疾病，特别是增殖性疾病，例如癌症。本发明还涉及包含所述盐的药物组合物及其在制备用于治疗或预防癌症(例如乳腺癌)的药物中的用途。

包括EGFR、erbB2、erbB3和erbB4在内的受体酪氨酸激酶的erbB家族常常涉及驱动肿瘤细胞的增殖和存活，因此受体的erbB家族受到多种上皮癌的牵连(有关综述参见Olayioye等，EMBO J.，2000，19，3159)，包括例如乳腺癌(Sainsbury等，Brit.J.Cancer，1988，58，458；Guerin等，Oncogene Res.，1988，3，21；Slamon等，Science，1989，244，707；Klijn等，Breast Cancer Res.Treat.，1994，29，73，有关综述另参见Salomon等，Crit.Rev.Oncol.Hematol.，1995，19，183)；非小细胞肺癌(NSCLC)，包括腺癌(Cerny等，Brit.J.Cancer，1986，54，265；Reubi等，Int.J.Cancer，1990，45，269；Rusch等，Cancer Research，1993，53，2379；Brabender等，Clin.Cancer Res.，2001，7，1850)以及其它肺癌(Hendler等，Cancer Cells，1989，7，347；Ohsaki等，Oncol.Rep.，2000，7，603)；膀胱癌(Neal等，Lancet，1985，366；Chow等，Clin.Cancer Res.，2001，7，1957，Zhau等，Mol Carcinog.，3，254)；食管癌(Mukaida等，Cancer，1991，68，142)；胃肠癌，例如结肠癌、直肠癌或胃癌(Bolen等，Oncogene Res.，1987，1，149；Kapitanovic等，Gastroenterology，2000，112，1103；Ross等，Cancer Invest.，2001，19，554)；前列腺癌(Visakorpi等，Histochem.J.，1992，24，481；Kumar等，2000，32，73；Scher等，J.Natl.Cancer Inst.，2000，92，1866)；白血病(Konaka等，Cell，1984，37，1035，Martin-Subero等，Cancer Genet Cytogenet.，2001，127，174)；卵巢癌(Hellstrom等，Cancer Res.，2001，61，2420)；头颈部癌(Shiga等，Head Neck，2000，22，599)或胰腺癌(Ovotny等，Neoplasma，2001，48，188)。

因此，普遍认为erbB受体酪氨酸激酶的抑制剂作为某些癌生长的选择性抑制剂应当具有价值。已经证实多种erbB酪氨酸激酶抑制剂的临床益处，而且多种erbB酪氨酸激酶抑制剂已获准用于癌症治疗。例如，用于治疗晚期非小细胞肺癌的EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和埃罗替尼、以及具有erbB2酪氨酸激酶抑制活性而用于转移性乳腺癌的拉帕替尼。若干其它的EGFR和erbB2酪氨酸激酶抑制剂目前尚在开发中。

国际专利申请公开号WO2005/028469在其实施例1中公开了化合物(I)，其结构如下：

化合物(I)是erbB受体酪氨酸激酶抑制剂，具体地讲，化合物(I)是EGFR和erbB2受体酪氨酸激酶的有效抑制剂。

越来越多的临床前和临床证据表明，除了通过EGFR和erbB2同二聚体的信号传导以外，由EGFR、erbB2和erbB3异二聚体介导的细胞信号传导也可能是重要的致癌信号传导途径(Sergina等，Nature，2007，445，437；Ritter等，Clin Cancer Res.2007，13，4909；Johnston等，JCO，2008，26，1066)。由于erbB3不具有固有酪氨酸激酶活性，erbB3受体的活化只有通过与其它激酶活化受体(尤其包括EGFR和erbB2)形成异二聚体受体复合物来实现。认为与erbB3形成的EGFR和erbB2异二聚体在表达这些受体的肿瘤中驱动肿瘤生长。

我们发现在临床前实验中，在配体刺激EGFR/erbB3和/或erbB2/erbB3异二聚化后，化合物(I)还通过抑制erbB3的磷酸化来抑制erbB3介导的信号传导。因此，与主要起EGFR酪氨酸激酶抑制剂作用的其它erbB酪氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼或埃罗替尼)相比，化合物(I)具有独特的erbB酪氨酸激酶抑制作用。我们进行了临床前研究，研究表明与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼和埃罗替尼)相比，化合物(I)具有改进的抗肿瘤作用。虽然不希望受理论的束缚，但是我们认为改进的性质可能是通过化合物(I)抑制erbB3介导的信号传导而产生的。

WO2005/028469指出其中公开的化合物可以药学上可接受的盐，例如式I化合物与无机酸或有机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸)的酸加成盐的形式来制备。在WO2005/028469中没有提到与富马酸的盐。WO2005/028469的实施例1中公开了化合物(I)，并且作为游离碱分离。在WO2005/028469中没有公开化合物(I)的具体盐。

我们发现，化合物(I)是晶体，具有图1的XRPD所显示的一些非晶形特征。对化合物(I)进行的示差扫描量热测定(图2A)显示以76.2℃开始的宽吸热峰(这很可能是由溶剂损失所致，最可能是水)，之后是以126.2℃开始的熔融吸热峰。对化合物(I)进行的热解重量分析(图2B)显示在25℃和95℃之间重量减轻1.2％。

动态水蒸气吸附(图3)显示在80％相对湿度下吸湿量约1.9％重量/重量，因此化合物(I)是适度吸湿的。

我们发现，化合物(I)具有相对低的固有溶解速率，特别在pH 6.0以下，并具有高的细胞渗透性。低的溶解度和高的渗透性表明化合物(I)属于BCS分类的II类。因此，化合物的溶解特性在控制药物吸收和患者间的变异性方面(尤其在较高剂量下)可能是关键的。这些研究结果以及化合物(I)部分是非晶形的并且是吸湿性的事实导致需要找到具有改进性质的化合物(I)的备选形式。

我们意外地发现，与化合物(I)相比，化合物(I)的富马酸氢盐具有有利的性质。化合物(I)富马酸氢盐具有有利的溶解特性，水溶性高，固有溶解速率好。而且，化合物(I)富马酸氢盐具有有利的固态性质(例如结晶度高、吸湿性低)和/或有利的热性质(例如高熔点)。

本发明的一个方面提供化合物(I)富马酸氢盐。

化合物(I)富马酸氢盐适宜为晶体。因此，本发明又一个方面提供晶体化合物(I)富马酸氢盐。

化合物(I)富马酸氢盐可以溶剂化和非溶剂化形式存在，例如水合形式。要了解的是，本发明包括化合物(I)富马酸氢盐的所有这类溶剂化和非溶剂化形式。

我们发现，化合物(I)富马酸氢盐的一种特殊晶型(下文称为“A型”)的特征在于它提供实质上如图4所示的X射线粉末衍射图。A型最主要的峰见表1。

表1

A型最主要的X射线粉末衍射峰

表1中采用下列缩略语：VS＝非常强；S＝强；M＝中等，W＝弱。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°附近具有至少一个特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型剂的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、14.9°或7.1°附近具有至少一个特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、14.9°和7.1°附近具有特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、24.0°、14.9°、12.4°或7.1°附近具有至少一个特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、24.0°、14.9°、12.4°和7.1°附近具有特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、24.0°、23.0°、21.2°、17.3°、15.4°、14.9°、13.0°、12.4°或7.1°附近具有至少一个特定峰。

本发明的又一个方面提供A型，其中所述A型的X射线粉末衍射图在2θ＝26.4°、24.0°、23.0°、21.2°、17.3°、15.4°、14.9°、13.0°、12.4°和7.1°附近具有特定峰。

本发明的另一个方面提供A型，其中所述A型具有与图4所示的X射线粉末衍射图实质相同的X射线粉末衍射图。

A型适宜实质上不含化合物(I)富马酸氢盐的其它形式。例如，至少80％的化合物(I)富马酸氢盐为A型形式，特别是至少90％、更特别是至少95％、甚至更特别是至少99％的化合物(I)富马酸氢盐为A型形式。在一个具体的实施方案中，至少98％的化合物(I)富马酸氢盐为A型形式。例如，当本文提及80％的化合物(I)富马酸氢盐为A型形式时，是指占化合物(I)富马酸氢盐重量的％。

A型的DSC温谱图见下文中的图5。采用实施例中所述的Mettler DSC820e仪器，通过示差扫描量热法(DSC)分析，A型在210.4℃附近开始有一尖锐的熔融吸热谱线。因此A型的熔点约为210℃。

我们发现，化合物(I)富马酸氢盐可以其它晶型存在，例如在本文实施例中描述的B-Q型。本发明的又一个方面提供选自本文所述B型～Q型中任一种的晶体化合物(I)富马酸氢盐。所述每种晶体化合物(I)富马酸氢盐形式都适宜实质上不含化合物(I)富马酸氢盐的其它形式。例如，至少80％的化合物(I)富马酸氢盐为所需要的形式，特别是至少90％、更特别是至少95％、甚至更特别是至少99％的化合物(I)富马酸氢盐为所需要的富马酸氢盐晶型。

本文所述的化合物(I)富马酸氢盐的晶型是晶体。通过X射线粉末衍射数据测定的结晶度适宜为例如大于约60％，例如大于约80％，特别是大于约90％，更特别是大于约95％。本发明的实施方案中，通过X射线粉末衍射数据测定的结晶度大于约98％，其中％结晶度是指占作为晶体的样品总质量的重量％。

在定义化合物(I)晶型的X射线粉末衍射峰的前述段落中，在表述“在2θ＝……附近”中使用了术语“在……附近”来表明峰的确切位置(即列举的2θ角度值)，该术语不应解释为绝对值，其原因在于：正如本领域技术人员所理解的一样，在一种测量仪器和另一种测量仪器之间，从一个样品到另一个样品，或者是由所采用的测定条件稍有变化所致，峰的确切位置可能略有不同。前述段落中还指出，化合物(I)富马酸氢盐A型提供与图4所示X射线粉末衍射图‘实质’相同的X射线粉末衍射图，且实质上具有表1所示的最主要的峰(2θ角度值)。要了解的是，在本文中使用术语‘实质上’还指：从一种仪器到另一种仪器，从一个样品到另一个样品，或者是由所采用的测定条件稍有变化所致，X射线粉末衍射图的2θ角度值可能略有不同，因此附图中所示或表中引用的峰位置也不应解释为绝对值。

在这一方面，本领域已知可得到具有一个或多个测量误差的X射线粉末衍射图，这取决于测量条件(例如所使用的设备或机器)。具体地讲，通常知道X射线粉末衍射图的强度可随测量条件和样品制备而波动。例如，X射线粉末衍射领域的技术人员将认识到，峰的相对强度会受到例如大小在30微米以上和非单一长径比的晶粒的影响，这可能影响样品的分析。技术人员还将认识到，反射位置会受到样品在衍射仪中的确切高度和衍射仪的零校准的影响。样品的表面平坦度也可能有微小影响。因此，本领域技术人员应了解的是，本文提供的衍射图数据不应解释为绝对值(更多的信息可参见Jenkins，R和Snyder，R.L.‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’John Wiley & Sons，1996)。因此，应当理解的是，本文所述化合物(I)富马酸氢盐的晶型不限于提供与图4所示X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图的晶体，提供与图4所示X射线粉末衍射图实质相同的X射线粉末衍射图的任何晶体都落入本发明的范围内。X射线粉末衍射领域的技术人员能够判断X射线粉末衍射图的实质相同性。

X射线粉末射线图中衍射角的测量误差一般约为2θ＝0.5°或更小，当考虑图1和图4中的X射线粉末衍射图以及当解释上文和表1中的峰位置时，应当考虑这一测量误差度。

采用Mettler DSC820e仪器(下文中将更详细地描述其用法)，测定本文所述熔点和DSC数据。本领域技术人员应了解的是，由于样品纯度、样品制备和测量条件(例如加热速率)的变化所致，通过DSC测定的熔点可发生轻微变化。应当理解的是，可以通过其它类型的设备或通过采用不同于下文所述条件的条件给出熔点的备选读数。因此，本文引用的熔点和吸热谱线图不应视为绝对值，在解释DSC数据时，要考虑这类测量误差。熔点的变化通常可达±0.5℃或以下。

化合物(I)富马酸氢盐的晶型(例如本发明的A型)还可以采用其它合适的分析技术(例如NIR光谱法或固态核磁共振波谱法)来表征和/或与其它外形相区别。

可通过常规方法(例如质子核磁共振(NMR)分析)证实本发明的化合物(I)富马酸氢盐的化学结构。

化合物(I)的合成

化合物(I)可采用WO2005/028469中所述方法或按照本文实施例列举的方法合成。

WO2005/028469的实施例1公开了化合物(I)的制备，方法如下：

将2-氯-N-甲基乙酰胺(32mg，0.3mmol)加入4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉(120mg，0.3mmol)、碘化钾(16mg，0.1mmol)和碳酸钾(50mg，0.36mmol)与乙腈(5ml)的混合物中。将混合物在回流下加热1小时。真空蒸发溶剂后，将残余物溶于二氯甲烷。有机溶液用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥。真空蒸发溶剂后，残余物用硅胶色谱法纯化(洗脱液：1％-2％ 7N氨甲醇的二氯甲烷溶液)，得到化合物(I)。

我们发现，使2-氯-N-甲基乙酰胺直接与4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉反应避免了使用碘化钾。而且，化合物(I)从某些溶剂中结晶出来得到高纯度的化合物(I)。因此，预期这种新方法适于化合物(I)的大规模制备。

因此，本发明的又一个方面提供用于制备化合物(I)的方法，所述方法包括：

(i)在合适的碱存在下，使2-氯-N-甲基乙酰胺与4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐反应；

(ii)将选自乙醇、水和甲醇或其混合物的溶剂加入步骤(i)的反应混合物中以实现化合物(I)的结晶；和

(iii)分离化合物(I)。

步骤(i)的反应便于在合适的惰性溶剂中进行，例如WO2005/028469第30页方法(c)中描述的溶剂。例如，可使用乙腈作为溶剂来进行该反应。该反应在合适的碱存在下进行，例如WO2005/028469第30页方法(c)中描述的一种碱，例如三乙胺。该反应适宜在高温下(例如在约75℃下)进行。

在一个实施方案中，该方法的步骤(ii)中所述溶剂为水。在这个实施方案中，当步骤(i)在乙腈中进行时，水∶乙腈的体积比适宜约为1∶3。

在本发明的另一个实施方案中，该方法的步骤(ii)中所述溶剂为乙醇。在这个实施方案中，当步骤(i)在乙腈中进行时，乙醇∶乙腈的体积比适宜约为3.5∶7。

在本发明的再一个实施方案中，该方法的步骤(ii)中所述溶剂为乙醇和水的混合物。在这个实施方案中，乙醇与水的体积比适宜为约20∶1～约30∶1，例如约21.9∶1～25∶1。当步骤(i)在乙腈中进行时，适宜将约3.5体积的乙醇和0.15体积的水加入7体积的乙腈中以实现结晶。

正如所理解的一样，当提及例如水∶乙腈的体积比为1∶3时，是指在完成该方法的步骤(i)后，将1体积的水加入存在于反应容器中的3体积的乙腈中。

在一个实施方案中，在该方法的步骤(ii)中，使步骤(i)的反应混合物冷却至约70℃，并加入乙醇。然后使反应混合物冷却至约45℃，加入水以实现化合物(I)的结晶。需要时，反应混合物中可加入化合物(I)晶种以利于开始结晶。然后使反应混合物冷却至约20℃以完成结晶。

步骤(iii)中化合物(I)的分离可采用常规方法进行，例如将化合物(I)过滤和干燥。

用作起始原料的4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐可按照本文实施例中描述的方法制备。例如，将盐酸加入6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉中。该反应便于在合适的溶剂中进行，例如乙醇、乙腈、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、正丙醇、甲醇、1-丁醇、乙酸乙酯、乙酸叔丁酯、异丙醇或工业用甲基化酒精。一种特别的溶剂为乙醇，或更特别为工业用甲基化酒精。

6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉可采用WO2005/028469的实施例1中所描述的方法，通过使4-(3-氯-2-氟苯胺基)-6-羟基-7-甲氧基喹唑啉与(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯反应来制备，其中该反应在氟化铯存在下使用DMA作为溶剂并在85℃的温度下进行。

该反应还可以在合适的碱(例如碳酸钾)存在下，在N-甲基吡咯烷酮(NMP)存在时进行。正如本文实施例中所述，该反应适宜在高温下进行。

然而，我们发现，在某些溶剂存在下通过进行该反应可得到晶型良好的产物。而且，预期这些溶剂中的一些适于大规模制备产物。

因此，本发明的又一个方面提供用于制备6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉的方法，所述方法包括：

(i)在合适的碱存在下，使4-(3-氯-2-氟苯胺基)-6-羟基-7-甲氧基喹唑啉与(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯反应，其中该反应在选自以下的溶剂中进行：N-甲基吡咯烷酮或选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇和工业用甲基化酒精的醇；和

(ii)使6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉结晶。

该方法的步骤(i)在合适的碱存在下进行，例如WO2005/028469中描述的碱，例如碳酸钾。该反应适宜在高温下(方便的是在回流温度下)进行。

需要时，可将水加入步骤(i)所使用的溶剂中以助于处理，例如以增加反应混合物的流动性。在一个实施方案中，该反应的步骤(i)在选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇和工业用甲基化酒精的醇中，任选在水存在时进行。在另一个实施方案中，该反应步骤(i)在乙醇和水的混合物中进行。当使用乙醇和水的混合物时，步骤(i)中乙醇与水的体积比并非至关重要，例如可高达约10∶2(例如约10∶1)的乙醇与水的体积比是适宜的。

该方法步骤(ii)中的结晶便于通过使步骤(i)的反应混合物冷却(例如冷却至约70℃)并将水加入混合物中以实现结晶来进行。然后可通过常规方法(例如实施例中所述方法)分离产物。

化合物(I)还可以按照反应流程1所示方法制备：

反应流程1

反应流程1注释：

步骤(i)：Lg¹为合适的离去基团，例如卤素、链烷磺酰氧基或芳基磺酰氧基，例如氯、溴、甲磺酰氧基、4-硝基苯磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基(适宜为甲磺酰氧基、4-硝基苯磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基，例如Lg¹为甲磺酰氧基)。

Pg¹为合适的胺保护基。这类基团是众所周知的，例如，正如许多有关该主题的普通教科书之一所描述的一样，例如‘Protective Groups in Organic Synthesis’，Theodora Green(出版商：John Wiley & Sons)。氨基保护基的实例包括酰基，例如烷酰基，例如乙酰基；烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基；芳基甲氧基羰基，例如苄氧基羰基；或芳酰基，例如苯甲酰基。Pg¹的一个具体实例为叔丁氧基羰基。

该反应适宜在碱(例如碳酸钾等碳酸盐)存在下进行。该反应便于在合适的惰性溶剂(例如异丙醇等醇)存在时进行。该反应适宜在高温下进行，方便的是在溶剂的回流温度下进行。

步骤(ii)：保护基Pg¹使用常规方法脱去。例如当Pg¹为叔丁氧基羰基时，可通过用合适的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理脱去。

步骤(iii)：Lg²为合适的离去基团，例如氯等卤素。该反应适宜在合适的碱(例如碳酸盐、有机胺或醇盐)存在下进行。合适的碱包括碳酸钾或三乙醇胺。该反应便于在惰性溶剂(例如乙腈或乙醇等醇)存在时进行。该反应适宜在高温下进行，方便的是在溶剂的回流温度下进行。

步骤(iv)：硝化可以采用众所周知的用于芳环硝化的方法进行，例如采用用于这类反应的公知条件，按实施例中所述，在硫酸存在下，用硝酸处理2-[4-(5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(4)。

步骤(v)：适于将硝基还原成胺的还原反应是众所周知的，例如通过在合适的还原剂(例如连二亚硫酸钠)存在下进行的反应。该反应适宜在含水溶剂(例如含水甲醇)存在下进行。该反应便于在高温(例如40-60℃)下进行。或者，还原可通过氢化进行，例如使用合适的催化剂(例如披钯碳催化剂，例如10％披钯碳催化剂)进行催化氢化。氢化便于在合适的溶剂(例如甲醇)中进行。

步骤(vi)：使2-[4-(4-氨基-5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(6)与N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛反应。该反应便于在合适的溶剂(例如2-甲基四氢呋喃等醚或甲苯等芳香烃)存在时进行。该反应适宜在高温(例如在约70-105℃，适宜约76℃)下进行。

步骤(vii)

该反应适宜在合适的酸存在下进行，例如选自乙酸、丙酸、琥珀酸、富马酸和柠檬酸的一种或多种酸。在一个实施例中，所述酸为乙酸。该反应适宜在惰性溶剂存在下进行，例如茴香醚等芳香烃溶剂。该反应适宜在高温下进行，例如在约90～约120℃、适宜在约90℃下进行。

反应流程1所述方法构成本发明的又一个方面。因此，提供用于制备化合物(I)的方法，所述方法包括在合适的酸存在下，使2-[4-(5-氰基-4-{[(二甲基氨基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(7)与3-氯-2-氟苯胺反应。

合适的反应条件如上文中有关反应流程1的步骤(vii)的描述。

反应流程1中所示的某些中间体是新的，并构成本发明的又一个方面。因此，本发明的另一个方面提供选自反应流程1的化合物2、3、4、5、6和7中任一种的化合物或其盐；其中Pg¹如上文中定义(例如叔丁氧基羰基)。在反应流程1中，一些中间体例如化合物(7)可能具有几何异构中心(E-异构体和Z-异构体)。要了解的是，本发明包括所有的这类几何异构体及其混合物。

化合物(I)富马酸氢盐A型的合成

本发明的又一个方面提供用于制备化合物(I)富马酸氢盐(A型)的方法，所述方法包括：

(i)使化合物(I)与足量的富马酸反应形成富马酸氢盐；

(ii)使A型结晶；和

(iii)分离出A型。

步骤(i)注释

与富马酸的反应便于在合适的溶剂中进行，溶剂例如选自甲醇、乙醇、1-丁醇、2-丁醇和双丙酮醇。该反应还可在合适溶剂的混合物中进行，例如选自以下的混合物：甲基乙基酮和二甲基甲酰胺；甲基乙基酮和四氢呋喃；甲基乙基酮和甲醇；甲基乙基酮和异丙醇；乙醇和二甲亚砜；乙醇和四氢呋喃；乙醇和异丙醇；1-丁醇和二甲基甲酰胺；1-丁醇和二甲亚砜；1-丁醇和四氢呋喃；1-丁醇和甲醇；1-丁醇和异丙醇；乙酸乙酯和二甲基甲酰胺；乙酸乙酯和甲醇；乙酸乙酯和异丙醇；以及甲醇和异丙醇。

在一个实施方案中，步骤(i)的反应在水中进行。

在一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含甲基乙基酮和选自二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲醇和异丙醇的溶剂。

在另一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含乙醇和选自二甲亚砜、四氢呋喃和异丙醇的溶剂。

在另一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含1-丁醇和选自二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、甲醇和异丙醇的溶剂。

在另一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含乙酸乙酯和选自二甲基甲酰胺、甲醇和异丙醇的溶剂。

在另一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含乙酸乙酯和异丙醇。

在另一个实施方案中，步骤(i)的反应在溶剂的混合物中进行，所述溶剂混合物包含甲醇和异丙醇。

在反应的步骤(i)在包含甲醇和异丙醇的溶剂混合物中进行的这些实施方案中，异丙醇与甲醇的体积比适宜为约3.4∶1～约1.0∶1，例如约1.5∶1～约1.0∶1。该反应适宜在高温下进行，例如在超过60℃的温度下、适宜从65℃到溶剂的回流温度下进行。便于将化合物(I)溶于或分散于异丙醇中，并使该混合物与富马酸的甲醇溶液或分散体反应。

在反应的步骤(i)在包含乙酸乙酯和异丙醇的溶剂混合物中进行的这些实施方案中，乙酸乙酯与异丙醇的体积比适宜为约5.1∶1～1.9∶1，例如约3.9∶1～1.9∶1，例如约2.1∶1。该反应适宜在约20～约73℃的温度下、例如在约40℃下进行。便于将化合物(I)溶于或分散于乙酸乙酯中，并使该混合物与富马酸的异丙醇溶液或分散体反应。或者，可将化合物(I)预溶于乙酸乙酯和异丙醇的混合物中。需要时，可以在化合物(I)溶解后采用常规方法(例如蒸馏)除去异丙醇。

当制备富马酸的醇(例如甲醇或异丙醇)溶液或分散体时，可能需要将混合物加热以实现富马酸的溶解。然而，应当避免过度加热和/或长时间将混合物保持在高温下，以使酯的形成减至最小。

一般来说，在该方法的步骤(i)中，使化合物(I)与至少2摩尔当量的富马酸、例如约2～约3摩尔当量、特别是约2～约2.7摩尔当量的富马酸反应。然而，在某些溶剂系统中可以使用较少量的富马酸。例如，我们发现，当该反应在乙酸乙酯和异丙醇的混合物中进行时，当富马酸与化合物(I)的摩尔比大于或等于1.725时，可以制成化合物(I)富马酸氢盐。

步骤(ii)注释

A型的结晶可以采用化合物从溶液中结晶的已知方法进行。例如通过使含盐溶液过饱和。可以通过例如使溶液冷却、从溶液中蒸发溶剂或通过将合适的抗溶剂加入溶液中来实现过饱和。

在一个实施方案中，通过使溶液冷却来实现结晶。例如，当反应的步骤(i)在甲醇和异丙醇的混合物中进行时，使反应混合物在约90分钟时间内冷却至约30℃，并在30℃下保持约30分钟。然后可以使反应混合物在约2小时时间内进一步冷却至0℃左右的温度，并保持在此温度下达足够的时间(例如约1小时)以使结晶完成。

或者，当该反应的步骤(i)在乙酸乙酯和异丙醇的混合物中进行时，使反应混合物冷却至约20℃(例如在约1小时时间内冷却至约40℃～约20℃)。然后将反应混合物保持在20℃下达足够的时间以实现结晶。适宜将反应混合物保持在20℃左右至少10小时，例如约13.5小时。

在另一个实施方案中，当该反应的步骤(i)在甲醇和异丙醇的混合物中进行时，可通过除去一部分溶剂使余留的反应混合物过饱和来进行结晶。可以通过蒸发或蒸馏除去溶剂。适宜除去约55-65％重量的溶剂，例如约62％。需要时，可再将异丙醇加入混合物中，接着蒸馏大致相同重量的溶剂。例如，可再将约50-60％的异丙醇加入混合物中，其中％是在第一次蒸馏后余留在反应容器中的溶剂的％重量。在加入异丙醇后，通过蒸馏除去近似重量的溶剂。可以通过再加入异丙醇并使混合物在约8小时的时间内冷却至约0℃来完成结晶。

一般来说，在该方法的步骤(ii)中，A型将自结晶，但正如本领域技术人员理解的一样，可以使用A型晶种以促进结晶。需要时，可以采用上述方法和制备化合物(I)富马酸氢盐A型的实施例中说明的方法来制备晶种。

步骤(iii)注释

在该方法的步骤(iii)中，可以采用本领域中已知的从溶液中分离结晶材料的合适方法。A型适宜经过滤收集。在分离出A型后，该盐可用合适的溶剂(例如冷异丙醇)洗涤。在分离出A型后，可采用常规方法(例如真空干燥)进行干燥。

因此，在一个实施方案中，本发明提供用于制备化合物(I)富马酸氢盐(A型)的方法，所述方法包括：

(i)使化合物(I)的异丙醇溶液或悬浮液与至少2摩尔当量富马酸的甲醇溶液反应，

其中异丙醇与甲醇的体积比为3.4∶1到约1.0∶1，例如约1.5∶1～约1.0∶1，

且其中该反应在至少60℃的温度下进行；

(ii)使A型结晶；和

(iii)分离A型。

用于A型结晶和分离的合适条件如上文中的规定。

因此，在本发明的另一个实施方案中，提供用于制备化合物(I)富马酸氢盐(A型)的方法，所述方法包括：

(i)使化合物(I)的乙酸乙酯溶液或悬浮液与至少1.725摩尔当量富马酸的异丙醇溶液(适宜为至少2摩尔当量富马酸)反应，

其中乙酸乙酯与异丙醇的体积比适宜为约5∶1到1∶1，例如约5.1∶1到1.9∶1，例如约2.1∶1，且其中该反应在约20～约73℃(例如约40℃)的温度下进行；

(ii)使得自步骤(i)的反应混合物冷却至约20℃，并将混合物保持在此温度下以实现A型的结晶；和

(iii)分离化合物(I)富马酸氢盐A型。

用于分离A型的合适条件如上文中的规定。

在本发明的另一个实施方案中，提供用于制备化合物(I)富马酸氢盐(A型)的方法，所述方法包括：

(i)使化合物(I)的水溶液与至少2摩尔当量富马酸(例如至少2.05、例如约2.1摩尔当量富马酸)反应，且其中该反应在约85℃下进行；

(ii)使得自步骤(i)的反应混合物冷却至约60℃；和

(iii)分离化合物(I)富马酸氢盐A型。

在步骤(ii)中，适宜使反应混合物慢慢冷却至约60℃，例如以约1℃/分钟的冷却速率冷却。需要时，在混合物冷却期间，可通过加入A型晶种来使A型结晶。A型晶种适宜在反应混合物冷却至约77℃时加入。在步骤(iii)中，用于分离A型的合适条件如上文所述。

晶体化合物(I)富马酸氢盐B型～P型可以通过例如本文实施例所述的方法制备。

药物组合物

本发明的又一个方面提供药物组合物，所述药物组合物包含化合物(I)富马酸氢盐以及药学上可接受的稀释剂或载体。化合物(I)富马酸氢盐可以本文所述的任何形式(例如A型)用于组合物中。

本发明的组合物可以为适于口服使用的形式(例如作为片剂、锭剂、硬质或软质胶囊剂、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)；适于局部使用的形式(例如作为乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、或水性或油性溶液剂或混悬剂)；适于经吸入给药的形式(例如作为微细粉剂或液体气雾剂)；适于经吹入给药的形式(例如作为微细粉剂)；或适于胃肠外给药的形式(例如作为用于静脉内、皮下、肌内或肌内给药的无菌水性或油性溶液剂，或者作为用于直肠给药的栓剂)。

可以通过常规方法，采用本领域众所周知的常规药用赋形剂，获得本发明的组合物。因此，欲用于口服的组合物可以含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。

例如化合物(I)富马酸氢盐适宜使用下列赋形剂制成片剂：

片芯：

化合物(I)富马酸氢盐(例如A型)；

乳糖；

微晶纤维素；

交联聚维酮；

聚维酮(PVP)；和

硬脂酸镁。

片芯可以用薄膜包衣进行包衣，例如HPMC基薄膜包衣，所述包衣任选含有一种或多种着色剂和/或光防护剂。

片剂可以采用常规方法和按照实施例中说明的方法制备。需要时，可在制成片剂前将化合物(I)富马酸氢盐碾磨，以在片剂中得到均匀粒径分布的化合物(I)富马酸氢盐。例如可将化合物(I)富马酸氢盐碾磨，得到约5μm的平均粒径。合适的碾磨方法是众所周知的。

与一种或多种赋形剂混合以产生单一剂型的活性成分的量必然将随待治疗的对象和具体的给药途径而变化。例如欲口服给予人的制剂一般含有例如0.5mg-0.5g的活性剂(更适宜为0.5-200mg，例如1-30mg)，配合适当且方便量的赋形剂，所述赋形剂可在组合物总重量的约5到约98％之间变动。

用于治疗或预防目的的化合物(I)富马酸氢盐的剂量大小自然将按照公知的医疗原则，根据疾病的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别及给药途径而变化。

在将化合物(I)富马酸氢盐用于治疗或预防目的时，通常给予的日剂量范围为例如0.1mg/kg-75mg/kg体重，如有需要，以分剂量给予。当采用肠胃外途径时，一般给予较低的剂量。因此，例如对于静脉给药，一般使用例如0.1mg/kg-30mg/kg体重的剂量范围。同样，对于吸入给药，使用例如0.05mg/kg-25mg/kg体重的剂量范围。然而，优选口服给药，尤其是以片剂形式给药。例如，可以每天小于1g但大于1mg的单位剂量口服给予温血动物化合物(I)富马酸氢盐。尤其是可以小于250mg/天的单位剂量给予温血动物化合物(I)富马酸氢盐。在本发明的另一个方面，可以小于160mg/天的单位剂量给予温血动物化合物(I)富马酸氢盐。在本发明的又一个方面，可以小于50mg/天的单位剂量给予温血动物化合物(I)富马酸氢盐。化合物(I)富马酸氢盐的剂量可以按单次日剂量或将总日剂量分成多份给予。例如，化合物(I)富马酸氢盐的总日剂量可按两次剂量给予，这两次剂量可以相同或不同。然而，总日剂量的每一份适宜大致相等。举例来说，可以一种或多种口服剂型，例如含有1.5mg、3.7mg、14.9mg、59.6mg或149mg化合物(I)富马酸氢盐的片剂或胶囊剂(等同于1mg、2.5mg、10mg、40mg或100mg的化合物(I)游离形式)给予化合物(I)富马酸氢盐。在又一个实施方案中，等同于40mg、80mg、100mg、160mg、200mg或240mg化合物(I)的化合物(I)富马酸氢盐的剂量按一天两次给予。在一个具体的实施方案中，等同于160mg化合物(I)的化合物(I)富马酸氢盐的剂量按一天两次给予。在一个具体的实施方案中，等同于200mg化合物(I)的化合物(I)富马酸氢盐的剂量按一天两次给予。在另一个具体的实施方案中，等同于240mg化合物(I)的化合物(I)富马酸氢盐的剂量按一天两次给予。

生物学测定

可按WO2005/028469中披露的测定法或本文实施例中描述的方法测定化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐的抑制活性。

本发明的化合物具有抗增殖性质，例如抗癌性质，这些性质被认为是由其erbB家族受体酪氨酸激酶抑制活性、尤其是混合的erbB2/EGF和/或erbB3/EGF特征而产生的。

因此，预期本发明的化合物可用于治疗单独或部分由erbB受体酪氨酸激酶介导的疾病或病症，即所述化合物可用来在需要这类治疗的温血动物中产生erbB受体酪氨酸激酶抑制作用。因此，本发明的化合物提供用于治疗恶性肿瘤细胞的方法，其特征在于抑制一个或多个受体酪氨酸激酶的erbB家族。本发明的化合物特别可用于产生由单独或部分抑制erbB受体酪氨酸激酶而介导的抗增殖和/或促凋亡和/或抗扩散作用。特别是，预期本发明的化合物可用于预防或治疗对抑制一种或多种erbB受体酪氨酸激酶(其涉及驱动这些肿瘤细胞增殖和存活的信号转导步骤)敏感的肿瘤。因此，预期本发明的化合物可通过提供抗增殖作用而用于治疗银屑病、良性前列腺增生(BPH)、动脉粥样硬化和再狭窄和/或癌症，特别用于治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感性癌症。这类良性或恶性肿瘤可影响任何组织，包括非实体瘤，例如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤，以及实体瘤，例如胆管癌、骨癌、膀胱癌、脑癌/CNS癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈部癌、肝癌、肺癌、神经细胞癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和外阴癌。

当提及癌症时，特别是指食管癌、骨髓瘤、肝细胞癌、胰腺癌、宫颈癌、尤因瘤、成神经细胞瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、黑素瘤、肺癌—非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)、胃癌、头颈部癌、脑癌、肾癌、淋巴瘤和白血病。在一个实施方案中，癌症是指乳腺癌，例如激素受体阳性乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是指SCLC、NSCLC、结肠直肠癌、卵巢癌和/或乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是指SCLC。在另一个实施方案中，癌症是指胃癌。另外，癌症指NSCLC。另外，癌症指结肠直肠癌。另外，癌症指卵巢癌。另外，癌症特别是指乳腺癌。另外，癌症特别是指激素受体阳性乳腺癌，尤其是绝经后女性的激素受体阳性乳腺癌。在一个实施方案中，癌症是指早期非转移性激素受体阳性乳腺癌，例如绝经后女性的早期非转移性激素受体阳性乳腺癌。另外，癌症是指早期非转移性雌激素和/或黄体酮受体阳性乳腺癌，尤其是绝经后女性的早期非转移性雌激素和/或黄体酮受体阳性乳腺癌。另外，癌症更特别是指转移性激素受体阳性乳腺癌，尤其是绝经后女性的转移性激素受体阳性乳腺癌。此外，癌症是指转移性雌激素和/或黄体酮受体阳性乳腺癌，尤其是绝经后女性的转移性雌激素和/或黄体酮受体阳性乳腺癌。此外，癌症是指膀胱癌、食管癌、胃癌、黑素瘤、宫颈癌和/或肾癌。另外，癌症是指子宫内膜癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、直肠癌和/或脑癌。在本发明的另一个实施方案中，癌症特别处于非转移状态。在本发明的另一个实施方案中，癌症特别处于转移状态。在本发明的又一个实施方案中，癌症特别处于转移状态，癌症更特别产生皮肤转移。在本发明的又一个实施方案中，癌症特别处于转移状态，癌症更特别产生淋巴转移。在本发明的又一个实施方案中，癌症特别处于转移状态，癌症更特别产生脑转移。

当提及治疗癌症时，这特别是指治疗表达一个或多个erbB家族的受体(例如EFGR、erbB2和/或erbB3受体)的癌性肿瘤。可根据抗肿瘤作用、反应程度(例如肿瘤体积减小或肿瘤负荷减轻)、反应速度、临床受益率(完全反应、部分反应和病情稳定的总和)、疾病进展时间、无进展生存率和总生存率中的一种或多种来测定本发明的化合物(I)富马酸氢盐的抗癌作用。这类临床试验终点是公知的，可参见例如FDA出版物“Guidance for Industry Clinical Trial Endpoints for the Approval of Cancer Drugs and Biologics”，2007年5月(www.fda.gov/CbER/gdlns/clintrialend.htm)。可根据例如肿瘤生长抑制、肿瘤生长延缓、肿瘤消退、肿瘤收缩、停止治疗时肿瘤再次生长的时间延长或疾病进程减缓的一种或多种来测定本发明的化合物(I)富马酸氢盐的抗肿瘤作用。

化合物(I)富马酸氢盐的使用还具有在温血动物(例如人)中预防癌症发生的有益效果。

根据本发明的这个方面，提供用作药物的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供用于在温血动物(例如人)中产生抗增殖作用的化合物(I)富马酸氢盐。

因此，根据本发明的这个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于在温血动物(例如人)中产生抗增殖作用的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于在需要这类治疗的温血动物(例如人)中产生抗增殖作用的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供用于预防或治疗对抑制erbB受体酪氨酸激酶(例如EGFR和erbB2和/或EGFR和erbB3的组合，其涉及导致肿瘤细胞增殖的信号转导步骤)敏感的肿瘤的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于预防或治疗对抑制erbB受体酪氨酸激酶(例如EGFR和erbB2和/或EGFR和erbB3的组合，其涉及导致肿瘤细胞增殖的信号转导步骤)敏感的肿瘤的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于预防或治疗对抑制受体酪氨酸激酶的一个或多个erbB家族(例如EGFR和erbB2和/或EGFR和erbB3的组合，其涉及导致肿瘤细胞增殖和/或存活的信号转导步骤)敏感的肿瘤的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于提供综合的EGFR和erbB2酪氨酸激酶抑制作用的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于提供综合的EGFR和erbB2酪氨酸激酶抑制作用的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于提供综合的EGFR和erbB2酪氨酸激酶抑制作用的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于对两种或更多种选自EGFR、erbB2和erbB3的受体提供酪氨酸激酶抑制作用的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于对两种或更多种选自EGFR、erbB2和erbB3的受体提供酪氨酸激酶抑制作用的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于对两种或更多种选自EGFR、erbB2和erbB3的受体提供酪氨酸激酶抑制作用的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于治疗全部或部分由erbB2/erbB3异二聚体的磷酸化所介导的疾病(例如肿瘤)的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于治疗全部或部分由erbB2/erbB3异二聚体的磷酸化所介导的疾病(例如肿瘤)的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于治疗全部或部分由erbB2/erbB3异二聚体的磷酸化所介导的疾病(例如肿瘤)的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供化合物(I)富马酸氢盐在制备用于治疗癌症(例如选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、胆管癌、骨癌、膀胱癌、脑癌/CNS癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈部癌、肝癌、肺癌(特别是非小细胞肺癌)、神经细胞癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和外阴癌的癌症，特别是选自乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、头颈部癌、卵巢癌和肺癌的癌症，更特别是乳腺癌)的药物中的用途。

根据本发明这个方面的又一个特征，提供用于治疗需要这类治疗的温血动物(例如人)的癌症(例如选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、胆管癌、骨癌、膀胱癌、脑癌/CNS癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈部癌、肝癌、肺癌(特别是非小细胞肺癌)、神经细胞癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和外阴癌的癌症，特别是选自乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、头颈部癌、卵巢癌和肺癌的癌症，更特别是乳腺癌)的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐。

根据本发明的又一个方面，提供用于治疗癌症(例如选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、胆管癌、骨癌、膀胱癌、脑癌/CNS癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈部癌、肝癌、肺癌(特别是非小细胞肺癌)、神经细胞癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和外阴癌的癌症，特别是选自乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、头颈部癌、卵巢癌和肺癌的癌症，更特别是乳腺癌)的化合物(I)富马酸氢盐。

如上所述，治疗或预防性治疗特定疾病所需要的剂量大小必将随受治疗的对象、给药途径和待治疗疾病的严重程度等而变化。

根据本发明的又一个方面，提供用于治疗癌症的、包含化合物(I)富马酸氢盐以及药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。

为了避免疑问，当指出治疗癌症时，应了解这还指预防转移和治疗转移，即癌症扩散。因此，可以使用本发明的化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐治疗未转移的患者以阻止转移发生，或延长转移发生的时间，以及治疗已经转移的患者以治疗转移本身。而且，癌症的治疗还指已证实的一种或多种原发肿瘤以及正在发展的一种或多种原发肿瘤的治疗。在本发明的一个方面，癌症的治疗涉及转移的预防。在本发明的另一个方面，癌症的治疗涉及转移的治疗。在本发明的另一个方面，癌症的治疗涉及已证实的一种或多种原发肿瘤或正在发展的一种或多种原发肿瘤的治疗。在一个实施方案中，癌症的治疗涉及辅助治疗。在另一个实施方案中，癌症的治疗是指癌症的新辅助治疗。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物(I)富马酸氢盐用作激素敏感性乳腺癌的辅助治疗，特别是用作绝经后女性的雌激素受体阳性乳腺癌的辅助治疗。在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物(I)富马酸氢盐用作激素敏感性乳腺癌的新辅助治疗，特别是用作绝经后女性的雌激素和/或黄体酮受体乳腺癌的新辅助治疗。在另一个实施方案中，化合物(I)富马酸氢盐用来治疗晚期(转移性)激素敏感性(雌激素和/或黄体酮受体阳性)乳腺癌，特别是绝经后女性的晚期雌激素受体阳性癌。

在再一个实施方案中，本发明的化合物(I)富马酸氢盐可在治疗患者的激素敏感性乳腺癌中用作新辅助疗法。在另一个实施方案中，本发明的化合物(I)富马酸氢盐未用作新辅助治疗。

术语“辅助疗法”是指在除去原发肿瘤后给予的治疗。如果癌症是乳腺癌，原发肿瘤的除去可通过例如手术(例如乳房肿瘤切除术或乳房切除术)和/或放射疗法进行。

术语“新辅助疗法”是指在通过手术或放射疗法除去原发肿瘤前给予的治疗。

在本文中，癌症的治疗还指癌症本身的预防。

在本发明的一个实施方案中，化合物(I)富马酸氢盐与适合用于治疗乳腺癌的内分泌药物联用。例如化合物(I)富马酸氢盐和选自芳香酶抑制剂、选择性雌激素受体调节剂、LHRH激动剂和雌激素受体下调剂的内分泌药物的组合。例如化合物(I)富马酸氢盐与芳香酶抑制剂的组合。例如化合物(I)富马酸氢盐与他莫昔芬的组合。例如化合物(I)富马酸氢盐与阿那曲唑的组合。例如化合物(I)富马酸氢盐与来曲唑的组合。例如化合物(I)富马酸氢盐与依西美坦的组合。化合物(I)富马酸氢盐与内分泌疗法的组合尤其可适用于治疗本文所述的乳腺癌。例如，所述组合可用于治疗转移性雌激素和/或黄体酮阳性乳腺癌。或者，所述组合可用作乳腺癌的辅助治疗，特别是用作雌激素和/或黄体酮阳性乳腺癌的辅助治疗。所述组合还可用于治疗没有接受既往内分泌疗法(例如他莫昔芬等选择性雌激素受体调节剂、阿那曲唑等芳香酶抑制剂或雌激素受体下调剂)的患者的雌激素和/或黄体酮阳性乳腺癌。

因此，在本发明的一个实施方案中，提供用于治疗需要这类治疗的温血动物(例如人)的晚期(转移性)雌激素和/或黄体酮阳性乳腺癌的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐以及有效量的芳香酶抑制剂例如阿那曲唑，其中所述动物之前未曾用例如选择性雌激素受体调节剂(例如他莫昔芬)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑)或雌激素受体下调剂的内分泌疗法治疗过。

在本发明的另一个实施方案中，提供用于治疗需要这类治疗的温血动物(例如人)的非转移性雌激素和/或黄体酮阳性乳腺癌的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐以及有效量的芳香酶抑制剂例如阿那曲唑，其中所述动物未曾用例如选择性雌激素受体调节剂(例如他莫昔芬)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑)或雌激素受体下调剂的内分泌疗法治疗过。在该实施方案中，所述组合适宜作为辅助治疗给予。

在上述用于治疗乳腺癌的两个实施方案中，温血动物适宜为绝经后女性。术语“绝经后”包括自然绝经后的女性和通过例如用LHRH激动剂(例如戈舍瑞林)治疗而引起停经的女性。要了解的是，在本文中指出患者“之前未曾用内分泌疗法治疗过”时，是指用LHRH激动剂治疗以引起患者提早停经的对患者的治疗不视为“既往用内分泌疗法治疗过”。因此，用LHRH激动剂治疗以引起提早停经的患者包括在本文描述为不是“用内分泌疗法治疗”的这些实施方案中。

在另一个实施方案中，化合物(I)富马酸氢盐与紫杉醇或多西他赛等紫杉烷类联用。这种组合可用于治疗乳腺癌。例如治疗erbB2低过量表达的乳腺癌(特别是晚期/转移性乳腺癌)。术语“erbB2低过量表达”是指Her2荧光原位杂交(FISH)阴性的肿瘤。作为“erbB2低过量表达”的具体肿瘤为：

(i)通过免疫组织化学(IHC)呈Her2+；和/或

(ii)通过IHC呈Her2++和Her2荧光原位杂交(FISH)阴性。

因此在本发明的一个具体实施方案中，在治疗具有选自以下一种或多种erbB2低过量表达的癌症时，化合物(I)富马酸氢盐与紫杉醇或多西他赛等紫杉烷类联用：

(a)为Her2FISH阴性的乳腺癌；

(b)通过IHC呈Her2+的乳腺癌；和

(c)通过IHC呈Her2++和Her2FISH阴性的乳腺癌。

根据本发明的又一个方面，提供用于治疗需要这类治疗的温血动物(例如人)的erbB2低过量表达的乳腺癌的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的化合物(I)富马酸氢盐以及有效量的紫杉烷类，例如紫杉醇或多西他赛。

本文中，在使用术语“组合”时，应了解其是指同时、分开或序贯给药。在本发明的一个方面，“组合”是指同时给药。在本发明的另一个方面，“组合”是指分开给药。在本发明的又一个方面，“组合”是指序贯给药。如果给药是序贯或分开的，则第二组分给药的延迟不应例如失去组合的有益效果。

正如所理解的一样，在本文所述方法、用途和药物组合物中提及使用化合物(I)富马酸氢盐时，是指本文所述的任何富马酸氢盐(例如A型)。

附图说明

图1表示化合物(I)游离形式的X射线粉末衍射图(XRPD)。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图2A表示化合物(I)游离形式的示差扫描量热迹线。x轴表示温度和时间，y轴表示功率，单位为mW。图中的文字表示吸热谱线的起始温度和曲线积分(mJ)。

图2B是化合物(I)游离形式的热解重量迹线。x轴表示温度和时间，y轴表示重量，单位为mg。图中的文字表示对于约30℃和80℃之间的事件，样品的％重量减轻和绝对重量减轻。

图3表示化合物(I)游离形式的动态水蒸气吸附等温线。x轴表示％相对湿度，y轴表示样品质量的％变化。“sorp”是指吸附周期和“desorp”表示解吸周期。

图4表示化合物(I)富马酸氢盐A型的X射线粉末衍射图(XRPD)。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图5表示化合物(I)富马酸氢盐A型的示差扫描量热迹线。x轴表示温度和时间，y轴表示功率，单位为mW。图中的文字表示熔融吸热谱线的起始温度和曲线积分(mJ)。

图6表示化合物(I)富马酸氢盐A型的热解重量迹线。x轴表示温度和时间，y轴表示重量，单位为mg。图中的文字表示在约30℃和80℃之间，样品的％重量减轻和绝对重量减轻。

图7表示化合物(I)富马酸氢盐A型的动态水蒸气吸附等温线。x轴表示％相对湿度，y轴表示样品质量的％变化。“sorp”是指吸附周期和“desorp”表示解吸周期。

图8表示化合物(I)富马酸氢盐B型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图9表示化合物(I)富马酸氢盐C型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图10表示化合物(I)富马酸氢盐D型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图11表示化合物(I)富马酸氢盐E型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图12表示化合物(I)富马酸氢盐F型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图13表示化合物(I)富马酸氢盐G型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图14表示化合物(I)富马酸氢盐H型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图15表示化合物(I)富马酸氢盐I型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图16表示化合物(I)富马酸氢盐J型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图17表示化合物(I)富马酸氢盐K型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图18表示化合物(I)富马酸氢盐L型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图19表示化合物(I)富马酸氢盐M型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图20表示化合物(I)富马酸氢盐N型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图21表示化合物(I)富马酸氢盐O型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图22表示化合物(I)富马酸氢盐P型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

图23表示化合物(I)富马酸氢盐Q型的X射线粉末衍射图。x轴表示2θ值，y轴表示计数。

实施例

通过下列实施例对本发明作进一步说明，所述实施例旨在详细说明本发明的若干实施方案。这些实施例并不想要，也不应被解释为是对本发明范围的限制。应当清楚，可以按照不同于本文具体描述的方法来实施本发明。就本文的教导而言，本发明的多种修改和变动都是可行的，因此，均属于本发明的范围。

除另有说明外，在实施例中：

(i)所给出的收率仅用于说明目的，不一定是可获得的最大收率；

(ii)采用Mettler DSC820e仪器通过DSC分析测定熔点；精确称取1-2mg样品，在排气式样品盘中进行分析；以10℃/分钟从25℃到325℃进行加热；除非另有说明，否则本文中的熔点是指采用DSC测量的熔融吸热谱线的起始温度；

(iii)在化学电离(CI)模式下使用直接暴露探头以70电子伏特的电子能进行质谱操作；其中所述电离通过电子碰撞(EI)、快速原子轰击(FAB)或电喷雾(ESP)实现；给出了m/z值；一般说来，仅报告指示母体质量的离子；除非另有说明，否则给出的质量离子为(MH)⁺，其表示质子化的质量离子；M⁺是指失去电子所产生的质量离子；M-H⁺则是指失去质子所产生的质量离子；

(iv)除另有说明外，当给出NMR数据时，其为主要诊断质子的δ值形式，以相对于四甲基硅烷(TMS)内标的百万分之几(ppm)给出，用全氘二甲亚砜(DMSO-d₆)作溶剂在500MHz下测定；使用以下缩略语：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰；

(v)化学符号具有其通常的含义；采用SI单位和符号；

(vi)溶剂比以体积∶体积(v/v)给出；

(vii)热解重量分析采用Mettler TG851设备进行[精确称取1-5mg样品，在敞口盘中进行分析；以10℃/分钟从25℃到325℃进行加热。

(viii)X射线粉末衍射分析采用配备闪烁探测器的Siemens D5000粉末X射线衍射仪进行；X射线源为Cu K_α，提供1.54的波长；在2θ2-40°范围内收集数据，2θ增幅为0.02°，1秒钟/增量，数据按下表2归类：

表2

^*由用固定狭缝测量的衍射图得出相对强度

[如前所述，X射线粉末衍射领域技术人员将认识到，峰的相对强度会受例如大小为30微米以上和非单一长径比的晶粒的影响，其可能影响样品的分析。技术人员还将认识到，反射位置会受样品在衍射仪中的确切高度和衍射仪的零校准的影响。样品表面平坦度也可能有少部分影响。因此，所提供的衍射图数据不得视为绝对值(有关更多信息可参见Jenkins，R&Snyder，R.L.‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’John Wiley &Sons，1996)]；

(ix)动态水蒸气吸附采用SMS DVS(Surface Measurement Systems Limited，UK)测量。使用200立方厘米/分钟的气流在25℃下分析样品。相对湿度(RH)以10％RH的步进从0％RH增加至80％RH，最后步进为95％RH。然后使用与吸附相同的RH步进方式使样品解吸；然后在第二吸附/解吸周期内重复这一操作。在每个湿度步进中建立平衡，使得重量随时间(分钟)的变动率为0.002％。

(x)在与光导纤维紫外光检测器相连的溶解浴中测量固有溶解速率。

(xi)采用HPLC UV测量水中的溶解度。

(xii)在下面给出的实施例中，所述摩尔数和收率是指在100％重量/重量下的原材料和试剂，因此考虑了所用材料的纯度。

实施例A

4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{[1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基]氧基}喹唑啉(化合物(I))的制备

将2-氯-N-甲基乙酰胺(3.720kg，34.60mol)和4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐(13.70kg，27.25mol)溶于乙腈(79.2kg)。在环境温度下，向经搅拌的悬浮液中加入三乙胺(17.40kg，172.11mol)。将所得透明溶液加热至回流并持续3小时。使溶液冷却至20℃(产物在50℃下结晶)。将水(54.2kg)加入反应器中，在20℃下再搅拌悬浮液2小时。产物经过滤后依次用水(34kg)和冷(0℃)乙腈(13.0kg)洗涤。产物从乙腈(94.6kg)中重结晶出来，经过滤分离后用冷(0℃)乙腈(13.2kg)洗涤。然后如上进行该产物从乙腈(75.2kg)的再次重结晶。然后真空干燥固体，得到为白色固体的标题产物(6.50kg，50％)；¹H NMR谱：(CDCl₃)1.98(m，2H)，2.08(m，2H)，2.46(-m，2H)，2.85(m，2H)，2.87(d，3H)，3.07(s，2H)，4.02(s，3H)，4.49(m，1H)，7.16(m，4H)，7.31(m，2H)，8.49(m，1H)，8.71(s，1H)；质谱：MH⁺ 474。

用作起始原料的4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉如下制备：

步骤1：6-乙酰氧基-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉盐酸盐

将6-乙酰氧基-7-甲氧基喹唑啉-4-酮(国际专利申请WO 96/15118，实施例39；21.4kg，89.3mol)悬浮于甲苯(150kg)中。向其中加入N-乙基二异丙胺(13.3kg，103mol)。将褐色悬浮液加热至70℃，然后加入三氯氧化磷(36.0kg，228mol)。将反应混合物在70℃下搅拌5小时。再加入甲苯(84.0kg)，接着加入3-氯-2-氟苯胺(14.88kg，102mol)。将反应混合物在70℃下搅拌2小时，期间固体沉淀出来。使悬浮液冷却至25℃并保持在此温度下93小时。反应混合物经过滤后，滤饼用甲苯(2x 55.5kg)洗涤。滤饼用乙醇(24.5kg)和水(32.0kg)的混合物再洗涤两次，然后用乙醇(50.5kg)洗涤两次，然后真空干燥固体，得到为米色固体的标题产物(33.4kg，78％)；¹H NMR：2.37(s，3H)，4.00(s，3H)，7.34(ddd，1H)，7.48(s，1H)，7.52(ddd，1H)，7.61(ddd，1H)，8.62(s，1H)，8.86(s，1H)；质谱：362.4，364.4。

步骤2：4-(3-氯-2-氟苯胺基)-6-羟基-7-甲氧基喹唑啉

将步骤1的6-乙酰氧基-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉盐酸盐(33.5kg，69.6mol)悬浮于甲醇(198kg)中。在25℃下，向经搅拌的悬浮液中加入水(86kg)和氢氧化钠(31.5kg，32％)。将所得溶液在60℃下搅拌4.5小时，然后冷却至25℃。加入乙酸(约16.0kg)直至达到pH 5.5-6.0，此时产物从溶液中沉淀出来。再加入甲醇(5.5kg)后，搅拌悬浮液90分钟。产物经过滤，然后依次用25％含水甲醇(39.0kg MeOH+17.0kg水)和甲醇(55.5kg)洗涤。将粗制固体在40℃下真空干燥。粗制固体用水(145kg)调成浆状物后，在65℃下搅拌2小时。使浆状物冷却至20℃后过滤。滤饼用甲醇(2x 21.5kg)洗涤，然后在40℃下真空干燥，得到为浅褐色固体的标题产物(21.85kg，98％)；¹H NMR：3.95(s，3H)，7.19(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.42(dd，1H)，7.50(dd，1H)，7.64(s，1H)，8.32(s，1H)，9.43(s，1H)，9.67(br.s，1H)；质谱：320.4，322.4。

步骤3：6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉

将步骤2的4-(3-氯-2-氟苯胺基)-6-羟基-7-甲氧基喹唑啉(15.591kg，48.44mol)、(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(按照Chemical &Pharmaceutical Bulletin 2001，49(7)，822-829制备；16.20kg，57.99mol)和碳酸钾(7.978kg，57.73mol)溶于N-甲基吡咯烷酮(114.2kg)中，搅拌的同时将混合物加热至100℃。在100℃(95℃-105℃)下继续加热5小时。然后使混合物冷却至80℃，加入水(216.6kg)猝灭。

将所得物(batch)在80℃下再搅拌60分钟，然后在2小时内冷却至20℃，期间产物结晶出来。经过滤分离产物。将产物溶于热(回流)甲醇(200L)中。向该混合物中加入水(20L)，这导致了结晶。使悬浮液冷却至0℃后过滤。在50℃下真空干燥，得到标题产物，18.80kg(77％)；¹H NMR：1.40(s，9H)，1.60-1.65(m，2H)，1.95-2.00(m，2H)，3.20-3.25(m，2H)，3.65-3.70(m，2H)，3.92(s，3H)，4.68(m，1H)，7.21(s，1H)，7.27(dd，1H)，7.47(ddd，1H)，7.51(dd，1H)，7.85(s，1H)，8.36(s，1H)，9.53(s，1H)；质谱：503.5，505.5。

步骤4：4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐

将步骤3的6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉(18.80kg，37.38mol)悬浮于异丙醇(139.8kg)中，搅拌的同时加热至40℃。在50分钟内将盐酸(15.40kg，～156.3mol)加入容器中，产生约9℃的放热。在加入酸期间，悬浮液溶解，得到澄清溶液。在约90分钟内将溶液慢慢加热至回流，然后再保持在回流下3小时。在此回流期间产物结晶出来。使黏稠悬浮液冷却至0℃后过滤。滤饼用冷(0℃)异丙醇(2x 20.6kg)洗涤两次。将产物在50℃下真空干燥，得到标题产物，13.60kg(73％)；¹H NMR：1.53-1.64(m，2H)，2.00-2.05(m，2H)，2.64-2.72(m，2H)，3.00-3.07(m，2H)，3.92(s，3H)，4.60(m，1H)，7.20(s，1H)，7.26(ddd，1H)，7.47(dd，1H)，7.50(dd，1H)，7.82(s，1H)，8.34(s，1H)，9.56(s，1H)；质谱：403.2，405.2。

实施例B：4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{[1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基]氧基}喹唑啉(化合物(I))的制备

将2-氯-N-甲基乙酰胺(24.22g，223.1mmol)和4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐(86.00g，160.9mmol)在乙腈(537ml)中调成浆状物。在环境温度下，向经搅拌的悬浮液中加入三乙胺(101ml，723.9mmol)。将反应物加热至75℃保持5小时。使溶液冷却至70℃后，加入乙醇(268ml)。使反应物冷却至45℃，加入水(9.6ml)。加入化合物(I)(0.42g)以形成结晶，然后在2小时内使浆状物冷却至20℃。再搅拌12小时后，经过滤分离产物。滤饼用乙腈(102ml)∶乙醇(51ml)∶水(1.8ml)洗涤两次，然后用水(153ml)洗涤两次。将产物在60℃下真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(45.9g，60％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.76-1.87(m，2H)2.01-2.11(m，2H)2.35-2.44(m，2H)2.64(d，J＝4.74Hz，3H)2.72-2.80(m，2H)2.95(s，2H)3.95(s，3H)4.51-4.63(m，1H)7.23(s，1H)7.29(td，J＝8.08，1.29Hz，1H)7.46-7.58(m，2H)7.75(q，J＝4.60Hz，1H)7.83(s，1H)8.38(s，1H)9.59(s，1H)；质谱：MH⁺ 474。

用作起始原料的4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐如下制备：

步骤1：6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉

将4-(3-氯-2-氟苯胺基)-6-羟基-7-甲氧基喹唑啉(按照实施例A步骤2中所述方法制备；60.00g，0.1828mol)、(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(88.04g，0.3107mol)和碳酸钾(30.31g，0.2193mol)悬浮于乙醇(584ml)和水(58ml)中，搅拌的同时将混合物加热至回流。在回流下继续加热16.5小时。然后使混合物冷却至70℃，在60分钟内加入水(234ml)。

在65℃下将所得物再搅拌2小时以形成结晶。在6小时内使浆状物冷却至20℃。经过滤分离产物。用含水乙醇(乙醇117ml，水58ml)将滤饼调成浆状物，然后用含水乙醇(乙醇117ml，水58ml)置换洗涤。然后用水(175ml)将滤饼调成浆状物，然后用水(175ml)置换洗涤。将产物在40℃下真空干燥，得到标题化合物(81.5g，84％)；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.42(s，9H)1.60-1.70(m，2H)1.96-2.04(m，2H)3.23-3.30(m，2H)3.65-3.75(m，2H)3.95(s，3H)4.68-4.75(m，1H)7.24(s，1H)7.29(t，J＝8.06Hz，1H)7.49(t，J＝7.50Hz，1H)7.54(t，J＝7.19Hz，1H)7.88(s，1H)8.39(s，1H)9.57(s，1H)；质谱：503.5，505.5。

步骤2：4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-[(哌啶-4-基)氧基]喹唑啉二盐酸盐

将6-{[(1-叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]氧基}-4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基喹唑啉(10.00g，0.1879mol)悬浮于工业用甲基化酒精(95ml)中，搅拌的同时加热至35℃。将盐酸(6.59ml，约0.7891mol)加入容器中，产生约5.5℃的放热。在加入酸期间，悬浮液溶解，得到澄清溶液。在约90分钟内将溶液慢慢加热至70℃，然后再保持在70℃下1小时。然后在4小时内使反应物冷却至0℃，期间产物结晶出来。产物经过滤分离，然后滤饼用工业用甲基化酒精(2x 14ml)洗涤两次。将产物在50℃下真空干燥，得到标题产物(9.04g，88％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.91-2.01(m，2H)2.27-2.35(m，2H)3.15-3.26(m，2H)3.26-3.35(m，2H)4.02(s，3H)5.07-5.15(m，1H)7.35(td，J＝8.08，1.29Hz，1H)7.46(s，1H)7.52(ddd，J＝8.03，5.23Hz，1H)7.63(ddd，J＝8.22，6.76，1.62Hz，1H)8.83(s，1H)8.91(s，1H)9.02-9.13(m，1H)9.20-9.31(m，1H)12.51(br.s.，1H))；质谱：403.2，405.2。

实施例C：4-(3-氯-2-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-{[1-(N-甲基氨基甲酰基甲基)哌啶-4-基]氧基}喹唑啉(化合物(I))的制备

化合物(I)按照下示流程制备：

将2-[4-(5-氰基-4-{[(二甲基氨基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(7，7.00g，17.71毫摩尔)悬浮于茴香醚(35.8g)中。加入乙酸(16.6g)，向所得溶液中加入3-氯-2-氟苯胺(2.71g，18.07毫摩尔)。将反应混合物在90℃下加热20小时，然后冷却至20℃。将水(37.04g)加入反应混合物中，弃去有机层。向所得含水混合物中依次加入异丙醇(39.00g)和氨水(20.79g，25％)。将反应混合物加热至30℃，加入导致结晶的化合物(I)晶种。然后使反应物冷却至0℃，产物经过滤分离。滤饼用水(7.28g)和异丙醇(4.68g)的混合物洗涤两次，然后干燥得到化合物(I)(5.65g，收率55％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.79(m，2H)2.04(m，2H)2.38(m，2H)2.62(d，J＝4.5Hz，3H)2.74(m，2H)2.94(s，2H)3.93(s，3H)4.56(tt，J＝8.1，3.8Hz，1H)7.21(s，1H)7.28(m，1H)7.50(m，2H)7.73(q，J＝4.5Hz，1H)7.81(s，1H)8.36(s，1H)9.56(br.s，1H)；质谱：m/z(M+H)⁺474.2，476.2。

用作起始原料的2-[4-(5-氰基-4-{[(二甲基氨基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(7)如下制备：

步骤1.4-(5-氰基-甲氧基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2)的制备

将3-羟基-4-甲氧基苯甲腈(1，6.00g，39.62毫摩尔)、(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(16.6g，59.44毫摩尔)(Chemical & Pharmaceutical Bulletin 2001，49(7)，822-829)和碳酸钾(6.71g，47.55毫摩尔)悬浮于异丙醇(78.98g)中，搅拌的同时将混合物在回流下加热。再加入(4-甲磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.08g，7.43毫摩尔)促使反应完成。然后使混合物冷却，加入水(100.47g)猝灭。加入4-(5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2)晶种后冷却至0℃，得到晶体产物，经过滤将其分离。滤饼依次用水(8.86g)和异丙醇(6.97g)的混合物和水(23.64g)洗涤，然后干燥，得到标题化合物(10.75g，收率80％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.39(s，9H)1.48(m，2H)1.88(m，2H)3.13(m，2H)3.67(m，2H)3.83(s，3H)4.56(tt，J＝8.1，3.8Hz，1H)7.13(d，J＝8.4Hz，1H)7.42(dd，J＝8.4，1.9Hz，1H)7.51(d，J＝1.9Hz，1H)；质谱：m/z(M+H)⁺333.1。

步骤2.4-甲氧基-3-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈(3)的制备

将4-(5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2，39.31g，118.26毫摩尔)悬浮于乙醇(155.53g)中并加热至40℃。向该浆状物中慢慢加入HCl(46.61g，573.04毫摩尔)。将混合物加热至60℃并保持3小时。使反应混合物冷却至20℃，加入晶种引发结晶。将所得固体在0℃下经过滤分离，用乙醇(62.21g)洗涤两次，然后干燥，得到为盐酸盐的标题化合物(29.84g，收率77％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.84(m，2H)2.09(m，2H)3.02(ddd，J＝12.7，8.9，3.4Hz，2H)3.20(m，2H)3.84(s，3H)4.63(tt，J＝7.7，3.6Hz，1H)7.15(d，J＝8.5Hz，1H)7.45(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)7.56(d，J＝1.9Hz，1H)9.16(br.s，2H)；质谱：m/z(M+H)⁺233.2。

步骤3.2-[4-(5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(4)的制备

将4-甲氧基-3-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈盐酸盐(3，28.36g，95.82毫摩尔)、2-氯-N-甲基乙酰胺(12.37g，114.98毫摩尔)和碳酸钾(33.11g，239.55毫摩尔)悬浮于乙腈(161.36g)中。该将反应混合物在回流下加热3小时。使反应混合物冷却至20℃，加入水(386.26g)。将反应物加热至75℃，通过蒸馏减少体积。在冷却时出现结晶。所得固体经过滤分离，用水洗涤两次(77.25g和128.75g)，然后干燥，得到标题化合物(27.95g，收率94％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.68(m，2H)1.91(m，2H)2.29(m，2H)2.61(d，J＝4.7Hz，3H)2.67(m，2H)2.88(s，2H)3.83(s，3H)4.41(tt，J＝8.3，4.0Hz，1H)7.11(d，J＝8.4Hz，1H)7.40(dd，J＝8.4，1.9Hz，1H)7.47(d，J＝1.9Hz，1H)7.68(q，J＝4.7Hz，1H)；质谱：m/z(M+H)⁺304.2。

步骤4.2-[4-(5-氰基-2-甲氧基-4-硝基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(5)的制备

将2-[4-(5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(4，8.78g，26.11毫摩尔)悬浮于乙酸(22.82g，364.87毫摩尔)中，使所得反应混合物冷却至5℃。向其中加入硫酸(23.64g，234.95毫摩尔)，并保持30℃以下的反应温度。向所得溶液中加入硝酸(2.40g，26.63毫摩尔)。然后将反应混合物加热至35℃并保持3小时。再加入硝酸(117mg，1.31毫摩尔)和硫酸(1.31g，13.1毫摩尔)，将反应混合物在35℃下加热30分钟。使溶液冷却至20℃，用氨水(92.45g，1.36摩尔)猝灭，导致温度升高至50℃。向所得浆状物中加入丙腈(61.58g、1.12摩尔)和水(19g)。将反应混合物加热至80℃，得到澄清溶液，其沉淀后分为两层。除去底层。使反应混合物冷却至20℃，得到黏稠浆状物。固体经过滤分离，用丙腈(6.16g，112.0毫摩尔)洗涤后干燥，得到标题化合物(7.44g，收率82％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.72(m，2H)1.97(m，2H)2.35(m，2H)2.61(d，J＝4.7Hz，3H)2.66(m，2H)2.90(s，2H)3.96(s，3H)4.73(tt，J＝8.4，4.0Hz，1H)7.71(q，J＝4.7Hz，1H)7.82(s，1H)7.86(s，1H)。质谱：m/z(M+H)⁺349.2。

步骤5.2-[4-(4-氨基-5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(6)的制备

将2-[4-(5-氰基-2-甲氧基-4-硝基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(5，7.42g，19.38毫摩尔)悬浮于水(44.52g)和甲醇(5.35g)中。向其中加入连二亚硫酸钠(11.91g，58.15毫摩尔)，将所得反应混合物加热至60℃。向反应混合物中加入盐酸(46.98g，463.89毫摩尔)，得到溶液，将其在60℃下保持3小时。然后使反应混合物冷却至20℃。依次加入氢氧化钠水溶液(15.51g，182.2毫摩尔)和2-甲基四氢呋喃(58.0g)。将反应混合物加热至60℃，其沉淀后分为两层，弃去下层水层。通过真空蒸馏减小反应混合物的体积，加入甲基叔丁基醚(18.54g)，得到浆状物，使之冷却至10℃，然后经过滤收集固体。固体用2-甲基四氢呋喃(5.8g)洗涤后干燥，得到标题化合物(5.4g，收率78％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.62(m，2H)1.82(m，2H)2.20(m，2H)2.60(d，J＝4.7Hz，3H)2.65(m，2H)2.86(s，2H)3.72(s，3H)4.00(tt，J＝8.3，4.0Hz，1H)5.66(br.s，2H)6.39(s，1H)6.94(s，1H)7.65(q，J＝4.7Hz，1H)。

质谱：m/z(M+H)⁺319.2。

步骤6.2-[4-(5-氰基-4-{[(二甲基氨基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(7)的制备

将2-[4-(4-氨基-5-氰基-2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(6，18.21g，52.05毫摩尔)悬浮于2-甲基四氢呋喃(99.62g)中。向其中加入乙酸(162.79mg)和N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(DMF-DMA)(8.63g，70.27毫摩尔)，将所得反应混合物在76℃下加热16小时。再将N，N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(639.41mg，5.20毫摩尔)加入反应混合物中以确保反应完全。使反应混合物冷却至30℃，期间出现结晶。所得固体经过滤分离，用2-甲基四氢呋喃(14.23g)洗涤后干燥，得到标题化合物(19.53g，收率97％)；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.65(m，2H)1.86(m，2H)2.24(m，2H)2.60(d，J＝4.7Hz，3H)2.66(m，2H)2.87(s，2H)2.95(s，3H)3.04(s，3H)3.81(s，3H)4.19(tt，J＝8.2，3.8Hz，1H)6.72(s，1H)7.15(s，1H)7.67(q，J＝4.7Hz，1H)7.90(s，1H)；质谱：m/z(M+H)⁺374.2。

生物活性

对化合物(I)的活性进行了评价以测定其：

a)在配体刺激的细胞中抑制EGFR、ErbB2和ErbB3活化(磷酸化)的能力；和

b)抑制MCF-7细胞的基础增殖和配体刺激的增殖的能力。

(a)配体驱动测定中的化合物(I)

方法：

KB细胞和MCF-7细胞获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，并按常规培养在RPMI 1640(不含酚红)+10％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺中。

细胞的处理和裂解：

分别以5000个细胞/孔和4000个细胞/孔将KB细胞和MCF-7细胞接种到含有10％FBS的RPMI 1640培养基的96孔板中。将细胞孵育72小时后，用不含血清的RPMI 1640培养基更换培养基达24小时。然后将细胞用浓度为0-10μM的化合物(I)处理90分钟。在细胞临溶解前，以将受体磷酸化增加至最大值的90％(ED₉₀)所需要的浓度将MCF-7和KB细胞与配体(对于MCF-7细胞为heregulin(“HRG”)，对于KB细胞为表皮生长因子(“EGF”))一起孵育5分钟，以供进行实验内比较。

p-EGFR、p-ErbB2和p-ErbB3的测定：

使用人磷酸-EGFR Duoset ELISA试剂盒(R&D systems total EGFR #DYC1854、pEGFR #DYC1095)测定KB细胞的p-EGFR状态。MCF-7细胞的p-ErbB2和p-ErbB3含量分别使用人磷酸-ErbB2 Duoset ELISA试剂盒(R&D systems，DYC1768)和人磷酸-ErbB3 Duoset ELISA试剂盒(R&D systems，DYC1769)测定。试剂盒测定了EGFR、ErbB2或ErbB3的整个细胞酪氨酸磷酸化。按照生产商的说明书，每孔加入50μl裂解物来进行测定。

结果：

结果概括于表3中。

表3.化合物(I)对p-EGFR(KB细胞中)及p-ErbB2和p-ErbB3(MCF-7细胞中)的活性

^*置信区间比

表3显示化合物(I)是这些细胞中磷酸-EGFR、磷酸-ErbB2和磷酸-ErbB3的有效抑制剂。

b)基础或HRG刺激的MCF-7细胞增殖测定中的化合物(I)

方法：

按常规将MCF-7细胞培养在DMEM(不含酚红)+10％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺中。

将细胞以4000个细胞/孔接种在96孔板的DMEM培养基(含有1％炭/葡聚糖处理的FBS和2mM谷氨酰胺)中，使细胞定居4小时后，分别用浓度为0-3μM和0-10μg/ml的化合物(I)处理。处理后2小时，以将MCF-7细胞增殖增加到最大值的90％(ED₉₀)所需要的浓度将细胞用10ng/ml HRG孵育。基础孔未用配体刺激。孵育4天后，使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)测定法对细胞成活力进行了评价。

在HRG刺激的化合物处理的细胞的IC₅₀测定前，从各个读数减去96小时的平均基础生长，对通过HRG信号传导驱动的增殖进行了评价。基础IC₅₀值用GI₅₀表示，即从96小时后的读数减去第0天板的细胞数(基线读数)。

结果：

将结果概括于表4和表5中。

表4 HRG刺激的增殖IC₅₀值

 化合物  几何平均IC₅₀  95％CIR 化合物(I)  0.061μM  2.421

表5基础增殖GI₅₀值

 化合物  几何平均GI₅₀  95％CIR 化合物(I)  1.094μM  4.423

在KB细胞中，用与EGFR特异性结合的EGF刺激引起磷酸化从而激活该受体。同样，在MCF-7细胞中，与ErbB3特异性结合的HRG引起ErbB3与ErbB2形成异二聚体，两个受体都被磷酸化并被激活。表4显示化合物(I)是HRG刺激的MCF-7增殖的有效抑制剂。相信对增殖的这些作用是由于这些化合物在ErbB2/ErbB3异二聚体上的活动所致，化合物(I)是该异二聚体的更为有效的抑制剂。

MCF-7基础测定表示其中没有刺激增加或erbB2/erbB3异二聚化活化的情况。表5显示即使在这样的条件下，化合物(I)仍抑制MCF-7。

实施例1

化合物(I)富马酸氢盐A型的制备：2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺二-[(2E)-丁-2-烯二酸酯]A型

在保持温度＞65℃的情况下，将富马酸(2.7g，23.22mmol)的甲醇(95ml)溶液加入2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(化合物(I))(5.62g，89％重量/重量，10.55mmol)与异丙醇(100ml)的混合物中。将混合物在回流下加热1小时后澄清。在90分钟内使反应混合物冷却至30℃，并保持30分钟以形成结晶。在2小时内使反应物冷却至0℃并保持1小时后，经过滤分离。滤饼用冷异丙醇(2x 10ml)洗涤两次后，在50℃下真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(5.84g，78％)；¹H NMR谱：(DMSO)1.85(m，1H)，2.08(m，1H)，2.50(m，1H)，2.66(d，3H)，2.83(m，1H)，3.05(s，2H)，3.96(s，3H)，4.58(m，1H)，6.64(s，4H)，7.23(s，1H)，7.28(m，1H)，7.46(ddd，1H)，7.55(m，1H)，7.70(宽四重峰，1H)，7.85(s，1H)，8.38(s，1H)。

实施例2

化合物(I)富马酸氢盐A型的制备：2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺二-[(2E)-丁-2-烯二酸酯]A型

在保持温度＞65℃的情况下，将富马酸(1.4kg，12.1mol)的甲醇(26.6kg)溶液加入2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(2.93kg，84.8％重量/重量，5.24mol)与异丙醇(39kg)的混合物中。加入冲洗管线的甲醇(a line wash of methanol)(3.6kg)。将混合物在回流下加热1小时后澄清，之后是冲洗管线的甲醇(7kg)。将反应混合物在大气压下蒸馏除去47kg馏出液。加入异丙醇(15.8kg)，将反应混合物蒸馏除去15.6kg馏出液。蒸馏期间出现结晶。加入异丙醇(21kg)，在8小时内使反应物冷却至0℃，保持1小时后经过滤分离。滤饼依次用冷的50∶50异丙醇∶MeOH(4k g)和冷异丙醇(4k g)洗涤后，在50℃下真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(3.64kg，98％)；¹H NMR谱：(DMSO)1.85(m，1H)，2.08(m，1H)，2.50(m，1H)，2.66(d，3H)，2.83(m，1H)，3.05(s，2H)，3.96(s，3H)，4.58(m，1H)，6.64(s，4H)，7.23(s，1H)，7.28(m，1H)，7.46(ddd，1H)，7.55(m，1H)，7.70(宽四重峰，1H)，7.85(s，1H)，8.38(s，1H)。

实施例3

化合物(I)富马酸氢盐A型的制备：2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺二-[(2E)-丁-2-烯二酸酯]A

将2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(化合物(I))(60.19g，88％重量/重量，111.8mmol)溶于乙酸乙酯(1550ml)。溶液经过滤澄清，过滤器用乙酸乙酯(53ml)洗涤。使溶液冷却至40℃。然后在1小时内加入富马酸(26.60g，257.0mmol)与异丙醇(408ml)的澄清溶液。然后用异丙醇(37ml)洗涤用来澄清富马酸溶液的过滤器。在40℃下保持1小时后，使反应物在1小时内冷却至20℃。将反应混合物保持13.5小时后，经过滤分离产物。滤饼用乙酸乙酯(82ml)∶异丙醇(24ml)洗涤两次，然后在40℃下真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(72.32g，90％)；¹H NMR谱：(DMSO)1.85(m，1H)，2.08(m，1H)，2.50(m，1H)，2.66(d，3H)，2.83(m，1H)，3.05(s，2H)，3.96(s，3H)，4.58(m，1H)，6.64(s，4H)，7.23(s，1H)，7.28(m，1H)，7.46(ddd，1H)，7.55(m，1H)，7.70(宽四重峰，1H)，7.85(s，1H)，8.38(s，1H)。

实施例4

化合物(I)富马酸氢盐A型的制备：2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺二-[(2E)-丁-2-烯二酸酯]A型

将2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(化合物(I))(2.75g，假定100％重量/重量，5.80mmol)溶于乙酸乙酯(94ml)和异丙醇(14ml)中。将溶液蒸馏，从而收集25.2ml馏出液。使溶液冷却至40℃。然后在1小时内加入富马酸(1.38g，11.90mmol)与异丙醇(21ml)的澄清溶液。加入化合物(I)富马酸氢盐A型晶种(3.7mg，5.3μmol)。然后，用异丙醇(2ml)洗涤用来澄清富马酸溶液的过滤器。在40℃下保持1小时后，使反应物在2小时内冷却至20℃。将反应混合物保持15小时后，经过滤分离产物。滤饼用乙酸乙酯(4.3ml)∶异丙醇(1.2ml)洗涤两次，然后在40℃下真空干燥，得到为白色固体的标题化合物(72.32g，90％)；¹H NMR谱：(DMSO)1.85(m，1H)，2.08(m，1H)，2.50(m，1H)，2.66(d，3H)，2.83(m，1H)，3.05(s，2H)，3.96(s，3H)，4.58(m，1H)，6.64(s，4H)，7.23(s，1H)，7.28(m，1H)，7.46(ddd，1H)，7.55(m，1H)，7.70(宽四重峰，1H)，7.85(s，1H)，8.38(s，1H)。

实施例5

化合物(I)富马酸氢盐A型的制备：2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺二-[(2E)-丁-2-烯二酸酯]A型

将2-[4-({4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}氧基)哌啶-1-基]-N-甲基乙酰胺(化合物(I))(1g，1.86毫摩尔)和富马酸(0.44g，3.81毫摩尔)悬浮于水(4.4g)中，加热至85℃。使反应混合物以1℃/分钟冷却至60℃，当温度为77℃时加入化合物(I)A型晶种。所得固体经过滤分离，用丙酮洗涤两次(0.70g/洗涤)后，在40℃真空炉中干燥，得到标题化合物(0.89g，收率68％)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d ppm 1.84(m，2H)2.08(m，2H)2.55(m，2H)2.63(d，J＝4.7Hz，3H)2.86(m，2H)3.12(s，2H)3.93(s，3H)4.59(tt，J＝7.8，3.7Hz，1H)6.62(s，4H)7.21(s，1H)7.27(td，J＝8.1，1.3Hz，1H)7.49(m，2H)7.86(m，2H)8.36(s，1H)9.63(br.s.，1H)。

化合物(I)富马酸氢盐A型的性质

化合物(I)富马酸氢盐A型是自由流动粉体。化合物(I)富马酸氢盐的X射线粉末衍射(图4)表明该材料为晶体。得自A型XRPD图的最主要的峰如上文中所述，并列于表1中。示差扫描量热图显示在210.4℃开始的单一熔融吸热谱线(图5)。通过热解重量分析法未观察到明显的重量减轻(图6)。动态水蒸气吸附表明化合物是非吸湿性的，吸收＜0.5％水分，高达95％相对湿度，无滞后迹象(图7)。

化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐A型的水溶性比较

表4详细列出了化合物(I)在多种水性缓冲液中的溶解度(48小时，25℃)。化合物(I)在水性缓冲液中具有依赖于pH的溶解度，低pH下的溶解度高(27.2mg/ml，pH 2.7)，高pH下的溶解度低(1μl/ml，pH 7.9)。在pH 6以下，化合物(I)的溶解度出现明显增加。因此，预期在低pH值下化合物(I)的溶解速率快，而预期在pH 6以上，溶解速率慢。

化合物(I)在水中的溶解度(48小时，25℃)为1μg/ml(pH 7.0)。相比之下，化合物(I)富马酸氢盐A型在水中的溶解度(48小时)为22.5mg/ml(pH3.5)。还在多种水性缓冲液中测定了化合物(I)富马酸氢盐A型和化合物(I)的固有溶解速率。化合物(I)富马酸氢盐A型在pH 6.5磷酸缓冲液中具有明显较高的固有溶解速率，如表6所示。

表6

37℃下化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐A型在水性缓冲液中的固有溶解速率

¹用光导纤维探头测定，λ＝335nm，盘大小4mm，温度37℃

SGF＝人工胃液

在狗中比较化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐A型的药代动力学研究

将两种化合物作为直接压制片给予狗，压制片含有100mg化合物(I)游离碱或其等同量的富马酸氢盐，组成如下：

25％重量/重量化合物(I)(或其等同量的富马酸氢盐)；

10％重量/重量微晶纤维素(Avicel 102)；

4％重量/重量交联羧甲纤维素钠(AcDiSol)；

1％重量/重量十二烷基硫酸钠；

加乳糖至99％重量/重量

加硬脂酸镁至100％重量/重量。

每片折合：

151mg化合物(I)；

60.4mg Avicel；

24.16mg AcDiSol；

6.04mg十二烷基硫酸钠；

356.36mg乳糖；和

6.04mg硬脂酸镁。

片剂总重量为604mg。

在狗体内研究开始之前，对固体剂型的性能进行了体外评价。以100mg(游离碱等同量)化合物(I)负载计，固体剂型在pH 4.5溶媒(最接近漏槽条件)中的溶解显示在45分钟后释出＞90％(表7)，表明这些剂型适合用于狗PK研究。

表7.化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐A型在pH 4.5柠檬酸盐缓冲液中的％溶解

                                                        

化合物                     在45分钟时的％溶解

                                                        

化合物(I)                  93.6

化合物(I)富马酸氢盐A型     100.3

                                                        

对口服给予狗的片剂组合物与化合物(I)剂量为20mg的静脉注射剂的性能进行了比较，注射剂中化合物(I)为4mg.mL^-1，溶于注射用水，并用25％重量/体积羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)/注射用水补足体积，使用1MHCl调节pH至4。

狗研究的结果见表8。

表8 雄性比格尔犬中口服给予化合物(I)和化合物(I)富马酸氢盐A型及静脉内给予化合物(I)的药代动力学参数一览(n＝4，平均值±SE)

¹以直接压制片给药；

C_max＝血浆浓度峰值

T_max＝至最大血浆浓度的时间。

AUC＝曲线下面积

Cl＝清除率

Hbf＝肝血流量

Vss＝稳定状态下的体积分布

表8显示按95％置信度用配对t检验(n＝4)测定，化合物(I)富马酸氢盐A型的生物利用度和血浆浓度峰值(C_max)显著好于化合物(I)的生物利用度和血浆浓度峰值(生物利用度，113％相对于64％)。

实施例6-21.晶体化合物(I)富马酸氢盐B-Q型

XRPD分析

采用Bruker D-8 Discover衍射仪和Bruker’s General Detector System(GADDS，4.1.20版)采集XRPD图。使用细聚焦管(40kV，40mA)、镜和0.5mm双针孔准直仪产生Cu Kα辐射的入射微光束。在分析前，对硅标准品(NIST SRM 640c)进行了分析以验证Si 111峰位置。把样品塞入3μm厚的薄膜之间形成轻便的圆盘型样本。将制备好的样本装到绑在平移台上的夹子中。使用摄像机和激光定位目标区域以与透射几何的入射束相交。对入射束进行扫描和rastered以优化取向统计。用光束阻挡器使来自入射束的空气散射减至最低。衍射图使用置于距样品15cm处的Hi-Star平面检测器采集，应用GADDS处理。使用0.04°2θ的步长对衍射图中的GADDS图像的强度进行积分。积分图显示衍射强度与2θ呈函数关系。

可变温度-XRPD

可变温度XRPD图(VT-XRPD)采用配备Anton Paar HTK 1200高温台的Shimadzu XRD-6000 X射线粉末衍射仪采集。在分析前，对硅标准品(NIST SRM 640c)进行了分析以验证Si 111峰位置，对香草醛和磺胺吡啶标准品进行了分析以验证台温。将样品装入陶瓷夹，以3°/分钟(0.4秒/0.02°步长)从2.5°到40°2θ进行了分析。

XRPD-微板分析

XRPD图用Bruker D-8 Discover衍射仪和Bruker’s General Area Diffraction Detection System(GADDS，4.1.20版)采集。使用细聚焦管(40kV，40mA)、镜和0.5mm双针孔准直仪产生Cu Kα辐射的入射束。通过将孔板绑在平移台上并移动各样品与入射束相交对样品进行定位以用于分析。应用透射几何学对样品进行了分析。分析期间在样品上对入射束进行扫描和rastered以优化取向统计。使用光束截捕器使来自低角度入射束的空气散射减至最小。衍射图采用置于距样品15cm的Hi-Star平面检测器采集，并应用GADDS处理。用0.04°2θ的步长对衍射图中的GADDS图像的强度进行了积分。积分图显示衍射强度与2θ呈函数关系。在分析前，对硅标准品进行了分析以验证Si 111峰位置。

实施例6.化合物(I)富马酸氢盐B型的制备

将足够的化合物(I)富马酸氢盐A型加入水中来制备浆状物，使得存在过量的固体。然后在4℃下，将混合物在密封小瓶中搅拌7天。经真空过滤分离固体并对固体进行分析。所得B型的XRPD图见图8。B型最主要的X射线粉末衍射峰见表9：

表9

认为B型为水合物，可能为四水合物或五水合物。

实施例7.化合物(I)富马酸氢盐C型的制备

将足够的化合物(I)富马酸氢盐A型加入IPA/水(90/10体积/体积)中来制备浆状物，使得存在过量的固体。然后在15℃下，将混合物在密封小瓶中搅拌6天。经真空过滤分离固体并对固体进行分析。所得C型的XRPD图见图9。C型最主要的X射线粉末衍射峰见表10：

表10

认为C型是混合的水合物/溶剂化物形式。

实施例8.化合物(I)富马酸氢盐D型的制备

在乙腈/水50/50中制备化合物(I)富马酸氢盐的溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将2-丙醇/水(90/10，体积/体积)加入孔中。对板进行超声处理，然后真空蒸发溶剂。所得D型的XRPD图见图10。D型最主要的X射线粉末衍射峰见表11：

表11

实施例9.化合物(I)富马酸氢盐E型的制备

在乙腈/水50/50(体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，把四氢呋喃加入孔中。对板进行超声处理，然后真空蒸发溶剂。所得E型的XRPD图见图11。E型最主要的X射线粉末衍射峰见表12：

表12

实施例10.化合物(I)富马酸氢盐F型的制备

在高温下，在四氢呋喃中制备化合物(I)富马酸氢盐饱和溶液，在仍温热时通过0.2μm尼龙滤器过滤到预热的小瓶中。覆盖小瓶，使之慢慢冷却至室温。注意固体存在与否。如果不存在固体，或者如果认为固体的量对于XRPD分析太少，则将小瓶放入冰箱中。再次留意固体是否存在，如果全无固体，则将小瓶放入冷冻室。在分析前，将形成的固体经过滤分离并将其干燥。所得F型的XRPD图见图12。F型最主要的X射线粉末衍射峰见表13。

表13

实施例11.化合物(I)富马酸氢盐G型的制备

在乙腈/水 50/50中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将2-丙醇/水 90/10加入孔中。对板进行超声处理，然后真空蒸发溶剂。所得G型的XRPD图见图13。G型最主要的X射线粉末衍射峰见表14。

表14

实施例12.化合物(I)富马酸氢盐H型的制备

在丙酮/水(95/5，体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，并在等分加入间隔期间进行超声处理以助于溶解。通过目视观察来判断，一旦混合物达到完全溶解，便将溶液通过0.2μm尼龙滤器过滤。在环境条件下，将经过滤的溶液在未加盖小瓶中蒸发。分离并分析形成的固体。所得H型的XRPD图见图14。H型最主要的X射线粉末衍射峰见表15：

表15

实施例13.化合物(I)富马酸氢盐I型的制备

在环境温度下，在甲醇中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液。然后在环境温度下，将溶液过滤到甲苯中。所得固体经过滤分离，干燥后进行分析。所得I型的XRPD图见图15。I型最主要的X射线粉末衍射峰见表16：

表16

实施例14.化合物(I)富马酸氢盐J型的制备

在环境温度下，在甲醇中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液。然后在环境温度下，将溶液过滤到过量的庚烷中。所得固体经过滤分离，干燥后进行分析。所得J型的XRPD图见图16。J型最主要的X射线粉末衍射峰见表17：

表17

实施例15.化合物(I)富马酸氢盐K型的制备

在乙腈/水(50/50 体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将氟苯加入孔中。对板进行超声处理，然后在环境条件下蒸发溶剂。所得K型的XRPD图见图17。K型最主要的X射线粉末衍射峰见表18：

表18

实施例16.化合物(I)富马酸氢盐L型的制备

在乙腈/水 50/50(体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇加入孔中。对板进行超声处理，然后在环境条件下蒸发溶剂。所得L型的XRPD图见图18。L型最主要的X射线粉末衍射峰见表19：

表19

实施例17.化合物(I)富马酸氢盐M型的制备

在乙腈/水(50/50 体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将2-丙醇/水(90/10 体积/体积)加入孔中。对板进行超声处理，然后在环境条件下蒸发溶剂。所得M型的XRPD图见图19。M型最主要的X射线粉末衍射峰见表20：

表20

实施例18.化合物(I)富马酸氢盐N型的制备

在乙腈/水(50/50体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将丙酮/水(60/40体积/体积)加入孔中。对板进行超声处理，然后在4℃下蒸发溶剂。所得N型的XRPD图见图20。N型最主要的X射线粉末衍射峰见表21：

表21

实施例19.化合物(I)富马酸氢盐O型的制备

在乙腈/水(50/50体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将乙醇/水(30/70 体积/体积)加入孔中。对板进行超声处理，然后在4℃下蒸发溶剂。所得O型的XRPD图见图21。O型最主要的X射线粉末衍射峰见表22：

表22

实施例20.化合物(I)富马酸氢盐P型的制备

在乙腈/水(50/50 体积/体积)中制备化合物(I)富马酸氢盐溶液，将等分量加入微板孔中。将溶剂蒸发后，将2-丙醇/水(90/10 体积/体积)加入孔中。对板进行超声处理，然后在4℃下蒸发溶剂。所得P型的XRPD图见图22。P型最主要的X射线粉末衍射峰见表23：

表23

实施例21.化合物(I)富马酸氢盐Q型的制备

在可变温度XRPD分析期间，当将B型加热至150℃时观察到Q型。Q型的XRPD图见图23。Q型最主要的X射线粉末衍射峰见表24：

表24

实施例22.化合物(I)富马酸氢盐的片剂制剂

将下述粉状成分加入混合器中，混合产生均匀分布的化合物(I)富马酸氢盐。制备粘合剂溶液，并加入粉体中，进一步混合直到形成合适的湿物料。将湿物料过筛，将所得粒料干燥至适当的湿量(例如小于2％重量)。将经干燥的粒料通过适当大小筛，与硬脂酸镁混合后，采用常规压片设备压制成片芯。然后采用常规多孔转鼓包衣机，将压成的片芯用薄膜包衣组分的含水悬浮液包衣。

按上述方法制备的含有等同于2.5mg、10mg、40mg和100mg化合物(I)的化合物(I)富马酸氢盐A型的薄膜包衣片见表25。

表25

¹.片剂强度是指片剂中存在的化合物(I)游离碱的等同量。

².在制成制剂前将化合物(I)富马酸氢盐微粉化，得到小于约5μm的平均粒径。

³.由Colorcon供应的Opadry White(03B28460)包括羟丙甲纤维素、聚乙二醇300和二氧化钛。

⁴.纯水在薄膜包衣期间用作溶剂/载体流体，在包衣过程中除去。

合适的制备方法概述如下：