作为胞嘧啶核苷脱氨酶抑制剂的2′-氟-2′-脱氧四氢尿苷

摘要

本发明提供了某些四氢尿苷衍生化合物、含有这种化合物的药物组合物和试剂盒以及制备和使用这种化合物的方法。

说明书

本申请要求2007年10月16日提交的美国临时申请第60/980,397号的权益，该美国临时申请的全部内容据此通过引用并入。

技术领域

本发明提供了作为胞嘧啶核苷脱氨酶(enzyme cytidine deaminase)的抑制剂的某些四氢尿苷衍生化合物、包含这种化合物的药物组合物和试剂盒以及制备和使用这种化合物的方法。

背景技术

腺苷脱氨酶(ADA，EC 3.5.4.4)和胞嘧啶核苷脱氨酶(CDA，EC3.5.4.5)在人类和其他生物中分别起到使天然氨基嘌呤和氨基嘧啶核苷脱去氨基的作用。它们还将活性的基于核苷的药物转化为无活性的代谢物。例如，嘌呤核苷药物阿糖腺嘌呤(氟达拉滨，ara-A)由ADA脱去氨基；母体氨基由羟基取代的所得的化合物与母体化合物相比，作为抗肿瘤剂是无活性的。相似地，抗白血病药物阿糖胞嘧啶(阿糖胞苷，ara-C)由CDA代谢降解为无活性的阿糖尿嘧啶。

CDA是嘧啶补救途径的组分。其通过水解脱去氨基分别将胞苷和脱氧胞苷转化为尿苷和脱氧尿苷(Arch.Biochem.Biophys.1991，290，285-292；Methods Enzymol.1978，51，401-407；Biochem.J.1967，104，7P)。其还将作为临床上有用的药物的许多合成的胞嘧啶类似物(例如上文提到的ara-C)脱去氨基(Cancer Chemother.Pharmacol.1998，42，373-378；Cancer Res.1989，49，3015-3019；Antiviral Chem.Chemother.1990，1，255-262)。胞嘧啶化合物向尿苷衍生物的转化通常使得治疗活性丢失或增加副作用。还显示获得对胞嘧啶类似物药物的耐药性的癌症常常过表达CDA(Leuk.Res.1990，14，751-754)。表达高水平CDA的白血病细胞可显现出对胞嘧啶抗代谢物的耐药性并且由此限制这种治疗的抗瘤活性(Biochem.Pharmacol.1993，45，1857-1861)。因此CDA的抑制剂在联合化疗中可以是有用的佐药。

许多年来四氢尿苷(THU)已经被认为是胞苷脱氨酶的抑制剂。

四氢尿苷(THU)

许多报道已经表明与THU的联合给药增加了基于胞苷的药物的功效和口服活性。例如，THU已经显示在L1210白血病小鼠中增强了抗白血病剂5-氮杂胞苷的口服活性(Cancer Chemotherapy Reports 1975，59，459-465)。已经在狒狒镰状细胞性贫血模型(Am.J.Hematol.1985，18，283-288)以及与口服给药的5-氮杂胞苷联合在患有镰状细胞性贫血的人类患者(Blood 1985，66，527-532)中研究THU加上5-氮杂胞苷的联合。

5-氮杂胞苷                 5-氮杂-2’-脱氧胞苷(地西他滨)             ara-C

THU还已经显示在L1210白血病小鼠(CancerResearch 1970，30，2166；Cancer Invest 1987，5，(4)，293-9)和荷瘤的小鼠(Cancer Treat.Rep.1977，61，1355-1364)中增强了ara-C的口服功效。静脉给药的ara-C与静脉给药的THU的联合已经在人类中的几个临床研究中得到探索(Cancer Treat.Rep.1977，61，1347-1353；Cancer Treat.Rep.1979，63，1245-1249；Cancer Res.1988，48，1337-1342)。尤其是，已经在患有急性骨髓性白血病(AML)和慢性骨髓性白血病(CML)的患者中进行了组合研究(Leukemia 1991，5，991-998；Cancer Chemother.Pharmacol.1993，31，481-484)。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷(地西他滨)是用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的抗瘤剂，也具有治疗AML和CML的潜在功效。像其他基于胞苷的药物一样，其口服生物利用度和功效受到CDA的去活性作用的限制。THU已经在狒狒中的镰状细胞疾病模型中显示增强地西他滨的效力(Am.J.Hematol.1985，18，283-288)。此外，另一种已知的CDA抑制剂zebularine已经显示在患有L1210白血病的小鼠中增强地西他滨的效力(Anticancer Drugs 2005，16，301-308)。

已经与CDA抑制剂组合研究了另一种基于胞苷的抗瘤药物吉西他滨(Biochem.Pharmacol.1993，45，1857-1861)。与THU的联合给药已经显示在小鼠中改变了吉西他滨的药物动力学和生物利用度(Abstr.1556，2007 AACR Annual Meeting，2007年4月14-18日，Los Angeles，CA；Clin.Cancer Res.2008，14，3529-3535)。

5-氟-2’-脱氧胞苷(氟代胞苷，FdCyd)是另一种基于胞苷的抗癌药物，其是DNA甲基转移酶的抑制剂。已经研究了在小鼠中经由THU对其代谢和药物动力学的调节(Clin Cancer Res.，2006，12，7483-7491；Cancer Chemother.Pharm.2008，62，363-368)。

上文提及的研究的结果表明，CDA抑制剂与基于胞苷的药物(例如ara-C、地西他滨、5-氮杂胞苷和其他药物)一起给药有治疗效用。然而早期的CDA抑制剂例如THU受限于包括酸不稳定性(J.Med.Chem.1986，29，2351)和差的生物利用度(J.Clin.Pharmacol.1978，18，259)在内的缺陷。

因此有对于新的、强效的并且治疗上有用的CDA的抑制剂存在持续需求。

发明内容

本发明提供了某些四氢尿苷衍生化合物、包含这种化合物的药物组合物和试剂盒以及制备和使用这种化合物的方法。本发明的化合物、组合物、试剂盒和方法可提供某些益处。例如，本发明的化合物和组合物可抑制CDA酶活性和/或增强作为CDA的底物的药物的半衰期、生物利用度和/或功效。此外，本发明的化合物、组合物、试剂盒和方法可显示出改善的水溶性、化学稳定性、药物吸收水平、毒性水平、贮存期限、制备和配制上的再现性和治疗功效。

在一个实施方案中，本发明提供式I的化合物或该化合物的药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、巯基、羟基、甲酰基、羧基、COO(C₁至C₆直链或支链烷基)、COO(C₁至C₆直链或支链烯基)、COO(C₁至C₆直链或支链炔基)、CO(C₁至C₆直链或支链烷基)、CO(C₁至C₆直链或支链烯基)、CO(C₁至C₆直链或支链炔基)、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现(each occurrence)可独立地是未取代的或由独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、甲酰基、羧基和巯基的一个至四个取代基取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H、-OH或-CH₂OH。

在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、硝基、巯基、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个或多个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氢、卤素、C₁至C₆烷基、C₁至C₆烯基、C₁至C₆烷氧基和C₁至C₆链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个至三个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

在一些实施方案中，式1化合物是：

其中，由星号标注的碳可具有(R)或(S)构型。在一些实施方案中，所公开的药物组合物或使用方法可包括具有(R)构型的化合物、(S)构型的化合物或(R)构型的化合物和(S)构型的化合物的混合物。在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氟和氢，条件是R₁和R₂不可都是氢。

在另外的实施方案中，式I的化合物具有Ia或Ib的立体化学：

在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氟和氢，条件是R₁和R₂不可都是氢。

在另外的实施方案中，式I的化合物选自化合物1至23和其药学上可接受的盐：

化合物1             化合物2           化合物3

化合物4             化合物5           化合物6

化合物7             化合物8           化合物9

化合物10            化合物11          化合物12

化合物13              化合物14           化合物15

化合物16              化合物17           化合物18

化合物19              化合物20           化合物21

化合物22              化合物23。

在另外的实施方案中，式I的化合物选自化合物1a、1b、2a、2b、3a和3b以及其药学上可接受的盐。

化合物1a          化合物1b        化合物2a

化合物2b          化合物3a        化合物3b。

由于本发明的化合物可具有至少一个手性中心，所以它们可以对映异构体、非对映异构体、外消旋混合物、非外消旋混合物或其他立体异构体的形式存在。本发明包括所有这些可能的异构体以及几何异构体和互变异构体。

本发明的另一个方面涉及药物组合物，所述药物组合物包括：

(i)有效量的如本文描述的本发明的化合物，所述化合物包括但不限于每个明示的实施方案；以及

(ii)药学上可接受的赋形剂。

在另外的实施方案中，药物组合物还包括有效量的至少一种另外的治疗剂，例如CDA底物药物或化疗剂。

本发明的化合物的“有效量”可从0.1wt.％至约100wt.％变化。在一些实施方案中，化合物的有效量是0.1至20％w/w。在其他实施方案中，有效量是1-10％w/w。在还有另外的实施方案中，有效量是2-5％w/w。

本发明的药物组合物可以被配制成以固体或液体形式给药，固体或液体形式包括适于下列的那些：(1)口服给药，例如，浸液(drench)(例如含水的或非水的溶液或悬浮液)、片剂(例如，靶向口腔、舌下和全身吸收的那些)、囊片、大丸药、粉末、颗粒、施用于舌的糊剂、硬胶囊、软胶囊、口腔喷剂(mouth spray)、糖锭剂、锭剂、丸剂、糖浆、悬浮液、酏剂、液体、乳剂和微乳剂；(2)胃肠外给药，例如，作为诸如无菌溶液或悬浮液通过皮下的、肌肉内的、静脉内的或硬膜外的注射；(3)局部施用，例如作为向皮肤施用的乳膏、软膏、贴片、垫或喷雾；(4)阴道内给药或直肠内给药，例如作为阴道栓剂、乳膏或泡沫；(5)舌下给药；(6)眼部给药(ocularly)；(7)经皮给药；或(8)经鼻给药。药物组合物可被配制用于即时的、持续的或控制的释放。

在一些实施方案中，药物组合物被配制用于口服给药。在另外的实施方案中，药物组合物被配制用于以固体形式口服给药。

本发明的另一个实施方案涉及一种用于抑制胞嘧啶核苷脱氨酶的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者给药有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

本发明的另一个实施方案涉及一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者给药：

(i)有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案；以及

(ii)CDA底物药物，CDA底物药物包括但不限于本文描述的每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

在一些实施方案中，癌症选自血液学癌症和实体癌。在另外的实施方案中，血液学癌症选自MDS和白血病。在另外的实施方案中，实体癌选自胰腺癌、卵巢癌、腹膜癌、非小细胞肺癌和乳腺癌。在还有另外的实施方案中，白血病是急性骨髓性白血病(AML)或慢性骨髓性白血病(CML)。

本发明的另一个实施方案涉及一种通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解的方法，所述方法包括向正在经受使用CDA底物药物的治疗的受治疗者给药有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案。CDA底物药物包括但不限于本文描述的每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

本发明的另一个实施方案涉及一种含有至少一个单位剂量形式的试剂盒，该单位剂量形式包含本发明的化合物或药物组合物。

试剂盒还可包括适于商业销售的容器和/或包装。容器可以是由药学上可接受的材料制造的如本领域中已知的任何常规的形状或形式，例如纸盒或纸板盒、玻璃瓶或塑料瓶或大口瓶、可重复密封的袋或便于根据治疗方案压出包装的具有单个剂量的泡罩包装。可在单一包装中一起使用多于一种容器。例如，片剂可被包含在泡罩包装中，而泡罩包装又被包含在盒子中。

附图说明

图1是显示在L 1210小鼠淋巴瘤模型中化合物1对地西他滨诱导的存活的影响的图。

图2是显示在L 1210小鼠淋巴瘤模型中化合物1a对地西他滨诱导的存活的影响的图。

图3是显示在L 1210小鼠淋巴瘤模型中化合物3a对地西他滨诱导的存活的影响的图。

图4是显示在L 1210模型中化合物1对Ara-C(200mg/kg)诱导的存活的影响的图。

图5是显示在L 1210模型中化合物1对Ara-C(100mg/kg)诱导的存活的影响的图。

图6是显示在L 1210模型中化合物1对Ara-C(50mg/kg)诱导的存活的影响的图。

图7是显示在L 1210模型中化合物1对Ara-C(25mg/kg)诱导的存活的影响的图。

图8是显示在小鼠A2780人类卵巢癌异种移植模型中化合物1对吉西他滨诱导的肿瘤体积减少的影响的图。

图9是化合物1a的晶体结构的ORTEP图。

图10是D₂O中的THU的¹H NMR结构。

图11是在三氟乙酸的存在下，在不同的时间，D₂O中的THU的¹H NMR结构。

图12是D₂O中的化合物1a的¹H NMR结构。

图13是在三氟乙酸的存在下，在不同的时间，D₂O中的化合物1a的¹H NMR结构。

具体实施方式

本发明提供了某些四氢尿苷衍生化合物、包含这种化合物的药物组合物和试剂盒以及制备和使用这种化合物的方法。本发明的化合物、组合物、试剂盒和方法可提供某些益处。例如，本发明的化合物和组合物可抑制CDA酶活性和/或增强作为CDA的底物的药物的半衰期、生物利用度和/或功效。此外，本发明的化合物、组合物、试剂盒和方法可显示出改善的水溶性、化学稳定性、药物吸收水平、毒性水平、贮存期限、制备和配制上的再现性和治疗功效。

定义

整个说明书和权利要求中，使用下列定义。

如说明书和权利要求中所用的，单数形式的一(a)、一(an)和该(the)包括复数指示物，除非文中另外清楚地规定。因此，例如，提及包含“一种化合物”的组合物可包括两种或更多种化合物。

“烷基”是指饱和的直链或支链的烃基。实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基和正己基。在一些实施方案中，烷基链是C₁至C₆支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₂至C₅支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₁至C₄支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₂至C₄支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₃至C₅支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₁至C₂支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烷基链是C₂至C₃支链或无支链碳链。

“烯基”是指含有至少一个碳碳双键的不饱和的直链或支链的烃基。实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、叔丁烯基、正戊烯基和正己烯基。在一些实施方案中，烯基链是C₂至C₆支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烯基链是C₂至C₅支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烯基链是C₂至C₄支链或无支链碳链。在一些实施方案中，烯基链是C₃至C₅支链或无支链碳链。

“烷氧基”是指通过氧键合结合的烷基。

“链烯氧基”是指通过氧键合结合的烯基。

“环烷基”是指非芳族的环状的烷基。

“环烯基”是指非芳族的环状的烯基。

“卤素”是指氟、氯、溴或碘基团。

“取代的”意指指定的基团上的至少一个氢由另一个基团取代，条件是没有超过该指定的基团的正常的化合价。就含有一个或多个取代基的任何基团来说，这种基团不意图引入空间上不实际的、合成上不可行的和/或固有地不稳定的任何取代。

“CDA底物药物”是指可由CDA脱去氨基的药物。CDA底物的非限制性实例包括胞苷类似物，例如地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷和cytochlor。

“有效量”是指产生所期望的作用(例如增加CDA底物药物的半衰期、生物利用度或功效，治疗受治疗者的癌症，抑制受治疗者中的胞嘧啶核苷脱氨酶或通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解)所需要的量。

“半衰期”是指受治疗者中化合物的浓度或量减少至给定浓度或量的正好一半所需的时间段。

“药学上可接受的”是指从药理学和/或毒理学观点来说对于患者是可接受的和/或从关于组成、制剂、稳定性、患者接受、生物利用度和与其他成分的相容性的物理和/或化学观点来说对于制造药剂师是可接受的那些特性和/或物质。

“药学上可接受的赋形剂”可意指用作用于向受治疗者递送治疗剂的载体、稀释剂、佐剂、粘合剂和/或媒介物(vehicle)，或者被加至药物组合物中用以改善其处理或贮存特性或者用以允许或有助于将化合物或组合物配制为适于给药的单位剂型的本身不是治疗剂的任何物质。药学上可接受的赋形剂是药学领域中熟知的并且被描述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿的药物科学)，MackPublishing Co.，Easton，Pa(例如第20版，2000)和Handbook ofPharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，American PharmaceuticalAssociation，Washington，D.C.(例如第1版、第2版和第3版，分别于1986、1994和2000出版)中。如本领域的技术人员已知的，赋形剂可提供各种功能并且可被描述为湿润剂、缓冲剂、助悬剂、润滑剂、乳化剂、崩解剂、吸收剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、调味剂和甜味剂。药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、醋酸纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素；(4)粉末状的黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐和(22)用于药物制剂的其他无毒性可相容的物质。

“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的酸式盐或碱式盐，所述盐具有所期望的药理学活性并且不是生物学上或其他方面所不期望的。可由酸形成盐，所述盐包括但不限于醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱式盐的实例包括但不限于铵盐、碱金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐，由有机碱成的盐例如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺和具有氨基酸例如精氨酸和赖氨酸的盐。在一些实施方案中，可用包括以下的试剂将碱性含氮的基团季铵化：低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐，例如二甲基硫酸盐、二乙基硫酸盐、二丁基硫酸盐和二戊基硫酸盐；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；以及芳烷基卤化物，例如苯乙基溴化物。

“单位剂量形式”是指适于作为用于人类或其他动物受治疗者的单一剂量的物理上分离的单位。每个单位剂量形式可含有计算出产生期望的作用的预定量的活性物质(例如本发明的化合物或组合物、CDA底物药物和/或其他治疗剂)。

“异构体”是指具有相同数目和类型的原子并且因此具有相同分子量但就原子的排列或构型来说不同的化合物。

“立体异构体”是指仅在空间上原子的排列不同的异构体。

“非对映异构体”是指彼此不是镜像的立体异构体。

“对映异构体”是指彼此是不能重叠的镜像的立体异构体。对映异构体包括含有基本上单一的对映异构体例如大于或等于90％、92％、95％、98％或99％或者等于100％的单一的对映异构体的“对映体纯的”异构体。

“差向异构体”是指仅在几个立体几何中心中的一个具有不同构型的化合物的立体异构体。

“外消旋的”是指含有相等份数的单个对映异构体的混合物。

“非外消旋的”是指含有不等份数的单个对映异构体的混合物。非外消旋的混合物可以R-构型富集的或S-构型富集的，所述混合物包括但不限于R-对映异构体比S-对映异构体或S-对映异构体比R-对映异构体为约50/50、约60/40和约70/30的混合物。

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，且该描述包括其中事件或情况发生的实例和其中事件或情况不发生的实例。例如，“任选地取代的”烷基包括未取代的烷基和取代的烷基。

“受治疗者”意指体外或体内的细胞或组织、动物或人类。动物或人类受治疗者也可称为“患者”。

“动物”是指具有感觉和随意移动的能力并且其生存需要氧气和有机食物的活的生物。

“哺乳动物”是指具有毛发或毛皮的温血脊椎动物。实例包括但不限于人类、马科动物、猪科动物、牛科动物、鼠科动物、犬科动物或猫科动物物种的成员。

关于疾病、病症或病况的“治疗”是指：(i)抑制疾病、病症或病况，例如阻止其发展；和/或(ii)减轻疾病、病症或病况，例如导致临床症状的消退。

关于疾病、病症或病况的“预防”是指预防疾病、病症或病况，例如使得疾病、病症或病况的临床症状不发展。

“癌症”是指趋向于以不可控的方式增殖并且一些情况下转移(扩散)的细胞的不正常生长。特定的癌症的类型包括但不限于在公开号第US 2006/0014949中确定的癌症和下列癌症：

-心脏的：肉瘤(例如，诸如血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤以及类似肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；

-肺：支气管癌(例如，诸如扁平细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌以及类似疾病)、肺泡(例如，诸如细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；

-胃肠道的：食道(例如，诸如鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤和类似疾病)、胃(例如，诸如癌症、淋巴瘤、平滑肌肉瘤和类似疾病)、胰腺(例如，诸如导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤和类似疾病)、小肠(例如，诸如腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤和类似疾病)、大肠(例如，诸如腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤和类似疾病)；

-泌尿生殖道：肾(例如，诸如腺癌、威氏肿瘤(肾胚细胞瘤)、淋巴瘤、白血病和类似疾病)、膀胱和尿道(例如，诸如鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌和类似疾病)、前列腺(例如，诸如腺癌、肉瘤)、睾丸(例如，诸如精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤和类似疾病)；

-肝：肝癌(例如，肝细胞癌和类似疾病)、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；

-骨：成骨肉瘤(例如，诸如骨肉瘤和类似疾病)、纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(例如，诸如网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(例如，诸如骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨肌瘤样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；

-神经系统：颅骨(例如，诸如骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎和类似疾病)、脑脊膜(例如，诸如脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病和类似疾病)、脑(例如，诸如星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤和类似疾病)、脊髓(例如，诸如神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤和类似疾病)；

-妇科学的：子宫(例如，诸如子宫内膜癌和类似疾病)、子宫颈(例如，诸如宫颈癌、癌前子宫颈发育不良(pre-tumor cervicaldysplasia)和类似疾病)、卵巢(例如，诸如卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌]、粒层-卵泡膜细胞瘤、卵巢塞-莱二氏细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤和类似疾病)、外阴(例如，诸如鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤和类似疾病)、阴道(例如，诸如透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤[胚胎性横纹肌肉瘤]、输卵管(癌)和类似疾病)；

-血液学的：血液(例如，诸如髓细胞性白血病[急性和慢性]、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓组织增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征和类似疾病)、何杰金病、非何杰金淋巴瘤；

-皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、胎块发育不良痣(moles dysplastic nevus)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕疙瘩、银屑病和类似疾病；以及

-肾上腺：成神经细胞瘤。

化合物

本发明的一个方面涉及一种式I的化合物或该化合物的药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、巯基、羟基、甲酰基、羧基、COO(C₁至C₆直链或支链烷基)、COO(C₁至C₆直链或支链烯基)、COO(C₁至C₆直链或支链炔基)、CO(C₁至C₆直链或支链烷基)、CO(C₁至C₆直链或支链烯基)、CO(C₁至C₆直链或支链炔基)、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、甲酰基、羧基和巯基的一个至四个取代基取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H、-OH或-CH₂OH。

在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、硝基、巯基、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个或多个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氢、卤素、C₁至C₆烷基、C₁至C₆烯基、C₁至C₆烷氧基和C₁至C₆链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个至三个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是卤素。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是氟。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂每一个都是氟。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-CN。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-CN。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-NO₂。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-NO₂。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-SH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-SH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-OH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-OH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-CHO。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-CHO。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COOH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COOH。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COOR_x，其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COOR_x，其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COR_x，其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COR_x，其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烯基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烯基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烷基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烯基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烯基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烯基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆烷氧基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烷氧基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基并且另一个是-H。

在另外的实施方案中，R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基并且另一个是-H。

在一些实施方案中，式I化合物是：

其中，由星号标注的碳可具有(R)或(S)构型。在一些实施方案中，所公开的药物组合物或使用的方法可包括具有(R)构型的化合物、(S)构型的化合物或(R)构型的化合物和(S)构型的化合物的混合物。在一些实施方案中，R₁和R₂独立地选自氟和氢，条件是R₁和R₂不可都是氢。

在另外的实施方案中，式I的化合物具有Ia或Ib的立体化学：

在另外的实施方案中，式I的化合物选自化合物1至23和其药学上可接受的盐：

化合物1               化合物2          化合物3

化合物4               化合物5          化合物6

化合物7               化合物8          化合物9

化合物10              化合物11         化合物12

化合物13             化合物14             化合物15

化合物16             化合物17             化合物18

化合物19             化合物20             化合物21

化合物22             化合物23。

在另外的实施方案中，式I的化合物选自化合物1a、1b、2a、2b、3a、3b和其药学上可接受的盐。

化合物1a            化合物1b          化合物2a

化合物2b         化合物3a        化合物3b。

由于本发明的化合物可具有至少一个手性中心，所以它们可以对映异构体、非对映异构体、外消旋混合物、非外消旋混合物或其他立体异构体的形式存在。本发明包括所有这些可能的异构体以及几何异构体和互变异构体。

立体异构体可通过已知的方法来制备或分离。例如，非对映异构体可通过物理分离方法例如分级结晶和色谱技术来分离。而对映异构体可通过用光学活性的酸或碱对非对映异构体的盐进行选择性结晶或通过手性色谱法来彼此分离。纯的立体异构体也可从适当的立体化学纯的起始原料合成制备或通过使用立体选择性反应来制备。

药物组合物

本发明的另一个方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包括：

(i)有效量的如本文描述的本发明的化合物，所述化合物包括但不限于每个明示的实施方案；以及

(ii)药学上可接受的赋形剂。

在另外的实施方案中，药物组合物还包括有效量的至少一种另外的治疗剂，例如CDA底物药物或化疗剂。

CDA底物药物可以是可由CDA脱去氨基的任何药物。CDA底物的非限制性实例包括胞嘧啶和胞苷类似物，例如地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷、cytochlor以及美国公开号第2006/0014949中公开的化合物。在一些实施方案中，CDA底物药物是地西他滨。在另外的实施方案中，CDA底物药物是5-氮杂胞苷。在还有另外的实施方案中，CDA底物药物是吉西他滨。在还有另外的实施方案中，CDA底物药物是ara-C。

化疗剂的实例包括但不限于：

烷基化剂(例如，其可包括阿霉素、环磷酰胺、雌莫司汀、卡莫司汀、丝裂霉素、博来霉素和类似物)；

抗代谢物(例如，其可包括5-氟-尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、奈拉滨、氟达拉滨、氨甲喋呤和类似物)；

铂酸化剂(platinating agent)(例如，其可包括顺铂、奥沙利铂、卡铂和类似物)；

拓扑异构酶抑制剂(例如，其可包括拓扑替康、伊立替康、依托泊苷和类似物)；

微管蛋白剂(例如，其可包括紫杉醇、多烯紫杉醇、长春瑞滨、长春碱、长春新碱、其他紫杉烷类、埃博霉素类和类似物)；

信号抑制剂(例如，激酶抑制剂、抗体、法呢基转移酶抑制剂和类似物)；以及

其他化疗剂(例如，他莫昔芬、抗有丝分裂剂(例如保罗样激酶抑制剂或极光激酶抑制剂)和类似物)。

本发明的化合物的“有效量”可从0.1wt.％至约100wt.％变化。在一些实施方案中，化合物的有效量是0.1至20％w/w。在其他实施方案中，有效量是1-10％w/w。在还有其他的实施方案中，有效量是2-5％w/w。

本发明的药物组合物可被配制成以固体或液体形式给药，固体或液体形式包括适用于下列的那些：(1)口服给药，例如，浸液(例如含水的或非水的溶液或悬浮液)、片剂(例如，靶向口腔、舌下和全身吸收的那些)、囊片、大丸药、粉末、颗粒、施用于舌的糊剂、硬胶囊、软胶囊、口腔喷剂、糖锭剂、锭剂、丸剂、糖浆、悬浮液、酏剂、液体、乳剂和微乳剂；(2)胃肠外给药，例如，作为诸如无菌溶液或悬浮液通过皮下的、肌肉内的、静脉内的或硬膜外的注射；(3)局部施用，例如作为向皮肤施用的乳膏、软膏、贴片、垫或喷雾；(4)阴道内给药或直肠内给药，例如作为阴道栓剂、乳膏或泡沫；(5)舌下给药；(6)眼部给药；(7)经皮给药；或(8)经鼻给药。药物组合物可被配制用于即时的、持续的或控制的释放。

在一些实施方案中，药物组合物被配制用于口服给药。在另外的实施方案中，药物组合物被配制用于以固体形式口服给药。

可使用已知的材料和技术来制备本发明的药物组合物，所述技术可包括但不限于将本发明的化合物与药学上可接受的赋形剂和任选的治疗剂混合和/或共混。

方法

本发明的另一个方面涉及一种用于抑制胞嘧啶核苷脱氨酶的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者给药有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

本发明的另一个方面涉及一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者给药：

(i)有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案；以及

(ii)CDA底物药物，CDA底物药物包括但不限于本文描述的每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

在一些实施方案中，癌症选自血液学癌症和实体癌。在另外的实施方案中，血液学癌症选自MDS和白血病。在另外的实施方案中，实体癌选自胰腺癌、卵巢癌、腹膜癌、非小细胞肺癌和乳腺癌。在还有另外的实施方案中，白血病是急性骨髓性白血病(AML)或慢性骨髓性白血病(CML)。

本发明的另一个方面涉及一种通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解的方法，所述方法包括向正在经受使用CDA底物药物的治疗的受治疗者给药有效量的如本文描述的本发明的化合物或药物组合物，化合物或药物组合物包括但不限于每个明示的实施方案。CDA底物药物包括但不限于本文描述的每个明示的实施方案。

在一些实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在另外的实施方案中，受治疗者是人类。

本发明的化合物或组合物的给药可经由本领域技术人员已知的任何接受的方式，例如，口服地、胃肠外地、通过吸入喷雾、局部地、直肠地、经鼻地、口腔地、阴道地、眼内地、肺内地或经由植入型储库(implanted reservoir)。术语“胃肠外地”包括但不限于皮下地、静脉内地、肌肉内地、腹膜内地、鞘内地、心室内地、胸骨内地(intrasternally)、颅内地、通过骨内注射和通过灌注技术。

可使用本领域技术人员众所周知的用于调节药物递送的时间和顺序的任何给药方案，并且如果需要的话重复该给药方案，以实现本发明的方法的治疗。例如，本发明的化合物或组合物可通过单一剂量、多次不连续的剂量或连续输注而被施用每天1、2、3或4次。

可在给药CDA底物药物之前、基本上同时或之后给药本发明的化合物或组合物。给药方案可包括用至少一种另外的治疗剂预治疗和/或联合给药。在这样的情况下，可同时地、单独地或顺序地给药本发明的化合物或组合物、CDA底物药物和至少一种另外的治疗剂。

给药方案的实例包括但不限于：

以顺序的方式给药每种化合物、组合物、CDA底物药物和/或治疗剂；以及

以基本上同时的方式(例如，当以单一的单位剂量形式时)或以每种化合物、组合物、CDA底物药物和/或治疗剂的多个单独的单位剂量形式联合给药每种化合物、组合物、CDA底物药物和/或治疗剂。

本领域的技术人员应当理解，“有效量”或“剂量水平”将取决于各种因素，例如具体给药方式、给药方案、所选的化合物和组合物以及被治疗的具体疾病和患者。例如，适当的剂量水平可根据下述情况而变化：所使用的具体的化合物或组合物的活性、排泄速度和可能的毒性；被治疗的患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药的频率；联合给药的其他治疗剂；和疾病的类型和严重度。

本发明涵盖在约0.001至约10,000mg/kg/d数量级的剂量水平。在一些实施方案中，剂量水平是约0.1至约1,000mg/kg/d。在其他实施方案中，剂量水平是约1至约100mg/kg/d。在还有其他的实施方案中，剂量水平是约1至约50mg/kg/d。在还有其他的实施方案中，剂量水平是约1至约25mg/kg/d。适当的剂量水平、给药方式和给药方案可由本领域的技术人员使用已知的技术来确定。

试剂盒

本发明的另一个方面涉及含有至少一个单位剂量形式的试剂盒，该单位剂量形式包含本发明的化合物或药物组合物。

试剂盒还可包括适于商业销售的容器和/或包装。容器可以是由药学上可接受的材料制造的如本领域中已知的任何常规的形状或形式，例如纸盒或纸板盒、玻璃瓶或塑料瓶或大口瓶、可重复密封的袋或便于根据治疗方案压出包装的具有单个剂量的泡罩包装。可在单一包装中一起使用多于一种容器。例如，片剂可被包含在泡罩包装中，而泡罩包装又被包含在盒中。

试剂盒还可包含信息。可在可读的介质上提供所述信息。可读的介质可包括标签。信息可针对医师、药剂师或患者。信息可表明单位剂量形式可产生一种或多种不良影响。信息可包括例如以本文描述的方式给药单位剂量形式的说明。这些说明可以各种方式来提供。例如，信息可包括包含各种重量或重量范围和对每种重量或重量范围来说适当的剂量的表格。

信息可与容器相关，例如通过：写在粘贴于容器的标签(例如，处方标签或单独的标签)上；作为书写的包装说明书包括在容器中；直接应用于容器，例如被打印在盒或泡罩包装的壁上；或通过系上或捆上连接，例如作为经由带子、绳或其他线、系索或栓绳型装置(tethertype device)固定于瓶颈的说明卡。

对本领域的技术人员来说，显然本发明的具体的实施方案可涉及上文说明的方面中的一个、一些或所有以及其他方面，并且可包括上文和下文说明的实施方案中的一个、一些或所有以及其他实施方案。

除了在实施例中或以另外的方式表明时，在本说明书和权利要求中所用的表示成分、反应条件等等的量的所有数目应被理解为由术语“约”修饰。相应地，除非相反地表明，否则这种数目是近似值，这种数目可根据试图通过本发明获得的所期望的特性而变化。至少并且不意图限制对权利要求的范围应用等同原则，每个数字参数应当根据有效数字和普通舍入技术的数目来解释。

尽管说明本发明的宽范围的数值范围和参数是近似值，但实施例中的数值是尽可能准确地报道的。然而，任何数值固有地包含必然由它们各自的测试测量中存在的标准偏差产生的某些误差。

实施例

下列实施例阐释本发明而不意图限制本发明。

化合物合成

可以如本文描述的和/或通过已知方法的应用或修改来制备本发明的化合物。本领域的技术人员应当理解，在反应方案中描述的反应物、步骤和/或条件中的一个或多个可能需要调整以适应R₁和R₂处的其他取代基。

实施例1：

方案1.二氟四氢尿苷衍生物(化合物1a和1b)的合成

2’2’-二氟-二氢-尿苷(DFDHU，25)。将吉西他滨24(3.0g，11.4mmol)溶于H₂O(50mL)中。向溶液加入载于氧化铝上的铑(900mg)并且将混合物于40psi氢化过夜。第二天，将混合物过滤，真空除去水并且将所得的粘性固体再次溶于H₂O中。向溶液加入载于氧化铝上的铑(900mg)并且将材料于40psi氢化过夜。过滤除去铑并且将所得的滤液浓缩以获得二氟二氢尿苷(5，DFDHU)和～10％的二氟四氢尿苷1a和1b(DFDHU)的粗混合物。在反相HPLC(反相C₁₈，5％CH₃CN/H₂O)上纯化粗混合物以获得1.84g  (61％，14.5分钟)的DFDHU 25和175mg(17％，1a，9.5分钟和1b，13.9分钟)的DFTHU的差向异构体。化合物1a的C-4的绝对构型由单晶X射线衍射确定，并与关于与四氢尿苷的单一差向异构体络合的胞嘧啶核苷脱氨酶的晶体结构的文献先例一致。5的¹HNMR：6.00(dd，IH)，4.20(q，1H)，3.92-3.72(m，3H)，3.64(m，1H)，3.43(m，1H)，2.68(t，2H)。

2’2’-二氟-四氢尿苷(DFDHU，1a和1b)。将DFDHU 25(1.2g，4.9mmol)溶于30mL的MeOH中并冷却至0℃。向溶液分批加入硼氢化钠(540mg，14.6mmol)并且将反应物缓慢加热至室温。于室温(r.t.)搅拌4小时后，真空除去MeOH并且将残留物溶于15mL的H₂O中。用2.0N HCl将溶液中和至pH 7。之后经由制备型HPLC(反相C₁₈，5％CH₃CN/H₂O)纯化溶液。盐在5.2分钟洗出。在7.5分钟出现一个峰(12％)。DFTHU的一种差向异构体1a在9.5分钟时洗出(350，29％)。另一种差向异构体1b在14.3分钟洗出(370mg，31％)。脱氧的产物26在17分钟洗出(200mg，17％)。

1a¹HNMR(D₂O，9.5分钟)：6.03(dd，1H)，5.04(bs，1H)，4.20(q，1H)，3.90-3.71(m，3H)，3.53(dt，1H)，3.30(dt，1H)，1.92-1.75(m，2H).C₉H₁₄N₂O₅F₂的分析计算值(0.15 H₂O)：C，39.90；H，5.32；N，10.34.实测值：C，39.87；H，5.41；N，10.26。

1b¹HNMR(D₂O，14.3分钟)：5.97(dd，1H)，5.03(bt，1H)，4.16(q，1H)，3.91-3.68(m，3H)，3.41(dt，1H)，3.20(dt，1H)，1.95-1.80(m，2H).C₉H₁₄N₂O₅F₂的分析计算值(0.60 H₂O)：C，38.74；H，5.49；N，10.04.实测值：C，38.55；H，5.36；N，9.87。

26¹H NMR(D₂O)δ5.99(dd，J＝15Hz，6Hz，1H)，4.17(m，1H)，3.89(m，1H)，3.75(m，2H)，3.42(m，1H)，3.21(t，J＝6Hz，2H)，3.18(m，1H)，1.86(m，2H)。

实施例2

方案2.2’(R)-氟-2’脱氧-四氢尿苷(化合物2a和2b)的合成

2’(R)-氟-2’脱氧-二氢尿苷[(R)-FDHU，28]。将2’-氟-2’-脱氧尿苷27(1.2g，4.9mmol)溶于含有几滴浓氢氧化铵(5滴)的H₂O(30mL)中。向溶液加入载于氧化铝上的铑(300mg)并且将混合物于40psi氢化过夜。第二天，将混合物过滤，且将滤液浓缩并经由制备型HPLC(反相C₁₈，5％CH₃CN/H₂O)纯化。主要产物是28，(R)-FDHU，其在9.2分钟时洗出(780mg，64％)。一些残留的起始材料7a(5.5分钟，95mg，8％)和极少量的FTHU 2a和2b(7.2分钟，50mg，4％和8.6分钟，45mg，4％)被分离。¹HNMR 28(D₂O)：5.83(dd，1H)，5.07(dd，1H)，4.18(q，1H)，3.90-3.78(m，2H)，3.65(dt，1H)，3.52-3.35(m，2H)，2.64(t，2H)。

2’(R)-氟-2’-脱氧-四氢尿苷((R)-FTHU，2a和2b)。将(R)-FDHU(600mg，2.4mmol)溶于20mL的MeOH中并冷却至0℃。向溶液分批加入硼氢化钠(355mg，9.6mmol)并且将反应缓慢加热至室温，过夜。真空除去MeOH并且将残留物溶于10mL的H₂O中。用2.0N HCl将溶液中和至pH 7。之后经由制备型HPLC(反相C₁₈，5％CH₃CN/H₂O)纯化溶液。期望的产物2a在7.2分钟洗出(275mg，46％)，之后是8.6分钟洗出的另一种差向异构体2b(125mg，21％)以及9.2分钟的一些残留的起始材料和14.9分钟的完全还原的材料29(50mg，9％)。根据关于与四氢尿苷的单一差向异构体络合的胞嘧啶核苷脱氨酶的晶体结构的文献先例来确定2a和2b的C-4的立体化学。

2a(7.2分钟)：¹HNMR(DMSO-d₆)：7.21(d，1H)，5.93(dd，1H)，5.59(d，1H)，5.39(d，1H)，4.99-4.75(m，3H)，3.95(m，1H)，3.62-3.21(m，5H)，1.69(m，2H)；¹³CNMR：153.12，91.2(d)，85.93(d)，81.36，71.30，68.3(d)，60.43，34.13，28.66.C₉H₁₅N₂O₅F的分析计算值(0.5 H₂O)：C，41.70；H，6.22；N，10.81.实测值：C，41.67；H，6.26；N，10.76。

2b(8.6分钟)：¹HNMR(DMSO-d₆)：7.15(d，1H)，5.95(dd，1H)，5.58(d，1H)，5.40(d，1H)，5.00-4.75(m，3H)，3.92(m，2H)，3.61-3.29(m，5H)，2.98(m，1H)，1.80-1.65(m，2H)；¹³CNMR：154.02，92.24(d)，86.62(d)，81.63，71.73，68.86(d)，60.89，35.08，29.00。

29(14.9分钟)：¹HNMR(D₂O)：5.93(dd，1H)，5.07(d，1H)，4.61(m，1H)，4.24(m，1H)，3.96-3.65(m，3H)，3.35-3.14(m，3H)，2.12-1.79(m，2H)。

实施例3

方案3.2’(S)-氟-2’脱氧-四氢尿苷(化合物3a和3b)的合成

2’(S)-氟-2’脱氧-二氢尿苷[(S)-FDHU，31]。将化合物30(1.2g，4.0mmol)溶于H₂O(40mL)中。向溶液加入载于氧化铝上的铑(200mg)并且将混合物于50psi氢化过夜。第二天，将混合物通过硅藻土垫过滤并于真空浓缩。以定量的产量获得期望的产物31(＞1.0g)。¹HNMR(D₂O)：6.08(dd，1H)，5.09(dt，1H)，4.28(m，1H)，3.85-3.80(m，2H)，3.72(m，2H)，3.51(m，1H)，2.65(t，J＝9Hz，2H)。

2’(S)-氟-2’脱氧-四氢尿苷((S)-FTHU，3a和3b)。将化合物31(1.12mg，4.55mmol)溶于28mL的MeOH中并冷却至0℃。向溶液分批加入硼氢化钠(475mg，12.55mmol)并且使反应持续1小时15分钟。真空除去MeOH并且将残留物溶于15mL的5％CH₃CN/H₂O中。用2.0N HCl将溶液中和至pH 7(～3mL)。之后经由制备型HPLC(反相C₁₈ Phenomenex Luna，采用5％CH₃CN/H₂O(等梯度洗脱液和折光率检测器)纯化溶液。期望的产物3a在9.3分钟洗出(163mg，14％)，之后是在13.4分钟洗出的另一种差向异构体3b(236mg，21％)，检测到一些残留的起始材料(未定量)以及完全还原的产物32(未定量)。根据关于与四氢尿苷的单一差向异构体络合的胞嘧啶核苷脱氨酶的晶体结构的文献先例来确定3a和3b的C-4的立体化学。

3a(9.3分钟)：¹HNMR(D₂O)δ6.12(dd，1H)，5.04(dt，1H)，5.03(m，1H)，4.27(m，1H)，3.83-3.59(m，4H)，3.34(m，1H)，1.86(m，2H).¹³CNMR：157.9，98.6(d)，83.9(d)，82.5，75.7(d)，74.0，62.6，37.5，30.0.C₉H₁₅N₂O₅F的分析计算值(0.25 H₂O)：C，42.44；H，6.13；N，11.00.实测值：C，42.49；H，6.09；N，10.82。

3b(13.4分钟)：¹HNMR(D₂O)δ6.07(dd，1H)，5.02(dt，1H)，5.02(t，1H)，4.26(dt，1H)，3.84-3.66(m，4H)，3.35(m，1H)，1.86(m，2H)；¹³CNMR：157.8，98.2(d)，84.4，82.0，75.7，74.0，62.4，38.4，29.3.C₉H₁₅N₂O₅F的分析计算值(0.4 H₂O)：C，41.96；H，6.19；N，10.87.实测值：C，41.99；H，6.15；N，10.91。

实施例4

CDA酶活性

可使用下列测定方法来证明本发明的化合物抑制CDA的酶活性的能力。

确定CDA酶活性的程序是基于公开的方法(例如Cacciamani，T.等人，Arch.Biochem.Biophys.1991，290，285-92；Cohen R.等人，J.Biol.Chem.，1971，246，7566-8；Vincenzetti S.等人，Protein Expr.Purif.1996，8，247-53)。测定是依据CDA催化的胞苷脱氨基以形成尿苷的286nm处的吸光度的变化。在96孔板规格上以200μl的总体积在磷酸钾缓冲液(pH 7.4，20mM，含有1mM DTT)中进行反应。最终的反应混合物含有胞苷(50μM)和纯化的人类重组CDA。稀释纯化的酶以便产生约2毫吸光度单位/分钟的吸光度变化。在加入CDA之前进行随着时间的吸光度变化的基线测量，以确保在没有CDA的情况下没有吸光度变化。在加入CDA之后，监测吸光度变化20-30分钟。当存在可能的抑制剂时，分别测量在0.1nM-1mM范围内的8个浓度以便得到IC₅₀值。将含有胞苷和CDA但是没有抑制剂的样品的随着时间的吸光度(总值)变化的斜率归一化为100％。从100％减去表示为总活性的百分比的在化合物的存在下残留的CDA酶活性，以便获得在不同化合物浓度时的抑制百分比。

使用上文描述的测定，估算化合物1和2的抑制效力。化合物的IC₅₀值呈现于表1中。“1a”和“1b”表示单一立体异构体；“1”表示差向异构体的混合物。

表1.测试化合物的抑制效力

  化合物  IC₅₀(nM)  1a  400±60  1b  5000±1000  1  400±60  2a  200±50

  化合物  IC₅₀(nM)  2b  5000±2000  2  2000±3000  3a  400±80  3b  4000±700  3  2000±1000

CDA底物药物的功效的增强

可在L 1210小鼠淋巴瘤模型中证明本发明的化合物增强CDA底物药物的功效的能力。

实施例5：

L1210存活模型中CDA抑制剂化合物1对地西他滨(0.1 mg/kg)诱导的存活的影响

方法

30只6-7周大的CD2F1雌性小鼠被随机分为6组：

 组# 1  L1210静脉注射(i.v.)和媒介物+媒介物口服(p.o.)x2，持续4天 2  L1210i.v.和媒介物+化合物1 10mg/kg p.o.x2，持续4天 3  L1210i.v.和媒介物+0.1mg/kg地西他滨p.o.x2，持续4天 4  L1210i.v.和化合物11mg/kg+01mg/kg地西他滨p.o.x2，持续4天 5  L1210i.v和化合物110mg/kg+0.1mg/kg地西他滨p.o.x2，持续4天 6  L1210i.v.和媒介物+0.1mg/kg地西他滨腹膜内注射(i.p.)x2，持续4天

L1210静脉内(i.v.)注射：在实验之前，将L 1210细胞在CD2F1雌性小鼠中传代(pass)至少3次。在使用CO₂处死一周前用L1210腹水腹膜内(i.p.)注射小鼠。使每只小鼠仰卧，用乙醇擦将其腹部表面擦净并且向其腹膜腔做一个小切口。向腔内注射2ml的于盐水中的冰冻的2.1％牛血清白蛋白(BSA)。将流体从腔抽出，用18G 3cc注射器转移至干净的无菌管中并且保存在冰上。在盐水中的2.1％BSA中以1∶10稀释流体并且向2ml稀释的腹水加入一滴zap-o-球蛋白。在血细胞计数器上对稀释的腹水(再次以1∶10稀释)计数并且计算细胞/ml的数目。将BSA溶液中的腹水储备液稀释至1x10⁴个细胞/0.1ml。用27G针对小鼠注射0.1ml的细胞溶液。

剂量溶液制备：适当时，在地西他滨之前30分钟用媒介物或化合物1口服对小鼠给药。

化合物1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备成1mg/ml并且之后在PBS中稀释至0.1mg/ml，以得到较低的剂量。

将地西他滨在PBS中制备为1mg/ml储备液并且适当地稀释以获得0.01mg/ml和0.02mg/ml的剂量溶液(dosing solution)。

剂量方案：每天新鲜配制地西他滨两次。给药时将所有剂量溶液贮存于冰上。连续四天每天两次(8小时间隔)i.p.或口服(p.o.)对小鼠给药。最终的剂量方案和总的地西他滨和化合物1的剂量概括于表2中。

表2.剂量方案

  组  #  药物  地西他滨  剂量  (给药途径)  累积的  地西他滨  剂量  化合物1  剂量  累积的  化合物1  剂量  1  媒介物  媒介物  0mg/kg  媒介物  0mg/kg  2  化合物1  媒介物  0mg/kg  10mg/kg  80mg/kg  3  地西他滨  0.1mg/kg p.o.  0.8mg/kg  媒介物  0mg/kg  4  地西他滨/  化合物1  0.1mg/kg p.o.  0.8mg/kg  1mg/kg  40mg/kg  5  地西他滨/  化合物1  0.1mg/kg p.o.  0.8mg/kg  10mg/kg  80mg/kg  6  地西他滨  0.1mg/kg i.p.  0.8mg/kg  媒介物  0mg/kg

存活和尸体解剖。研究持续期间(30天)每天(周一至周五)观察小鼠的存活和称重。对死亡的小鼠进行尸体解剖并且观察器官中肿瘤的存在。按照Covey等人，Eur.J.Cancer Oncol.1985，通过大于1.6g的肝重和大于150mg的脾重确定肿瘤死亡。

使用地西他滨或地西他滨加上化合物1给药的小鼠比用媒介物对照或单独的化合物1给药的小鼠活得更长(图1和表3；p＜0.05)。用与地西他滨联合的化合物1观察到剂量响应的趋势。

地西他滨(0.1mg/kg)p.o.不如0.1mg/kg地西他滨i.p.有效但是没有显著差异(表3；图1，p＝0.052)。

与单独的0.1mg/kg地西他滨p.o.(p＝0.0031)和0.1mg/kg地西他滨i.p.(p＝0.016；表3，图1)相比，10mg/kg化合物1与0.1mg/kg地西他滨p.o.的共施用显著增加了存活。与单独的0.1mg/kg地西他滨p.o.(p＝0.0031)相比，但不与0.1mg/kg地西他滨i.p.(p＝0.13；表3，图1)相比，1mg/kg化合物1与0.1mg/kg地西他滨p.o.的共施用显著增加了存活。

表3列出了每个治疗组的平均存活和与媒介物组相比的百分比ILS(增加的生存期)。所有治疗的组明显比媒介物对照和单独CDA抑制剂的组生存得更久(p＜0.05)。

表3列出了尸体解剖时小鼠的肝和脾的重量。如大于1g的肝重和大于80mg的脾重指示的(Covey等人，如上)，除了一只0.1mg/kg地西他滨i.p.小鼠之外，所有小鼠死于“肿瘤负荷”相关的死亡。三只对照小鼠的肝和脾的重量是0.97±0.08g和0.08±0.02g。记录关于腹腔和胸腔的整体外观的大体观察。

表3.在L1210 IV存活模型中地西他滨和化合物1对存活以及肝重和脾重的影响

  组#  L1210  细胞  平均存活  (天)±SD  ^*％ILS  (增加的  存活期)  平均肝重  (g)±SD  平均脾重  (g)±SD  1  1x10⁴  7.40±0.55  n/a  1.81±0.13  0.31±0.05  2  1x10⁴  7.40±0.55  0.00  1.99±0.22  0.39±0.07  3  1x10⁴  10.6±0.56  43.24  2.05±0.17  0.33±0.06  4  1x10⁴  12.8±0.45  72.97  2.03±0.08  0.29±0.03  5  1x10⁴  14.2±0.45  91.89  2.02±0.27  0.29±0.07

^*％ILS＝实验的平均存活(天)-对照的平均存活(天)X100

对照的平均存活(天)

图1是显示在L 1210小鼠淋巴瘤模型中化合物1对地西他滨(DAC)诱导的存活的影响的图。

实施例6：

在L1210存活模型中CDA抑制剂化合物1a对地西他滨(0.1mg/kg)诱导的存活的影响

按照实施例5的规程在L1210模型中评价化合物1a。用地西他滨(“DAC”)和DAC加上化合物1a给药的小鼠比接受媒介物对照和单独CDA抑制剂的小鼠活得更长(图2；p＜0.05)。与DAC联合的10mg/kg化合物1a在延长存活上比更低的剂量更有效。

实施例7：

在L1210存活模型中CDA抑制剂化合物3a对地西他滨(0.1mg/kg)诱导的存活的影响

按照实施例5的规程在L1210模型中评价化合物3a。用地西他滨(“DAC”)和DAC加上化合物3a给药的小鼠比接受媒介物对照和单独CDA抑制剂的小鼠活得更长(图3；p＜0.05)。

实施例8：

在L1210存活模型中CDA抑制剂化合物1对阿糖胞苷(ara-c)诱导的存活的影响

50只6-7周大的CD2F1雌性小鼠被随机分为10组。(N＝5只小鼠/组)：

 组# 1  L1210(i.v)和媒介物+媒介物(PBS)p.o.x2，持续4天 2  L1210i.v和媒介物+Ara-C 200mg/kg p.o.x2，持续4天 3  L1210i.v.和媒介物+Ara-C 100mg/kg p.o.x2，持续4天 4  L1210i.v.和媒介物+Ara-C 50mg/kg p.o.x2，持续4天 5  L1210i.v.和媒介物+Ara-C 25mg/kg p.o.x2，持续4天 6  L1210i.v.和化合物110mg/kg+Ara-C 200mg/kg x2，持续4天 7  L1210i.v.和化合物110mg/kg+Ara-C 100mg/kg x2，持续4天 8  L1210i.v和化合物110mg/kg+Ara-C 50mg/kg x2，持续4天 9  L1210i.v.和化合物110mg/kg+Ara-C 25mg/kg x2，持续4天 10  L1210i.v.和化合物110mg/kg+媒介物p.o.x2，持续4天

L1210IV注射：在处死(CO₂)一周前用L1210腹水i.p.注射CD2F1雌性小鼠。在实验之前，将L1210细胞在体内传代至少3次。使每只小鼠仰卧，用乙醇擦将其腹部表面擦净并且向其腹膜腔做一个小切口。向腔内注射2ml的于盐水中的冰冻的2.1％BSA，并然后将流体抽出并用18G 3cc注射器转移至干净的无菌管中并且保存在冰上。在盐水中的2.1％BSA中以1∶10稀释流体并且向2ml稀释的腹水加入一滴zap-o-球蛋白。在血细胞计数器上对稀释的腹水(再次以1∶10稀释)计数并且计算细胞/ml的数目。将BSA溶液中的腹水储备液稀释至1x10⁴个细胞/0.1ml。用27G针对小鼠注射0.1ml的细胞溶液。整个i.v.注射需要约50分钟。

剂量溶液制备：适当时，在Ara-c之前30分钟用媒介物或化合物1口服对小鼠给药。化合物1在PBS中制备成1mg/ml，且Ara-C在PBS中制备成20mg/ml的储备液，且之后适当稀释以得到较低的剂量。

剂量方案：在研究开始时制备化合物1并贮存于4℃。每天新鲜配制Ara-C两次。给药时将所有溶液贮存于冰上，连续四天每天两次(8小时间隔)口服地对小鼠给药。最终的剂量方案和总的Ara-C和化合物1的剂量概括于表4中。

表4.剂量方案

存活和尸体解剖。研究持续期间(45天)每天(周一至周五)观察小鼠的存活和称重。对死亡的小鼠进行尸体解剖并且观察器官中肿瘤的存在。按照Covey等人(同上)通过大于1.6g的肝重和大于150mg的脾重确定肿瘤死亡。

使用单独的Ara-C(50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg)和Ara-C加上化合物1给药的小鼠比用媒介物对照和单独的CDA抑制剂治疗的小鼠活得更长(图4-7；p＜0.05)。与媒介物对照相比，单独的化合物1对存活没有影响(图4)。

与用媒介物和10mg/kg化合物1治疗的小鼠相比，单独的25mg/kgAra-C对延长存活没有影响。与对照组的小鼠相比，50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg Ara-C以剂量依赖性的方式显著增加存活(天)。与用相同剂量的单独的Ara-C治疗的小鼠的存活时间相比，10mg/kg化合物1与Ara-C p.o.的共施用显著增加存活(图4-7)。

实施例9：

在小鼠A2780人类卵巢癌异种移植模型中化合物1对吉西他滨诱导的肿瘤体积减少的影响

在人类卵巢癌异种移植A2780中测试与化合物1联合的吉西他滨的口服功效。用30-60mg的肿瘤片段对5-6周大的雌性NCr nu/nu小鼠进行皮下移植。第11天，当肿瘤大约200mm³时，如表5中所描述的开始治疗。

表5.剂量方案

  组  治疗  吉西他滨时间表  化合物1时间表  1  2  3  4  5  6  介质(盐水)  化合物1  吉西他滨  吉西他滨/化合物^*  吉西他滨  吉西他滨/化合物^*  PO；q3dx4   PO 10mg/kg；q3dx4  PO 10mg/kg；q3dx4  PO 30mg/kg；q3dx4  PO 30mg/kg；q3dx4   PO 10mg/kg q3dx4   PO 10mg/kg q3dx4   PO 10mg/kg q3dx4

*在吉西他滨前大约30分钟给药化合物1

在整个实验中观察肿瘤体积。每周测量肿瘤体积三次。通过长椭球的体积公式(LxW²)/2从卡尺测量结果计算肿瘤负荷(mg＝mm³)，其中L和W分别是直交的长度和宽度测量结果(mm)。

A2780模型中用于评价功效的主要指标是完全和部分的肿瘤退化、肿瘤生长延迟和研究结束时的无瘤存活者的数目。完全响应(CR)被界定为肿瘤大小减少至不可测量的大小(＜50mm³)。部分响应(PR)被界定为肿瘤质量从起始的肿瘤大小减少＞50％。在研究期间达到CR或PR但又开始生长的肿瘤仍被认为是CR或PR。研究结束时的无瘤存活(TFS)是在研究终点(第74天)没有可测量的肿瘤(＜50mm³)。这一实验中将肿瘤生长延迟(TGD)界定为与对照组相比达到750mm³时治疗组的天数的中位数目。

10mg/kg PO q3dx4吉西他滨的口服给药在这一模型中不是非常有效，第74天时的实验终点获得6.1天的肿瘤生长延迟(非统计学上显著的)，没有CR、PR或无瘤存活者。当10mg/kg吉西他滨与化合物1联合给药时，与这一剂量的单独的吉西他滨相比，在实验结束时观察到显著的肿瘤生长的延迟(19.2天；与单独的吉西他滨相比p＜0.05)，且75％的肿瘤显示CR，但是没有TFS。在图8中(肿瘤体积对治疗开始后时间(天))，明显的是，单独的化合物1对肿瘤生长没有影响，而使用化合物1和吉西他滨的联合治疗比单独的吉西他滨更加有效。

30mg/kg PO q3dx4(MTD)吉西他滨的口服给药是有效的，产生统计学上显著的22天肿瘤生长延迟，具有63％CR但没有TFS。吉西他滨(30mg/kg PO)加上化合物1的联合化疗在第74天(实验终点)时产生统计学上显著的＞57天的肿瘤生长延迟和100％CR以及50％的TFS发生率。

表6.在A2780卵巢癌模型中吉西他滨和化合物1的联合治疗对肿瘤生长延迟的影响

  治疗  TGD  P值  未治疗的对照  NA  10mg/kg化合物1  0.4天

  治疗  TGD  P值  10mg/kg吉西他滨  6.1天  10mg/kg吉西他滨+化合物1  19.2天  与10mg/kg单独的吉西他滨相比  ＜0.05  30mg/kg吉西他滨  22天  与未治疗的对照相比＜0.05  30mg/kg吉西他滨+化合物1  ＞57天  与30mg/kg单独的吉西他滨相比  ＜0.05

实施例10：

化合物1a的固态表征

数据收集

将具有大约0.48x0.43x0.32mm的尺寸的化合物1a(F₂O₅N₂C₉H₁₄)的无色棱柱晶体安装在环中，所有测量在具有石墨单色Cu-Kα射线的Rigaku RAXIS SPIDER成像板平面检测器上进行。

从暴露60秒的5个回摆(oscillation)进行指标化(indexing)。晶体至检测器的距离是127.40mm。

用于数据收集的晶胞常数(cell constant)和取向矩阵符合简单的三角晶胞(劳厄晶组：-3ml)，其具有尺寸：

对于Z＝6和F.W.＝268.22，计算的密度是1.574g/cm³。基于以下的系统消光和对结构的成功解释和精修：

0001:1±3n

空间群被确定为：

P3₁21(#152)

于-123±1℃的温度下收集数据至136.4°的最大2θ值。收集总共111个回摆图像(oscillation image)。使用ω扫描以5.0°的步长于χ＝0.0°和从20.0°至200.0°进行数据的扫描。以5.0°的步长于χ＝54.0°和从20.0°至200.0°进行第二次扫描。以5.0°的步长于χ＝54.0°和从20.0°至185.0°进行第三次扫描，并使用ω扫描以5.0°的步长于χ＝0.0°和从20.0°至50.0°进行最后的扫描。辐照率是12.0[秒/°]。晶体至探测器的距离是127.40mm。以0.100mm像素的方式进行读出。

数据简化

在所收集的11772个映像(reflection)中，2052个是唯一的(Rint＝0.038)。合并等值的映像。

Cu-Kα射线的线性吸收系数μ是13.035cm^-1。使用经验的吸收校正，其产生从0.540至0.659的透射系数。针对洛仑兹和极化效应校正数据。使用对次级消光的校正(Larson，A.C.，Crystallographic Computing1970，291-294；方程22，用晶胞体积代替V)(系数＝0.005900)。

结构解释和精修

通过直接的方法(SIR92：Larson，A.C.，J.Appl.Cryst.，1994，27，435)解释结构并使用Fourier技术展开(DIRDIF99：Beurskens，P.T.等人，The DIRD-99 Program System.Technical Report of theCrystallography Laboratory(DIRD-99程序系统，晶体学实验室的技术报告)，1999，University of Nijmegen，The Netherlands)。将非氢原子各向异性地精修。一些氢原子被各向同性地精修而其余的使用riding模型精修。F²上的全矩阵最小二乘法精修的最终循环(最小二乘法加权＝∑w(F₀²-F_c²)²)是基于2052个观察到的映像和181个可变参数和收敛(最大参数偏移为＜其有效标准偏差(esd)的0.01倍)，其具有下列未加权和加权的协议因子(agreement factor)：

R1＝∑||Fo|-|Fc||/∑|Fo|＝0.0303

wR2＝[∑(w(Fo²-Fc²)²)/∑w(Fo²)²]^1/2＝0.0733

单位权(unit weight)的观察的标准偏差(标准偏差＝[∑w(Fo²-Fc²)²/(No-Nv)]^1/2，No＝观察的数目，Nv＝变量的数目)是1.10。使用单位权。最终差异Fourier图上的最大峰和最小峰分别对应和根据Flack参数，0.0(1)，推导出绝对结构，使用839个Friedel对来精修(Flack，H.D.，Acta Cryst.1983，A39，876-881)。

从Cromer，D.T.等人，International Tables for X-ray Crystallography(国际X射线晶体学表)1974，IV，表2.2A获取中性原子散射因子。反常色散效应被包括在Fcalc(Ibers，J.A.等人，Acta Crystallogr.1964，17，781)中；Δf’和Δf”的值是Creagh，D.C.等人.，International Tables forCrystallography(国际晶体学表)1992，C，表4.2.6.8，219-222的那些。质量衰减系数的值是Creagh，D.C.等人.International Tables forCrystallography(国际晶体学表)1992，C，表4.2.4.3，200-206的那些。除了精修之外，使用CrystalStructure 3.8结晶学软件包进行所有的计算，使用SHELXL-97进行精修。

实验细节

                            A.晶体数据

经验式                      F₂O₅N₂C₉H₁₄

化学式量                    268.22

晶体颜色，晶体外貌          无色，棱柱

晶体尺寸                    0.48X0.43X0.32mm

晶系                        三角形

晶格类型                    简单

指标化图像                  5回摆，60.0秒

检测器位置                  127.40mm

像素大小                    0.100mm

晶格参数

空间群                      P3₁21(#152)

Z值                         6

D_计算                       1.574g/cm³

F₀₀₀                        840.00

μ(CuKα)                   13.035cm^-1

                            B.强度测量

衍射仪                      Rigaku RAXIS-SPIDER

射线                        CuKα

                            石墨单色的

检测仪孔径                  460mmx256mm

数据图像                    111次曝光

ω回摆范围(χ＝0.0，)20.0-200.0°

ω回摆范围(χ＝54.0，)20.0-200.0°

ω回摆范围(χ＝54.0，)20.0-185.0°

ω回摆范围(χ＝0.0，)20.0-50.0°

辐照率                      12.0秒/°

检测器位置                127.40mm

像素大小                  0.100mm

2θ_Max                    136.4°

所测量的映像的数目        总数：11772

                          唯一的：2052(Rint＝

                          0.038)

                          Friedel对：839

校正                      洛仑兹-极化

                          吸收

                          (透射系数：0.540-

                          0.659)

                          次级消光

                          (系数5.90000e-003)

                          C.结构解释和精修

结构解释                  直接法(SIR92)

精修                      F²上的全矩阵最小二乘法

函数最小化                ∑w(Fo²-Fc²)²

最小二乘法加权            w＝1/[σ²(Fo²)+(0.0317·P)²

                          +0.6904·P]

                          其中P＝(Max(Fo²，0)+2Fc²)/3

2θ_Max临界值              136.4°

反常色散                  所有的非氢原子

观察数目(所有的映像)      2052

变量数目                  181

映像/参数的比             11.34

残差：R1(I＞2.00σ(I))    0.0303

残差：R(所有的映像)       0.0329

残差：wR2(所有的映像)     0.0733

拟合优度指示              1.099

Flack参数(Friedel对＝839) 0.0(1)

最后循环中的最大偏移/误差  ＜0.001

最后的差异图中的最大峰

最后的差异图中的最小峰

化合物1a的测定的结构的ORTEP图(Michael N.Burnett和CarrollK.Johnson，ORTEP-III：Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot Program forCrystal Structure Illustrations(ORTEP-III：用于晶体结构说明的OakRidgere热椭球绘图程序)，Oak Ridge National Laboratory ReportORNL-6895，1996)示于图9。

实施例11：

与THU相比化合物1a的酸稳定性的增强

通过¹H NMR光谱学评估化合物1a和四氢尿苷(THU)在酸溶液中的稳定性。

将四氢尿苷(THU，5mg)溶解于D₂O(0.75mL)中。¹HNMR(D₂O，300MHz，27℃)谱显示于图10中。向这一样品加入一滴氘化的TFA，之后即刻测定¹HNMR光谱(图10)。恰好在这一最早的时间点，于5.4ppm处的峰(积分成～10％的转化率)指示环扩展为TH-吡喃糖。之后的几个小时后，采集光谱(D₂O，300MHz，27℃)，如图11中所示。4小时后，TH-吡喃糖更多，指示约60％的转化率。在72小时，转化几乎完全完成(＞80％)。4.0-4.5区域内的值得注意的变化也指示THU分解和TH-吡喃糖形成。

将化合物1a(5mg)溶解于D₂O(0.75mL)中。¹HNMR光谱(D₂O，300MHz，27℃)显示于图12中。向这一样品加入一滴氘化的TFA，之后即刻测定¹HNMR光谱(图12)。第一时间点后，唯一值得注意的变化是缩醛胺的差向异构化，这由5.92和5.93的特别的峰记录。4小时和72小时后(图13)，光谱(D₂O，300MHz，27℃)中没有其他显著的变化。这些结果表明在这些条件下使用化合物1a没有吡喃糖形成发生。

本发明的某些实施方案：

1.一种式I的化合物或该化合物的药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、巯基、羟基、甲酰基、羧基、COO(C₁至C₆直链或支链烷基)、COO(C₁至C₆直链或支链烯基)、COO(C₁至C₆直链或支链炔基)、CO(C₁至C₆直链或支链烷基)、CO(C₁至C₆直链或支链烯基)、CO(C₁至C₆直链或支链炔基)、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、甲酰基、羧基和巯基的一个至四个取代基取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H、-OH或-CH₂OH。

2.一种实施方案1的化合物，其中R₁和R₂独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、硝基、巯基、C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链炔基、C₁至C₆直链或支链烷氧基或C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个或多个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

3.一种实施方案1的化合物，其中R₁和R₂独立地选自氢、卤素、C₁至C₆烷基、C₁至C₆烯基、C₁至C₆烷氧基和C₁至C₆链烯氧基；其中C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基、C₁至C₆直链或支链烷氧基和C₁至C₆直链或支链链烯氧基的每次出现可独立地是未取代的或由一个至三个卤素取代；

并且条件是当R₁和R₂中的一个是-H时，那么另一个不是-H或-OH。

4.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是卤素。

5.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是氟。

6.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-H。

7.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-H。

8.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂每一个都是氟。

9.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-CN。

10.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-CN。

11.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-NO₂。

12.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-NO₂。

13.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-SH。

14.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-SH。

15.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-OH。

16.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-OH。

17.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-CHO。

18.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-CHO。

19.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COOH。

20.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COOH。

21.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COOR_x，并且其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

22.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COOR_x，并且其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

23.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-COR_x，并且其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

24.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-COR_x，并且其中R_x选自C₁至C₆直链或支链烷基、C₁至C₆直链或支链烯基和C₁至C₆直链或支链炔基。

25.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷基。

26.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷基。

27.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烯基。

28.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烯基。

29.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

30.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

31.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是卤素并且另一个是-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

32.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是氟并且另一个是-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

33.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷基。

34.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷基并且另一个是-H。

35.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烷基并且另一个是-H。

36.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烯基。

37.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烯基并且另一个是-H。

38.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烯基并且另一个是-H。

39.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷氧基。

40.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链烷氧基并且另一个是-H。

41.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链烷氧基并且另一个是-H。

42.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的至少一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基。

43.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由卤素取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基并且另一个是-H。

44.实施方案1的化合物，其中R₁和R₂中的一个是由氟取代的-C₁至C₆直链或支链链烯氧基并且另一个是-H。

45.实施方案1至44中的任一个的化合物，其中式I的化合物具有Ia或Ib的立体化学：

46.实施方案1的化合物，其中化合物选自化合物1至23：

化合物1           化合物2           化合物3

化合物4           化合物5           化合物6

化合物7             化合物8          化合物9

化合物10           化合物11          化合物12

化合物13            化合物14          化合物15

化合物16            化合物17           化合物18

化合物19            化合物20          化合物21

化合物22         化合物23。

47.实施方案1的化合物，其中化合物选自1a、1b、2a、2b、3a和3c：

化合物1a         化合物1b        化合物2a

化合物2b         化合物3a        化合物3b。

48.一种药物组合物，所述药物组合物包括：

(i)有效量的实施方案1至47中的任一个的化合物或其药学上可接受的盐；以及

(ii)药学上可接受的赋形剂。

49.一种用于抑制胞嘧啶核苷脱氨酶的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者给药有效量的实施方案1至47中的任一个的化合物或药物组合物。

50.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受治疗者施用：

(i)有效量的实施方案1至48中的任一个的化合物或药物组合物；以及

(ii)CDA底物药物。

51.一种用于通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解的方法，所述方法包括向经受使用CDA底物药物的治疗的受治疗者给药有效量的实施方案1至48中的任一个的化合物或药物组合物。

52.实施方案49至51中的任一个的方法，其中CDA底物药物选自地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷和cytochlor。

53.实施方案49至52中的任一个的方法，其中在CDA底物药物之前给药权利要求1所述的化合物。

54.实施方案49至52中的任一个的方法，其中基本上与CDA底物药物同时给药权利要求1所述的化合物。

55.实施方案49至52中的任一个的方法，其中在CDA底物药物之后给药权利要求1所述的化合物。

56.实施方案49至55中的任一个的方法，其中受治疗者是哺乳动物。

57.实施方案49至55中的任一个的方法，其中受治疗者是人类。

58.实施方案50和52至57中的任一个的方法，其中所述癌症选自血液学癌症和实体癌。

59.实施方案50和52至57中的任一个的方法，其中所述癌症是选自MDS和白血病的血液学癌症。

60.实施方案59的方法，其中所述白血病是AML或CML。

61.实施方案58的方法，其中所述癌症是选自胰腺癌、卵巢癌、腹膜癌、非小细胞肺癌和乳腺癌的实体癌。

62.一种试剂盒，所述试剂盒包含至少一种单位剂量形式，其中所述单位剂量形式包含实施方案1至48中的任一个的化合物或药物组合物。

63.一种式I的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，由星号标注的碳可具有(R)或(S)构型；并且其中R₁和R₂独立地选自氟和氢，条件是R₁和R₂不可都是氢。

64.一种式I的化合物和其药学上可接受的盐，所述化合物选自以下化合物：

化合物1                化合物2              化合物3

其中，由*标注的每个碳原子具有选自(R)构型、(S)构型或(R)构型和(S)构型的混合的立体化学构型。

65.实施方案64的化合物，其中所述化合物是化合物1。

66.实施方案65的化合物，其中化合物1具有由化合物1a表示的立体化学：

化合物1a。

67.实施方案65的化合物，其中化合物1具有由化合物1b表示的立体化学：

化合物1b。

68.实施方案64的化合物，其中所述化合物是化合物2。

69.实施方案68的化合物，其中化合物2具有由化合物2a表示的立体化学：

化合物2a。

70.实施方案68的化合物，其中化合物2具有由化合物2b表示的立体化学：

化合物2b。

71.实施方案64的化合物，其中所述化合物是化合物3。

72.实施方案71的化合物，其中化合物3具有由化合物3a表示的立体化学：

化合物3a。

73.实施方案71的化合物，其中化合物3具有由化合物3b表示的立体化学：

化合物3b。

74.一种药物组合物，所述药物组合物包含实施方案64的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。

75.实施方案74的药物组合物，所述药物组合物还包含CDA底物药物。

76.实施方案75的药物组合物，其中所述CDA底物药物选自地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷和cytochlor。

77.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)向需要其的哺乳动物给药包含有效量的实施方案64的化合物的第一药物组合物；以及

(ii)向需要其的哺乳动物给药包含CDA底物药物的第二药物组合物。

78.实施方案77的方法，其中所述CDA底物药物选自地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷和cytochlor。

79.实施方案77的方法，其中所述癌症是用CDA底物药物治疗的癌症。

80.实施方案77的方法，其中所述癌症选自血液学癌症和实体癌。

81.实施方案80的方法，其中所述癌症是选自骨髓异常增生综合征和白血病的血液学癌症。

82.实施方案81的方法，其中所述白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。

83.实施方案80的方法，其中所述癌症是选自胰腺癌、卵巢癌、腹膜癌、非小细胞肺癌和转移性乳腺癌的实体癌。

84.一种用于通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解的方法，所述方法包括向经受使用所述CDA底物药物的治疗的哺乳动物给药有效量的包含实施方案64的化合物的药物组合物。

85.实施方案84的方法，其中所述CDA底物药物选自地西他滨、5-氮杂胞苷、吉西他滨、ara-C、曲沙他滨、替扎他滨、5’-氟-2’-脱氧胞苷和cytochlor。

86.一种用于抑制需要其的受治疗者中的胞嘧啶核苷脱氨酶的实施方案64的化合物。

87.实施方案64的化合物用来制备用于抑制需要其的受治疗者中的胞嘧啶核苷脱氨酶的药物的用途。

88.一种用于治疗正在用CDA底物药物进行治疗的受治疗者中的癌症的实施方案64的化合物。

89.实施方案64的化合物用来制备用于治疗正在用CDA底物药物进行治疗的受治疗者中的癌症的药物的用途。

90.一种用于通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制正经受使用CDA底物药物的治疗的哺乳动物中的CDA底物药物的降解的实施方案64的化合物。

91.实施方案64的化合物用来制备用于通过胞嘧啶核苷脱氨酶抑制CDA底物药物的降解的药物的用途。

92.实施方案77的方法，其中在CDA底物药物之前给药实施方案64的化合物。

93.实施方案77的方法，其中基本上与CDA底物药物同时给药实施方案64的化合物。

94.实施方案77的方法，其中在CDA底物药物之后给药实施方案64的化合物。

95.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐和地西他滨；以及药学上可接受的赋形剂。

96.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)向需要其的哺乳动物给药包含有效量的权利要求2所述的化合物的第一药物组合物；以及

(ii)向需要其的哺乳动物给药包含地西他滨的第二药物组合物。

尽管已经参考本发明的特定的实施方案描述了本发明，但本领域的技术人员应当理解，可以进行各种变化并且可以用等同方案进行替代，而不背离本发明的真实精神和范围。此外，可以进行许多修改以使特定的情况、材料、物质组成、过程、一个或多个处理步骤适于本发明的精神和范围。所有这样的修改预期在附于此的权利要求的范围内。

上文所引用的所有专利和出版物据此通过引用并入。