一种海洋细菌显色分离培养基及其应用

摘要

本发明公开了一种海洋细菌显色分离培养基及其应用。本发明海洋细菌显色分离培养基的配方为：蛋白胨2~3g/L，酵母膏0.1~1g/L，乳糖8~20g/L，蔗糖8~20g/L，纤维二塘8~20g/L，硫代硫酸钠0.1~1g/L，柠檬酸铁铵0.1~1g/L，3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐0.01~0.1g/L和琼脂10~20g/L。本发明海洋细菌显色分离培养基使细菌生长处呈现不同颜色，便于快速简便的检测或分离海洋细菌，有利于海洋微生物多样性研究。

说明书

技术领域

本发明涉及海洋细菌的分离培养领域，尤其是一种海洋细菌显色分离培养基及其应用。

背景技术

长期以来，海洋细菌分离主要采用的培养基有Zobell 2216E和TSB(胰蛋白胨大豆肉汤培养基)等，其中以Zobell 2216E应用最为广泛，由蛋白胨5.0g/L，酵母膏1.0g/L，磷酸铁0.01g/L，琼脂18.0g/L和海水1000mL组成。由于此培养基中蛋白胨、酵母膏只提供基本的碳氮源、维生素、生长因子，因此在平板上生长的细菌菌落绝大多数只呈现白色，间或有极少量黄色菌落出现。采用这类培养基，几乎不能对不同种属细菌在培养形态上进行区分。此外，在实际的微生物学工作中发现，采用传统的2216E和TSB培养基，分离鉴定的细菌种类也非常有限，主要集中于少量的几个细菌属上。这是因为在高浓度营养的环境下，实际只有少量能快速调整代谢的微生物种类能迅速生长，并抵制其它种类微生物生长。

采用这类常规的培养基十分不利于海洋细菌的分离和多样性研究，常常造成一些有价值的微生物被漏选掉或者低估微生物的多样性。基于这种情况，发明一种方便挑选和分离不同种属海洋细菌并增加分离微生物多样性的培养基十分迫切。

发明内容

本发明的目的在于根据现有的常规培养基中存在的不足，提供一种便于不同种属海洋细菌的挑选和分离的海洋细菌显色分离培养基。

本发明另一目的是提供上述海洋细菌显色分离培养基的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

一种海洋细菌显色分离培养基，其配方如下：蛋白胨2~3g/L，酵母膏0.1~1g/L，乳糖8~20g/L，蔗糖8~20g/L，纤维二糖8~20g/L，硫代硫酸钠0.1~1g/L，柠檬酸铁铵0.1~1g/L，3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐0.01~0.1g/L和琼脂10~20g/L。

作为一种优选方案，上述培养基配方如下：蛋白胨2.5g/L，酵母膏0.5g/L，乳糖10g/L，蔗糖10g/L，纤维二糖10g/L，硫代硫酸钠0.5g/L，柠檬酸铁铵0.5g/L，3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐0.025g/L和琼脂18g/L。

本发明海洋细菌显色分离培养基是利用不同种属的细菌发酵不同糖类、产酸能力不同以及是否具备产硫化氢能力的原理，在添加了酸碱指示剂、各种糖类、硫代硫酸钠的培养基上呈现出不同的颜色，以利于肉眼的分辨和挑选。另外，本发明还调低了营养物的浓度，使较慢生长的微生物种类得以形成可见、可分离的菌落，从而增加了分离细菌的多样性。

本发明海洋细菌显色分离培养基配方的技术原理是：蛋白胨、酵母膏和磷酸铁提供碳源、氮源、维生素。生长因子及Fe离子，以满足细菌生长的基本需要；乳糖、蔗糖和纤维二糖为可发酵的糖类，不同的海洋细菌利用这三种糖类的能力不同，因此产酸能力也不同；硫代硫酸钠在某些细菌作用下被还原为硫化氢，其与柠檬酸铁铵中的铁盐生成硫化铁；3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐(中性红，简称Neutral red)在pH为6.8~8.0之间时，颜色为红~亮黄，其变色范围刚好适合于海洋细菌生长及代谢的pH范围，且颜色变化明显，对比鲜明。

本发明海洋细菌显色分离培养基可用于海洋细菌的检测或分离。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)细菌生长于基于本发明培养基上，可形成白色、乳白、粉红、大红、亮黄、黄色、黑色或菌落外圈透明等不同的颜色，菌落的形态特征为圆润、扁平、突起或凹陷等，丰富的表型特征大大方便了挑取不同的细菌种类；

(2)培养基采用较低浓度的营养物，协调了较快和较慢生长的微生物种类形成菌落的时间，因此增加了培养基平板生长细菌的种类，有利于细菌多样性及微生物资源研究；

(3)本发明培养基可以替代2216E及TSB培养基，利用该培养基所形成菌落丰富的表型是2216E及TSB培养基所没有的，具有十分广阔的应用价值及前景。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例1近岸海水中细菌在本发明培养基上培养

本发明培养基：蛋白胨2.5g，酵母膏0.5g，磷酸铁0.05g，乳糖10g，蔗糖10g，纤维二糖10g，硫代硫酸钠0.5g，柠檬酸铁胺0.5g，中性红0.025g，琼脂18g，海水1000mL，搅拌均匀后121℃，20分钟灭菌，冷却至65~60℃时调pH＝7.4~7.6，倾倒平板，凝固干燥后待用。

Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母膏1.0g/L，磷酸铁0.01g/L，琼脂18.0g/L，海水1000ml搅拌均匀后121℃，20分钟灭菌，冷却至65~60℃倾倒平板，凝固干燥后待用(作为对照)。

取新鲜近岸海水，吸取100~500μL(根据水中菌含量调整)，分别涂于本发明之培养基及Zobell 2216E培养基上，30℃培养箱中培养18~24小时。

结果显示，本发明之培养基上能挑取出约20个不同颜色和形态的菌落，而Zobell 2216E培养基上仅能挑取出10个(图1)。

实施例2海水对虾养殖池水中细菌在本发明培养基上培养

本发明培养基：蛋白胨2.5g，酵母膏0.5g，磷酸铁0.05g，乳糖10g，蔗糖10g，纤维二糖10g，硫代硫酸钠0.5g，柠檬酸铁胺0.5g，中性红0.025g，琼脂18g，海水1000ml，搅拌均匀后121℃，20分钟灭菌，冷却至65~60℃时调pH＝7.4~7.6，倾倒平板，凝固干燥后待用。

Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母膏1.0g/L，磷酸铁0.01g/L，琼脂18.0g/L，海水1000ml搅拌均匀后121℃，20分钟灭菌，冷却至65~60℃倾倒平板，凝固干燥后待用(作为对照)。

取新鲜海水养殖池水，吸取100-500μL(根据水中菌含量调整)，分别涂于本发明之培养基及Zobell 2216E培养基上，30℃培养箱中培养18~24小时。

结果显示本发明之培养基上能挑取出约17个不同颜色和形态的菌落，而Zobell 2216E培养基上仅能挑取出10个(图2)。

由上面二个实施例可以表明本发明培养基明显优于Zobell 2216E培养基，根据菌落生长的颜色和形态就可以分离出更多种属的海洋细菌。