一种粒毛盘菌多糖新的医药用途

摘要

本发明公开了一种粒毛盘菌新的医药用途，即粒毛盘菌多糖在制备抗疲劳药物中的应用。药效学证明，经纯化的粒毛盘菌多糖可显著延长小鼠负重游泳时间，明显提高小鼠肝糖元和肌糖元的含量，提高血清乳酸脱氢酶活力，显著降低小鼠剧烈运动后血尿素氮含量，具有增强运动耐力、缓解体力疲劳的作用。因此它能用于制备抗疲劳药物。粒毛盘菌多糖无毒副作用，可根据需要制成各类剂型，服用方便。

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种生物活性物质粒毛盘菌多糖在制药领域中的应用，具体地说是粒毛盘菌多糖在制备抗疲劳药物中的应用。

二、背景技术

疲劳是极其复杂的生理状态，一般指机体生理过程不能持续其功能在特定水平上或不能维持预定的运动强度致使身体和精神状态的下降，从而导致工作能力和工作效率的衰退。因此，消除疲劳，提高机体的潜在机能和生命力是医学工作者的主要任务之一。

目前在临床上用于治疗运动性疲劳的药物包括化学药品、生物制品和中药等。其中化学药品和生物制品在提高运动能力、延缓疲劳发生和消除疲劳方面确有较好的效果，但是由于某些这类药物含有兴奋剂等可能给机体造成危害的成分而使其应用受到了很大的限制。在寻找更安全和有效的抗疲劳药物的研究中，真菌多糖由于其副作用少，不含对人体有害的兴奋剂成分而成为近年来抗疲劳药物研究的热点。

真菌多糖是一类重要的生物活性物质，是目前公认的有较高疗效的免疫增强剂，研究发现其还具有明显的抗衰老、消除人体过剩的自由基，抗肿瘤等药理功能，在食品加工、医药、日用化工等领域具有重要的应用。粒毛盘菌属(Lachnum Retz.)是世界性分布的一类重要真菌资源，在深层培养条件下能产生多种生物活性物质，也是近几年来发现的具有重要经济价值的一类真菌。

粒毛盘菌多糖的制备多有研究，如浙江大学学报于2009年公开了一种粒毛盘菌多糖的提取方法，并对提取的多糖进行了初步的纯化。申请人也就粒毛盘菌和萼状粒毛盘菌多糖提取工艺进行了深入的研究，并就多糖的纯化分级方法申请了发明专利(CN101649338A)。

三、发明内容

本发明的目的在于提供一种新的抗疲劳药物以满足人们对该类药物的需要，所要解决的技术问题是确立粒毛盘菌多糖抗疲劳的药理作用。

本发明的技术方案是粒毛盘菌多糖的制备，多糖水溶液的配制并通过小鼠抗疲劳作用的药理实验，以确立粒毛盘菌多糖的抗疲劳的作用。

本发明所称的粒毛盘菌多糖新的医药用途就是经纯化的粒毛盘菌多糖在制备抗疲劳药物中的应用。

所述的纯化是指粒毛盘菌液态发酵后分离得到的发酵液依次经浓缩、95％乙醇醇析沉淀、洗涤、蒸馏水复溶后再脱蛋白、脱色和蒸馏水透析处理。最后真空干燥得到的多糖粉末称纯化的粒毛盘菌多糖。

本发明的粒毛盘菌多糖可以按药剂学的常规制备方法加工成口服或注射的抗疲劳药物制剂，即将有效量的粒毛盘菌多糖与药用辅料制备成各种剂型供临床用，如片剂、胶囊、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂等。

本纯化的粒毛盘菌多糖经药效学实验表明可显著延长小鼠负重游泳时间，明显提高小鼠肝糖元和肌糖元的含量，提高血清乳酸脱氢酶活力，显著降低小鼠剧烈运动后血尿素氮含量，具有增强运动耐力、缓解体力疲劳的作用。

四、具体实施方式

(一)粒毛盘菌多糖制备

采用5L自控发酵罐液态深层发酵，培养基采用发酵培养基，发酵培养基为马铃薯浸汁20％、葡萄糖20g/L、酵母膏5g/L、硫酸锰0.075g/L，大豆油5g/L，装料系数为0.7，接种量为15％，培养温度为25℃，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵时间为7天。将发酵液抽滤得发酵液。所述的马铃薯浸汁是200g马铃薯破碎后加入1000mL水，沸腾15分钟后冷却、分离得到的马铃薯汁液。

将发酵液浓缩到原来体积的1/3，加3倍体积95％的乙醇于4℃醇析24h，醇析液5000r/min离心10min，去上清，沉淀用无水乙醇、丙酮洗涤2～3遍，然后用蒸馏水溶解，Sevage法脱蛋白，30％H₂O₂脱色，对流水、蒸馏水透析48h，真空干燥得纯化的多糖粉末。

(二)粒毛盘菌多糖溶液的制备

粒毛盘菌多糖粉末用0.9％生理盐水配制成5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL的水溶液，给药体积为20mL/kg。

(三)粒毛盘菌多糖对小鼠抗疲劳的作用

动物：昆明小鼠，雌雄各半，体重22±2g，随机分组。

试剂盒：肌糖元及肝糖元测定试剂盒、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)测试盒、血尿素氮测(ureanitrogen，BUN)试盒南京建成生物工程研究所。

方法：小鼠于实验环境下适应3d后随机分成4组，每组15只。正常对照组每天灌胃0.9％生理盐水，其余各组连续灌胃5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL的多糖水溶液，灌胃体积为0.1mL/(10g bw)。按照小鼠体重给予不同体积的受试物，自由摄食和饮水，连续灌喂21d。

相关指标测定：

(1)负重游泳实验及力竭游泳时间的测定

小鼠连续灌喂21d，末次灌喂30min后，每组机抽取10只，尾部负重5％体重的铅丝，置于游泳箱中游泳，水温(25±1)℃记录开始游泳至力竭沉入水面下8s不能浮出面为止的时间，即为小鼠的力竭游泳时间。

(2)肝糖元及肌糖元测定

每组随机选取10只小鼠，末次灌胃前空腹12h，灌胃30min后，置于游泳箱中游泳，水温30℃，20min后颈椎脱臼处死，解剖取肝脏和小鼠后腿肌肉，生理盐水漂洗，滤纸吸干，称重，然后进行肌糖元及肝糖元测定。具体操作按肌糖元及肝糖元测定试剂盒说明书。

(3)乳酸脱氢酶(LDH)测定

末次灌胃前空腹12h，灌胃30min后，置小鼠在游泳箱中游泳20min，眼眶采血，于4℃6000r/min离心10min分离出血清，冰箱保存(4℃)、备测。具休操作按乳酸脱氢酶测定试剂盒说明书。

(4)血尿素氮(BUN)测定

取血步骤同(3)，具体操作按照血尿素氮测定试剂盒说明。

(四)结果

灌胃处理后，各组小鼠游泳时间和肝糖元、肌糖原、血尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)等生化指标测定结果见表1。由表1可以看出，各粒毛盘菌多糖组小鼠负重游泳时间、糖元储备量、血清乳酪脱氢酶活力均高于正常对照组，血尿素氮含量则低于正常对照组。

表1粒毛盘菌多糖抗疲劳实验结果(n＝10)

注：与空白对照组比较，^*P＜0.01，^**P＜0.05。

实验过程中对小鼠体重进行称量。比较发现，在饲料量不加控制而自由摄食的情况下，各多糖剂量组对小鼠体重增长均有不同程度影响。由表2可知，空白对照组小鼠体重增长率最大，而多糖高剂量组小鼠体重增长率最小，说明盘菌多糖对小鼠体重的增长具有显著的抑制作用。

表2粒毛盘菌多糖对小鼠体重增长的影响

(五)讨论

常用的体力疲劳的评价方法主要有两类：一类是运动耐力实验。运动耐力是反映机体疲劳最直接、最客观的指标，游泳实验是运动耐力测定方法中常用、而且简单的一种方法，实验结果较准确，能客观的反映机体的体能。体力疲劳的另一类评价方法是生化指标检测。在反映疲劳的生化指标中，肌糖元含量、肝糖原含量、血尿素氮和乳酸脱氢酶含量等生化指标的改变最具代表性，也是检测疲劳最常用的指标。本实验中通过小鼠负重游泳实验可知粒毛盘菌多糖中高剂量组可显著提高小鼠的运动耐力，通过生化指标测定得知粒毛盘菌多糖能提高小鼠肝糖原和肌糖元的含量，提高血清乳酸脱氢酶活力，显著降低小鼠剧烈运动后血尿素氮含量，显示粒毛盘菌多糖具有一定的抗疲劳作用。

(六)粒毛盘菌多糖制剂的加工

1、片剂加工：

用湿法制粒压片法加工普通片剂1000片。

取过80～100目筛的粒毛盘菌多糖500g、稀释剂糊精290g混合均匀后加适量乙醇混合均匀制得软材，软材过筛得到湿颗粒，干燥后整粒，最后加入润滑剂硬脂酸镁10g混匀后压片。

片重0.8g，多糖含量0.5g/片。

2、胶囊剂加工

取稀释剂干淀粉250g，助流剂滑石粉45g，润湿剂十二烷基硫酸钠5g混合均匀与500g粒毛盘菌多糖混合均匀后装1^#空心胶囊1000粒。