紫茎泽兰在制备兽用药或饲料添加剂中的应用

摘要

本发明涉及紫茎泽兰或紫茎泽兰提取物在制备治疗呼吸系统疾病的兽用药或制备提高免疫力药物中的应用，所述治疗呼吸系统疾病包括消炎、止咳、祛痰、治疗流感或传染性支气管炎；还涉及紫茎泽兰或其提取物作为畜禽饲料添加剂方面的应用。所述应用实现了对紫茎泽兰进行有效的开发利用，变害为利，具有重大的经济和社会意义。

说明书

技术领域

本发明涉及植物紫茎泽兰的应用，具体的涉及紫茎泽兰或其提取物在制备兽用药或保健饲料添加剂中的用途。

背景技术

紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)属菊科，为多年生、丛生状常绿半灌木，俗称飞机草、魔鬼草。原产于南美洲墨西哥，20世纪40年代由缅甸、泰国一带传入我国云南，70年代开始在我国酿成草害。目前，紫茎泽兰已在云南、四川、贵州广泛分布，在重灾区生物量巨大，但到目前为止还没有行之有效的控制体系。对紫茎泽兰进行有效的开发利用，变害为利，具有重大的经济和社会意义。

近年来，四川、云南等地对紫茎泽兰已经进行了一些开发利用，但仅限于一些粗加工，主要是用于生物燃料、压成纸板、沼气等，还没有充分认识到它的药理功能。紫茎泽兰为有毒杂草，马、牛、羊及小鼠食用后有中毒现象的报道。发明人在研究紫茎泽兰的毒素分布中发现，其毒素主要存在于叶片中，其他部位含量很少或检测不到；且通过微生物发酵可以有效脱除紫茎泽兰叶片中的毒素。因此，由于紫茎泽兰资源丰富，且限制其开发的毒性问题可以解决，其开发利用大有可为。目前针对紫茎泽兰的研究发现，该植物中含有多种生物活性成分，其中所含单萜、倍半萜及其衍生化合物表现出明显的杀虫、拒食、抑菌活性，所含植物倍半萜、甾体、三萜、黄酮、苯丙素及其衍生化合物具有较高的抗菌、消炎、抗癌活性。了解紫茎泽兰的药理作用，可大大提高其开发利用的附加值。

随着集约化养殖规模的不断扩大，畜禽的呼吸系统疾病、消化系统疾病等各方面的疾病比较严重。就呼吸系统疾病而言，近年来的禽流感、猪流感等在影响养殖业的同时，也给人类的健康带来极大的挑战。抗生素的滥用，使耐药菌株的问题越来越严重，同时也造成大量的药物残留，严重影响畜禽肉类的品质。采用具有药理作用的杂草植物药治疗畜禽呼吸系统疾病可以避免以上问题，同时成本低，来源广泛，并能化害为利，但目前并未见有报道。

发明内容

本发明的目的在于针对上述领域中存在的不足，提供紫茎泽兰在制备治疗呼吸系统疾病兽用药或作为畜禽饲料添加剂方面的应用。使其中毒素(泽兰酮类成分)含量降到占干草重量的0.2％以下后再进行提取。

紫茎泽兰或紫茎泽兰提取物在制备治疗呼吸系统疾病的兽用药或制备提高免疫力药物中的应用。

所述治疗呼吸系统疾病包括消炎、止咳、祛痰、治疗流感或传染性支气管炎。

所述紫茎泽兰提取物用于制备口服制剂，所述口服制剂为胶囊剂、散剂或颗粒剂。

紫茎泽兰或其提取物作为畜禽饲料添加剂方面的应用。

所述饲料添加剂添加量占动物日粮的0.1-20％。

以紫茎泽兰提取物作为饲料添加剂的添加量占动物日粮的0.01-5％，以紫茎泽兰作为饲料添加剂的添加量占动物日粮的0.5-20％，所述饲料用于预防或治疗呼吸系统疾病。

所述紫茎泽兰为紫茎泽兰植物地上部分；所述紫茎泽兰提取物，通过以下方法制备：原料为紫茎泽兰的地上部分，采收后阴干、粉碎、提取、合并提取液、浓缩干燥，即得紫茎泽兰提取物。

所述提取之前采用复合微生物发酵脱毒，所述复合微生物包括植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌等，使其中毒素(泽兰酮类成分)含量降到占干草重量的0.2％以下后再进行提取。在作为口服药剂使用时，事先进行脱毒可降低紫茎泽兰叶片中含有的少量毒素引起的副作用。

所述提取为用水或有机溶剂或含水有机溶剂，采用浸提或超声提取或加热回流提取1-3次，每次溶剂体积用量为药材重量的3-10倍；所述浓缩干燥为减压回收溶剂至干或浓缩至无醇味后冷冻干燥或喷雾干燥。

所述有机溶剂为乙醇或甲醇或二者混合物，所述含水有机溶剂是有机溶剂体积浓度为10-95％的水溶液，所述浸提时间为12-24h，所述超声提取其时间为10-30min，所述加热回流提取其时间为1-3h。

为更好的理解本发明，下面用紫茎泽兰的提取物的药理实验及结果来说明紫茎泽兰的新用途：

取紫茎泽兰地上部分粗粉1Kg，室温下浸提三次，每次24h，乙醇用量分别为8L、6L和6L，合并滤液，减压回收溶剂至干，得紫茎泽兰提取物供下述药理实验使用，得率为5.0％，总黄酮含量为21.3％。用紫茎泽兰或其他方法得到的紫茎泽兰提取物也可达到同样的效果，区别仅在于用量的不同。动物实验数据用x±SD表示，数据采用SPSS11.3统计软件进行一维方差分析。

(1)紫茎泽兰提取物急性毒性实验

昆明种小鼠40只，雌雄各半，体重20±2g，随机分成实验组和对照组，每组20只。禁食14h后。实验组按小鼠体重剂量5g/Kg一次性给予紫茎泽兰提取物(相当于原植物干重小鼠给药量为20g/Kg)，每只鼠灌胃0.5mL，对照组每只小鼠给予溶剂1％吐温-80水溶液0.5mL，给药后连续观察一周，发现实验组除在给药后的两个小时内表现出活动略有减少，之后逐渐恢复正常外，整个实验周期实验组和对照组均生长正常，无中毒、死亡及其他异常现象。按食品毒理学安全性评价实验结论，紫茎泽兰一次投药量大于5000mg/kg，无死亡，可认为该提取物毒性较低，无需做致死量精确测定。

通过毒性实验证明，紫茎泽兰及其提取物的毒性很低，其乙醇提取物对于小鼠的LD50＞5g/Kg，相当于原植物LD50＞20g/Kg，属于实际无毒类植物。

(2)紫茎泽兰提取物抗炎活性实验

1.材料

1.1药物：紫茎泽兰提取物，地塞米松片(广东华南制药厂)

1.2动物：昆明种小鼠，普通级，雌雄各半，体重20±2g；由四川大学实验动物中心提供，动物合格证号：SC×K(111)-10-2006

2.方法

小鼠耳肿胀实验：昆明种小鼠随机分为5组：空白组(给予等体积1％吐温-80％水溶液)、地塞米松阳性对照组(2mg·kg-1)、紫茎泽兰乙醇提取物3个剂量组(1g/kg，0.5g/kg，0.25g/kg，提取物混悬于1％吐温-80的蒸馏水中)，每组12只。各组小鼠灌胃给药，每天1次，连续7d。于末次给药30min后在小鼠右耳的前后两面涂布致炎剂二甲苯(100％)0.05mL/只，左耳不做任何处理。30min后处死小鼠，剪下双耳用5mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，每鼠右耳片重量减去左耳片重量即为肿胀度，统计各组小鼠的耳肿胀程度以及给药组的肿胀抑制率。

肿胀抑制率(％)＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100％

3.结果

表紫茎泽兰提取物对小鼠耳肿胀的影响(x±SD，n＝12)

  组别  剂量/g·kg-1  肿胀度/％  肿胀率抑制/％  空白对照  -  38.1±25.1  0  紫茎泽兰低剂量组  0.25  31.0±20.0  18.4  紫茎泽兰中剂量组  0.5  24.3±23.6  36.8  紫茎泽兰高剂量组  1  16.4±9.2*  57.0  地塞米松组  2.0×10-3  10.7±6.5**  72.1

注：*与空白对照组比较P＜0.05；**与空白组比较P＜0.01

紫茎泽兰提取物高中低剂量组对小鼠耳肿胀有不同程度的抑制作用。与空白对照组相比，紫茎泽兰高剂量提取物小鼠的耳肿胀程度有显著抑制作用，肿胀抑制率57％。由此可见紫茎泽兰提取物有一定的抗炎作用。

(3)紫茎泽兰提取物免疫调节实验

1.材料

1.1药物：紫茎泽兰提取物，地塞米松片(广东华南制药厂)

1.2动物：昆明种小鼠，普通级，雌雄各半，体重20±2g由四川大学实验动物中心提供，

动物合格证号：SC×K(111)-10-2006

2.方法

2.1溶血素实验

昆明种小鼠72只，随机分为6组，每组12只。正常对照组、环磷酰胺组每天按每只小鼠0.3ml灌胃生理盐水，其余各组(环+药物)每天灌胃同容量不同浓度药物，分别按紫茎泽兰提取物高、中、低剂量(1g·kg^-1、0.5g·kg^-1、0.25g·kg^-1)，阳性对照虫草灵芝口服液原液稀释一倍后按每只0.3ml给药，连续10d。于给药第6天，除正常对照组外，各组按每只小鼠腹腔注5％鸡红细胞0.2ml致敏，给药第8d，除正常组外，均皮下注射环磷酰胺0.02mg·g，连续3d，末次注射24h后，取小鼠眼球取血1ml-1.5ml，静置1h放入抗凝剂的EP管中，2000-3000r/min离心10min，取上层血清50μl，用NS稀释100倍，取此血清样2ml在冰浴下加入5％鸡红细胞1mL，再加入10％补体1ml混匀，37℃温浴1h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中终止反应，以2000r/min离心10min，，取2ml上清液于540nm测其吸光度值(A)作为血清中溶血素的指标。(另设不加血清的空白管，即5％鸡红细胞混悬液1ml，10％补体1ml混合，在37℃水浴保温1h后，于冰箱中止反应，离心，取其上清液作为比色时调0的基准)。

2.2小鼠免疫器官指数的检测

取上述2.1小鼠实验结束时摘眼球放血处死小鼠，剥取脾脏和胸腺，并将周围组织剥离干净后称其湿重

3结果

表紫茎泽兰提取物对免疫低下小鼠免疫功能的影响

注：*与空白对照组比较P＜0.05；**与空白组比较P＜0.01

紫茎泽兰提取物0.5g·kg^-1及1g·kg^-1组能显著促进免疫低下小鼠血清溶血素的形成，与空白对照组相比显著性差异，与正常组比无显著差异。1g·kg^-1剂量组能显著提高免疫低下小鼠胸腺指数和脾脏指数。实验结果表明紫茎泽兰提取物有一定的提高机体免疫功能的作用。

(4)紫茎泽兰提取物止咳实验

1.材料：同免疫调节实验

2.方法

小鼠氨水引咳实验：实验分组与给药同实验(2)，实验前禁食12h，并于末次给药后30min，将1只小鼠置于250ml的磨砂广口瓶中(预先加入含75uL氨水的棉球)，观察并记录小鼠的咳嗽潜伏期(由放入瓶中开始至产生咳嗽的时间)和2min内小鼠的咳嗽次数(表现为小鼠腹肌收缩，同时张大口，有时有咳声)。

3.结果

  组别  剂量/g·kg-1  潜伏期/s  咳嗽/次  空白对照  -  27.6±13.3  12.3±5.3  紫茎泽兰低剂量组  0.5  25.8±8.7  6.7±2.6**  紫茎泽兰中剂量组  1  33.7±17.8  7.0±4.0**  紫茎泽兰高剂量组  2  23.6±5.6  8.2±2.9*  磷酸可待因组  4×10-3  39.8±12.8*  7.2±2.0**

注：*与空白对照组比较P＜0.05；**与空白组比较P＜0.01

实验结果表明，高中低剂量的紫茎泽兰提取物均能显著抑制氨水引起的小鼠咳嗽，减少咳嗽次数，但对咳嗽的潜伏期无明显影响。

(5)紫茎泽兰提取物祛痰实验

1.材料：同免疫调节实验

2.方法

酚红排泌实验：昆明小鼠，分组方法及给药剂量同实验(2)，阳性对照组为氯化铵水溶液(小鼠给药剂量为1g/Kg)，每组10只。末次给药30min后，腹腔注射5％酚红盐溶液，0.01mL·g-1小鼠。注射30min后将小鼠处死，背位固定，分离气管，取一段气管(长1cm)放入装有1mL生理盐水的试管中，振荡30min，将冲洗液吸入另一试管内，加0.1mL 1mol·L-1NaOH，于546nm处比色，测0D值

3.结果

  组别  剂量/g·kg-1  吸光度值  空白对照  -  处理  紫茎泽兰低剂量组  0.25  空白对照  紫茎泽兰中剂量组  0.5  紫茎泽兰低剂量组  紫茎泽兰高剂量组  1  紫茎泽兰中剂量组  氯化铵组  1  紫茎泽兰高剂量组

*与空白对照组比较P＜0.05；**与空白组比较P＜0.01

与空白对照组相比，紫茎泽兰提取物0.5g·kg^-1剂量组能显著提高酚红的排泌量，表明紫茎泽兰提取物能使小鼠排痰能力增强，有一定的祛痰作用。

通过药效实验结果证明，紫茎泽兰具有抗炎、免疫、止咳、祛痰的活性。根据中兽医理论辩证论治，呼吸道疾病可视为疫毒内侵，肺胃热盛，血瘀气滞。治则抗菌消炎、止咳祛痰。紫茎泽兰具有止咳、祛痰和抗炎的作用，同时紫茎泽兰能提高体液免疫的功能，改善免疫功能低下的状况，治疗畜禽呼吸道疾病，如流感，传染性支气管炎等可达到标本兼治的目的。

本发明中紫茎泽兰及其提取物的具体应用可包括如下：

1.用于制备抗炎、止咳祛痰和提高免疫力的兽用药物。具体方法是将有效量的紫茎泽兰或其提取物与兽医药上可接受的辅料配合，制成适合不同动物使用剂型的药物。

所制备的兽用药，可用于治疗畜禽呼吸系统疾病，如流感、传染性支气管炎等。

2.用于制备抗炎、止咳祛痰和提高免疫力的动物饲料保健添加剂。具体方法是将有效量的紫茎泽兰或其提取物采用适当的分散方法与饲料配方混合，按照通用制备饲料的方法，加工制成保健饲料。

所制备的保健饲料，可用于预防、治疗畜禽呼吸系统疾病，如流感、传染性支气管炎等。

综合以上应用，即实现了对紫茎泽兰进行有效的开发利用，变害为利，又提供了一种新型的畜禽治疗呼吸系统疾病及增强免疫力的药物和饲料添加剂。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的内容完全不局限于此。

实施例1

取紫茎泽兰地上部分粗粉1Kg，室温下浸提三次，每次24h，乙醇用量分别为8L、6L和6L，合并滤液，减压回收溶剂至干，得紫茎泽兰提取物，得率为5.0％，总黄酮含量为21.3％。

实施例2

取紫茎泽兰30-40cm近顶端茎叶粗粉(毒素成分去氢泽兰酮含量为0.39％)100g，喷施0.5％的液态复合微生物(主要菌种为植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌)脱毒剂密闭处理三天后，晾干得紫茎泽兰脱毒草粉(毒素成分去氢泽兰酮含量降至0.011％)，室温下甲醇超声提取三次，每次30min，三次甲醇用量均为300mL，合并滤液，减压回收溶剂至干，得紫茎泽兰提取物，得率为7.3％，总黄酮含量为19.8％。

实施例3

取花期紫茎泽兰地上部分粗粉200g，加入蒸馏水，加热回流提取三次，每次2h，蒸馏水用量分别为1.6L、1.2L和1.2L，合并滤液，减压回收溶剂至小体积，冷冻干燥，得紫茎泽兰提取物，得率为14.6％，总黄酮含量为25.5％。

实施例4紫茎泽兰抗流感兽用胶囊

材料：紫茎泽兰提取物140g，脱毒紫茎泽兰细粉140g，羧甲基淀粉钠8g，糖粉40g。将提取物与紫茎泽兰脱毒细粉混合，加入糖粉和羧甲基淀粉钠，以PVP的乙醇液为粘合剂，制颗粒，40度干燥后于硬脂酸镁混合均匀后装胶囊，得到抗流感胶囊1000粒。

实施例5紫茎泽兰抗流感兽用颗粒剂

材料：紫茎泽兰提取物100g，紫茎泽兰脱毒细粉100g，糖粉20g，微粉硅胶20g，羧甲基淀粉钠3g，PVP 30g，乙醇200ml，硬脂酸镁2g，滑石粉2g。将提取物与紫茎泽兰脱毒草粉混合，加入糖粉和羧甲基淀粉钠，以HPMC为粘合剂，制颗粒，干燥即得颗粒剂。

实施例6肉兔生长期保健全价饲料配方

配方：玉米20％，豆粕23％，小麦15％，麸皮20％，动物蛋白粉1％，预混料1.5％，紫茎泽兰脱毒草粉18％，食盐0.5％，石粉1％。

实施例725％保健乳猪浓缩料

配方：豆粕70％，棉粕4％，血球蛋白7％，进口鱼粉10％，生长猪预混料3％，紫茎泽兰提取物0.5％，赖氨酸1％，氯化胆碱0.2％，植物油1％，石粉2％，甜味剂0.2％，盐1.1％。

实施例8肉雏鸡保健饲料

配方：玉米55％，豆粕38％，紫茎泽兰提取物0.3％，磷酸氢钙1.4％，石粉1％，食盐0.3％，油3％，添加剂1％。