假丝酵母二羟基丙酮合成酶的原核表达载体及其构建方法和应用

摘要

本发明提供一种高效表达假丝酵母二羟基丙酮合成酶蛋白DAS的原核表达载体(pET28a-DAS)，该载体含有T7启动子和终止子、细菌核糖体结合位点和DAS基因及一个组氨酸标签，从假丝酵母中克隆出DAS基因，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达，利用该载体转化大肠杆菌(BL21)，可实现DAS蛋白的高水平表达，表达的DAS蛋白80％以上形成包涵体，用高浓度的尿素溶解包涵体后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DAS蛋白，再从凝胶中回收DAS蛋白可得到纯度极高的DAS蛋白，用于抗体的制备。DAS重组蛋白表达量很高，因此不需要大规模培养细菌，纯化DAS蛋白的操作相当简单，成本较低，极易重复使用。