一种用于治疗病毒性呼吸道感染疾病的中药有效部位组合物

摘要

本发明属医药技术领域。本发明公开了一种用于预防或治疗病毒性上呼吸道感染的中药有效部位组合物。它能安全、有效地预防或治疗病毒性上呼吸道感染，以黄芪多糖为有效部位的黄芪提取物，以金银花总有机酸为有效部位的金银花提取物，以黄芩总黄酮为有效部位的黄芩提取物的组合物，三种有效部位联合应用，具有明显的协同作用，对呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、轮状病毒均有显著效果，与市售同用途药物比较，由于药效物质基本清楚，临床适应病证较为确切，从而具有适应现代制造业的工艺技术和质量标准的优势。该组合物可以是医学上可以接受的口服制剂，如片剂、胶囊剂(软胶囊或硬胶囊)、颗粒剂、口服液等剂型。

说明书

技术领域

本发明属于一种用于治疗病毒性呼吸道感染疾病的药物组合物，具体地说是中药有效部位提取物组成的药物组合物。

背景技本

病毒感染性疾病是人类健康的一大威胁，特别是其中某些疾病的增长速度相当快，甚至对全人类的健康都产生了严重影响。如：公元1555年，墨西哥天花大流行，200万人不治而亡；1918年在全世界范围内爆发的发生流感造成2000万人死亡；1969年西部非洲出现拉沙病毒；1976年非洲大陆出现了埃博拉病毒；1981年被称为世纪灾难的AIDS出现，还有汉坦病毒、尼巴病毒、马尔堡病毒等等，特别是自1981年以来艾滋病全球感染者人数已达4030万，其中2500万人死忘，已成为一种严重的灾难性的全球流行的疾病。2003年传染性非典型性肺炎(SARS)流行，2004年初禽流感暴发，2009年甲型H1N1流感全球蔓延等这些触目惊心的事件警示着我们，即使是二十一世纪的今天，病毒性疾病对人类威胁不但没有丝毫降低，并有愈演愈烈之势。该类疾病受到各国科学家的高度重视。因此，大力开发研制安全有效的抗病毒药物具有重要的社会意义与经济意义。

大多数病毒对病毒唑等西药不敏感，目前已成为困扰医学界的一大难题。医用外源性干扰素、白细胞介素-2等能抑制病毒复制，提高机体细胞免疫功能，但费用昂贵，且长期应用易产生耐药性，降低疗效，病情复发。病毒感染属于中医学中“疫毒”、“瘟疫”范畴，中药在病毒感染性疾病治疗中有着化学合成药物不可替代的优势，具有抗病毒疗效显著，抗病毒谱广，毒副作用小(主要指全身用药无明显的组织细胞毒性，无致畸、致突变作用，无免疫抑制、骨髓抑制作用)，药源丰富，价格低廉，无耐药产生，能调节整体免疫功能，抑制病毒复制，阻止病毒致细胞病变，改善临床症状等特点。在2003年SARS的治疗过程中，中医药以其独特的疗效引起世界的关注，并得到世界卫生组织(WHO)专家的肯定。研究和开发新的抗病毒感染性疾病的中药已成为国内甚至国际上的热点。

现代研究表明，黄芪多糖提取物主要通过调节机体的免疫功能而达到间接抗流感病毒作用，表现在多个方面，如增加外周血中多核白细胞的数量，加强单核巨噬细胞系统功能，增强自然杀伤细胞(NKC)和LAK细胞活性，对细胞免疫功能的双向调节，增强体液免疫，对补体系统的影响，诱生干扰素等细胞因子。黄芩总黄酮提取物对柯萨奇B族病毒(CoxB)、流感病毒和副流感病毒等与上呼吸道感染相关病毒表现了明显的体外抑制作用；经体内给药，对流感病毒所致的小鼠肺部感染表现了一定的治疗作用，对流感病毒感染造成的小鼠死亡表现了明显的保护作用。金银花总有机酸提取物对小鼠肺内流感病毒增殖有显著抑制作用，能明显对抗小鼠流感病毒性肺炎。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗病毒性呼吸道感染疗效更好、更安全、更方便的中药有效部位复方组合物及其制剂，其药效物质基本明确，作用机理相对清楚，质量可控。能补气解毒，具有提高免疫力与抗菌抗病毒的双向作用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：该药物含有黄芪总多糖、金银花总有机酸、黄芩总黄酮，能益气解毒，产生协同作用，经药效学证明其药效显著。

本发明通过下述技术方案予以实施。

本发明药物所用原料的重量配比可以为：黄芪总多糖提取物1～2份，金银花总有机酸提取物1～1.5份，黄芩总黄酮提取物1.5～2.5份。

本发明药物剂型可以是片剂、滴丸、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液等口服制剂，辅料为药剂学上可以接受的相应辅料。

本发明所用的黄芪总多糖含量不低于50％，金银花总有机酸含量不低于50％，黄芩总黄酮不低于70％。

本发明中对于固体组合物中所标示的百分数均为重量百分数。

本发明治疗病毒性呼吸道感染的药物组合物中，所述的黄芪总多糖提取物是从黄芪中提取的，金银花总有机酸提取物是从金银花中提取的，黄芩总黄酮提取物是从黄芩中提取的；所述的黄芪总多糖、金银花总有机酸、黄芩总黄酮的含量均符合上述要求。

该组合物的活性成分提取物均可用文献方法制备，也可以从市场购买，还可以自己制备。

所述的黄芪总多糖可用下列方法制备：将黄芪药材，加水煎煮二次，合并提取液，减压浓缩，浓缩液醇沉，滤取析出物，加水溶解，离心除去不溶物，滤液减压浓缩至适量，加乙醇使含醇量达80％，室温静置过夜，倾出上清液，沉淀部分加乙醇搅拌，滤过，乙醇洗涤，真空干燥，即得黄芪总多糖含量不低于50％的提取物。

上述黄芪总多糖的含量测定(紫外-可见光光度法)

对照品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.0ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，分别置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，置具塞试管中，分别加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以第一份为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB)，在490nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  取本品0.1g〔同时另取本品粉末测定水分(中国药典2005年版一部附录IXH第一法)〕，精密称定置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取2ml，加乙醇10ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加4％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中黄芪多糖含量(μg)，计算，即得。

本品按干燥品计算，含黄芪多糖以葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于50.0％。

本发明组合物中的黄芩总黄酮可用下列方法制备：将黄芩药材，加水煎煮，合并提取液，调溶液为强酸性，静置后，过滤，得沉淀物，调溶液为中性，醇沉，充分搅拌，抽滤，得沉淀，干燥，即得黄芩总黄酮含量不得低于70％的提取物。

上述黄芩提取物中黄芩总黄酮的含量测定(紫外-可见光光度法)

对照品溶液的制备  精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，置5ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.2mg)。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，照紫外-可见分光光度法(附录VA)，在500nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  取本品约0.5g，精密称定，加甲醇溶解至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中黄芩苷的重量(μg)，计算，即得。

本品按干燥品计算，含总黄酮以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于70.0％。

上述黄芩提取物中黄芩总黄酮的含量测定(高效液相色谱法)

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备  精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品约0.03g[同时另取本品粉末测定水分(中国药典2005年版一部附录IXH第一法)]，精密称定，加70％乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于60.0％。

本发明组合物中的金银花总有机酸可用下列方法制备：所述的金银花总有机酸是按照下述方法制备的：将金银花药材，加水煎煮，合并提取液，浓缩，浓缩液醇沉后滤过，取滤液回收乙醇，得溶液稀释至适量，加酸至溶液为酸性，上大孔吸附树脂，用30％乙醇洗脱，得洗脱液，减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，即得金银花总有机酸。即得金银花总有机酸不得低于50％的提取物，其中绿原酸不得低于20％。

(1)上述的金银花总有机酸中绿原酸的含量测定(高效液相色谱法)

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算不低于1000。

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备  取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含绿原酸(C16H18O9)不得少于20％。

(2)上述的金银花总有机酸的测定(紫外-可见光光度法)

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得(10℃以下保存)。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加50％甲醇至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在327nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  取本品约0.15g，精密称定，置100ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50％甲醇至6ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg)，计算，即得。

本品按干燥品计算，含总有机酸以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于50.0％。

本发明还公开了本发明药物组合物的制备方法，该方法可以采用制药领域的常规方法，使用常规的药用辅料进行制备。例如采用一般方法将黄芪总多糖、金银花总有机酸、黄芩总黄酮均匀混合后，与任意一种或一种以上药剂学上常用的载体或辅料混合，然后制成各种口服剂型。所述的载体例如赋形剂、填料、稀释剂、润滑剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、芳香剂等。具体的所述载体例如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等。

根据需要，本发明的药物组合物可制成适于口服用药的制剂，可以是下述的任一剂型：片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸、分散片、口腔崩解片、丸剂、口服液。

本发明的另一目的是提供了本发明组合物在预防病毒性上呼吸道感染方面的应用。

本发明组合物具有功能清热解毒、益气祛邪，用于风热阻肺兼气虚型急性上呼吸道感染，抗病毒效果显著。我们采用大孔吸附树脂分离纯化等新工艺，将方中药味所含多糖类、有机酸及黄酮类等成分提取分离出来，开发成抗病毒组分中药。

本发明组合物不单纯着眼于直接的抗病毒作用，而是重视病毒-机体-中药三者的关系，通过调动机体特异性和非特异性免疫功能来增强抗病毒感染的能力。

具体实施方式

为了对本发明剂型更进一步的详细描述，给出具体实施例，但仅作为阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1黄芪总多糖、金银花总有机酸和黄岑总黄酮的制备

黄芪总多糖提取物的制备：黄芪药材切片，以乙醇超声提取2次，加水煎煮二次，第一次加6倍量水煎煮2小时，第二次加4倍量水煎煮1.5小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.2浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，滤取析出物，加水溶解，离心除去不溶物，滤液减压浓缩至适量，加乙醇使含醇量达80％，室温静置12小时，倾出上清液，沉淀部分加乙醇搅拌，滤过，乙醇洗涤，真空干燥，即得黄芪总多糖含量不低于50％。

金银花总有机酸提取物的制备：将金银花药材，加水煎煮二次，第一次8倍量水煎煮1.5小时，第二次6倍量水煎煮1.0小时，合并煎煮液，减压浓缩至相对密度1.05，浓缩液加乙醇使含醇量达到70％，滤过，取滤液回收乙醇，得溶液稀释至适量，加盐酸至PH值为3，上大孔吸附树脂，用30％乙醇洗脱，得洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.05的浸膏，喷雾干燥，即得金银花总有机酸不得低于50％，其中绿原酸不得低于20％。

黄芩总黄酮提取物的制备：将黄芩药材，加水煎煮二次，第一次8倍量水煎煮1小时，第二次6倍量水煎煮1.5小时，合并煎煮液，加盐酸调PH值为1-2，80℃保温，使黄芩总黄酮凝聚析出。滤过，弃去滤液，沉淀物加适量水搅匀，用40％氢氧化钠溶解，调节pH值至7，加等量乙醇，再用盐酸调节pH值至1-2，加热至80℃，使黄芩总黄酮析出。滤过，沉淀以少量50％乙醇洗涤后，再以5倍量乙醇洗涤，干燥，即得黄芩总黄酮含量不得低于70％。

实施例2本发明药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊剂型

颗粒剂的制备：采用常规制备颗粒剂工艺，取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮1.5份，辅料适量。混匀，制粒，过筛，干燥，制得颗粒剂型的药物组合物。

片剂的制备：将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得含黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮1.5份的片剂剂型的药物组合物。

胶囊剂的制备：将制得的颗粒装入胶囊壳，制成胶囊剂，即制得含黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮1.5份的胶囊剂型的药物组合物。

实施例3本发明组合物的滴丸剂型

制备：采用常规制备滴丸的工艺，取黄芪总多糖1.0份、金银花总有机酸1.0份，黄芩总黄酮1.5份，辅料适量，制得该药物组合物的滴丸。

实施例4本发明组合物的软胶囊剂型

制备：采用常规制备软胶囊的工艺，取黄芪总多糖1.5份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮2.5份，辅料适量，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊，制得该药物组合物的软胶囊。

实施例5本发明组合物的微丸剂型

制备：采用常规制备微丸的工艺，取黄芪总多糖1.0份、金银花总有机酸1.0份，黄芩总黄酮1.5份，辅料适量，制得该药物组合物的微丸。

实施例6本发明组合物的口腔崩解片

制备：采用常规制备口腔崩解片的工艺，取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮2.5份，辅料适量，制得该药物组合物的口腔崩解片。

实施例7本发明组合物的分散片

制备：采用常规制备分散片的工艺，取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮2.5份，辅料适量，制得该药物组合物的分散片。

实施例8本发明组合物的口服液

制备：采用常规制备口服液的工艺，取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮2.5份，辅料适量，制得该药物组合物的口服液。

实例9本发明组合物对小鼠感染流感病毒的对抗作用

本发明组合物的体内抗病毒作用由以下药效学试验证明：

组合物A：取黄芪总多糖1.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮1.5，制备而成。

组合物B：取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1份，黄芩总黄酮2.0，制备而成。

组合物C：取黄芪总多糖2.0份、金银花总有机酸1.5份，黄芩总黄酮2.5，制备而成。

(1)对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用

取昆明小鼠120只，取ICR小鼠120只，体质量13～16g，雌雄各半，随机分6组，每组20只：空白对照组、模型对照组、病毒唑组100mg/kg、组合物A组、组合物B组、组合物C组。以上各组小鼠灌胃给药，每日1次，连续5日，灌胃体积为10ml/kg，空白对照组与模型对照组给予等体积蒸馏水。于给药第一天各组小鼠(除空白对照组外)，在乙醚浅麻醉下，以血凝滴度640以上的病毒尿囊液(甲型流感病毒A/PR8/34)，给小鼠滴鼻感染，每鼠50μL(20个LD₅₀致死量，已测得LD₅₀为10^-3.7)，观察动物感染后发病及死亡情况，记录14d内死亡数，并计算保护率及平均存活天数，结果见表1。

表1对流感病毒后小鼠死亡率的影响(n＝20)

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01.

小鼠感染病毒14d内，与模型组比较，本发明组合物各组动物的死亡数明显降低、小鼠的平均存活天数较模型组明显延长，差异有统计学意义(P＜0.05或0.01)，表明本发明组合物对甲型流感病毒感染小鼠具有明显保护作用，本发明组合物对甲型流感病毒有较好的抑制作用。

(2)对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响

取昆明小鼠120只，取ICR小鼠120只，体质量13～16g，雌雄各半，随机分6组，每组20只，分组与给药同上。各小鼠在乙醚浅麻醉下，以血凝滴度640以上的病毒尿囊液(甲型流感病毒A/PR8/34)，给小鼠滴鼻感染，每鼠30μL(20个LD₅₀致死量，LD₅₀为10^-3.7)，观察肺部病变，取全肺称重，计算各鼠肺指数值，肺指数抑制率，比较各组间差异，并取鼠肺用10％甲醛固定，作病理组织学检查。结果见表2。

表2对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响(n＝10)

注：与空白组比较^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01.

本发明组合物各组小鼠的肺指数值明显低于模型组，与模型组比较有差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，表明本发明对流感病毒引起的小鼠肺部炎症有明显抑制作用。

实例10本发明组合物对正常小鼠单核巨噬细胞功能及免疫器官重量的影响

取雄性ICR小鼠60只，体重18～22g，随机分为5组，每组12只：模型对照组、组合物A组、组合物B组、组合物C组，香菇菌多糖片组。灌胃给药，每日1次，连续5日，灌胃体积为20ml/kg，空白对照组给予等体积蒸馏水。末次给药30min后，尾静脉注入20％印度墨汁生理盐水0.1ml/10kg体重，注射后2min及20min分别眶后静脉丛取血20μl，溶于2ml0.1％Na₂CO₃溶液中摇匀，置紫外可见光分光光度计在波长680nm下比色，测定光密度(OD)；脱臼处死小鼠，解剖摘取肝、脾、胸腺重量。按李仪奎主编的《中药药理实验方法学》计算吞噬速率K、吞噬指数α，结果进行统计学处理，见表3。

表3抗病毒对正常小鼠单核吞噬细胞功能的影响(n＝12，)

注：与空白组比较^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01.与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01.

结果表明，本发明组合物能明显提高K值和a值，说明对网状内皮系统吞噬功能具有明显的激活、增强作用。