嵌合狂犬病病毒株rLEP333Q-L(H)的构建及其生物学功能的研究

摘要

本发明属于重组病毒疫苗领域。本发明涉及一株嵌合狂犬病病毒rLEP333Q-L(H)弱毒疫苗株，其表达的狂犬病病毒rLEP糖蛋白第333位精氨酸(Arg)突变为谷氨酰胺(Gln)，同时将L基因替换为HEP的L基因。本发明还涉及生产所述病毒株的方法，以及所述病毒株的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及重组疫苗领域，具体地涉及一种用于制备弱毒疫苗的嵌合狂犬病病毒株rLEP333Q-L(H)，本发明还涉及所述病毒株的应用。

引言

狂犬病是一种很重要的人畜共患病，在世界范围内每年约有60,000余人死于狂犬病^[1]，引起严重的公共健康问题。狂犬病病毒属于弹状病毒科、狂犬病毒属，为不分节段单股负链RNA病毒，其基因组长约12kb，共编码5个结构蛋白：核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和RNA聚合酶(L)。依赖RNA的RNA聚合酶L是狂犬病病毒中最大的结构蛋白，是一多功能酶，在病毒基因组复制、转录及转录后的加工，包括甲基化戴帽和多聚腺苷酸化等方面发挥作用。

1940年，Koprowski等人从病死女孩脑内分离到狂犬病毒Flury株，经1日龄雏鸡脑内、鸡胚卵黄囊传代后，再经鸡胚传代178代以上，无论神经内、外接种都对动物丧失致病力，但新生乳鼠和猴在脑内接种时仍具有残留毒力^[2]。在鸡胚传代68代以前的称为“LEP”(鸡胚低代株)，高于136代的称为“HEP”(鸡胚高代株)。LEP脑内感染成年小鼠致死，而HEP脑内感染成年小鼠不致死。Flury-LEP株具有优良的免疫原性，被广泛用作人或动物的狂犬病灭活疫苗种毒株。WHO对使用狂犬病病毒弱毒活疫苗的要求是小鼠脑内感染不致死，因此，有待对LEP株进行改造，以期获得安全有效的活疫苗推荐株。

为获得安全、高效的狂犬病弱毒活疫苗株，本研究利用反向遗传技术构建了将LEP的糖蛋白第333位精氨酸(Arg)突变为谷氨酰胺(Gln)，同时将L基因替换为HEP的L基因的嵌合病毒rLEP333Q-L(H)。我们鉴定了该嵌合病毒株的生物学特性，并将其与Flury-LEP、HEP进行了比较。结果表明重组病毒rLEP333Q-L(H)具有很好的安全性和免疫原性，适用于作为狂犬病病毒弱毒疫苗的开发。

发明内容

在第一个方面中，本发明提供一株嵌合狂犬病病毒株，该嵌合病毒是在亲本弱毒疫苗株Flury-LEP基础上，将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同时将LEP的L基因替换为HEP的L基因，并拯救获得的感染性病毒颗粒。

在第一个方面的一个实施方案中，其中构建的病毒株为rLEP333Q-L(H)。

在第一个方面的一个实施方案中，所述Flury-LEP的全长基因组cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

在第一个方面的一个实施方案中，其中所述HEP的L基因的序列如SEQ ID NO：8所显示。

在第二个方面中，本发明提供一种构建第一方面的病毒株的方法，所述方法包括下列步骤：

1)构建转录质粒，所述转录质粒包含将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同时将LEP的L基因替换为HEP的L基因的Flury-LEP全长基因组cDNA序列；

2)构建一个或多个转录辅助质粒，所述辅助质粒包括编码狂犬病病毒Flury-LEP核蛋白N、磷酸蛋白P及聚合酶蛋白L基因的开放阅读框架的cDNA序列；

3)将所述转录质粒和转录辅助质粒共转染允许狂犬病病毒Flury-LEP弱毒疫苗株复制的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞；

4)收获上清液，获救嵌合病毒株。

在第二个方面的一个实施方案中，其中所述转录质粒为pCI-LEP333Q-L(H)。

在第二个方面的一个实施方案中，其中所述转录辅助质粒分别为pCAGG-N、pCAGG-P或pCAGG-L。

在第二个方面的一个实施方案中，其中所述宿主细胞为真核细胞。

在第二个方面的一个实施方案中，其中所述真核细胞为BHK-21细胞。

在第三个方面中，本发明提供一种载体，其包含将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同时将LEP的L基因替换为HEP的L基因的Flury-LEP全长基因组cDNA序列。

在在第三个方面的一个实施方案中，所述Flury-LEP的全长基因组cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

在第三方面的一个实施方案中，其中所述HEP的L基因的序列如SEQID NO：8所显示。

在第四个方面中，本发明提供第一个方面的病毒株和第三个方面的载体用于制备弱毒疫苗的应用。

附图说明

图1是rLEP和rLEP333Q-L(h)的基因组图示。黑色方框代表LEP株各个基因的ORF，白色方框代表HEP株L基因的ORF。

图2左图：间接免疫荧光检测拯救病毒rLEP333Q-L(h)感染NA细胞，右图：阴性对照。

图3LEP、HEP和rLEP333Q-L(H)在NA细胞上的生长动力学曲线。

图4每组小鼠的体重变化情况，以接种病毒当天体重为100％，观察21天。

图5HEP、LEP或rLEP333Q-L(h)免疫小鼠后诱导的中和抗体水平以及攻毒结果。A：10⁶FFU的HEP或rLEP333Q-L(h)，或10⁴FFU的HEP、LEP或rLEP333Q-L(h)免疫小鼠3周后诱导的中和抗体水平。B：免疫后小鼠用街毒Guangxi09株进行攻毒试验结果，观察期为4周。

具体实施方式本发明通过具体的实施例来进一步举例说明，但下述实施例不应被理解为对本发明的限制。

实施例1嵌合病毒rLEP333Q-L(H)的构建及其生物学活性鉴定

1 材料与方法

1.1 质粒、细胞株和病毒

质粒pCAGG、pCI-RBz购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，pBluescriptSK(+)购自clonetech。BHK-21细胞(ATCC CCl-10)，293T细胞(CRL-11268)购自ATCC，培养基均为含10％胎牛血清的DMEM(购自GIBCO)。小鼠脑神经瘤细胞NA细胞来自军事医学科学院军事兽医研究所，培养基为含10％胎牛血清的MEM(购自GIBCO)。狂犬病病毒Flury-LEP和HEP购自中国兽医药品监察所中国兽医微生物菌种保藏管理中心，在BHK-21细胞上扩增，-70℃冻存备用。

1.2 主要试剂和仪器

T4DNA连接酶，限制性内切酶Nhe I，Sph I，Mlu I，EcoR I，Kpn I等均购自大连TaKaRa公司。Phusion^TM超保真DNA聚合酶，限制性内切酶Rsr II购自NEB公司。RNA提取试剂Trizol，SuperScript^TMIII反转录试剂盒，无血清培养基Opti-MEM，转染试剂Lipofectamine^TM 2000均购自Invitrogen公司。犊牛血清购自Gibco公司。LB培养基成分均购自OXOID公司。胶回收试剂盒(Gel Extraction Mini Kit)及质粒小量提取试剂盒(Plasmid MiniKit)均购自OMEGA公司。质粒中量提取试剂盒QIAfilter Plasmid Midi Kit购自QIAGEN公司。鼠抗狂犬病病毒高免血清由本研究室按本领域常规方法制备。FITC标记的羊抗鼠荧光二抗购自Sigma公司。普通显微镜，购自OLYMPUS公司；荧光显微镜，购自ZEISS公司。PCR仪购自AppliedBiosystem公司。核酸测序采用BECKMAN CEQ 8000自动测序仪，所用试剂为BECKMAN公司产品。P2级生物安全柜购LABCONCO自公司。二氧化碳培养箱购自Thermo Electron公司。不同型号离心机均购自BECKMAN公司。-70℃超低温冰箱购自NBS公司。普通冰箱冰柜购自海尔公司。全自动净水机MILI-Q购自BIOCEL公司。各种规格细胞培养瓶及细胞培养板均购自CORNING公司。

1.3 引物

参照Gene Bank中所提供的Flury-HEP株基因组序列(Gene Bank序列号AB085828)和Flury-LEP基因序列(Gene Bank序列号DQ099524，Flury-LEP全长基因组cDNA序列见SEQ ID NO：1)，将Flury-LEP基因组分为3段(即，F1，F2和F3)分别设计PCR引物。其中，片段F1为Flury-LEP基因序列的1-4063核苷酸序列(SEQ ID NO：2)，片段F2为Flury-LEP基因序列的4013-8254核苷酸序列(SEQ ID NO：3)，片段F3为Flury-LEP基因序列的8187-11925核苷酸序列(SEQ ID NO：4)。构建全长基因组cDNA所用引物、引入Pme I酶切位点引物、将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺的引物和将替换L基因的引物(表1)，以及构建辅助质粒所用引物(表2)均由上海英俊生物技术有限公司合成。

表1 RT-PCR和全长基因组cDNA构建所用的引物

注：cDNA片断与图1相一致。下划线部分为病毒特异序列，黑体表示酶切位点，锤头状核酶(HamRz)和丁肝病毒核酶(HdvRz)用斜体表示；突变碱基用字符边框表示。

表2 辅助质粒构建所用的引物

注：下划线部分为病毒特异序列，黑体表示酶切位点，突变碱基用字符边框表示，Kozak序列用斜体表示。

1.4 构建Flury-LEP基因组全长cDNA克隆和嵌合病毒全长cDNA克隆

1.4.1 病毒基因组的提取、反转录和PCR

取Flury-LEP病毒液250μL，加入750μL Trizol，经常规方法提取基因组RNA。提取的RNA用SuperScript^TMIII反转录试剂盒进行反转录反应(反转录引物见表1)按该试剂盒说明书进行操作，获得末端部分重叠的3个病毒cDNA片段F1、F2和F3片段。

1.4.2 RT-PCR产物的克隆

整个基因组分为末端部分重叠的3个片断进行RT-PCR扩增，PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，使用胶回收试剂盒(购自OMEGA公司)回收F1、F2和F3片段，分别克隆至pBluscript II KS(+/-)(Clontech)的EcoR v位点，转化感受态细胞DH5α，选择并提取阳性质粒pBlue-F1，pBlue-F2和pBlue-F3，测序确保克隆的基因组片段与病毒基因组RNA序列完全一致(具体方法见《分子克隆试验指南》，J.萨姆布鲁克编，2008年第三版，科学出版社译)。

1.4.3 Flury-LEP基因组全长cDNA克隆和cDNA片段克隆的构建

利用基因组cDNA片段F1、F2和F3相邻重叠部分存在的限制酶切位点进行连接组装。具体地，首先将F3段cDNA经Nhe I和Rsr II位点克隆进pCI-RBz，所得质粒命名为pCI-F3，再将F1段经Nhe I和Mlu I插入到pCI-F3，所得质粒命名为pCI-F31。最后将F2段经Sph I和Mlu I克隆进pCI-F31，至此Flury-LEP全基因组cDNA组装完成，构建成的病毒基因组转录质粒命名为pCI-LEP。

pCI-LEP的基础上，构建在G和L基因之间带有Pme I酶切位点的全长cDNA克隆，具体方法是：以pCI-LEP为模板，利用F2-PF和Pme I-PR为引物，扩增出PCR片段PmeA，以F2-PR和Pme I-PF为引物扩增出PCR片段PmeB；然后再以PCR片段PmeA和PmeB为模板，以F2-PF和F2-PR为引物，扩增出含有Pme I酶切的F2片段，命名为F2-P。将F2-P经Sph I和Mlu I克隆进pCI-F31，从而构建成重组基因组转录载体pCI-LEP-Pme I。

1.4.4 G333突变全长基因组的构建

具体方法是：以构建好pCI-LEP-Pme I为模板，利用F2-PF和RtoQ-PR为引物，扩增出片段MuA；以RtoQ-PF和F2-PR为引物，扩增出片段MuB；然后再以PCR片段MuA和MuB为模板，以F2-PF和F2-PR为引物，扩增出糖蛋白第333位精氨酸R突变为谷氨酰胺Q的F2片段，命名为F2-Mu。最后将F2-Mu片段经Sph I和Mlu I替换至进在1.4.3中已构建好的pCI-F31，至此Flury-LEP G333突变全基因组cDNA组装完成，构建成的病毒基因组转录质粒命名为pCI-LEP333Q。

1.4.5 嵌合病毒全长cDNA克隆pCI-LEPG333Q-L(H)的构建

按照1.4.1中的方法提取Flury-HEP病毒基因组RNA，以5’CLF和3’CLR为引物进行RT-PCR扩增出含有HEP的L基因(SEQ ID NO：8)的PCR片段LHD。再以pCI-LEP333Q为模板，以5’CL+F和3’CL+R为引物，扩增出含有LEP的部分G基因、假基因和部分L基因的片段LHU。然后，以LHD和LHU这2个PCR产物为模板，以5’CL+F和3’CLR为引物扩增出含有HEP的L基因、其余皆为LEP基因序列的片段LH。将片段LH和pCI-LEP333Q分别用Pme I和Rsr II处理后连接，即将LH替换至pCI-LEP333Q的相应位置，至此，嵌合病毒全长cDNA克隆pCI-LEP333Q-L(H)构建成功(图1)。

1.5 构建转录辅助质粒系统

以pCI-LEP为模板，PCR扩增编码核蛋白(N)(SEQ ID NO：5)、磷酸蛋白(P)(SEQ ID NO：6)及聚合酶蛋白(L)基因(SEQ ID NO：7)的开放阅读框架(ORF)cDNA序列，分别克隆在pCAGG质粒的多克隆位点(MCS)。在起始密码子前引入Kozak序列(GCCACC)，以增强蛋白表达；在原有终止密码子后增加一个终止密码子，以有效终止辅助质粒mRNA的转录。构建成的辅助质粒分别命名为pCAGG-N、pCAGG-P和pCAGG-L。

1.6 病毒拯救

在转染前一天，将293T细胞传到35mm 6孔板上，当细胞密度达到80％以上时即可进行转染。将pCI-LEP333Q-L(H)、pCAGG-N、pCAGG-P、pCAGG-L分别以4μg、2μg、1μg、1μg的比例加入到250μl无血清培养基OPTI-MEM中，混匀；取15μl Lipofectamine^TM 2000溶于250μl OPTI-MEM中，混匀后在室温静置5min；然后将Lipofectamine^TM 2000与转染质粒(具体是pCI-LEP333Q-L(H)、pCAGG-N、pCAGG-P、pCAGG-L各4μg、2μg、1μg、1μg)混合均匀，室温孵育30min。在此期间用OPTI-MEM洗涤293T细胞两次，然后每孔加入OPTI-MEM 1ml，最后将Lipofectamine^TM 2000-质粒混合液500μl加入细胞培养孔中，置于37℃CO₂培养箱中培养8h后吸弃转染液，加入10％DMEM继续培养。72小时后，仔细吹落培养板上的细胞，将培养液及细胞混合物全部接种BHK-21细胞。72h后，在BHK-21细胞上用间接免疫荧光(IFA)检测病毒滴度，简言之，即以鼠抗狂犬病病毒高免血清为一抗，相同倍数稀释的小鼠阴性血清为对照，荧光素(FITC)标记的羊抗鼠IgG(Sigma)为二抗，最后用荧光显微镜观察结果。收获上清液，获救突变病毒株，获救病毒株命名为rLEP333Q-L(H)株。

1.7 种毒的制备及滴定

将拯救的病毒在BHK-21细胞上进行扩增，10％DMEM 37℃培养3天。制备好的种毒分别在NA细胞和BHK-21细胞上培养48h后，以IFA(步骤同1.6)确定病毒滴度。病毒滴度用病灶形成单位(focus forming unit)FFU表示。

1.8 病毒生长动力学曲线的测定

为测定病毒生长动力学曲线，将LEP、HEP和rLEP333Q-L(H)分别以M.O.I.为0.01分别感染单层NA细胞。感作1h后，用无菌PBS洗2次后，分别加含0.2％FBS的MEM 2ml，分别于接种后24h、72h和120h取细胞培养液上清，并在NA细胞测定滴度，绘制病毒生长动力学曲线。

1.9 对小鼠致病力的测定

将10⁵ FFU/30μl的LEP、HEP和rLEP333Q-L(H)分别脑内接种或10⁶FFU/100μl小鼠后腿肌肉注射，5～6周龄的Balb/c雌性小鼠。连续观察21天，记录每组小鼠的平均体重变化和死亡情况。

1.10 嵌合病毒rLEP333Q-L(H)对小鼠的免疫保护试验

为了评价嵌合病毒rLEP333Q-L(H)对小鼠的免疫效果，分别将10⁶FFU/100μl的HEP和rLEP333Q-L(H)，或是10⁴FFU/100μl LEP，HEP和rLEP333Q-L(H)后腿肌肉注射4周龄Balb/c雌性小鼠，每组10只。免疫后3周采血、分离血清，用于中和抗体滴度检测。对免疫后的小鼠进行攻毒试验，以街毒Guangxi09为攻击毒株，每只小鼠后腿肌肉注射50LD₅₀/100μl的Guangxi09，每日观察小鼠，记录其死亡情况，持续观察4周。

1.11 中和试验

血清样品首先56℃水浴处理30min灭活，随后连续5倍至320倍倍比稀释，同时设阴性、标准血清对照。攻击病毒采用标准固定毒CVS株，将稀释好的血清与含100000个FFU的病毒等体积混合，37℃孵育1h，然后取100μl加到过夜生长的24孔BHK-21细胞上。每个样品作3个重复。感染后48h进行IFA检测。被检血清的中和抗体滴度为使荧光灶抑制等于50％的血清最高倍数。标准血清的起始稀释效价为2IU/ml，待测抗体单位(IU/ml)＝待测血清中和滴度/标准血清中和滴度×2。

2.结果

2.1 从全长cDNA克隆拯救嵌合病毒rLEP333Q-L(H)

为了从克隆的cDNA中拯救感染性RV，首先以pCI-LEP333Q-L(H)及表达RV N、P、L蛋白的辅助质粒共转染293T细胞。3天后收获细胞液，盲传一代后IFA检测呈阳性结果(图2)。对拯救病毒进行RT-PCR及基因组序列分析结果显示，获救病毒基因组cDNA的第4907的碱基为G，第4910的为T，第4912的为A；G蛋白第333位精氨酸R(CGG)已经突变为谷氨酰胺Q(CAA)；扩增的部分L基因片段与HEP的L基因一致，和预期完全相符。结果表明，通过反向遗传操作技术，成功拯救出具有感染性的嵌合病毒rLEP333Q-L(H)。

2.2 嵌合病毒rLEP333Q-L(H)生物学特性的鉴定

2.2.1 动力学曲线

rLEP333Q-L(H)在神经元细胞NA上的生长动力学曲线如图所示(图3)，rLEP333Q-L(H)在NA细胞上的生长水平在各个时间点均低于LEP和HEP，到达的最高水平为2×10⁶FFU/ml，分别较LEP和HEP低约30倍和20倍。

2.2.2 嗜神经指数

狂犬病病毒的体外嗜神经指数是指病毒在NA细胞相对于BHK-21细胞上的感染性比例^[6]，嗜神经指数为1即表示病毒在神经元细胞上感染的能力比在非神经细胞上的高10倍。致病性毒株与弱毒株相比通常具有较高的嗜神经指数。致病性毒株的嗜神经指数一般大于1，而弱毒株的嗜神经指数通常接近于0^[3，4，5]。LEP和HEP的嗜神经指数分别为0.8和0(表3)，嵌合病毒rLEP333Q-L(H)的嗜神经指数已下降与无毒株HEP一样为零。

表3 LEP、rLEP333Q-L(H)和HEP的体外嗜神经性

^a同一种毒在NA细胞和BHK-21细胞上的滴度

^b体外嗜神经指数＝log(NA上的滴度)-log(BHK-21上的滴度)

2.2.3 对小鼠的致病性

为了确定LEP、HEP以及rLEP333Q-L(H)对小鼠的致病性，每只小鼠脑内接种病毒10⁵FFU/30μl。感染LEP的小鼠表现出麻痹、兴奋，体重减轻等中枢神经系统疾病的临床症状，且所有的老鼠在11天内全部死亡。而HEP和rLEP333Q-L(H)感染的小鼠只表现出轻微的症状如毛微乱、感染初期体重略减，在21天的观察期内没有小鼠死亡(图4)。狂犬病病毒通过肌肉注射感染小鼠可以测定其由外周侵入到CNS的能力即神经侵入能力。LEP 10⁶FFU/100μl后腿肌肉注射小鼠，所有的小鼠同样也在11天内全部死亡；而HEP和rLEP333Q-L(H)感染的小鼠则体重持续增长，没有出现死亡的情况。结果表明，嵌合病毒rLEP333Q-L(H)对成年小鼠不致病，与LEP相比，对小鼠致病性下降。

2.3 嵌合病毒rLEP333Q-L(H)对小鼠的免疫保护性

根据O.I.E标准测定不同毒株诱导小鼠中和抗体水平实验结果显示：10⁶FFU/100μl的rLEP333Q-L(H)免疫小鼠诱导产生的中和抗体为3.6±0.89IU，显著高于HEP诱导的量(图5A)；10⁴FFU/100μl的LEP肌肉注射小鼠是安全的，因此，用10⁴FFU/100μl的LEP、HEP和rLEP333Q-L(H)分别免疫小鼠并进行比较，结果rLEP333Q-L(H)诱导产生的中和抗体为1.9±1.34IU，显著高于LEP和HEP诱导的量；攻毒试验的结果表明，10⁴FFU的rLEP333Q-L(H)免疫可以完全保护小鼠抵抗50LD₅₀的街毒的攻击量，而LEP和HEP免疫小鼠的保护率分别为60％和80％(图5B)。

以上的这些结果表明rLEP333Q-L(H)用于活毒疫苗使用时，与LEP相比，不仅安全性好，而且免疫原性更强，作为弱毒活疫苗开发具有很好的前景。

3 讨论

本研究通过反向遗传技术成功拯救嵌合狂犬病病毒rLEP333Q-L(H)株，该嵌合病毒是在亲本弱毒疫苗株Flury-LEP株反向遗传操作系统基础上，构建了将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同时将LEP的L基因替换为HEP的L基因的全长cDNA克隆并拯救获得感染性病毒颗粒。

对rLEP333Q-L(H)株的生物学特性分析发现，该病毒株在神经细胞NA细胞上的复制生长水平均低于LEP株和HEP株，可见聚合酶基因L的替换对病毒的生长有着十分重要的影响。rLEP333Q-L(H)的体外嗜神经指数和体内的神经侵入能力均已降至和HEP一样，更为重要的是rLEP333Q-L(H)株脑内感染成年小鼠时，对小鼠不致死，达到WHO对于弱毒活疫苗的使用标准。

对小鼠的免疫试验表明，和同样安全的HEP相比较，嵌合病毒rLEP333Q-L(H)株诱导更高的中和抗体水平，说明rLEP333Q-L(H)株保持了LEP株免疫原性好的特点；和LEP相比较，由于LEP高滴度肌肉注射小鼠致死，我们选择了对小鼠安全的剂量，10⁴FFU剂量下LEP、HEP和rLEP333Q-L(H)诱导的中和抗体水平和保护率的比较，发现rLEP333Q-L(H)诱导的中和抗体水平不仅高于HEP，也同时高于LEP，这可能与rLEP333Q-L(H)诱导较强的凋亡水平相关。

通过以上的试验结果表明了，嵌合病毒rLEP333Q-L(H)不仅安全性好，而且可诱导较高的中和抗体水平，是作为用于开发作为狂犬病病毒弱毒活疫苗的候选毒株。

参考文献

[1]Martinez L.Global infectious disease surveillance.Int J Infect Dis，2000，4(4)：222-8.

[2]Koprowski H，Black J，Nelsen DJ.Studies on chick-embryo-adapted-rabiesvirus.VI.Further changes in pathogenic properties following prolongedcultivation in the developing chick embryo.J Immunol，1954，72(1)：94-106.

[3]Morimoto K，Hooper DC，Carbaugh H，et al.Rabies virus quasispecies：implications for pathogenesis.Proc Natl Acad Sci USA，1998，95(6)：3152-6.

[4]Morimoto K，Foley HD，McGettigan JP，et al.Reinvestigation of the roleof the rabies virus glycoprotein in viral pathogenesis using a reverse geneticsapproach.J Neurovirol，2000，6(5)：373-81.

[5]Ito N，Takayama M，Yamada K，et al.Rescue of rabies virus from clonedcDNA and identification of the pathogenicity-related gene：glycoprotein geneis associated with virulence for adult mice.J Virol，2001，75(19)：9121-8.

SEQUENCE LISTING

<110>中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

<120>嵌合狂犬病病毒株rLEP333Q-L(H)的构建

<130>IB100516

<160>8

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>11925

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>1

acgcttaaca acaaaaccaa agaagaagca gacagcgtca gttgcaaagc aaaaatgtaa    60

cacccctaca atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt   120

gaagcccgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa   180

aaagccttgt ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt   240

atcaggcatg aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc   300

aatgcagttc tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc   360

acgaaaagga gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga   420

agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca   480

tgcatcttta gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa   540

cactggtaac tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc   600

ttttgttaag atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg   660

gagtactata ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat   720

cgagcatctg tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc   780

aggactggta tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat   840

actatatttc ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca   900

agagacagct gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa   960

gtctccttat tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg  1020

ctatatgggt caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga  1080

gatgtctgtt ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag  1140

aaggttcttc agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac  1200

cgacgtggca ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg  1260

tgaaaccaga agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa  1320

gagatcacat atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc  1380

attcgccgaa tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taaggagttg aatgacaggg  1440

tgccagaaat ccatagattg tgtatatcca tcatgaaaaa aactaacact cctcctttcg  1500

aaccatccca agtatgagca agatctttgt taatccgagt gcaatcagag ccggtctggc  1560

cgatcttgag atggccgaag agactgttga tctgatcaac agaaacatag aagacaatca  1620

ggctcatctc cagggagaac ccatagaagt ggacaatctc cctgaggaca tgaggcaatt  1680

tcacctgggc gatgaaaaat tgtccaacct tggtgagatg gttagggtgg gcgaaggcaa  1740

gtatcgagag gactttcaga tggatgaggg agaggacccc aacctcctgt tccaatcgta  1800

cctggacaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg tcaggagaga gattcctcaa  1860

gatatggtca cagaccgtag aggaaattat atcctatgtc acggtcaact ttcctaaccc  1920

tccaggaagg tcttcggagg ataaatcaac ccaaactact ggccgggagc tcaagaagga  1980

gacaacatcc actctttctc agagagaaag ccaaccttca aaagccggaa tggtggctca  2040

agttgcctct ggccctccat cccttgaatg gtctgccacc aatgaagagg atgatctatc  2100

agtagaggct gagatcgctc atcagattgc tgaaagcttt tccaagaagt acaagtttcc  2160

ctctcgatct tcaggaatat tcttgtataa ttttgagcaa ctggagatga accttgatga  2220

catagttaaa gaggcaaaaa atgtaccggg cgtgacccgt ctggcccatg atggatccaa  2280

aatcccccta agatgtgtac tgggatgggt cgctttggcc aactccaaga aattccaatt  2340

gatagtcgag gccgacaagc taagcaaaat catgcaagat gacttggatc gctacacatc  2400

atgctaaccg agtcttcgaa ttcattccct ctagataatg aaaactgaga tgtcatggag  2460

tcgacatgaa aaaaacaggc aacaccacta ataaaatgaa ctttctatgt aagatagtga  2520

aaaactgtag ggatgaggac acccaaaagc cctctcctgt gtcagcccct ccggatggcg  2580

atgacctgtg gcttccacct ccagaatatg tcccgctgaa agaactcaca agcaagaaga  2640

acatgaggaa cttttgtatc aacggggagg ttaaagtgtg tagcccgaac ggttactcat  2700

tcaggatcct gcggcatatt ctgagatcat tcgacgagat atactctggg aatcatagga  2760

tgattgggtt agtcaaagtt gttattggac tagctttatc aggagctcca gttcctgagg  2820

gcatgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cccttatttt ccagtgggct gattccaggg  2880

gccctcttga aggggaggag ttggaacact ctcaagagat cacttgggac gatgatactg  2940

aattcgtcgg attgcaaatg agagtgagcg caagacaatg tcatattcaa ggcaggatct  3000

ggtgtatcaa catgaactcg agggcatgtc aactatggtc tgacatgtct cttcagacac  3060

aaaggtctga agaggacaaa gactcttctc tgcttctaga ataatcagat tatatcccgc  3120

aagtttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatacg ggcttaactc caatccttgg  3180

gagcaataga acaaaaaaac acgccatggt gccattaaac cgctgcattt tatcaaagtc  3240

aagttaatta cctttacatt ttgagcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc  3300

aaaagactta aggaaagatg gttcctcagg ttcttttgtt tgtacccctc ctgggttttt  3360

cattgtgttt cgggaagttc cccatttaca cgataccaga caaacttggt ccctggagcc  3420

ctattgacat acaccatctc agctgtccaa ataacctggt tgtggaggac gaaggatgta  3480

ccaacctgtc cgagttctct tacatggaac ttaaagtggg atacatctca gccataaaag  3540

tgaacgggtt cacttgcaca ggtgttgtga cagaggcaga aacctacacc aactttgttg  3600

gttatgtcac aaccacattc aagagaaagc atttccgccc caccccagac gcatgtagag  3660

ccgcgtataa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt  3720

accccgacta ccattggctt cgaactgtaa aaaccaccaa agagtctctc gttatcatat  3780

ccccaagtgt gacagatttg gacccatatg acaaatccct tcactcaagg gtcttccctg  3840

gcggaaattg ctcaggaata acggtgtcct cgacctactg ctcaactaat catgattaca  3900

ccatttggat gcctgagaat ctgagactag ggacatcttg tgacattttt accaatagca  3960

gagggaagag ggcatccaaa ggaggcaaga cttgcggctt tgtggatgaa agaggcctgt  4020

ataagtctct aaagggagca tgcaaactca agttatgtgg agttctcgga cttagactta  4080

tggatggaac atgggtcgcg atgcaaacat cagatgagac caaatggtgc cctccaggtc  4140

agttggtgaa tttgcacgac tttcgctcag acgagattga gcatctcgtt gtggaagagt  4200

tagtcaagaa aagagaggag tgtctggatg cactagagtc catcatgacc accaagtcag  4260

tgagtttcag acgtctcagt cacttgagaa aacttgtccc tgggtttgga aaagcatata  4320

ccatattcaa caaaaccttg atggaggctg atgctcacta caagtctgtc cggacctgga  4380

atgagatcat cccctcaaaa gggtgtttga gagttggggg gaggtgtcat ccccatgtga  4440

acggggtgtt tttcaatggt ataatattag ggtctgacgg ccatgttcta atcccagaga  4500

tgcagtcatc cctcctccag caacatatgg agttgttgga atcttcagtt atccccctga  4560

tgcacccctt ggcagaccct tctacagttt tcaaagacgg tgatgaggtt gaggattttg  4620

ttgaagttca cctccccgat gtgcatgaac aggtctcagg agttgaactg ggtctcccga  4680

actgggggaa gtatgtattg atgattgcag gggccttgat tgccctgatg ttgataattt  4740

tcctgatgac atgttgcaga agagtcaatc gaccagaatc tacgcaaagc agtcttggag  4800

agacagggag aaatgtgtca gtcacttccc aaagcggaaa agtcatatct tcatgggagt  4860

catataagag tggaggcgag accagactgt gaaggccggt catccttttg acacttcaag  4920

tcccgaggat aacctcctct cggggttggg gggaatcttg ggatccagta gtcctccttg  4980

aactccatcc aacagggtag atttaagagt catgagactt tcattaatca tctcagttga  5040

tcagacatgg tcgtgtagat tctcataaca cgggagatct tctagcagtt tcagtgacca  5100

acggtgcttt cattctccag gaactgatac caaaggttgt ggacaagcca aggggtgctt  5160

cggattactc tgtgcttggg cacagaaaga ggtcgtagtt tgccccttga tagcagattc  5220

aacatgaatt aactaagaaa ggcgatctgc ctcccatgaa ggacataagc aatagttcac  5280

aatcatcttg catctcagtg aagtgtacat aactataaag ggctgggtca tctaagcatt  5340

tcagtcgaga aaaaaactgt agaccaaaag aacaactaac aacacttctc atcccgagac  5400

ccatatcaag atgctggatc cgggagaggt ttatgatgac cctattgatc caattgagtc  5460

agaggctgaa cccagaggaa cccccactgt ccccaacatc ttgaggaact ctgactacaa  5520

tctcaactct cctttgatag aggactctgc caaactaatg ttagaatggt tgaaaacagg  5580

gaacagacct tatcggatga ctttgacaga caattgctcc aggtcttaca aagttttgaa  5640

agattatttc aagaaagtag atttgggttc tctcaaagtg ggaggaactg ctgcacaatc  5700

aatgatttct ctctggttgt atggagccca ctctgagtca aacaggagcc ggagatgtat  5760

aaccgacttg gcccatttct attccaagtc atcccccata gagaagctgt tgaattgtac  5820

gttaggaaac agaggcctga gaatcccacc agagggggtg ttaagttgcc ttgagagggt  5880

cgattatgat aaggcatttg ggaggtatct ggccaacacg tattcctctt atctgttttt  5940

ccatgtaatt accttataca tgaatgccct agactgggaa gaggaaaaaa ccatcctagc  6000

attatggaaa gatctaacct cagtggatac cgggaaggac ttggtcaaat tcaaagatca  6060

aatatgggga ctgctggttg tgacaaagga ctttgtttac tctcagagtt ctaactgtct  6120

ttttgacaga aactatacac tgatgctaaa ggatcttttc ttgtctcgat tcaactcctt  6180

gatgattttg ctttctcccc ctgagccccg atactcagat gacttaatat ctcagctgtg  6240

ccagctatac atcgctgggg atcaagtctt gtccttgtgt gggaactccg gctatgaagt  6300

catcaaaata ttggagccat atgtcgtgaa cagtttggtc cagagggcag agaagtttag  6360

gcctctcatc cactccttgg gagactttcc tatgtttata aaagacaagg tgaatcaact  6420

tgaagggact ttcggtccca gtgcaaaaag gttttttagg gttctagatc aattcgacaa  6480

catacatgat ctagtatttg tgtatggctg ttacagacat tgggggcacc cctatataga  6540

ttatcggaag ggtctgtcga aactatatga tcaagttcac attaagaaag taatagataa  6600

gtcctaccag gagtgtttag caagtgactt ggctagaagg atcctcagat ggggatttga  6660

caagtactcc aagtggtatc tagattcgag attccttgcc ctagaccacc ccttggctcc  6720

ttatatcaag acccaaacat ggccacccaa acatatagta gacttggtgg gggacacatg  6780

gcacaagctc ccgatcacgc agatctttga gattcctgaa tcaatggacc cgtcagagat  6840

actggatgat aaatcacatt ctttcaccag aacaagacta gcttcttggc tgtccgagaa  6900

ccgagggggg cctgttccta gcgagaaggt cattatcacg gccctgtcta agccacctgt  6960

caatccccga gagtttttga aatctatcga cctcggagga ttgccagatg atgacttgat  7020

aattggcctc agaccaaagg aacgggagtt gaagattgag ggccgattct tcgctctaat  7080

gtcatggaat ctaagattat attttgtcat caccgagaag ctcttggcca actacatttt  7140

gccacttttt gacgcactga ctatgacaga caacctgaac aaggtattta aaaagttgat  7200

cgacagggtc accgggcaag ggcttttgga ctattcgagg gtcacatacg catttcacct  7260

ggactatgag aaatggaaca atcatcaaag attggagtca acggaggatg tattttctgt  7320

cctagatcag gtgtttggat tgaagagggt gttttctaga acacacgagt tttttcagaa  7380

gtcctggatc tattattcag acagatcaga cctcattggg ttacgggagg atcagatata  7440

ttgcttggat atgtccaatg gtccaacctg ctggaatggc caagacggcg ggctagaggg  7500

cttacggcag aagggctgga gtctagtcag cttattgatg atagatagag aatctcaaac  7560

caggaacaca agaaccaaga tactagctca aggagacaac caggttctgt gtccgacata  7620

catgttgtca ccgggattgt ctcaagaggg gcttctctat gagttagaga gcatatcgag  7680

gaatgcactc tcaatatacc gagctatcga ggaaggagca tctaaactgg ggctgatcat  7740

caagaaagaa gagaccatgt gtagttatga ctttctcata tatgggaaga cccccttatt  7800

tcgaggcaac atattagtac ctgaatccaa aagatgggcc cgagtctctt gcatctctaa  7860

cgaccaaata gtcaacctcg ccaatataat gtctacagta tccaccaatg cgctgacagt  7920

ggcacaacac tctcaatctc tgatcaaacc tatgagggat tttctgctca tgtcagtaca  7980

ggcagttttc cactacctgc tgtttagccc aatcttaaaa ggcagggttt ataagattct  8040

gagtgctgaa ggggagagct ttctcctagc catgtcgcgg ataatctacc tagatccttc  8100

tttgggaggg gtgtctggaa tgtctctcgg gaggttccat atacgtcagt tctcagaccc  8160

tgtctctgaa gggttgtcat tctggagaga gatctggtta agctcccatg aatcctggat  8220

tcacgcgttg tgtcaagagg ccgggaaccc cgatcttgga gagagaacac tagagagctt  8280

cactcgcctt ttagaagatc ctactacctt aaatatcaaa ggaggggcca gtcctaccat  8340

tctactcaag gatgctatca gaaaggctct gtacgacgag gtggacaagg tggaaaattc  8400

agagtttcga gaggcaatcc tgttgtccaa gacccataga gataacttta tactcttttt  8460

aaaatctgtt gagcctctgt tccctcgatt tctcagtgaa ctcttcagtt cgtccttctt  8520

gggaatacca gagtcaatta ttggactgat acaaaactcc aggacaataa gaaggcagtt  8580

tagaaagagt ctctcaagaa ctttagaaga gtccttctac aactcagaga tccacgggat  8640

taatcggatg acccagacac ctcaaagggt cgggagagtg tggccttgct cttcagagag  8700

ggcagatcta cttagggaga tctcttgggg aaggaaagtg gtaggcacga cagttcctca  8760

cccttccgag atgttggggc tgcttccaaa atcctctatt tcctgcactt gtggagcaac  8820

agggggaggc aatcctagag tttctgtatc agtactcccg tccttcgatc agtcattttt  8880

ttcacgaggt cccctaaagg gatacttggg ctcgtccacc tccatgtcaa cccagctatt  8940

ccatgcatgg gaaaaagtca ctaatgttca tgtggtgaaa agggctatat cgttaaaaga  9000

atctataaac tggttcatca atagaaattc caatttggct caaactctaa ttagaaacat  9060

catgtctctg acaggccctg atttccctct agaagaggct cctgttttca aacggacagg  9120

gtcagccttg cataggttc aagtctgccag atacagcgaa ggagggtatt cttctgtttg  9180

tcctaacctt ctctctcata tctctgtcag tacagacact atgtctgatt tgacccaaga  9240

cgggaagaac tatgatttca tgtttcagcc attgatgctt tatgcgcaaa catggacatc  9300

agagctggta cagagagaca caagactgag agactccacg tttcactggc accttcgatg  9360

caacagatgt gtaaggccca ttgaggatat aacactggaa acttctcaga tcttcgagtt  9420

cccggatgtg tcaaaaagga tatccaggat ggtttctgga gccgtccctc actttcagaa  9480

gcttcctgat atccgtctaa gaccaggtga ttttgaatct ctaagtggta gagaaaagtc  9540

tcgccacata gggtcagctc aggggctctt atactcaatc ttagtagcaa ttcacgattc  9600

aggatacaat gatgggacca tcttccctgt caacatatac ggcaaagttt cccctagaga  9660

ctatttgaga gggctcgcaa gagggatctt gataggatcc tcgatttgct tcttgacacg  9720

aatgacaaat attaatatta aaagacctct tgaattgatc tcaggggtaa tttcctatat  9780

tctcctgagg ctggataatc atccctctct gtatataatg cttagagaac cgtctcttag  9840

aggagagata ttctctatcc ctcagaaaat ccccgccgct tacccaacca ctatgaaaga  9900

aggcaacaga tcgatcttgt gttacctcca acacgtgcta cgctatgagc gagaagtaat  9960

cacggcgtcc ccggagaatg actggctgtg gatcttctca gacttcagaa gtgcgaaaat 10020

gacgtacttg accctcatta cctaccagtc tcacctccta ctccagaggg ttgagcgaaa 10080

cttgtctaag agtatgagag ctactctgcg acaaatgggt tccttaatga ggcaagtgct 10140

gggtgggcac ggagaagaca ccttggagtc agacgacgac attcaacgat tactaaaaga 10200

ctctttgcga aggacaaggt gggtagatca agaggtgcgc catgcagcta gaaccatgag 10260

tggagattac agccccaaca agagagtatc ccgcaaggca ggatgttcag aatgggtctg 10320

ctctgctcaa caggttgccg tctccacctc agccaacccg gcccctgtct cagagcttga 10380

cattagggcc ctatctaaga ggtttcaaaa ccccttgatc tcgggcctaa gagtggttca 10440

gtgggcaacc ggcgcccatt ataagcttaa gcctattcta gatgatctaa atgttttccc 10500

atctctctgt cttgttgttg gagacgggtc agggggaata tcaagggcag ttctcaacat 10560

gtttccagat tctaagcttg tgttcaacag cctat ggag gtgaatgatc tgatggcttc 10620

cggaacacat ccactgcctc cttcagcaat catgagtgga ggagatgata tcatctccag 10680

agtgatagac tttgactcaa tctgggaaaa accatccgac ctgaggaact tggccacctg 10740

gagatacttc cagtcagttc aaaagcaggt caacatgtcg tatgacctca ttgtttgtga 10800

tgcagaagtt actgatattg catctatcaa ccggataact ctgttgatgt ctgatttcgc 10860

attgtctata gatggaccac tttatctggt cttcaaaact tacgggacta tgctagtgaa 10920

cccagactat aaagctatcc aacatctgtc aagagcgttc ccttcggtca cagggtttat 10980

aacccaagta acttcgtcct tttcttctga gctatacctc cggttctcca aacgagggaa 11040

gttttttagg gatgctgagt acttgacctc ttccaccctt cgggagatga gccttgtgtt 11100

attcaattgt agcagcccca aaagtgagat gcagagagct cgttccttaa actatcaaga 11160

tcttgtaagg ggatttcctg aagagatcat atcaaatcct tacaatgaaa tgatcataac 11220

tctgattgac agtgatgtag agtccttcct ggtccacaag atggtggatg atcttgagtt 11280

acagagggga actctgtcta aagtggctat cattatatcc atcatgattg ttttttccaa 11340

tagagtcttc aacatttcca aacctttgac tgaccccttg ttctatcccc catctgatcc 11400

taaaatcctg aggcacttca acatatgttg cagtactatg atgtatctat ctaccgcttt 11460

aggcgacgtc cctagcttcg caagacttca tgacctatat aatagaccta taacttatta 11520

cttcagaaag caagttattc gagggaatat ttatctatct tggagctggt ccgatgacac 11580

cccagtgttc aagagggtag cctgtaattc tagcttgagt ctgtcatctc actggatcag 11640

gttgatttac aagatagtga agactaccag actcgttggc agcatagaag atctatcagg 11700

agaggtagaa cgacacctgc atgggtacaa cagatggatc accctcgagg atatccgatc 11760

tagatcatcc ctactagact acagttgttt gtaagccgga cattaatgaa agcctgtaca 11820

tgctaaaatt cttgtatgat gcatcttgaa aaaaacaaga tcttgaatcc gaacctctgg 11880

ttgtttgatt gtttttttta tctttattgt ttatttgtta agcgt                 11925

<210>2

<211>4063

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>2

acgcttaaca acaaaaccaa agaagaagca gacagcgtca gttgcaaagc aaaaatgtaa    60

cacccctaca atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt   120

gaagcccgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa   180

aaagccttgt ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt   240

atcaggcatg aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc   300

aatgcagttc tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc   360

acgaaaagga gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga   420

agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca   480

tgcatcttta gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa   540

cactggtaac tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc   600

ttttgttaag atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg   660

gagtactata ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat   720

cgagcatctg tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc   780

aggactggta tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat   840

actatatttc ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca   900

agagacagct gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa   960

gtctccttat tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg  1020

ctatatgggt caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga  1080

gatgtctgtt ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag  1140

aaggttcttc agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac  1200

cgacgtggca ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg  1260

tgaaaccaga agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa  1320

gagatcacat atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc  1380

attcgccgaa tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taaggagttg aatgacaggg  1440

tgccagaaat ccatagattg tgtatatcca tcatgaaaaa aactaacact cctcctttcg  1500

aaccatccca agtatgagca agatctttgt taatccgagt gcaatcagag ccggtctggc  1560

cgatcttgag atggccgaag agactgttga tctgatcaac agaaacatag aagacaatca  1620

ggctcatctc cagggagaac ccatagaagt ggacaatctc cctgaggaca tgaggcaatt  1680

tcacctgggc gatgaaaaat tgtccaacct tggtgagatg gttagggtgg gcgaaggcaa  1740

gtatcgagag gactttcaga tggatgaggg agaggacccc aacctcctgt tccaatcgta  1800

cctggacaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg tcaggagaga gattcctcaa  1860

gatatggtca cagaccgtag aggaaattat atcctatgtc acggtcaact ttcctaaccc  1920

tccaggaagg tcttcggagg ataaatcaac ccaaactact ggccgggagc tcaagaagga  1980

gacaacatcc actctttctc agagagaaag ccaaccttca aaagccggaa tggtggctca  2040

agttgcctct ggccctccat cccttgaatg gtctgccacc aatgaagagg atgatctatc  2100

agtagaggct gagatcgctc atcagattgc tgaaagcttt tccaagaagt acaagtttcc  2160

ctctcgatct tcaggaatat tcttgtataa ttttgagcaa ctggagatga accttgatga  2220

catagttaaa gaggcaaaaa atgtaccggg cgtgacccgt ctggcccatg atggatccaa  2280

aatcccccta agatgtgtac tgggatgggt cgctttggcc aactccaaga aattccaatt  2340

gatagtcgag gccgacaagc taagcaaaat catgcaagat gacttggatc gctacacatc  2400

atgctaaccg agtcttcgaa ttcattccct ctagataatg aaaactgaga tgtcatggag  2460

tcgacatgaa aaaaacaggc aacaccacta ataaaatgaa ctttctatgt aagatagtga  2520

aaaactgtag ggatgaggac acccaaaagc cctctcctgt gtcagcccct ccggatggcg  2580

atgacctgtg gcttccacct ccagaatatg tcccgctgaa agaactcaca agcaagaaga  2640

acatgaggaa cttttgtatc aacggggagg ttaaagtgtg tagcccgaac ggttactcat  2700

tcaggatcct gcggcatatt ctgagatcat tcgacgagat atactctggg aatcatagga  2760

tgattgggtt agtcaaagtt gttattggac tagctttatc aggagctcca gttcctgagg  2820

gcatgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cccttatttt ccagtgggct gattccaggg  2880

gccctcttga aggggaggag ttggaacact ctcaagagat cacttgggac gatgatactg  2940

aattcgtcgg attgcaaatg agagtgagcg caagacaatg tcatattcaa ggcaggatct  3000

ggtgtatcaa catgaactcg agggcatgtc aactatggtc tgacatgtct cttcagacac  3060

aaaggtctga agaggacaaa gactcttctc tgcttctaga ataatcagat tatatcccgc  3120

aagtttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatacg ggcttaactc caatccttgg  3180

gagcaataga acaaaaaaac acgccatggt gccattaaac cgctgcattt tatcaaagtc  3240

aagttaatta cctttacatt ttgagcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc  3300

aaaagactta aggaaagatg gttcctcagg ttcttttgtt tgtacccctc ctgggttttt  3360

cattgtgttt cgggaagttc cccatttaca cgataccaga caaacttggt ccctggagcc  3420

ctattgacat acaccatctc agctgtccaa ataacctggt tgtggaggac gaaggatgta  3480

ccaacctgtc cgagttctct tacatggaac ttaaagtggg atacatctca gccataaaag  3540

tgaacgggtt cacttgcaca ggtgttgtga cagaggcaga aacctacacc aactttgttg  3600

gttatgtcac aaccacattc aagagaaagc atttccgccc caccccagac gcatgtagag  3660

ccgcgtataa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt  3720

accccgacta ccattggctt cgaactgtaa aaaccaccaa agagtctctc gttatcatat  3780

ccccaagtgt gacagatttg gacccatatg acaaatccct tcactcaagg gtcttccctg  3840

gcggaaattg ctcaggaata acggtgtcct cgacctactg ctcaactaat catgattaca  3900

ccatttggat gcctgagaat ctgagactag ggacatcttg tgacattttt accaatagca  3960

gagggaagag ggcatccaaa ggaggcaaga cttgcggctt tgtggatgaa agaggcctgt  4020

ataagtctct aaagggagca tgcaaactca agttatgtgg agt                    4063

<210>3

<211>4242

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>3

aggcctgtat aagtctctaa agggagcatg caaactcaag ttatgtggag ttctcggact    60

tagacttatg gatggaacat gggtcgcgat gcaaacatca gatgagacca aatggtgccc   120

tccaggtcag ttggtgaatt tgcacgactt tcgctcagac gagattgagc atctcgttgt   180

ggaagagtta gtcaagaaaa gagaggagtg tctggatgca ctagagtcca tcatgaccac   240

caagtcagtg agtttcagac gtctcagtca cttgagaaaa cttgtccctg ggtttggaaa   300

agcatatacc atattcaaca aaaccttgat ggaggctgat gctcactaca agtctgtccg   360

gacctggaat gagatcatcc cctcaaaagg gtgtttgaga gttgggggga ggtgtcatcc   420

ccatgtgaac ggggtgtttt tcaatggtat aatattaggg tctgacggcc atgttctaat   480

cccagagatg cagtcatccc tcctccagca acatatggag ttgttggaat cttcagttat   540

ccccctgatg caccccttgg cagacccttc tacagttttc aaagacggtg atgaggttga   600

ggattttgtt gaagttcacc tccccgatgt gcatgaacag gtctcaggag ttgaactggg   660

tctcccgaac tgggggaagt atgtattgat gattgcaggg gccttgattg ccctgatgtt   720

gataattttc ctgatgacat gttgcagaag agtcaatcga ccagaatcta cgcaaagcag   780

tcttggagag acagggagaa atgtgtcagt cacttcccaa agcggaaaag tcatatcttc   840

atgggagtca tataagagtg gaggcgagac cagactgtga aggccggtca tccttttgac   900

acttcaagtc ccgaggataa cctcctctcg gggttggggg gaatcttggg atccagtagt   960

cctccttgaa ctccatccaa cagggtagat ttaagagtca tgagactttc attaatcatc  1020

tcagttgatc agacatggtc gtgtagattc tcataacacg ggagatcttc tagcagtttc  1080

agtgaccaac ggtgctttca ttctccagga actgatacca aaggttgtgg acaagccaag  1140

gggtgcttcg gattactctg tgcttgggca cagaaagagg tcgtagtttg ccccttgata  1200

gcagattcaa catgaattaa ctaagaaagg cgatctgcct cccatgaagg acataagcaa  1260

tagttcacaa tcatcttgca tctcagtgaa gtgtacataa ctataaaggg ctgggtcatc  1320

taagcatttc agtcgagaaa aaaactgtag accaaaagaa caactaacaa cacttctcat  1380

cccgagaccc atatcaagat gctggatccg ggagaggttt atgatgaccc tattgatcca  1440

attgagtcag aggctgaacc cagaggaacc cccactgtcc ccaacatctt gaggaactct  1500

gactacaatc tcaactctcc tttgatagag gactctgcca aactaatgtt agaatggttg  1560

aaaacaggga acagacctta tcggatgact ttgacagaca attgctccag gtcttacaaa  1620

gttttgaaag attatttcaa gaaagtagat ttgggttctc tcaaagtggg aggaactgct  1680

gcacaatcaa tgatttctct ctggttgtat ggagcccact ctgagtcaaa caggagccgg  1740

agatgtataa ccgacttggc ccatttctat tccaagtcat cccccataga gaagctgttg  1800

aattgtacgt taggaaacag aggcctgaga atcccaccag agggggtgtt aagttgcctt  1860

gagagggtcg attatgataa ggcatttggg aggtatctgg ccaacacgta ttcctcttat  1920

ctgtttttcc atgtaattac cttatacatg aatgccctag actgggaaga ggaaaaaacc  1980

atcctagcat tatggaaaga tctaacctca gtggataccg ggaaggactt ggtcaaattc  2040

aaagatcaaa tatggggact gctggttgtg acaaaggact ttgtttactc tcagagttct  2100

aactgtcttt ttgacagaaa ctatacactg atgctaaagg atcttttctt gtctcgattc  2160

aactccttga tgattttgct ttctccccct gagccccgat actcagatga cttaatatct  2220

cagctgtgcc agctatacat cgctggggat caagtcttgt ccttgtgtgg gaactccggc  2280

tatgaagtca tcaaaatatt ggagccatat gtcgtgaaca gtttggtcca gagggcagag  2340

aagtttaggc ctctcatcca ctccttggga gactttccta tgtttataaa agacaaggtg  2400

aatcaacttg aagggacttt cggtcccagt gcaaaaaggt tttttagggt tctagatcaa  2460

ttcgacaaca tacatgatct agtatttgtg tatggctgtt acagacattg ggggcacccc  2520

tatatagatt atcggaaggg tctgtcgaaa ctatatgatc aagttcacat taagaaagta  2580

atagataagt cctaccagga gtgtttagca agtgacttgg ctagaaggat cctcagatgg  2640

ggatttgaca agtactccaa gtggtatcta gattcgagat tccttgccct agaccacccc  2700

ttggctcctt atatcaagac ccaaacatgg ccacccaaac atatagtaga cttggtgggg  2760

gacacatggc acaagctccc gatcacgcag atctttgaga ttcctgaatc aatggacccg  2820

tcagagatac tggatgataa atcacattct ttcaccagaa caagactagc ttcttggctg  2880

tccgagaacc gaggggggcc tgttcctagc gagaaggtca ttatcacggc cctgtctaag  2940

ccacctgtca atccccgaga gtttttgaaa tctatcgacc tcggaggatt gccagatgat  3000

gacttgataa ttggcctcag accaaaggaa cgggagttga agattgaggg ccgattcttc  3060

gctctaatgt catggaatct aagattatat tttgtcatca ccgagaagct cttggccaac  3120

tacattttgc cactttttga cgcactgact atgacagaca acctgaacaa ggtatttaaa  3180

aagttgatcg acagggtcac cgggcaaggg cttttggact attcgagggt cacatacgca  3240

tttcacctgg actatgagaa atggaacaat catcaaagat tggagtcaac ggaggatgta  3300

ttttctgtcc tagatcaggt gtttggattg aagagggtgt tttctagaac acacgagttt  3360

tttcagaagt cctggatcta ttattcagac agatcagacc tcattgggtt acgggaggat  3420

cagatatatt gcttggatat gtccaatggt ccaacctgct ggaatggcca agacggcggg  3480

ctagagggct tacggcagaa gggctggagt ctagtcagct tattgatgat agatagagaa  3540

tctcaaacca ggaacacaag aaccaagata ctagctcaag gagacaacca ggttctgtgt  3600

ccgacataca tgttgtcacc gggattgtct caagaggggc ttctctatga gttagagagc  3660

atatcgagga atgcactctc aatataccga gctatcgagg aaggagcatc taaactgggg  3720

ctgatcatca agaaagaaga gaccatgtgt agttatgact ttctcatata tgggaagacc  3780

cccttatttc gaggcaacat attagtacct gaatccaaaa gatgggcccg agtctcttgc  3840

atctctaacg accaaatagt caacctcgcc aatataatgt ctacagtatc caccaatgcg  3900

ctgacagtgg cacaacactc tcaatctctg atcaaaccta tgagggattt tctgctcatg  3960

tcagtacagg cagttttcca ctacctgctg tttagcccaa tcttaaaagg cagggtttat  4020

aagattctga gtgctgaagg ggagagcttt ctcctagcca tgtcgcggat aatctaccta  4080

gatccttctt tgggaggggt gtctggaatg tctctcggga ggttccatat acgtcagttc  4140

tcagaccctg tctctgaagg gttgtcattc tggagagaga tctggttaag ctcccatgaa  4200

tcctggattc acgcgttgtg tcaagaggcc gggaaccccg at                     4242

<210>4

<211>3739

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>4

gagagatctg gttaagctcc catgaatcct ggattcacgc gttgtgtcaa gaggccggga    60

accccgatct tggagagaga acactagaga gcttcactcg ccttttagaa gatcctacta   120

ccttaaatat caaaggaggg gccagtccta ccattctact caaggatgct atcagaaagg   180

ctctgtacga cgaggtggac aaggtggaaa attcagagtt tcgagaggca atcctgttgt   240

ccaagaccca tagagataac tttatactct ttttaaaatc tgttgagcct ctgttccctc   300

gatttctcag tgaactcttc agttcgtcct tcttgggaat accagagtca attattggac   360

tgatacaaaa ctccaggaca ataagaaggc agtttagaaa gagtctctca agaactttag   420

aagagtcctt ctacaactca gagatccacg ggattaatcg gatgacccag acacctcaaa   480

gggtcgggag agtgtggcct tgctcttcag agagggcaga tctacttagg gagatctctt   540

ggggaaggaa agtggtaggc acgacagttc ctcacccttc cgagatgttg gggctgcttc   600

caaaatcctc tatttcctgc acttgtggag caacaggggg aggcaatcct agagtttctg   660

tatcagtact cccgtccttc gatcagtcat ttttttcacg aggtccccta aagggatact   720

tgggctcgtc cacctccatg tcaacccagc tattccatgc atgggaaaaa gtcactaatg   780

ttcatgtggt gaaaagggct atatcgttaa aagaatctat aaactggttc atcaatagaa   840

attccaattt ggctcaaact ctaattagaa acatcatgtc tctgacaggc cctgatttcc   900

ctctagaaga ggctcctgtt ttcaaacgga cagggtcagc cttgcatagg ttcaagtctg   960

ccagatacag cgaaggaggg tattcttctg tttgtcctaa ccttctctct catatctctg  1020

tcagtacaga cactatgtct gatttgaccc aagacgggaa gaactatgat ttcatgtttc  1080

agccattgat gctttatgcg caaacatgga catcagagct ggtacagaga gacacaagac  1140

tgagagactc cacgtttcac tggcaccttc gatgcaacag atgtgtaagg cccattgagg  1200

atataacact ggaaacttct cagatcttcg agttcccgga tgtgtcaaaa aggatatcca  1260

ggatggtttc tggagccgtc cctcactttc agaagcttcc tgatatccgt ctaagaccag  1320

gtgattttga atctctaagt ggtagagaaa agtctcgcca catagggtca gctcaggggc  1380

tcttatactc aatcttagta gcaattcacg attcaggata caatgatggg accatcttcc  1440

ctgtcaacat atacggcaaa gtttccccta gagactattt gagagggctc gcaagaggga  1500

tcttgatagg atcctcgatt tgcttcttga cacgaatgac aaatattaat attaaaagac  1560

ctcttgaatt gatctcaggg gtaatttcct atattctcct gaggctggat aatcatccct  1620

ctctgtatat aatgcttaga gaaccgtctc ttagaggaga gatattctct atccctcaga  1680

aaatccccgc cgcttaccca accactatga aagaaggcaa cagatcgatc ttgtgttacc  1740

tccaacacgt gctacgctat gagcgagaag taatcacggc gtccccggag aatgactggc  1800

tgtggatctt ctcagacttc agaagtgcga aaatgacgta cttgaccctc attacctacc  1860

agtctcacct cctactccag agggttgagc gaaacttgtc taagagtatg agagctactc  1920

tgcgacaaat gggttcctta atgaggcaag tgctgggtgg gcacggagaa gacaccttgg  1980

agtcagacga cgacattcaa cgattactaa aagactcttt gcgaaggaca aggtgggtag  2040

atcaagaggt gcgccatgca gctagaacca tgagtggaga ttacagcccc aacaagagag  2100

tatcccgcaa ggcaggatgt tcagaatggg tctgctctgc tcaacaggtt gccgtctcca  2160

cctcagccaa cccggcccct gtctcagagc ttgacattag ggccctatct aagaggtttc  2220

aaaacccctt gatctcgggc ctaagagtgg ttcagtgggc aaccggcgcc cattataagc  2280

ttaagcctat tctagatgat ctaaatgttt tcccatctct ctgtcttgtt gttggagacg  2340

ggtcaggggg aatatcaagg gcagttctca acatgtttcc agattctaag cttgtgttca  2400

acagcctatt ggaggtgaat gatctgatgg cttccggaac acatccactg cctccttcag  2460

caatcatgag tggaggagat gatatcatct ccagagtgat agactttgac tcaatctggg  2520

aaaaaccatc cgacctgagg aacttggcca cctggagata cttccagtca gttcaaaagc  2580

aggtcaacat gtcgtatgac ctcattgttt gtgatgcaga agttactgat attgcatcta  2640

tcaaccggat aactctgttg atgtctgatt tcgcattgtc tatagatgga ccactttatc  2700

tggtcttcaa aacttacggg actatgctag tgaacccaga ctataaagct atccaacatc  2760

tgtcaagagc gttcccttcg gtcacagggt ttataaccca agtaacttcg tccttttctt  2820

ctgagctata cctccggttc tccaaacgag ggaagttttt tagggatgct gagtacttga  2880

cctcttccac ccttcgggag atgagccttg tgttattcaa ttgtagcagc cccaaaagtg  2940

agatgcagag agctcgttcc ttaaactatc aagatcttgt aaggggattt cctgaagaga  3000

tcatatcaaa tccttacaat gaaatgatca taactctgat tgacagtgat gtagagtcct  3060

tcctggtcca caagatggtg gatgatcttg agttacagag gggaactctg tctaaagtgg  3120

ctatcattat atccatcatg attgtttttt ccaatagagt cttcaacatt tccaaacctt  3180

tgactgaccc cttgttctat cccccatctg atcctaaaat cctgaggcac ttcaacatat  3240

gttgcagtac tatgatgtat ctatctaccg ctttaggcga cgtccctagc ttcgcaagac  3300

ttcatgacct atataataga cctataactt attacttcag aaagcaagtt attcgaggga  3360

atatttatct atcttggagc tggtccgatg acaccccagt gttcaagagg gtagcctgta  3420

attctagctt gagtctgtca tctcactgga tcaggttgat ttacaagata gtgaagacta  3480

ccagactcgt tggcagcata gaagatctat caggagaggt agaacgacac ctgcatgggt  3540

acaacagatg gatcaccctc gaggatatcc gatctagatc atccctacta gactacagtt  3600

gtttgtaagc cggacattaa tgaaagcctg tacatgctaa aattcttgta tgatgcatct  3660

tgaaaaaaac aagatcttga atccgaacct ctggttgttt gattgttttt tttatcttta  3720

ttgtttattt gttaagcgt                                               3739

<210>5

<211>1353

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>5

atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt gaagcccgag    60

attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa aaagccttgt   120

ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt atcaggcatg   180

aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc aatgcagttc   240

tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc acgaaaagga   300

gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga agggaattgg   360

gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca tgcatcttta   420

gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa cactggtaac   480

tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc ttttgttaag   540

atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg gagtactata   600

ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat cgagcatctg   660

tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc aggactggta   720

tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat actatatttc   780

ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca agagacagct   840

gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa gtctccttat   900

tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg ctatatgggt   960

caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga gatgtctgtt  1020

ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag aaggttcttc  1080

agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac cgacgtggca  1140

ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg tgaaaccaga  1200

agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa gagatcacat  1260

atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc attcgccgaa  1320

tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taa                               1353

<210>6

<211>894

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>6

atgagcaaga tctttgttaa tccgagtgca atcagagccg gtctggccga tcttgagatg    60

gccgaagaga ctgttgatct gatcaacaga aacatagaag acaatcaggc tcatctccag   120

ggagaaccca tagaagtgga caatctccct gaggacatga ggcaatttca cctgggcgat   180

gaaaaattgt ccaaccttgg tgagatggtt agggtgggcg aaggcaagta tcgagaggac   240

tttcagatgg atgagggaga ggaccccaac ctcctgttcc aatcgtacct ggacaatgtt   300

ggagtccaaa tagtcagaca aatgaggtca ggagagagat tcctcaagat atggtcacag   360

accgtagagg aaattatatc ctatgtcacg gtcaactttc ctaaccctcc aggaaggtct   420

tcggaggata aatcaaccca aactactggc cgggagctca agaaggagac aacatccact   480

ctttctcaga gagaaagcca accttcaaaa gccggaatgg tggctcaagt tgcctctggc   540

cctccatccc ttgaatggtc tgccaccaat gaagaggatg atctatcagt agaggctgag   600

atcgctcatc agattgctga aagcttttcc aagaagtaca agtttccctc tcgatcttca   660

ggaatattct tgtataattt tgagcaactg gagatgaacc ttgatgacat agttaaagag   720

gcaaaaaatg taccgggcgt gacccgtctg gcccatgatg gatccaaaat ccccctaaga   780

tgtgtactgg gatgggtcgc tttggccaac tccaagaaat tccaattgat agtcgaggcc   840

gacaagctaa gcaaaatcat gcaagatgac ttggatcgct acacatcatg ctaa         894

<210>7

<211>6384

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>7

atgctggatc cgggagaggt ttatgatgac cctattgatc caattgagtc agaggctgaa    60

cccagaggaa cccccactgt ccccaacatc ttgaggaact ctgactacaa tctcaactct   120

cctttgatag aggactctgc caaactaatg ttagaatggt tgaaaacagg gaacagacct   180

tatcggatga ctttgacaga caattgctcc aggtcttaca aagttttgaa agattatttc   240

aagaaagtag atttgggttc tctcaaagtg ggaggaactg ctgcacaatc aatgatttct   300

ctctggttgt atggagccca ctctgagtca aacaggagcc ggagatgtat aaccgacttg   360

gcccatttct attccaagtc atcccccata gagaagctgt tgaattgtac gttaggaaac   420

agaggcctga gaatcccacc agagggggtg ttaagttgcc ttgagagggt cgattatgat   480

aaggcatttg ggaggtatct ggccaacacg tattcctctt atctgttttt ccatgtaatt   540

accttataca tgaatgccct agactgggaa gaggaaaaaa ccatcctagc attatggaaa   600

gatctaacct cagtggatac cgggaaggac ttggtcaaat tcaaagatca aatatgggga   660

ctgctggttg tgacaaagga ctttgtttac tctcagagtt ctaactgtct ttttgacaga   720

aactatacac tgatgctaaa ggatcttttc ttgtctcgat tcaactcctt gatgattttg   780

ctttctcccc ctgagccccg atactcagat gacttaatat ctcagctgtg ccagctatac   840

atcgctgggg atcaagtctt gtccttgtgt gggaactccg gctatgaagt catcaaaata   900

ttggagccat atgtcgtgaa cagtttggtc cagagggcag agaagtttag gcctctcatc   960

cactccttgg gagactttcc tatgtttata aaagacaagg tgaatcaact tgaagggact  1020

ttcggtccca gtgcaaaaag gttttttagg gttctagatc aattcgacaa catacatgat  1080

ctagtatttg tgtatggctg ttacagacat tgggggcacc cctatataga ttatcggaag  1140

ggtctgtcga aactatatga tcaagttcac attaagaaag taatagataa gtcctaccag  1200

gagtgtttag caagtgactt ggctagaagg atcctcagat ggggatttga caagtactcc  1260

aagtggtatc tagattcgag attccttgcc ctagaccacc ccttggctcc ttatatcaag  1320

acccaaacat ggccacccaa acatatagta gacttggtgg gggacacatg gcacaagctc  1380

ccgatcacgc agatctttga gattcctgaa tcaatggacc cgtcagagat actggatgat  1440

aaatcacatt ctttcaccag aacaagacta gcttcttggc tgtccgagaa ccgagggggg  1500

cctgttccta gcgagaaggt cattatcacg gccctgtcta agccacctgt caatccccga  1560

gagtttttga aatctatcga cctcggagga ttgccagatg atgacttgat aattggcctc  1620

agaccaaagg aacgggagtt gaagattgag ggccgattct tcgctctaat gtcatggaat  1680

ctaagattat attttgtcat caccgagaag ctcttggcca actacatttt gccacttttt  1740

gacgcactga ctatgacaga caacctgaac aaggtattta aaaagttgat cgacagggtc  1800

accgggcaag ggcttttgga ctattcgagg gtcacatacg catttcacct ggactatgag  1860

aaatggaaca atcatcaaag attggagtca acggaggatg tattttctgt cctagatcag  1920

gtgtttggat tgaagagggt gttttctaga acacacgagt tttttcagaa gtcctggatc  1980

tattattcag acagatcaga cctcattggg ttacgggagg atcagatata ttgcttggat  2040

atgtccaatg gtccaacctg ctggaatggc caagacggcg ggctagaggg cttacggcag  2100

aagggctgga gtctagtcag cttattgatg atagatagag aatctcaaac caggaacaca  2160

agaaccaaga tactagctca aggagacaac caggttctgt gtccgacata catgttgtca  2220

ccgggattgt ctcaagaggg gcttctctat gagttagaga gcatatcgag gaatgcactc  2280

tcaatatacc gagctatcga ggaaggagca tctaaactgg ggctgatcat caagaaagaa  2340

gagaccatgt gtagttatga ctttctcata tatgggaaga cccccttatt tcgaggcaac  2400

atattagtac ctgaatccaa aagatgggcc cgagtctctt gcatctctaa cgaccaaata  2460

gtcaacctcg ccaatataat gtctacagta tccaccaatg cgctgacagt ggcacaacac  2520

tctcaatctc tgatcaaacc tatgagggat tttctgctca tgtcagtaca ggcagttttc  2580

cactacctgc tgtttagccc aatcttaaaa ggcagggttt ataagattct gagtgctgaa  2640

ggggagagct ttctcctagc catgtcgcgg ataatctacc tagatccttc tttgggaggg  2700

gtgtctggaa tgtctctcgg gaggttccat atacgtcagt tctcagaccc tgtctctgaa  2760

gggttgtcat tctggagaga gatctggtta agctcccatg aatcctggat tcacgcgttg  2820

tgtcaagagg ccgggaaccc cgatcttgga gagagaacac tagagagctt cactcgcctt  2880

ttagaagatc ctactacctt aaatatcaaa ggaggggcca gtcctaccat tctactcaag  2940

gatgctatca gaaaggctct gtacgacgag gtggacaagg tggaaaattc agagtttcga  3000

gaggcaatcc tgttgtccaa gacccataga gataacttta tactcttttt aaaatctgtt  3060

gagcctctgt tccctcgatt tctcagtgaa ctcttcagtt cgtccttctt gggaatacca  3120

gagtcaatta ttggactgat acaaaactcc aggacaataa gaaggcagtt tagaaagagt  3180

ctctcaagaa ctttagaaga gtccttctac aactcagaga tccacgggat taatcggatg  3240

acccagacac ctcaaagggt cgggagagtg tggccttgct cttcagagag ggcagatcta  3300

cttagggaga tctcttgggg aaggaaagtg gtaggcacga cagttcctca cccttccgag  3360

atgttggggc tgcttccaaa atcctctatt tcctgcactt gtggagcaac agggggaggc  3420

aatcctagag tttctgtatc agtactcccg tccttcgatc agtcattttt ttcacgaggt  3480

cccctaaagg gatacttggg ctcgtccacc tccatgtcaa cccagctatt ccatgcatgg  3540

gaaaaagtca ctaatgttca tgtggtgaaa agggctatat cgttaaaaga atctataaac  3600

tggttcatca atagaaattc caatttggct caaactctaa ttagaaacat catgtctctg  3660

acaggccctg atttccctct agaagaggct cctgttttca aacggacagg gtcagccttg  3720

cataggttca agtctgccag atacagcgaa ggagggtatt cttctgtttg tcctaacctt  3780

ctctctcata tctctgtcag tacagacact atgtctgatt tgacccaaga cgggaagaac  3840

tatgatttca tgtttcagcc attgatgctt tatgcgcaaa catggacatc agagctggta  3900

cagagagaca caagactgag agactccacg tttcactggc accttcgatg caacagatgt  3960

gtaaggccca ttgaggatat aacactggaa acttctcaga tcttcgagtt cccggatgtg  4020

tcaaaaagga tatccaggat ggtttctgga gccgtccctc actttcagaa gcttcctgat  4080

atccgtctaa gaccaggtga ttttgaatct ctaagtggta gagaaaagtc tcgccacata  4140

gggtcagctc aggggctctt atactcaatc ttagtagcaa ttcacgattc aggatacaat  4200

gatgggacca tcttccctgt caacatatac ggcaaagttt cccctagaga ctatttgaga  4260

gggctcgcaa gagggatctt gataggatcc tcgatttgct tcttgacacg aatgacaaat  4320

attaatatta aaagacctct tgaattgatc tcaggggtaa tttcctatat tctcctgagg  4380

ctggataatc atccctctct gtatataatg cttagagaac cgtctcttag aggagagata  4440

ttctctatcc ctcagaaaat ccccgccgct tacccaacca ctatgaaaga aggcaacaga  4500

tcgatcttgt gttacctcca acacgtgcta cgctatgagc gagaagtaat cacggcgtcc  4560

ccggagaatg actggctgtg gatcttctca gacttcagaa gtgcgaaaat gacgtacttg  4620

accctcatta cctaccagtc tcacctccta ctccagaggg ttgagcgaaa cttgtctaag  4680

agtatgagag ctactctgcg acaaatgggt tccttaatga ggcaagtgct gggtgggcac  4740

ggagaagaca ccttggagtc agacgacgac attcaacgat tactaaaaga ctctttgcga  4800

aggacaaggt gggtagatca agaggtgcgc catgcagcta gaaccatgag tggagattac  4860

agccccaaca agagagtatc ccgcaaggca ggatgttcag aatgggtctg ctctgctcaa  4920

caggttgccg tctccacctc agccaacccg gcccctgtct cagagcttga cattagggcc  4980

ctatctaaga ggtttcaaaa ccccttgatc tcgggcctaa gagtggttca gtgggcaacc  5040

ggcgcccatt ataagcttaa gcctattcta gatgatctaa atgttttccc atctctctgt  5100

cttgttgttg gagacgggtc agggggaata tcaagggcag ttctcaacat gtttccagat  5160

tctaagcttg tgttcaacag cctattggag gtgaatgatc tgatggcttc cggaacacat  5220

ccactgcctc cttcagcaat catgagtgga ggagatgata tcatctccag agtgatagac  5280

tttgactcaa tctgggaaaa accatccgac ctgaggaact tggccacctg gagatacttc  5340

cagtcagttc aaaagcaggt caacatgtcg tatgacctca ttgtttgtga tgcagaagtt  5400

actgatattg catctatcaa ccggataact ctgttgatgt ctgatttcgc attgtctata  5460

gatggaccac tttatctggt cttcaaaact tacgggacta tgctagtgaa cccagactat  5520

aaagctatcc aacatctgtc aagagcgttc ccttcggtca cagggtttat aacccaagta  5580

acttcgtcct tttcttctga gctatacctc cggttctcca aacgagggaa gttttttagg  5640

gatgctgagt acttgacctc ttccaccctt cgggagatga gccttgtgtt attcaattgt  5700

agcagcccca aaagtgagat gcagagagct cgttccttaa actatcaaga tcttgtaagg  5760

ggatttcctg aagagatcat atcaaatcct tacaatgaaa tgatcataac tctgattgac  5820

agtgatgtag agtccttcct ggtccacaag atggtggatg atcttgagtt acagagggga  5880

actctgtcta aagtggctat cattatatcc atcatgattg ttttttccaa tagagtcttc  5940

aacatttcca aacctttgac tgaccccttg ttctatcccc catctgatcc taaaatcctg  6000

aggcacttca acatatgttg cagtactatg atgtatctat ctaccgcttt aggcgacgtc  6060

cctagcttcg caagacttca tgacctatat aatagaccta taacttatta cttcagaaag  6120

caagttattc gagggaatat ttatctatct tggagctggt ccgatgacac cccagtgttc  6180

aagagggtag cctgtaattc tagcttgagt ctgtcatctc actggatcag gttgatttac  6240

aagatagtga agactaccag actcgttggc agcatagaag atctatcagg agaggtagaa  6300

cgacacctgc atgggtacaa cagatggatc accctcgagg atatccgatc tagatcatcc  6360

ctactagact acagttgttt gtaa                                         6384

<210>8

<211>6384

<212>DNA

<213>狂犬病病毒株

<400>8

atgctggatc cgggagaggt ttatgatgac cctattgatc caattgagtc agaggctgaa    60

cccagaggaa cccccactgt ccccaacatc ttgaggaact ctgactacaa tctcaactct   120

cctttgattg aggactctgc caaactaatg ttagaatggt tgaaaacagg gaacagacct   180

tatcggatga ctttgacaga caattgctcc aggtcttaca aaggtttgaa agattatttc   240

aagaaagtag atttgggttc tctcaaagtg ggaggaactg ctgcacaatc aatgatttct   300

ctctggttgt atggagccca ctctgagtca aacaggagcc ggagatgtat aaccgacttg   360

gcccatttct attccaagtc atcccccata gagaagctgt tgaattgtac gttaggaaac   420

agaggcctga gaatcccacc agagggggtg ttaagttgcc ttgagagggt cgattatgat   480

aaggcatttg ggaggtatct ggccaacacg tattcctctt atctgttttt ccatgtaatt   540

accttataca tgaatgccct agactgggaa gaggaaaaaa ccatcctagc attatggaaa   600

gatctaacct cagtggatac cgggaaggac ttggtcaaat tcaaagatca aatatgggga   660

ctgctgattg tgacaaagga ctttgtttac tctcagagtt ctaactgtct ttttgacaga   720

aactatacac tgatgctaaa ggatcttttc ttgtctcgat tcaactcctt gatgattttg   780

ctttctcccc ctgagccccg atactcagat gacttaatat ctcagctgtg ccagctatac   840

atcgccgggg atcaagtctt gtccttgtgt gggaactccg gctatgaagt catcaaaata   900

ttggagccat atgtcgtgaa cagtttggtc cagagggcag agaagtttag gcctctcatc   960

cactccttgg gagactttcc tatgtttata aaagacaagg tgaatcaact tgaagggact  1020

ttcggtccca gtgcaaaaag gttttttagg gttctagatc aattcgacaa catacatgat  1080

ctagtatttg tgtatggctg ttacagacat tgggggcacc cctatataga ttatcggaag  1140

ggtctgtcga aactatatga tcaagttcac attaagaaag taatagataa gtcctaccag  1200

gagtgtttag caagtgactt ggctagaagg atcctcagat ggggatttga caagtactcc  1260

aagtggtatc tagattcgag attccttgcc cgagaccacc ccttggctcc ttatatcaag  1320

acccaaacat ggccacccaa acatatagta gacttggtgg gggacacatg gcacaagctc  1380

ccgatcacgc agatctttga gattcctgaa tcaatggacc cgtcagagat actggatgat  1440

aaatcacatt ctttcaccag aacaagacta gcttcttggc tgtcagagaa ccgagggggg  1500

cctgttccta gcgagaaggt cattatcacg gccctgtctc agccacctgt caatccccga  1560

gagtttttga aatctatcga cctcggagga ttgccagatg atgacttgat aattggcctc  1620

agaccaaagg aacgggagtt gaagattgag ggccgattct tcgctctaat gtcatggaat  1680

ctaagattat attttgtcat caccgagaag ctcttggcca actacatttt gccacttttt  1740

gacgcactga ctatgacaga caacctgaac aaggtattta aaaagttgat cgacagggtc  1800

accgggcaag ggcttttgga ctattcgagg gtcacatacg catttcacct ggactatgag  1860

aaatggaaca atcatcaaag attggagtca acggaggatg tattttctgt cctagatcag  1920

gtgtttggat tgaagagggt gttttctaga acacacgagt tttttcagaa gtcctggatc  1980

tattattcag acagatcaga cctcattggg ttacgggagg atcagatata ttgcttggat  2040

atgtcaaatg gtccaacctg ctggaatggc caagacggcg ggctagaggg cttacggcag  2100

aagggctgga gtctagtcag cttattgatg atagatagag aatctcaaac caggaacaca  2160

agaaccaaga tactagctca aggagacaac caggttctgt gtccgacata catgttgtca  2220

ccgggattgt ctcaagaggg gcttctctat gagttagaga gcatatcgag gaatgcactc  2280

tcaatatacc gagctatcga ggaaggagca tctaaactgg ggctgatcat caagaaagaa  2340

gagaccatgt gtagttatga ctttctcata tatgggaaga cccccttatt tcgaggcaac  2400

atattagtac ctgaatccaa aagatgggcc cgagtctctt gcatctctaa cgaccaaata  2460

gtcaacctcg ccaatataat gtctacagta tccaccaatg cgctgacagt ggcacaacac  2520

tctcaatctc tgatcaaacc tatgagggat tttctgctca tgtcagtaca ggcagttttc  2580

cactacctgc tgtttagccc aatcttaaaa ggcagggttt ataagattct gagtgctgaa  2640

ggggagagct ttctcctagc catgtcgcgg ataatctatc tagatccttc tttgggaggg  2700

gtgtctggaa tgtctctcgg gaggttccat atacgtcagt tctcagaccc tgtctctgaa  2760

gggttgtcat tctggagaga gatctggtta agctcccacg aatcctggat tcacgcgttg  2820

tgtcaagagg ccgggaaccc cgatcttgga gagagaacac tagagagctt cactcgcctt  2880

ttagaagatc ctactacctt aaatatcaaa ggaggggcca gtcctaccat tctactcaag  2940

gatgctatca gaaaggctct gtacgacgag gtggacaagg tggaaaattc agagtttcga  3000

gaggcaatcc tgttgtccaa gacccataga gataacttta tactcttttt aaaatctgtt  3060

gagcctctgt tccctcgatt tctcagtgaa ctcttcagtt cgtccttctt gggaatacca  3120

gagtcaatta ttggactgat acaaaactcc aggacaataa gaaggcagtt tagaaagagt  3180

ctctcaagaa ctttagaaga gtccttctat aactcagaga tccacgggat taatcggatg  3240

acccagacac ctcaaagggt cgggagagtg tggccttgct cttcagagag ggcagatcta  3300

cttagggaga tctcttgggg aaggaaagtg gtgggcacga cagttcctca cccttccgag  3360

atgttggggc tgcttccaaa atcctctatt tcctgcactt gtggagcaac agggggaggc  3420

aatcctagag tttctgtatc agtactcccg tccttcgatc agtcattttt ttcacgaggt  3480

cccctaaagg gatacttggg ctcgtccacc tccatgtcaa cccagctatt ccatgcatgg  3540

gaaaaagtca ctaatgttca tgtggtgaaa agggctatat cgttaaaaga atctataaac  3600

tggttcatca atagaaattc caatttggct caaactctaa ttagaaacat catgtctctg  3660

acaggccctg atttctctct agaagaggct cctgttttca aacggacagg gtcagccttg  3720

cataggttca agtctgccag atacagcgaa ggagggtatt cttctgtttg tcctaacctt  3780

ctctctcata tctctgtcag tacagacact atgtctgatt tgacccaaga cgggaagaac  3840

tatgatttca tgtttcagcc attgatgctt tatgcgcaaa catggacatc agagctggta  3900

cagagagaca caagactgag agactccacg tttcactggc accttcgatg caacagatgt  3960

gtaaggccca ttgaggatat aacactggaa acttctcaga tcttcgagtt cccggatgtg  4020

tcaaaaagga tatccaggat ggtttctgga gccgtccctc actttcagaa gcttcctgat  4080

atccgtctaa gaccaggtga ttttgaatct ctaagtggta gagaaaagtc tcgccacata  4140

gggtcagctc aggggctctt atactcaatc ttagtagcaa ttcacgattc aggatacaat  4200

gatgggacca tcttccctgt caacatatac ggcaaagttt cccctagaga ctatttgaga  4260

gggctcgcaa gagggatctt gataggatcc tcgatttgct tcttgacacg aatgacaaat  4320

attaatatta aaagacctct tgaattgatc tcaggggtaa tttcctatat tctcctgagg  4380

ctggataatc atccctctct gtatataatg cttagagaac cgtctcttag aggagagata  4440

ttctctatcc ctcagaagat ccccgccgct tacccaacca ctatgaaaga aggcaacaga  4500

tcgatcttgt gttacctcca acacgtgcta cgctatgagc gagaagtaat cacggcgtcc  4560

ccggagaatg actggctgtg gatcttctca gacttcagaa gtgcgaaaat gacgtacttg  4620

accctcatta cctaccagtc tcacctccta ctccagaggg ttgagcgaaa cttgtctaag  4680

agtatgagag ctactctgca acaaatgggt tccttaatga ggcaagtgct gggtgggcac  4740

ggagaagaca ccttggagtc agacgacgac attcaacgat tactaaaaga ctctttgcga  4800

aggacaaggt gggtagatca agaggtgcgc catgcagcta gaaccatgag tggagattac  4860

agccccaaca agagagtatc ccgcaaggca ggatgttcag aatgggtctg ctctgctcaa  4920

caggttgccg tctccacctc agccaacccg gcccctgtct cagagcttga cattagggcc  4980

ctatctaaga ggtttcaaaa ccccttgatc tcgggcctaa gagtggttca gtgggcaacc  5040

ggcgcccatt ataagcttaa gcctattcta gatgatctaa atgttttccc atctctctgt  5100

cttgttgttg gagacgggtc agggggaata tcaagggcag ttctcaacat gtttccagat  5160

tctaagcttg tgttcaacag cctattggag gtgaatgatc tgatggcttc cggaacacgt  5220

ccactgcctc cttcagcaat catgagtgga ggagatgata tcatctccag agtgatagac  5280

tttgactcaa tctgggaaaa accatccgac ctgaggaact tggccacctg gagatacttc  5340

cagtcagttc aaaagcaggt caacatgtcg tacgacctca ttatttgtga tgcagaagtt  5400

actgatattg catctatcaa ccggataact ctgttgatgt ctgatttcgc attgtctata  5460

gatggaccac tttatctggt cttcaaaact tacgggacta tgctagtgaa cccagactat  5520

aaagctatcc aacatctgtc aagagcgttc ccttcggtca cagggtttat aacccaagta  5580

acttcgtcct tttcttctga gctatacctc cggttctcca aacgagggaa gttttttagg  5640

gatgctgagt acttgacctc ttccaccctt cgggagatga gccttgtgtt attcaattgt  5700

agcagcccca aaagtgagat gcagagagct cgttccttaa actatcaaga tcttgtaagg  5760

ggatttcctg aagagatcat atcaaatcct tacaatgaaa tgatcataac tctgattgac  5820

agtgacgtag agtccttcct ggtccacaag atggtggatg atcttgagtt acagagggga  5880

actctgtcta aagtggctat cattatatcc atcatgatcg ttttttccaa tagagtcttc  5940

aacatttcca aacctttgac tgaccccttg ttctatcccc catctgatcc taaaatcctg  6000

aggcacttca acatatgttg cagtactatg atgtatctat ctaccgcttt aggcgacgtc  6060

cctagcttcg caagacttca tgacctatat aatagaccta taacttatta cttcagaaag  6120

caagttattc gagggaatat ctatctatct tggagctggt ccgatgacac cccagtgttc  6180

aagagggtag cctgtaattc tagcttgagt ctgtcatctc actggatcag gttgatttac  6240

aagatagtga agactaccag actcgttggc agcatagaag atctatcagg agaggtagaa  6300

cgacacctgc atgggtacaa cagatggatc accctcgagg atatccgatc tagatcatcc  6360

ctactagact acagttgttt gtaa                                         6384