血清胸腺因子在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理及化学治疗药物的保护药物方面的用途

摘要

本发明公开了将血清胸腺因子(FTS)在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理治疗及化学治疗药物的保护药物或增强免疫药物方面的用途。试验结果显示，荷瘤小鼠、W256大鼠给药各组与生理盐水组均有显著性差异且抑瘤率均大于30％，因此FTS抗肿瘤作用确实。FTS还能够多方面提高机体的免疫活性，增强机体免疫功能。FTS无毒，所产生的副作用很小，而且它的有效作用剂量范围很广，安全范围较大。在作为肿瘤物理及化学治疗药物的保护药的研究中发现，FTS对机体免疫指标具有明显的保护。因此FTS可以为临床上治疗肿瘤提供一个新的靶向和发展方向。

说明书

本申请是中国专利申请200710002734.3的分案申请。

原申请日：2007-1-25

原申请号：200710002734.3

原申请发明创造名称：血清胸腺因子在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理及化学治疗药物的保护药物方面的用途

技术领域

本发明涉及一种生物化学物质在制药工程中的新用途，更具体的是血清胸腺因子在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理及化学治疗药物的保护药物或增强免疫药方面的用途。

背景技术

癌症是引起人类死亡的主要原因之一。据世界卫生组织统计，全球每年死于癌症的病人约有五百万，而且最近几年由于我们生活环境的恶化，癌症的发病率上升，且呈现患者低龄化的趋势。可见癌症的预防和治疗十分迫切。药物治疗是癌症的主要治疗手段之一。近一个世纪以来，癌症的药物治疗取得了显著成绩，开发出了几十种抗肿瘤药物，有效地延长了患者的生命或提高了患者的生存质量。其中有些肿瘤的药物治疗效果非常显著，如药物治疗小儿急性白血病等。采用合理的给药方式或与其它治疗手段相结合，通常可改进药物的治疗效果。但肿瘤的药物研究和开发仍面临巨大的挑战，如目前肿瘤药物种类比较单一，多数为细胞毒药物，能杀死各种生长周期的肿瘤细胞，但是其副作用也很明显，原因在于这些药物在杀死肿瘤细胞的同时，也限制了这些药物疗效的发挥。另外，对多数实体瘤如肺癌、肝癌和胰腺癌等，化学药物的治疗效果常不明显，而且到目前为止，大多数化疗药物并不能有的放矢地“靶向”治疗肿瘤，往往在杀伤癌细胞的同时，对正常的组织细胞产生影响和损伤，所以在产生治疗作用的同时，常伴有不同程度的不良反应。同时还存在抗肿瘤药物的耐药性问题。上述这些问题的解决一方面要依赖于肿瘤分子生物学的深入研究，另一方面也要通过进一步研究以发现大量更多的具有抗肿瘤活性的药物，从中开发出高效低毒的新型抗肿瘤药物。

随着科学技术及人们生活的现代化，环境污染给人们的健康带来越来越多的不利影响，尤其是在疾病的诊断与治疗过程中，如在肿瘤放疗、化疗过程中，某些药物对人类具有不可低估的辐射作用。还有些带有辐射性的职业工作都无时不在侵害着人们的机体，损害着人类的健康。因此，研究开发抗辐射药物已经受到人们的极大重视。

放疗和化疗是治疗肿瘤的主要方式，但都具有明显的副作用。如环磷酰胺(CY)是临床上用于治疗恶性肿瘤和自身免疫性疾病的一种常用且有效的化疗剂，但其毒副作用较大，特别是抑制骨髓造血，致外周血中红细胞、白细胞和血小板减少，以及明显的胃肠道反应使病人食欲下降、免疫力低下。由于这些毒副作用，使CY的用量和疗程均受到了限制。为了减轻化疗剂的毒副作用，临床上常辅用一些升白细胞药，如利血生、肌酐等，但效果不理想。

胸腺是人体重要的中枢免疫器官，是T细胞成熟发育的主要器官，对于维持和发展正常的免疫应答及维持生命是必要的。它能分泌多种胸腺激素，血清胸腺因子(facteur thymic serique，FTS)就是其上皮细胞分泌的九肽。FTS由九个氨基酸Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn组成。

FTS最初由JF Bach等从猪血纯化，1977年在Nature上发表以来引起广泛关注。天然的FTS分子中含有等摩尔的锌离子，若将其络合去除其生物学活性则丧失。与天然的FTS相比，人工合成的FTS具有相同的生物学活性。华东理工大学学报第31卷第6期727-730页公开了利用化学方法合成血清胸腺因子(FTS)以及对所合成的血清胸腺因子进行了活性测定的内容。

据报道，自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化等，其胸腺的FTS分泌减少；获得性免疫缺陷综合症病人血清中的FTS含量也降低。FTS与这些病的病因有何关系尚不明确，但是给予FTS治疗后病人的免疫功能低下和免疫紊乱的状态皆可纠正。FTS似乎对多种免疫细胞都能产生作用。在胸腺内，FTS对鸟类和哺乳动物的T细胞前体的发育起重要作用，有研究证明FTS可以调节鸟类CD4⁺∶CD8⁺的比例。FTS也能增加自然杀伤细胞的活力。在鸡模型中，FTS能增加IL-2R的表达。FTS也被提出影响人IFN-γ受体表达。但是，到目前为止，国内外还未见FTS作为抗肿瘤及增强免疫药方面的应用的专利和研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供血清胸腺因子在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理治疗及化学治疗药物的保护药物或增强免疫药物方面的用途。

本发明中药理学实验采用的血清胸腺因子，可以是从动物血中自然提取的，也可以是通过化学合成方法人工合成的。

本发明的药理学实验试验中所用的材料以及试验方法：

一、材料

1、试验动物：

本发明中的试验动物为实验用昆明小鼠，体重20-22g；Wistar大鼠，体重100-120g，均为SPF级，雄雌各半。动物合格证号：京动许字(2000)第017号，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。实验动物室为无菌空气二级过滤，人工日光灯12h自动照明，恒温恒湿，温度22-24℃，相对湿度40％-50％。荷瘤鼠种由中国医学科学院药物研究所提供。人肝癌Heps瘤，购自于中国医学科学院协和药物所。裸鼠由中国药品生物制品检定所动物繁育场提供，清洁级，合格证号为：SCXK京(2005-2004)。

2、主要试剂

本发明中的血清胸腺因子(FTS)由中国药品生物制品标准化研究中心提供，是人工合成的血清胸腺因子(FTS)，合成方法见华东理工大学学报第31卷第6期727-30页，为白色冻干粉末，用前纯水稀释；环磷酰胺由山西普德药业有限公司提供，批号14023686；5-氟尿嘧啶由上海旭东海普药业有限公司提供，批号H31020593；印度墨水由北京笃信精细制剂厂提供；RPMI-1640培养液由北京天象鑫隆技术有限公司提供。

二、方法

1、剂量设置

根据药效曲线结果设置高中低三个剂量组

小鼠：高剂量0.25mg·kg^-1、中剂量0.125mg·kg^-1、低剂量0.0625mg·kg^-1；EAC腹水瘤的阳性对照5-氟尿嘧啶给药剂量25mg·kg^-1，H22实体瘤阳性对照药环磷酰胺给药剂量20mg·kg^-1；给药体积均为10ml·kg^-1。空白对照用生理盐水。

大鼠：高剂量2.2mg·kg^-1、中剂量1.1mg·kg^-1、低剂量0.55mgkg^-1；大鼠W256实体瘤阳性对照药为环磷酰胺89.2mg.kg^-1，给药体积均为2ml·kg^-1。空白对照用生理盐水。

裸鼠：高剂量0.125mg·kg^-1；中剂量0.0625mg·kg^-1；低剂量0.032mg·kg^-1；阳性对照组：环磷酰胺10mg·kg^-1，仅给药一次，给药体积均为0.1ml·10g^-1；空白对照用生理盐水。

2、动物模型制备

腹水瘤：取接种于小鼠的腹腔第7天的EAC瘤配成瘤细胞悬液接种于同种异体鼠腹腔，每鼠接种含106个瘤细胞的细胞悬液0.4ml。

实体瘤：<1>小鼠：取接种于小鼠的腹腔第7天的H22瘤配成细胞悬液接种于同种异体鼠前肢腋窝皮下，每鼠接种含106个瘤细胞的细胞悬液0.2ml；<2>取接种于大鼠腹腔第7天的Walker-256瘤配成瘤细胞悬液接种于同种异体大鼠右侧腿肌肉，每鼠接种含106个瘤细胞的细胞悬液0.2ml。

人肝癌Heps瘤：购自于中国医学科学院协和药物所，取肿瘤腋下接种于裸鼠前肢腋窝皮下，接种后观察成活后给药进行实验。共给药17天，末次给药后第二天解剖称瘤重、测出长短径计算体积。

3、免疫功能测试

用淋巴细胞转化试验(MTT法)：体外实验在给药结束次日小鼠眼眶放血致死，无菌取脾。用RPMI1640培养液制成3×10⁶-8×10⁶/mL的淋巴细胞悬液备用。用96孔培养板培养淋巴细胞，每孔含备用淋巴细胞液100μL，每种浓度3复孔。按试验要求除空白对照孔外，分别加入样品，样品+锌各100μL以及ConA10ug/50μL。淋巴细胞在37℃CO₂孵箱中孵育72h，终止孵育前4h，每孔加MTT20ul，5mg/mL。细胞培养结束后加二甲基亚砜200μL，待紫色结晶全部溶解后用酶联免疫检测仪在570nm处测OD值。

小鼠碳粒廓清试验：取末次给药次日小鼠尾静脉注射稀释好的印度墨汁液0.1ml/10g，分别采5min和10min的眼静脉丛血加至0.1％Na₂CO₃2ml，再用721型分光光度计在600nm处测OD值。

4、检验指标

腹水瘤：

实体瘤：

生命延长率和抑瘤率均需大于30％抗肿瘤作用明确；

刺激指数SI＝实验组OD值/对照组OD值；

廓清指数K＝(logOD₁-logOD₂)/(t₂-t₁)

其中OD₁和OD₂分别为在某一时刻t₁与t₂所测得光密度值；

肿瘤体积的计算公式为：V＝(L×W²)/2

其中L----肿瘤的长径  W----肿瘤的短径

本发明血清胸腺因子作为制备抗肿瘤药物、肿瘤物理及化学治疗药物的保护药物或增强免疫药方面的用途。生物反应调节剂类抗肿瘤药物除少数品种本身具有抗增殖作用外，大多是通过增强机体的免疫功能达到抑制癌细胞生长杀灭癌细胞的。本发明中动物体内试验结果可见FTS对所述的四种荷瘤鼠的肿瘤抑制作用是明显的，高、中剂量对EAC小鼠均达到很好的抑瘤效果，而且对照组作统计学分析有显著性差异。本发明中将FTS作为抗人肝癌Heps瘤药时，高、中、低剂量均对人肝癌Heps瘤小鼠抑瘤作用明显，而且对照组作统计学分析有显著性差异。因此FTS抗肿瘤作用确实。FTS还能够多方面提高机体的免疫活性，增强机体免疫功能。而FTS本身并不是细胞毒类抗肿瘤药，急性毒性试验表明，FTS无毒，且产生的副作用很小，而且它的有效作用剂量范围很广，安全范围较大，在作为肿瘤物理及化学治疗药物的保护药的研究中发现，FTS对受辐射小鼠的免疫指标具有明显的保护作用，白细胞总数和吞噬能力都得到提高，胸腺指数也有所提高，在较高辐射剂量下(7.0Gy)，FTS也提高了小鼠的存活率和平均存活时间。因此FTS可以为临床上治疗肿瘤提供一个新的靶向和发展方向。

附图说明

图1FTS对T细胞增殖效应刺激指数的影响

图2FTS的浓度对吞噬指数的影响

图3FTS对受辐射小鼠存活率的影响(6.0Gy)

图4FTS对受辐射小鼠存活率的影响(7.0Gy)

图5FTS对受辐射小鼠存活时间的影响(6.0Gy)

图6FTS对受辐射小鼠存活时间的影响(7.0Gy)

图7FTS对荷瘤小鼠化疗存活率的影响(1为空白对照，2为FTS5μg/只，3为FTS50μg/只)

图8FTS对荷瘤小鼠化疗存活时间的影响(1为空白对照，2为FTS 5μg/只，3为FTS50μg/只)

具体实施方式

下面将结合具体实施方案对本发明进行更为详细的描述，应当指出的是，在此列出的所有实施例仅仅是说明性的，并不意味着对本发明范围进行限定。

实施例一

本实施例涉及EAC腹水瘤组结果

皮下注射给药，第0天接种动物，第1天检查培养情况，如无污染，则将动物称重并随机分组开始给药。将肿瘤模型小鼠随机分成5组，分别是高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组和空白组，剂量分别为高剂量0.25mg·kg^-1、中剂量0.125mg·kg^-1、低剂量0.0625mg·kg^-1，除阳性药组外每天给药一次，连续14天；阳性药组5-氟尿嘧啶，隔日一次，共三次。结果如表1所示：

表1FTS用于抗EAC腹水瘤药的结果(χ±s，n＝10)

  组别  生存时间(天)  生命延长率  高剂量  中剂量  低剂量  阳性对照  空白对照  18.3±3.6^ΔΔ  17.9±3.1^ΔΔ  16.9±3.3^ΔΔ  24.3±4.1^ΔΔΔ  13.3±2.5  37.6％  34.6％  27.1％  82.7％

^ΔΔP＜0.01，^ΔΔΔP＜0.001与空白组对照；生命延长率与空白组对照。

表1的结果表明末次给药后观察存活情况：高剂量组、中剂量组两组生命延长率均大于30％，且有一定的量效关系，疗效确定，给药组与对照组均有显著性差异(P＜0.01)。说明FTS在作为制备抗EAC腹水瘤药的用途时作用显著。

实施例二

本实施例涉及H22实体瘤组结果

皮下注射给药，第0天接种动物，第1天检查培养情况，如无污染，则将动物称重并随机分组开始给药。将肿瘤模型小鼠随机分成5组，分别是高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组和空白组，剂量分别为高剂量0.25mg·kg^-1、中剂量0.125mg·kg^-1、低剂量0.0625mg·kg^-1，除阳性药组外每天给药一次，连续14天；环磷酰胺一次性给药。结果见表2。

表2FTS用于抗H22实体瘤药的结果(n＝10)

  组别  实体瘤的重量(g)  抑瘤率  高剂量  中剂量  低剂量  阳性对照  空白对照  2.5±0.9^ΔΔ  2.7±0.7^ΔΔ  3.1±1.4  0.6±0.5^ΔΔΔ  4.2±1.0  40.7％  31.2％  26.8％  84.8％

^ΔΔP＜0.01，^ΔΔΔP＜0.001与空白组对照；抑瘤率与空白组相对照。

表2的结果说明：给药高剂量组、中剂量组抑瘤率大于30％且有一定量效关系，疗效明确。高剂量组、中剂量组与对照组有显著性差异(P＜0.01)。高剂量组和中剂量组实体瘤重量的增加比低剂量组及空白对照组重量的增加少。说明FTS在作为制备抗H22实体瘤药的用途时作用显著。

实施例三

本实施例涉及Walker-256瘤组结果

皮下注射给药，第0天接种动物，第1天检查培养情况，如无污染，则将动物称重并随机分组开始给药。将肿瘤模型大鼠随机分成5组，分别是高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组和空白组，剂量分别为高剂量2.2mg·kg^-1、中剂量1.1mg·kg^-1、低剂量0.55mg·kg^-1，除阳性药组外每天给药一次，连续14天；环磷酰胺一次性给药。结果见表3。

给药组末次给药后次日解剖取出实体瘤称重，计算出抑瘤率。给药组抑瘤率均大于30％且有一定量效关系，疗效明确。给药组与对照组均有显著性差异(P＜0.001)。结果见表3。

表3FTS用于抗Walker-256瘤的效果(n＝10)

  组别  肿瘤的重量(g)  抑瘤率(％)  高剂量  中剂量  低剂量  阳性对照  空白对照  6.2±2.7^ΔΔΔ  9.2±2.5^ΔΔΔ  11.2±4.1^ΔΔΔ  2.6±1.7^ΔΔΔ  17.8±3.8  65.2％  48.4％  37.1％  85.4％

^ΔΔΔP＜0.001与空白组对照；抑瘤率与空白组相对照。

表3的结果说明：给药组抑瘤率均大于30％且有一定量效关系，疗效明确，给药组与对照组均有显著性差异(P＜0.001)；高剂量组、中剂量组以及低剂量组测得的肿瘤的重量关系为：高剂量组＜中剂量组＜低剂量组＜空白对照组。说明FTS在作为制备抗Walker-256瘤药的用途时作用显著。

实施例四

本实施例涉及人肝癌Heps瘤组结果

皮下注射给药，第0天接种动物，第1天检查培养情况，如无污染，则将动物称重并随机分组开始给药。将肿瘤模型大鼠随机分成5组，分别是高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组和空白组，剂量分别为高剂量0.125mg·kg^-1、中剂量0.0625mg·kg^-1、低剂量0.032mg·kg^-1，除阳性药组外每天给药一次，共给药17天；环磷酰胺一次性给药，给药剂量为10mg·kg^-1。给药体积均为10mL/kg。结果见表4。

表4FTS用于抗人肝癌Heps瘤的效果(n＝10)

  组别  肿瘤的重量(g)  抑瘤率  肿瘤的体积(mm³)  高剂量  中剂量  低剂量  阳性对照  空白对照  0.72±0.23^***  0.90±0.19^**  0.99±0.24^**  0.57±0.12^***  1.51±0.52  52.28％  40.36％  34.19％  62.43％  287.52±192.56^***  519.61±301.00^**  660.83±448.81^*  99.73±68.60^***  1224.08±701.42

^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与空白组对照

表4的结果说明：给药组末次给药后次日解剖取出实体瘤称重，计算出抑瘤率。试验结果表明，给药组抑瘤率均大于30％且有一定量效关系，疗效明确。给药组与对照组均有显著性差异(P＜0.001)。高剂量组、中剂量组以及低剂量组测得的肿瘤的重量大小关系为：高剂量组＜中剂量组＜低剂量组＜空白对照组。高剂量组、中剂量组以及低剂量组测得的肿瘤的体积大小关系为：高剂量组＜中剂量组＜低剂量组＜空白对照组。

实施例五

本实施例涉及FTS对昆明小鼠脾淋巴细胞增殖效应的影响

体外实验在给药结束次日小鼠眼眶放血致死，无菌取脾。用RPMI1640培养液制成3×10⁶-8×10⁶/mL的淋巴细胞悬液备用。用96孔培养板培养淋巴细胞，每孔含备用淋巴细胞液100μL，每种浓度3复孔。按试验要求除空白对照孔外，分别加入样品，样品+锌各100μL以及ConA10ug/50μL。淋巴细胞在37℃CO₂孵箱中孵育72h，终止孵育前4h，每孔加MTT20ul，5mg/mL。细胞培养结束后加二甲基亚砜200μL，待紫色结晶全部溶解后用酶联免疫检测仪在570nm处测OD值。

表5FTS对体外培养脾淋巴细胞增殖效应的影响(n＝10)

^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01，^ΔΔΔΔP＜0.001与空白组进行比较；有ConA刺激组的影响大于无ConA刺激组。

由图1及表5的结果可见：有或无ConA刺激时，各组0.002～0.008mg/ml浓度依赖地增强T细胞增殖效应，而当浓度大于0.016mg/ml时促进作用减弱。同时FTS+Zn组均比FTS组效应强，ConA刺激后T细胞增殖效应明显增强，在0.016mg/ml处表现出的增殖效应最强，两侧呈下降趋势。

实施例六

本实施例涉及碳粒廓清试验结果

本试验以吞噬指数高低表示小鼠廓清血流中炭粒的能力。最适剂量的标准是小鼠注射后，30min内，对照组小鼠的廓清率要明显低于被阳性药激活的小鼠廓清率。其中高剂量组的剂量为2.2mg·kg^-1、中剂量组的剂量为1.1mg·kg^-1、低剂量组的剂量为0.55mg·kg^-1，结果见图2。

图2的结果表明：高剂量组2.2mg·kg^-1、中剂量组1.1mg·kg^-1、低剂量组0.55mg·kg^-1三组吞噬指数均明显高于空白对照组，其中高剂量组与环磷酰胺组结果接近，吞噬指数都大于5，中剂量组和低剂量组的吞噬指数都大于4，而空白对照组的吞噬指数则小于2。这一系列的结果说明FTS能显著的增强生物机体的免疫力。

实施例七

本实施例涉及FTS急性毒性试验的结果

取禁食15小时的昆明小鼠，20只/组，雌雄各半，体重为22-24g，小鼠每次尾静脉注射体积为10mL/kg体重，连续观察7日内动物的不良反应及死亡状况。记录给药前及观察结束时的体重。静脉注射给药后，连续观察4小时，小鼠未见异常，未见小鼠出现中枢神经兴奋或抑制等异常行为。给药次日小鼠精神好，行为正常，活动自如，呼吸频率无变化，对光声等刺激敏感，被毛润泽；饲料消耗、饮水及粪便等均正常，未发现任何毒性反应或死亡，尾静脉注射局部未发现红肿、淤血和坏死。详见表6。

表6FTS急性毒性试验结果

  组  别  给药次  数/日  给药剂量  (mg/kg)  给药浓度  (mg/ml)  小鼠数  (只)  死亡  (％)  给药前体重  (g)  给药后体重  (g)  1  1  5.0  0.5  20  0  22.3±2.1  28.3±2.4  2  1  10.0  1.0  20  0  23.4±3.1  29.7±2.1  3  1  50.0  5.0  20  0  23.6±2.5  28.6±3.2  4  1  100.0  10.0  20  0  23.1±2.8  29.8±2.0

表6的结果表明：给药7日存活小鼠平均体重增长4-6g，试验中给药5.0mg/kg组、10.0mg/kg组、50.0mg/kg组、100.0mg/kg组小鼠均未发现任何毒性反应或死亡。FTS临床人拟用量为4mg/次/日，而在最大试验剂量280mg/人/天，相当于临床用量的70倍时，均未见小鼠异常，未见小鼠出现中枢神经兴奋或抑制等异常行为，小鼠精神好，行为正常，活动自如，呼吸频率无变化，对光声等刺激敏感，被毛润泽；饲料消耗、饮水及粪便等均正常，未发现任何毒性反应或死亡，尾静脉注射局部未发现红肿、淤血和坏死。因此，认为FTS是无毒的抗肿瘤的多肽。

实施例八

本实施例涉及FTS在作为制备肿瘤物理及化学治疗药物的保护药方面的用途的结果。

所用材料和仪器

龙胆紫(北京惠泽奥公司)，印度墨水(北京笃信精细制剂厂)，环磷酰胺(山西泰盛制药有限公司)，血清胸腺因子(FTS)由中国药品生物制品标准化研究中心提供，。钴源(军科院北京放射医学研究所)，显微镜(CH20BIMF 200，0lympus)，分光光度计(UV-2550，SHIMADZU)。

所用的方法：

1、白细胞计数

白细胞稀释液：取冰醋酸1.5mL和1％龙胆紫1mL，混匀，加蒸馏水至100mL。

(1)在小试管中加0.38mL白细胞稀释液；

(2)从鼠尾取血，用吸管准确吸血20μL，擦净吸管外沾附的血液。

(3)迅速将血轻轻放入上述小试管中，并用上清液洗吸管2-3次，摇匀。

(4)将白细胞混悬液滴入计数池内，静置2-3分钟，待白细胞下沉后计数。

(5)在低倍镜下，白细胞呈圆形，浆透亮，核呈紫黑色，稍有折光，借此特点可与杂质相区别。计数池四角的4个大方格中所有的白细胞数，将总数乘以50，即得每1mm³血中白细胞数。

计算原理：每个大方格面积为1mm³，计数池深度为0.1mm，血稀释20倍，故每1mm³血中白细胞数为4个大方格的白细胞数×10×20÷4。

2、碳粒廓清法

操作步骤：体重18-22g小白鼠，雌雄各半，随机分为实验组与对照组，分别给与药物和溶剂。实验时每鼠尾静脉注射印度墨汁0.05mL/10g体重，于1(t₁)和5(t₂)分钟后，分别从眼眶静脉取血20μL，加到2ml、0.1％Na₂CO₃溶液中摇匀，用分光光度计在680nm比色，测光密度。

3、结果

FTS抗辐射作用的免疫指标检测

昆明鼠17±1g，10只/组，雌雄各半。650拉德Co60照射，照射率236.1伦/分，照射时间为2分钟39.4秒。

阴性对照组每天皮下注射0.1mL生理盐水，给药组每天皮下注射不同剂量的FTS：0.5μg/只。阳性对照物为尼尔雌醇，一次性灌胃：取尼尔雌醇2片(2mg)，碾碎，加4mL水，加0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)，搅匀，灌胃0.1mL/只，即0.05mg/只。

一周后检测血液白细胞总数，碳粒廓清指数和吞噬指数，胸腺指数和脾指数。用T检验比较给药组与阴性对照组的差异显著性。结果如表7所示：

表7FTS抗辐射作用的指标检测

  组别  体重增加  白细胞个数  (个/mm³)  廓清指数K  吞噬指数α  胸腺指数  (mg/10g)  脾指数  (mg/10g)  未辐射  7.16  (p＜0.05)  5878  (p＜0.01)  0.041  5.48  32.82  (p＜0.01)  84.69  (p＜0.01)  阴性对  照  3.93  985  0.041  7.41  20.45  17.76  阳性对  照  3.47  2693  (p＜0.01)  0.033  6.00  28.32  (p＜0.05)  8.96  (p＜0.01)  0.5μg  4.16  1445  (p＜0.01)  0.053  7.54  24.71  13.32  5μg  4.69  1794  (p＜0.01)  0.060  (p＜0.05)  8.15  (p＜0.05)  25.60  11.56  (p＜0.05)  50μg  2.56  (p＜0.05)  1761  (p＜0.01)  0.063  (p＜0.05)  8.23  (p＜0.05)  26.47  (p＜0.05)  10.17  (p＜0.05)

表7的结果表明，给药组的白细胞总数明显增大，具有统计意义，给药组的廓清指数和吞噬指数也明显提高，其中5μg组和50μg组具有显著性。给药组的胸腺指数也有所提高，其中50μg组具有显著性。FTS对受辐射小鼠在免疫指标上确有保护作用，并且5μg/只的剂量更佳。

(1)FTS对受辐射小鼠存活率的影响

昆明鼠20±1g，20只/组，雌雄各半。分别用600拉德和700拉德Co60照射，照射率246.72伦/分。

阴性对照每天皮下注射0.1mL生理盐水，给药组每天皮下注射不同剂量的FTS：0.5μg/只，5μg/只，50μg/只，200μg/只。两周后停药，继续观察，到30天为止。阳性对照组为尼尔雌醇，一次性灌胃，取尼尔雌醇2片(2mg)，碾碎，加4mL水，加0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)，搅匀，灌胃0.1mL/只，即0.05mg/只。结果如图3，图4，图5，图6所示。结果表明，Co60照射后，皮下注射FTS明显降低了小鼠的死亡率。无论是在较低辐射剂量600拉德还是较高辐射剂量700拉德，FTS都对小鼠有保护作用。

(2)FTS对腹水瘤小鼠的作用

取20±1g的昆明小鼠，雌性，10只/组，二级实验动物房饲养。肝癌H22细胞经小鼠腹腔传代保种，取其腹水瘤，1∶1.5稀释，腹腔接种0.4mL。每天皮下注射给药，连续两周，空白对照注射生理盐水，FTS给药50μg/只。第15天考察腹水重，脾指数和胸腺指数。用t检验比较给药组和空白对照组之间的差异显著性。结果如表8所示。

表8FTS对腹水瘤小鼠胸腺指数和脾指数的影响

  组别  增重(g) 腹水重量(g)  脾指数(mg/10g)  胸腺指数(mg/10g)  空白  -2.075 16.075  56.981  13.518  FTS  -2.021 16.235  55.219  19.632(p＜0.05)

表8的结果表明：FTS组胸腺指数明显提高，并具有显著性意义。但腹水重量没有明显区别，表示腹水细胞不受抑制。可见FTS对腹水瘤小鼠有一定的保护作用，通过脾指数和胸腺指数初步反应了免疫能力得到改善。

(3)FTS对荷瘤小鼠化疗的结果

取20±1g的昆明小鼠，雌性，10只/组，二级实验动物房饲养。取肝癌H22腹水瘤转接为实体瘤，两周后收集实体瘤细胞，分散细胞，背部皮下接种。每日腹腔注射环磷酰胺(100mg/kg)，同时皮下注射不同浓度的合成多肽FTS，连续两周，之后继续注射多肽。20天后记录存活率和平均存活时间。用卡方实验和t检验比较给药组和空白对照组之间的差异显著性。结果如图7、图8所示。

图7、图8的结果表明，到第20天的存活率有一定的差异，但因为环磷酰胺的作用，小鼠都没有明显的肿瘤生长。结果主要体现了药物减小环磷酰胺的副作用。而且，5μgFTS的作用比50μgFTS的作用明显。