利用微波加热分解提取法的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法

摘要

本发明提供一种能够确保分析精度、并且兼备简便性和迅速性的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法。该二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法的特征在于，在反应容器中加入生药或含有生药的制剂或者它们的处理物、酸催化剂水溶液、L-半胱氨酸或其盐、和提取用有机溶剂，密闭后照射微波，使存在于生药或含有生药的制剂中的二硫代氨基甲酸盐类农药分解为二硫化碳，在上述有机溶剂中分配提取，之后进行分析。

说明书

技术领域

本发明涉及对试样中的二硫代氨基甲酸盐类农药进行分析的方法。

背景技术

二硫代氨基甲酸盐类农药作为杀菌剂、杀线虫剂被广泛应用于农药领域，也被用于作为中药制剂原料的药用生药中。

在有代表性的二硫代氨基甲酸盐类农药分析方法，即二硫化碳法中，通过在酸催化剂中对试样中残留的二硫代氨基甲酸盐类农药进行加热，使其分解为二硫化碳并进行测定，以二硫化碳换算残留值进行定量。但其必须使用特殊的分解用玻璃器具和多种烈性药品(盐酸、浓硫酸、碱)，分析方法繁杂。此外，还有使二硫代氨基甲酸盐类农药形成衍生物并进行定量的甲基化法，其能够判断残留的农药种类(亚乙基双二硫代氨基甲酸盐类、二甲基二硫代氨基甲酸盐类、亚丙基双二硫代氨基甲酸盐类)，就此而言优于二硫化碳法，但在操作性、样品处理能力方面没有大的差异。另外，由于材料特性(分解性、难溶解性)的原因，对二硫代氨基甲酸盐类农药难以适用近年常见的能够一次确认许多残留农药的同时分析法。

由于以上理由，尽管二硫代氨基甲酸盐类农药的使用量大，但也不得不依赖于残留分析效率差的分别分析法，因此难以进行残留农药的管理。

在非专利文献1中公开了利用微波照射加热使残留于干燥烟草和桃中的二硫代氨基甲酸盐类农药分解为二硫化碳并进行定量的方法。在该分析法中，在树脂制的筒中加入样品、5mol/L盐酸、氯化锡(II)催化剂、异辛烷有机溶剂，密闭后利用微波进行加热，使残留的二硫代氨基甲酸盐类农药分解为二硫化碳，在反应用筒内在有机溶剂中分配提取后，采集有机溶剂相，用带有火焰光度型检测器的气相色谱(GC-FPD)进行分析。该方法是极其简易的方法。

但是，本案发明人将非专利文献1中记载的分析方法用于生药和中药制剂等时，在农药的添加回收试验中没有得到满意的结果，因此需要做进一步改进。

在非专利文献2中记载L-半胱氨酸防止用作亚乙基双二硫代氨基甲酸盐类农药的代森锰锌(Manzeb)分解为亚乙基硫脲，但完全没有提及亚乙基双二硫代氨基甲酸盐类农药、亚丙基双二硫代氨基甲酸盐类农药和二甲基二硫代氨基甲酸盐类农药的分解为二硫化碳的反应。

在非专利文献3中记载如果将果实或蔬菜的试样磨碎，由于二硫代氨基甲酸盐类农药与水分接触而迅速被分解，还记载如果在该试样中加入L-半胱氨酸，二硫代氨基甲酸盐类农药的分解会受到抑制，但尚不清楚抑制了怎样的分解反应，也完全没有说明在利用微波使二硫代氨基甲酸盐类农药分解为二硫化碳的反应体类中同时存在有L-半胱氨酸时会如何作用。另外，非专利文献3中确认L-半胱氨酸对酸橙、葡萄、苹果和莴苣试样有效果，但尚未确认到对迷你番茄试样有效果。

非专利文献1：J.Agric.Food Chem.，2002，50，2220-2226

非专利文献2：J.Agric.Food Chem.，1992，40，76-80

非专利文献3：2006年第29回農薬残留分析研究会講演要旨集(2006年第29次农药残留分析研究会讲演摘要集)第168～171页

发明内容

本发明的课题在于提供一种能够确保分析精度、并且兼备简便性和迅速性的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法。

本发明的要点如下。

(1)一种二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法，通过在反应容器中加入生药或含有生药的制剂或者它们的处理物、L-半胱氨酸或其盐、和提取用有机溶剂，密闭后照射微波，使存在于生药或含有生药的制剂中的二硫代氨基甲酸盐类农药分解为二硫化碳，在上述有机溶剂中分配提取之后进行分析。

(2)如上述(1)所述的方法，进一步在反应容器中加入酸催化剂水溶液并密闭。

(3)如上述(2)所述的方法，酸催化剂水溶液含有氯化锡(II)或其水合物和盐酸。

(4)如上述(1)～(3)中任一项所述的方法，提取用有机溶剂是环己烷或2，2，4-三甲基戊烷。

(5)如上述(1)～(4)中任一项所述的方法，利用气相色谱进行分析。

(6)如上述(1)～(5)中任一项所述的方法，二硫代氨基甲酸盐类农药包括丙森锌。

(7)如上述(1)～(6)中任一项所述的方法，生药或含有生药的制剂是生药、中药制剂、健康食品、类药品或化妆品。

发明效果

根据本发明，能够在短时间内安全地一次性处理多个样品。由此，能够极大地简化至今为止繁杂的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析。

具体实施方式

本发明的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法利用和改进了二硫化碳法这种二硫代氨基甲酸盐类农药分析方法的原理。本方法不使用覆套式电阻加热器等直接加热、而是利用微波照射进行间接加热，从而促进农药分解，同时使分解生成的二硫化碳在有机溶剂中提取分配，用气相色谱等对其进行测定，以二硫化碳换算残留值对农药残留值进行定量。

在本发明中，只要分析对象二硫代氨基甲酸盐类农药具有下式：＞N-CS-S-所示的二硫代氨基甲酸盐结构即可，没有限制，例如有下式(I)、(II)或(III)所示的化合物。

(式中，R¹和R²相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的苯基、取代或非取代的C_1-5-烷基、取代或非取代的C_3-7-烷基、氨基、苯并噻唑基，R¹和R²也可以共同表示碳原子数为1～4的亚烷基，n是1或2，X表示氢原子、铵基、金属原子。)

在上述式中，R¹或R²所示的C_1-5-烷基，例如有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基，作为C_3-7-烷基，例如有环己基。R¹或R²所示的苯基、C_1-5-烷基和C_3-7-烷基可以被二硫代氨甲酰基取代。

X所示的金属原子，例如有钠、钾等碱金属原子，钙、镁等碱土金属原子，锌、镍、镉、铁、铜、锰、砷。

上述二硫代氨基甲酸盐类农药的具体例，有代森锌、代森锰、代森锰锌、代森铵、福代锌(双二甲基二硫代氨甲酰锌亚乙基双二硫代氨基甲酸盐)、有机镍(二甲基二硫代氨基甲酸镍)、福美铁、丙森锌、代森联、福美锌、福美联、甲基二硫代氨基甲酸钠。

能够适用于本发明的试样，只要是怀疑有二硫代氨基甲酸盐类农药残留的生药或含有生药的制剂或者它们的处理物即可，没有特别限制，例如可以有生药、中药制剂、健康食品、类药品(例如刷牙粉)、化妆品、农作物、土壤等。根据需要，可以对生药或含有生药的制剂进行粉碎、裁切等处理后使用。

在本发明中，可以使用含有L-半胱氨酸或其盐的水溶液。用作L-半胱氨酸的盐，例如可以是盐酸盐或其水合物。该水溶液中的L-半胱氨酸或其盐的浓度通常是0.1～10.0w/v％。在生药的分析中，为2.0～6.0w/v％，最好为4.0％w/v％。

如果L-半胱氨酸或其盐的浓度小于2％，添加回收率会不充分；如果大于10％，反应溶液的粘度变高，溶液的均匀性下降，所以分解为二硫化碳的反应会不充分。

在本发明中，除了含有L-半胱氨酸或其盐的水溶液外，根据需要还可以同时使用酸催化剂水溶液。在此使用的酸催化剂水溶液，例如有含有氯化锡(II)或其水合物及盐酸的水溶液、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸等酸性水溶液。可以将氯化锡(II)或其水合物、盐酸和水分别加入到反应器中，也可以预先混合氯化锡(II)或其水合物、盐酸和水，再根据需要混合L-半胱氨酸或其盐，将得到水溶液加入反应容器中。

氯化锡(II)可以以无水合物或二水合物等水合物的形态使用。作为L-半胱氨酸的盐，例如有盐酸盐或其水合物。

预先配制含有氯化锡(II)或其水合物、盐酸和L-半胱氨酸或其盐的水溶液时，该水溶液中的盐酸浓度通常是0.5～6.0mol/L，氯化锡(II)或其水合物的浓度通常是0.1～5.0w/v％，L-半胱氨酸或其盐的浓度通常是0.1～5.0w/v％。

作为提取用有机溶剂，通常，从微波透射性和提取的选择性的观点出发，优选非极性或弱极性的溶剂，具体有己烷、庚烷、辛烷、壬烷、异辛烷(2，2，4-三甲基戊烷，下同)、甲苯等。从添加回收率的观点出发，特别优选环己烷、异辛烷。

反应容器只要是耐压力设计、能够进行温度控制且能够密闭的容器即可，没有特别的限制。反应容器的材质只要是微波透射性的材质即可，没有特别的限制，例如有氟树脂(例如Teflon、PFA)、玻璃(例如派pyrex^TM、石英)等。

通常，在每1个反应容器(70mL容积)中，加入0.1～5g试样(生药或含有生药的制剂或它们的处理物)、10～30mL含有L-半胱氨酸或其盐的酸催化剂水溶液(或含有L-半胱氨酸或其盐的水溶液)、5～20mL提取用有机溶剂。该值是根据装置的规模而变化的值，可以根据微波照射装置、微波输出和反应容器各自的大小适当变更。

将反应容器密闭后，放入微波溶剂提取装置，从反应容器外侧照射微波进行加热。微波加热是利用300MHz～300GHz范围的电磁波的感应加热方式。微波加热是利用由电磁波产生的、介质中存在的离子电流和分子的偶极子旋转进行加热。

微波照射时，通常对每个反应容器照射10～100W、将温度控制保持在80～100℃，连续或断续地照射15～30分钟。

在本发明中例如通过以下三个阶段进行微波照射。

为了使反应溶液的温度达到上述范围，在最初开始微波照射时，升高微波输出使之迅速升温。(第一阶段)

在溶液温度达到上述范围以后，将微波输出调整到能够保持温度的程度，照射必要的时间。(第二阶段)

微波照射结束后，使反应溶液的温度降低到室温。(第三阶段)

作为微波溶剂提取装置，只要能够一次组合多个反应容器而设置，一次能处理多个样品即可，没有限制，例如有milestone公司生产的用于同时处理多样品的24转子、扭矩扳手紧固式12转子等。由于耐压性能高，最好为扭矩扳手紧固式12转子。

分解反应结束后，利用各种分析设备进行分析，例如利用气相色谱、最好为带有火焰光度型检测器的气相色谱(GC-FPD)进行分析，分析试样中的二硫代氨基甲酸盐类农药。

如果在微波烘箱装置中放入多个分解反应用容器，一次性地进行微波照射，能够在短时间内安全地一次性处理多个样品。

实施例

以下，列举实施例具体说明本发明，但本发明的范围不限于以下的实施例。

实施例1使用4.0％L-半胱氨酸盐酸盐水溶液作为催化剂试液的生药中的福美联、代森锰锌和丙森锌的添加回收试验

通过以下记载的样品、分析装置、分析条件和操作，进行生药中的三种二硫代氨基甲酸盐类农药(福美联、代森锌、丙森锌)的添加回收试验。

(1)样品、试剂和其它

(a)样品

作为样品，使用以下20种生药的原体，或使用将其裁切或粉碎等而得到的3～5mm左右的样品。

当归、川芎、牡丹皮、橙皮、陈皮、半夏、柴胡、细辛、山药、远志、大枣、枳实、五味子、牛膝、麦门冬、白芷、苏叶、花椒、小麦、枇杷叶

(b)试剂、试液

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂

2，2，4-三甲基戊烷(异辛烷)：关东化学株式会社、一级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

(c)催化剂试液

4.0％半胱氨酸盐酸盐水溶液：在蒸馏水中溶解20g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，得到500mL溶液。

(d)被检验农药

农药标准品

二硫化碳：和光纯药工业株式会社、特级试剂、试剂纯度99％

福美联标准品：和光纯药工业株式会社、农药标准品、试剂纯度100％

丙森锌标准品：GL sciences株式会社、农药标准品、试剂纯度80％以上

代森锰锌标准品：和光纯药工业株式会社、农药标准品、试剂纯度91％

农药标准溶液的配制

福美联标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)：称取3.16mg福美联，加入丙酮，精确地调节为25mL溶液。

丙森锌标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)：称取4.75mg丙森锌，加入蒸馏水，进行超声波照射形成悬浊溶液后，精确地调节为25mL溶液。

代森锰锌标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)：称取3.89mg代森锰锌，加入蒸馏水或乙腈，进行超声波照射形成悬浊溶液后，精确地调节为25mL溶液。

(e)添加农药

在各样品中分别直接添加福美联、代森锰锌或丙森锌农药标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)，使得二硫化碳换算浓度为10ppm。

(2)微波溶剂提取处理

(a)微波溶剂提取装置(以下简称为MW装置)

微波溶剂提取装置ETHOS1(milestone公司)

^*MW装置本体ETHOS1(规格)

控制终端640

升压变压器MDM-1000-240-4K

内部温度控制盒ATC-FO

红外线外部温度控制盒IRT

磁力搅拌器ASM-400

^*部分中压转子MPR-600/12(规格)

底板

顶板

中压部分MPR-600/12用

弹簧HTC-600

转接板AP-45/HT

TFM盖SD-05/S

指示环IR-54/25

TFM分解容器(100mL)HPV-100

保护器SS-05

ATC用中压部分

ATC盖盒(无压力孔)

^*其它

ATC陶瓷热电偶套管140mm ATC-FO(黄色盖AN0532)

TFM转子(Φ8mm×20mm)

扭矩扳手(22.5Nm)

(b)利用MW装置进行的提取处理

在Teflon制的容器(100mL)中称取2.0g经过粉碎的样品生药，将容器放入保护器。在分解容器内部放入搅拌子，接着迅速加入10mL异辛烷和30mL催化剂溶液。用TFM盖加盖，安装转接板、弹簧和指示环，安装于中压部分，并用扭矩扳手(22.5Nm)紧固。同样的操作进行了与需测定个数相同的次数。预先将部分中压转子的底板安装在ETHOS1库内，以点对称的方式安装中压部分，从上面嵌入顶板。另外，为了供内部温度传感器使用，在加入有TFM转子、10mL异辛烷和30mL催化剂溶液的TFM容器中安装ATC盖盒，安装于ATC用中压部分，并用扭矩扳手(22.5Nm)紧固。将温度传感器探头插入ATC用中压部分的热电偶套管和ETHOS1库内的连接器，在底板上安装ATC用中压部分。关闭ETHOS1的门，开始下述表1所示条件的微波提取步骤。该步骤结束，确认反应容器充分冷却，在样品瓶中采集反应液的上层(异辛烷)，作为GC分析试样。

[表1]

(c)校正线用二硫化碳溶液的配制

在25mL的褐色容量瓶中取一半容量左右的异辛烷，加上塞子，精确称量容量瓶的质量。在其中精确量取1mL二硫化碳，加上盖子，精确称量容量瓶的质量。用异辛烷精确地调节为25mL，得到原液A(约50000μg/mL)。

精确量取1mL原液A，用异辛烷精确地调节为50mL，得到原液B(约1000μg/mL)。

精确量取1mL原液B，用异辛烷精确地调节为50mL，得到原液C(约20μg/mL)。

精确量取5mL原液C，用异辛烷精确地调节为25mL，得到标准溶液1(相当于4.0μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液1，用异辛烷精确地调节为20mL，得到标准溶液2(相当于2.0μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液2，用异辛烷精确地调节为20mL，得到标准溶液3(相当于1.0μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液3，用异辛烷精确地调节为20mL，得到标准溶液4(相当于0.5μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液4，用异辛烷精确地调节为25mL，得到标准溶液5(相当于0.2μg/mL)。

(3)利用气相色谱进行的分析操作

(a)气相色谱装置仪器识别序号：GC-7(GC-FPD/FPD)

Agilent Technologies公司生产6890N(本体)

Agilent Technologies公司生产7683(自动取样器)

注入口：分流/不分流注入口

嵌入件：Agilent Technologies公司生产分流/不分流嵌入件(5183-4711)

检测器：Agilent Technologies公司生产FPD检测器(硫方式波长滤波器、393nm)

(b)GC-FPD的分析条件

柱：GS-GasPro(Agilent Technologies公司生产)、长度15m、内径0.32mm、膜压0

柱温：40℃(1.5min)→30℃/min→220℃(6.5min)

注入口温度：120℃

注入方式和注入量∶分流(10∶1)、1μL

载气：氦气、恒量流动方式、平均线速度37cm/sec

检测器：FPD-S温度220℃、氢流量50mL/min、空气流量60mL/min、氮气+氦气流量50mL/min

(c)校正线的制作

用GC-FPD对校正线用二硫化碳标准溶液1～5各分析1次，根据峰面积值(Y)的常用对数(Yi)相对于二硫化碳浓度(X)的常用对数(Xi)的值，采用最小二乘法进行直线回归，制作校正线。

(iv)分析试样中浓度的计算和数值处理

求出二硫化碳峰面积(y)的常用对数(yi)，使用校正线的一次式Yi＝aXi+b的斜率a和yi截距b，采用以下的计算方法计算出农药浓度(Xppm二硫化碳换算)。

X(ppm)＝10^(Yi-b)/a×C

(修正系数＝C：相对于1g样品的异辛烷添加量的相对比)

用百分率表示分析试样中的农药浓度相对于添加的农药标准溶液的准确的二硫化碳换算浓度，算出添加回收率。以N＝1测定时，将回收率的小数点第二位四舍五入，求到小数点第一位。以N＝3测定时，将回收率的小数点第三位舍弃，求到小数点第二位，之后将小数点第二位四舍五入，至小数点第一位，求取平均和相对标准偏差(RSD)。

(4)试验结果和考察

如表2所示，可以确认全部20种生药、3种农药，满足残留农药中分析试验的成立条件，即添加回收率70～120％。

[表2]

实施例2使用4.0％L-半胱氨酸水溶液作为催化剂试液的生药的代森锰锌的添加回收试验

(1)样品、试剂和其它

(a)样品

作为样品，使用以下80种生药的原体，或使用将其裁切或粉碎等而得到的3～5mm左右的样品。

芍药、桂皮、茯苓、香附子、桃仁、甘草、黄连、生姜、丁香、延胡索、葛根、浜防风、黄耆、黄芩、桔梗、大黄、防己、防风、黄柏、厚朴、薄荷、麻黄、荆芥、茴香、吴茱萸、山栀子、瓜吕仁、杏仁、牛蒡子、酸枣仁、车前子、胡麻、冬瓜子、薏苡仁、辛夷、阿胶、蝉退、瓜吕根、和羌活、苦参、干姜、前胡、知母、天麻、天门冬、独活、白术、木香、升麻、缬草根、威灵仙、番泻叶、茵陈蒿、艾叶、钓藤、地骨皮、槲皮、山茱萸、麻子仁、连翘、龙眼肉、猪苓、槟榔子、麦芽、缩砂、梗米、木通、菊花、良姜、莲肉、红花、忍冬、疾黎子、何首乌、竹茹、川骨、桑白皮、天南星、苏木、贝母、羌活、百合、紫根、附子、杜仲、山楂子、熟地黄、吐根、粉末麦芽糖、竹节人参

除了使(1)(a)样品和添加回收试验的对象农药为代森锰锌以外，在与实施例1相同的条件下进行添加回收试验。

(4)试验结果和考察

如表3所示，可以确认全部80种生药，在代森锰锌的添加回收试验中满足残留农药中分析试验成立的条件的添加回收率70％～120％。

[表3]

  生药名称  葛根  浜防风  黄耆  黄芩  桔梗  大黄  防己  防风  黄柏  厚朴  代森锰锌回收率(％)  81.2  80.3  82.4  76.9  81.9  86.3  75.7  79.4  80.2  80.8

  生药名称  薄荷  麻黄  荆芥  茴香  吴茱萸  山栀子  瓜吕仁  杏仁  牛蒡子  酸枣仁  代森锰锌回收率(％)  77.5  90.8  78.1  83.8  84.6  77.2  77.1  74.8  83.7  85.0

  生药名称  车前子  胡麻  冬瓜子  薏苡仁  辛夷  阿胶  蝉退  瓜吕根  和羌活  苦参  代森锰锌回收率(％)  71.3  76.4  81.9  75.2  77.1  88.3  74.0  82.4  82.2  82.9

  生药名称  干姜  前胡  知母  天麻  天门冬  独活  白术  木香  升麻  缬草根  代森锰锌回收率(％)  77.6  72.4  79.3  86.8  89.5  84.6  77.8  72.3  82.6  83.5

  生药名称  威灵仙  番泻叶  茵陈蒿  艾叶  钓藤  地骨皮  槲皮  山茱萸  麻子仁  连翘  代森锰锌回收率(％)  75.1  80.0  87.4  91.3  97.7  92.8  99.9  90.4  95.2  88.2

  生药名称  龙眼肉  猪苓  槟榔子  麦芽  缩砂  梗米  木通  菊花  良姜  莲肉  代森锰锌回收率(％)  92.7  101.1  92.3  91.9  87.5  85.5  81.8  81.8  84.5  83.1

  生药名称  红花  忍冬  疾黎子  何首乌  竹茹  川骨  桑白皮  天南星  苏木  贝母  代森锰锌回收率(％)  72.0  77.8  78.9  85.0  77.3  94.8  90.1  82.9  82.8  87.2

  生药名称  羌活  百合  紫根  附子  杜仲  山楂子  熟地黄  吐根  粉末饴  竹节人参  代森锰锌回收率(％)  73.4  88.6  74.7  75.6  88.9  77.5  77.1  82.0  96.0  73.2

实施例3使用含有1.5％氯化锡、1％L-半胱氨酸的5mol/L盐酸作为催化剂试液的生药中的福美联、代森锰锌和丙森锌的添加回收试验

(1)样品、试剂和其它

(a)样品

作为样品，使用以下5种生药的原体，或使用将其裁切或粉碎等而得到的3～5mm左右的样品。

苍术、泽泻、干地黄、人参、龙胆

(b)试剂、试液

盐酸：和光纯药工业株式会社、特级试剂

氯化锡(II)二水合物：关东化学株式会社、特级试剂、试剂纯度97.0％、JIS K8136

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂、试剂纯度99.0％

环己烷：关东化学株式会社、残留农药试验用

2，2，4-三甲基戊烷(异辛烷)：关东化学株式会社、一级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

5.0mol/L盐酸溶液：在1240mL盐酸中慢慢加入精制水，得到3000mL溶液。

(c)催化剂试液

1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液：精确称取9.20g氯化锡(II)二水合物，加入5.0mol/L盐酸，得到500mL溶液。

1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液：称取9.2g氯化锡(II)二水合物，并称取7.3g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，加入5.0mol/L盐酸，得到500mL溶液。

(d)被检验农药和(e)添加农药与实施例1相同。

(2)微波溶剂提取处理

(a)MW装置与实施例1相同。

(b)利用MW装置进行的提取处理

在Teflon制的容器(100mL)中称取2.0g经过粉碎的样品生药，将容器放入保护器。在分解容器内部放入搅拌子，接着迅速加入10mL异辛烷和30mL催化剂溶液。用TFM盖加盖，安装转接板、弹簧和指示环，安装于中压部分，并用扭矩扳手(22.5Nm)紧固。同样的操作进行了与需测定个数相同的次数。预先将部分中压转子的底板安装在ETHOS1库内，以点对称的方式安装中压部分，从上面嵌入顶板。另外，作为内部温度传感器用途，在加入有TFM转子、10mL异辛烷和30mL催化剂溶液的TFM容器中安装ATC盖盒，安装于ATC用中压部分，并用扭矩扳手(22.5Nm)紧固。将温度传感器探头插入ATC用中压部分的热电偶套管和ETHOS1库内的连接器，在底板上安装ATC用中压部分。关闭ETHOS1的门，开始下述表4所示条件的微波提取步骤。该步骤结束，确认反应容器充分冷却，在样品瓶中采集反应液的上层(异辛烷)，作为GC分析试样。

[表4]

(c)校正线用二硫化碳溶液的配制

与实施例1相同。

(3)利用气相色谱进行的分析操作

与实施例1相同。

(4)试验结果和考察

如表5所示，可以确认在5种生药中，对于3种农药，除了苍术中的丙森锌以外，均满足残留农药中分析试验成立的条件的添加回收率70～120％。

[表5]

实施例4使用1.0％L-半胱氨酸盐酸盐水溶液作为催化剂试液的生药中的福美联的添加回收试验

(1)样品、试剂和其它

(a)样品

作为样品，使用枳实、川芎和花椒的原体，或使用将其裁切或粉碎等而得到的3～5mm左右的样品。

(b)试剂、试液

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂

2，2，4-三甲基戊烷(异辛烷)：关东化学株式会社、一级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

(c)催化剂试液

1.0％半胱氨酸水溶液：在蒸馏水中溶解5.0g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，得到500mL溶液。

(d)被检验农药

农药标准品

二硫化碳：和光纯药工业株式会社、特级试剂、试剂纯度99％

福美联标准品：和光纯药工业株式会社、农药标准品、试剂纯度100％

农药标准溶液的配制

福美联标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)：称取3.16mg福美联，加入丙酮，精确得到25mL溶液。

(e)添加农药

使用微量吸管分别在各样品中直接添加福美联标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL)，使得二硫化碳换算浓度为10ppm。

(2)微波溶剂提取处理

试验装置和试验条件等基本与实施例1相同，但微波提取步骤的条件如表6所示。

[表6]

(3)利用气相色谱进行的分析操作

与实施例1相同。

(4)试验结果和考察

如表7所示，可以确认在5种生药中，对于3种农药，除了苍术中的丙森锌以外，均满足残留农药中分析试验成立的条件的添加回收率70～120％。

[表7]

实施例5使用0.5％、1.0％和2.0％L-半胱氨酸水溶液作为催化剂试液的代森锰锌的添加回收试验

(1)样品、试剂和其它

(a)样品

作为样品，使用枳实、川芎、花椒和苏叶的原体，或使用将其裁切或粉碎等而得到的3～5mm左右的样品。

(b)试剂、试液

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂

2，2，4-三甲基戊烷(异辛烷)：关东化学株式会社、一级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

(c)催化剂试液

0.5％半胱氨酸水溶液：在蒸馏水中溶解2.5g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，得到500mL溶液。

1.0％半胱氨酸水溶液：在蒸馏水中溶解5.0g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，得到500mL溶液。

2.0％半胱氨酸水溶液：在蒸馏水中溶解10.0g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，得到500mL溶液。

(d)被检验农药

农药标准品

二硫化碳：和光纯药工业株式会社、特级试剂、试剂纯度99％

代森锰锌标准品：和光纯药工业株式会社、农药标准品、试剂纯度91％

农药标准溶液的配制

代森锰锌标准溶液(二硫化碳换算80μg/mL溶液)：称取3.89mg代森锰锌，加入蒸馏水或乙腈，进行超声波照射，得到悬浊液后，精确地调节为25mL。

(e)添加农药

使用微量吸液管分别在各样品中直接添加代森锰锌农药标准溶液(二硫化碳换算80μg/L溶液)，使得二硫化碳换算浓度为10ppm。

(2)微波溶剂提取处理

试验装置和试验条件等基本与实施例1相同，但微波提取步骤的条件如表8所示。

[表8]

(3)利用气相色谱进行的分析操作

与实施例1相同。

(4)试验结果和考察

如表9所示，用4种生药中进行了代森锰锌的添加回收试验，结果，可以确认在催化剂试液为0.5％或1.0％L-半胱氨酸水溶液时，不能满足添加回收率70～120％，但在2.0％L-半胱氨酸水溶液时，4种生药都满足。

[表9]

实施例6

实施例6中使用的试剂、试液以及标准品和农药标准溶液的配制方法如下。

1.试剂、试液

盐酸：和光纯药工业株式会社、特级试剂

氯化锡(II)二水合物：关东化学株式会社、特级试剂、试剂纯度97.0％、JIS K8136

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂、试剂纯度99.0％

环己烷：关东化学株式会社、残留农药试验用

2，2，4-三甲基戊烷(异辛烷)：关东化学株式会社、一级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

5.0mol/L盐酸溶液：在1240mL盐酸中慢慢加入精制水，得到3000mL溶液。

1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液：精确称取9.20g氯化锡(II)二水合物，加入5.0mol/L盐酸，得到500mL溶液。

1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液：称取9.2g氯化锡(II)二水合物，并称取7.3g L-半胱氨酸盐酸盐一水合物，加入5.0mol/L盐酸，得到500mL溶液。

2.标准品和农药标准溶液配制

二硫化碳：和光纯药工业株式会社、特级试剂、JIS K8732

福美联标准品：和光纯药工业株式会社、农药标准品、试剂纯度100％

丙森锌标准品：GL sciences株式会社、农药标准品、试剂纯度80％以上

福美联标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)：称取3.16mg福美联，加入丙酮，精确地调节为100mL。

丙森锌标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)：称取4.75mg丙森锌，加入蒸馏水，利用超声波破碎悬浊后，精确地调节为100mL。

A.前处理操作

装置(微波溶剂提取装置)：

MILESTONE公司生产的ETHOS1(烘箱本体、选择内部温度传感器、磁力搅拌机)

MILESTONE公司生产的PRO24(24个同时处理转子)

搅拌子：直径6mm×全长20mm

前处理操作：

将Teflon制的容器(反应容器筒、70mL)直接放在天平上，精确称取样品，放入搅拌子。用定量移液管向其中加入5.0mL异辛烷或环己烷。添加回收试验时，接着用定量移液管添加农药标准溶液。用定量移液管在其中加入30mL的L-半胱氨酸、氯化锡(II)二水合物5.0mol/L盐酸溶液，加上Teflon制的盖子后，放入压力容器，关闭安全阀。同样的操作进行了与需测定个数相同的次数，另外组合1个安装有内部温度传感器的压力容器。将压力容器以圆对称的方式排列置于转子主体中，加盖后安装内部温度传感器的探针，置于烘箱本体中，实施在结果项中所示的前处理方法。

前处理方法结束后，取出压力容器，打开安全阀，取出Teflon制的容器，卸下Teflon制的盖，用巴斯德移液管将有机层取样至测定玻璃瓶中。

在一个反应容器中安装温度传感器，并配置各反应容器使其位置呈点对称均等分布，使用处理方法。

B.校正线用二硫化碳溶液的配制

在25mL的褐色容量瓶中取一半容量左右的环己烷，加上塞子，精确称量容量瓶的质量。在其中精确量取1mL二硫化碳，加上盖子，精确称量容量瓶的质量。用环己烷精确地调节为25mL，得到标准原液。

精确量取1mL标准原液，用环己烷精确地调节为50mL，得到1000μg/mL溶液。

精确量取1mL1000μg/mL溶液，用环己烷精确地调节为50mL，得到20μg/mL溶液。

精确量取1mL20μg/mL溶液，用环己烷精确地调节为25mL，得到标准溶液1(0.8μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液1，用环己烷精确地调节为20mL，得到标准溶液2(0.4μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液2，用环己烷精确地调节为20mL，得到标准溶液3(0.2μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液3，用环己烷精确地调节为20mL，得到标准溶液4(0.1μg/mL)。

精确量取10mL标准溶液4，用环己烷精确地调节为25mL，得到标准溶液5(0.04μg/mL)。

C.结果和考察

1.分析条件和校正线的考察

因为夹杂峰和二硫化碳峰远离，载气流量也以通常的值也能得到充分的分离，所以，使用GS-GasPro作为分析柱。

(1)使用GS-GasPro的GS-FPD条件

装置(气相色谱)

Agilent Technologies公司生产6890N(本体)

Agilent Technologies公司生产7683(自动取样器)

注入口：分流/不分流注入口、脉冲不分流方式(脉冲压30psi)

嵌入件：Agilent Technologies公司生产分流/不分流嵌入件(5183-4711)

GC-FPD的测定条件：

柱：GS-GasPro(Agilent Technologies公司生产)、长度15m、内径0.32mm、膜压0

柱温：40℃(1.5min)→30℃/min→220℃(1.5min)

注入口：分流/不分流

注入口温度：120℃

注入方式和注入量：脉冲不分流(30psi、1.5min)、1μL

载气：氦气、恒量流动方式、平均线速度37cm/sec

检测器：FPD-S温度220℃、氢流量50mL/min、空气流量60mL/min、氮气+氦气流量50mL/min

(c)校正线的制作

以GC-FPD的测定条件1对校正线用二硫化碳溶液进行分析，根据二硫化碳的浓度和峰面积值制作校正线，求出相关函数和标准溶液浓度的真实度。

计算：相对于浓度的常用对数，标绘峰面积的常用对数(双对数图)，采用任何计算方法一维回归相关系数都在0.99以上，良好。但真实度只在双对数图的一次回归中，所有浓度均得到±5％以内的良好结果(表10)。校正线范围的0.04～0.8μg/mL相当于样品中农药浓度0.2～4ppm。

[表10]

  双对数图  校正线①  校正线②  校正线③  相关函数  0.9995  0.9987  0.9996             0.040.1真实度(％) 0.20.40.8  103.296.299.1100.0101.7  104.995.696.0100.8103.0  99.998.4100.9103.797.3

2.添加L-半胱氨酸产生的效果

(反应容器的容量)

70mL(同时前处理最多24个)

(校正线)

根据5点浓度(0.05、0.2、0.4、0.6、1μg/mL)的二硫化碳校正线中的GC-FPD定量值和提取溶剂的样品稀释倍率之积计算出定量值。

(分析条件)

使用上述测定条件。

(样品)

使用补中益气汤各1.0g作为样品。

(添加农药)

在各样品中添加100μL农药标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)。(样品中的二硫化碳换算浓度是2.0μg/mL)

(前处理试液条件)

加入5.0mL环己烷、和30mL 1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液或30mL 1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液，同时处理7个。使用表11所示的前处理方法参数。

[表11]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  800  室温→100  80  第二阶段  12  500  100  80

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第三阶段  73  0  100→室温  80

(结果和考察)

添加1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液时的添加回收率(N＝3)与未添加L-半胱氨酸时相比高10％左右(表12)。可以认为这是由于添加L-半胱氨酸，丙森锌的副分解反应被抑制，迅速分解为二硫化碳。

通常能够得到残留农药试验中的分析法成立条件的70～120％添加回收率。

[表12]

样品名称农药酸催化剂溶液  添加回收率(％)平均值补中益气汤丙森锌  1％半胱氨酸、1.5％SnCl₂-HCl1％半胱氨酸、1.5％SnCl₂-HCl1％半胱氨酸、1.5％SnCl₂-HCl  75.770.976.174.2补中益气汤丙森锌  1.5％SnCl₂-HCl1.5％SnCl₂-HCl1.5％SnCl₂-HCl  62.761.362.562.2

3.添加L-半胱氨酸时的提取溶剂的影响

(反应容器的容量)

70mL(同时前处理最多24个)

(校正线)

根据5点浓度(0.04、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL)的二硫化碳校正线中的GC-FPD定量值和提取溶剂的样品稀释倍率之积计算出定量值。

(分析条件)

使用上述测定条件。

(样品)

使用补中益气汤、大建中汤各1.0g作为样品。

(添加农药)

在各样品中添加100μL福美联和丙森锌农药标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)。(样品中的二硫化碳换算浓度是2.0μg/mL)

(前处理试液条件)

加入5.0mL环己烷或异辛烷、和30mL 1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液，同时处理24个。使用表13所示的前处理方法参数。

[表13]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  1500  室温→100  80  第二阶段  12  800  100  80  第三阶段  73  0  100→室温  80

(结果和考察)

在表14中表示结果。在任一种配方、添加农药的情况下，使用环己烷作为提取溶剂时的添加回收率都很高。

[表14]

  样品名称  提取溶剂  农药  添加回收率(％)  平均值  RSD(％)补中益气汤  环己烷环己烷  福美联福美联  98.4103.0100.73.2补中益气汤  环己烷环己烷环己烷  丙森锌丙森锌丙森锌  83.281.877.680.93.6大建中汤  环己烷环己烷环己烷  福美联福美联福美联  97.799.792.996.83.6大建中汤  环己烷环己烷环己烷  丙森锌丙森锌丙森锌  78.773.073.375.04.3补中益气汤  异辛烷异辛烷异辛烷  福美联福美联福美联  86.695.394.892.25.3补中益气汤  异辛烷异辛烷异辛烷  丙森锌丙森锌丙森锌  74.877.575.075.82.0大建中汤  异辛烷异辛烷异辛烷  福美联福美联福美联  91.883.785.887.14.8

  样品名称  提取溶剂  农药  添加回收率(％)  平均值  RSD(％)大建中汤  异辛烷异辛烷异辛烷  丙森锌丙森锌丙森锌  65.965.767.466.31.5

4.半胱氨酸浓度的影响

对补中益气汤、大建中汤中由于添加的半胱氨酸的浓度而引起的添加回收率的变化进行研究。添加浓度以0、0.1、0.5、1.5％的5个浓度实施。

(反应容器的容量)

70mL(同时前处理最多24个)

(校正线)

根据5点浓度(0.04、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL)的二硫化碳校正线中的GC-FPD定量值和提取溶剂的样品稀释倍率之积计算出定量值。

(分析条件)

使用上述测定条件。

(样品)

使用补中益气汤、大建中汤各1.0g作为样品。

(添加农药)

在各样品中添加100μL丙森锌农药标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)。(样品中的二硫化碳换算浓度是2.0μg/mL)

(前处理试液条件)

加入5.0mL环己烷、和30mL 1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液或30mL L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液，同时处理21个。其中，各浓度的L-半胱氨酸溶液基于上述1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液的配制方法配制。使用表15所示的前处理方法参数。

[表15]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  1500  室温→100  80  第二阶段  12  800  100  80  第三阶段  73  0  100→室温  80

(结果和考察)

在表16中表示结果。可知在丙森锌的添加回收时，对于补中益气汤，随着L-半胱氨酸浓度增加添加回收率提高。

[表16]

  样品名称  半胱氨酸浓度  添加回收率平均值(％)补中益气汤  0％0.1％0.5％1％5％  66.677.280.082.788.7大建中汤  0％0.1％0.5％1％5％  72.473.472.471.277.0

5.前处理反应时间的影响

(反应容器的容量)

70mL(同时前处理最多24个)

(校正线)

根据5点浓度(0.04、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL)的二硫化碳校正线中的GC-FPD定量值和提取溶剂的样品稀释倍率之积计算出定量值。

(分析条件)

使用上述测定条件。

(样品)

使用补中益气汤各1.0g作为样品。

(添加农药)

在各样品中添加100μL丙森锌农药标准溶液(二硫化碳换算20μg/mL溶液)。(样品中的二硫化碳换算浓度是2.0μg/mL)

(前处理试液条件)

加入5.0mL环己烷、和30mL 1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液，分别同时处理3个。使用表17、表18所示的前处理方法参数。

[表17]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  600  室温→100  80  第二阶段  5，10，15  300  100  80  第三阶段  100  0  100→室温  80

[表18]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  600  室温→100  80  第二阶段  20，25  300  100  80  第三阶段  60  0  100→室温  80

(结果和考察)

在表19中表示结果。在5～20分钟、100℃分解的结果中，添加回收率没有大的差别。只有在25分钟分解时，回收率稍微提高5％左右。如果在25分钟、100℃分解，则合计进行30分钟微波加热。综合地看，可以得到结论，时间短、数据离散最小的100℃、10分钟的分解效果好。

[表19]

  样品名称  分解时间  添加回收率(％) 平均值、RSD(％)补中益气汤  555  76.681.282.080.03.6补中益气汤  101010  82.781.481.781.90.9补中益气汤  151515  85.182.481.883.12.1补中益气汤  202020  74.382.680.979.35.5补中益气汤  252525  85.686.184.685.40.9

6.污染配方的残留农药实测值的确认

与采用环境省公告法(食品卫生检查指南、残留农药编、第864页)检测的二硫代氨基甲酸盐类农药的污染试样的实测数据进行比较。

(反应容器的容量)

70mL(同时前处理最多24个)

(校正线)

根据5点浓度(0.04、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL)的二硫化碳校正线中的GC-FPD定量值和提取溶剂的样品稀释倍率之积计算出定量值。

(分析条件)

使用上述测定条件。

(样品)

使用污染试样各1.0g作为样品。

(前处理试液条件)

加入5.0mL环己烷、和30mL 1％L-半胱氨酸1.5％氯化锡5.0mol/L盐酸溶液，分别同时处理3个。使用表20所示的前处理方法参数。

[表20]

  时间/分钟  微波输出上限/W  温度/℃  搅拌器输出/％  第一阶段  5  800  室温→100  80  第二阶段  10  800  100  80  第三阶段  75  0  100→室温  80

(结果和考察)

在表21中表示结果。结果显示：微波试验法与环境省公告法的实测数据相比，得到几乎相同的值，并且离散也小。虽然与环境省公告法的结果相比，其值稍小，但是是添加回收率的成立条件(添加回收率70～120％)能够允许的值。另外，可以推测其原因在于校正线范围的最小值附近的定量误差。从本次结果和先前添加回收试验结果可以得出结论，本试验法能够充分确保农药试验法的精度。

[表21]

  试验方法  试样名称 残留值(ppm) 平均值、RSD(％)微波法污染试样  0.2340.2230.2300.2292.43  环境省公告法  污染试样  0.286

(实施例2)

对于医疗用医药品、一般用医药品及其它制品，实施利用微波二硫化碳法的二硫代氨基甲酸盐类农药的添加回收试验。

1.方法

(1)设备

前处理装置：微波溶剂提取装置

MILESTONE公司生产的ETHOS1(烘箱本体、选择：内部温度传感器、磁力搅拌机)

MILESTONE公司生产的PRO24(24个同时处理转子)

搅拌子：直径6mm×全长20mm

分析装置：GC-FPD(仪器识别序号GC-7)

Agilent Technologies公司生产6890N(本体)

Agilent Technologies公司生产7683(自动取样器)

注入口：分流/不分流注入口

嵌入件：Agilent Technologies公司生产分流/不分流嵌入件(5183-4711)

FPD检测器(硫方式波长滤波器、393nm)

(2)试剂

二硫化碳(以下记为CS₂)：和光纯药工业株式会社、特级试剂

盐酸：和光纯药工业株式会社、一级试剂

氯化锡(II)二水合物：关东化学株式会社、特级试剂

L-半胱氨酸盐酸盐一水合物：和光纯药工业株式会社、特级试剂

环己烷：关东化学株式会社、残留农药-PCB试验用或特级试剂

丙酮：关东化学株式会社、残留农药-PCB试验用

乙腈：关东化学株式会社、残留农药-PCB试验用

蒸馏水(己烷洗净品)：和光纯药工业株式会社、残留农药试验用

(3)农药标准品

农药标准品名称  制造商                  纯度        CS₂换算系数

福美联          和光纯药工业株式会社    100％       1.58

代森锌          和光纯药工业株式会社    80.5％      1.81

丙森锌          GL sciences             80％        1.90

福美锌          和光纯药工业株式会社    97.7％      2.01

有机镍          GELEST Inc.             100％       1.97

福美铁          和光纯药工业株式会社    99.3％      1.82

代森锰          和光纯药工业株式会社    90.2％      1.74

代森锰锌        和光纯药工业株式会社    91％        1.77

福代锌          和光纯药工业株式会社    96％        1.91

这里的纯度都是制造商提供的值。

(4)样品

医疗用医药品：医疗用中药提取物制剂128个配方、一般用医药品及其它制品：一般用中药提取物制剂(颗粒)6个品种、一般用生药制剂(颗粒)2个品种、一般用中药提取物制剂(片剂)6个品种、一般用生药制剂(片剂)2个品种、其它16个品种

(5)试剂的配制

催化剂试剂：1.55％氯化锡(II)-1％L-半胱氨酸-5mol/L盐酸

在1000mL 5mol/L盐酸中溶解18.4g氯化锡(II)二水合物和14.7gL-半胱氨酸盐酸盐一水合物。

(6)校正线用CS₂标准溶液的配制

在25mL容量瓶中取约12mL的环己烷，精确称量质量。在其中加入1mL CS₂，再次精确称量质量。用环己烷定容至25mL，将得到的溶液作为标准原液，用环己烷阶段性稀释，配制标准溶液1～5(约0.8、0.4、0.2、0.1、0.04μg/mL)。

标准溶液的精确浓度由1mL CS₂的精确质量计算。

(7)用于研究添加回收率的农药标准品溶液的配制

如下所述配置农药标准品溶液，使得CS₂换算为20μg/mL。

农药名称   溶剂                                      试剂称量值  配制量

福美联     丙酮(关东化学株式会社)                    3.16mg      100mL

代森锌     乙腈(关东化学株式会社)                    4.50mg      100mL

丙森锌     蒸馏水-己烷洗净品(和光纯药工业株式会社)   4.75mg      100mL

福美锌     丙酮(关东化学株式会社)                    4.11mg      100mL

有机镍     蒸馏水-己烷洗净品(和光纯药工业株式会社)   3.94mg      100mL

福美铁     丙酮(关东化学株式会社)                    3.67mg      100mL

代森锰     乙腈(关东化学株式会社)                    3.86mg      100mL

代森锰     锌蒸馏水-己烷洗净品(和光纯药工业株式会社) 3.89mg      100mL

福代锌     乙腈(关东化学株式会社)                    3.98mg      100mL

由称量的标准品的精确质量和纯度以及CS₂换算系数，根据下式计算出农药标准品溶液的准确的CS₂换算浓度。

CS₂换算浓度(μg/mL)＝农药标准品浓度(μg/mL)×纯度÷CS₂换算系数

(8)试样前处理

将分解容器直接放在天平上，精确称取样品，放入搅拌子并加盖。用定量移液管添加100μL农药标准溶液，使得样品中的农药为制剂规格值2ppm(CS₂换算)，之后用定量移液管加入5mL环己烷。用定量移液管向其中加入30mL催化剂试剂，放入压力容器，关闭安全阀。同样的操作进行了与需测定个数相同的次数，另外组合1个安装有内部温度传感器的压力容器。将压力容器以圆对称的方式排列置于转子主体中，加盖后安装内部温度传感器的探针，置于烘箱本体中，利用以下所示的前处理方法进行分解提取操作。

分解提取操作后，取出压力容器，打开安全阀，取出分解容器，卸下盖子，用巴斯德移液管将环己烷层取样至测定瓶中。

在求取样品中二硫代氨基甲酸盐类农药的实测值时，不添加农药标准品溶液，进行同上的前处理操作。

<前处理装置方法1>

搅拌器输出：80％

转子旋转：ON

分解容器内温度控制：室温→100℃/5分钟→100℃(保持10分钟)

反应后空冷时间：75分钟

<前处理装置方法2>

搅拌器输出：80％

转子旋转：ON

分解容器内温度控制：室温→90℃/7分钟→90℃(保持10分钟)

反应后空冷时间：73分钟

(9)GC-FPD的测定条件

与实施例1相同。

(10)校正线的制作

用GC-FPD对校正线用CS₂标准溶液1～5各分析1次，根据峰面积值(y)的常用对数(yi)相对于CS₂浓度(x)的常用对数(xi)的值，采用最小二乘法进行直线回归，制作校正线。

(11)分析试样中浓度的计算和数值的处理

求出CS₂的峰面积值(Y)的常用对数(Yi)，使用校正线的一次式Yi＝aXi+b的倾斜a和yi截距b，采用以下的计算方法计算出农药浓度(Xppm、CS₂换算)。

X(ppm)＝10^(Yi-b)/a×5

(修正系数＝5：相对于1g制剂添加5mL环己烷)

用百分率表示分析试样中的农药浓度相对于添加的农药标准溶液的准确的CS₂换算浓度，算出回收率。以N＝1测定时，将回收率的小数点第二位四舍五入，求到小数点第一位。以N＝3测定时，将回收率的小数点第三位舍弃，求到小数点第二位，之后将小数点第二位四舍五入，至小数点第一位，求取平均和相对标准偏差(RSD)。

2.结果

添加回收试验

作为医疗用中药提取物制剂的添加回收试验，对于20个配方，以N＝3实施福美联、代森锌和丙森锌的添加回收试验。再对于当归芍药散、补中益气汤、大建中汤，实施福美锌、有机镍、福美铁、代森锰、代森锰锌、福代锌的添加回收试验(N＝3)。此外的配方以N＝1实施福美联、代森锌和丙森锌的添加回收试验。

在表22中表示医疗用中药提取物制剂128个配方中的福美联、代森锌、丙森锌的添加回收率。

[表22]

所有配方均达到70～120％的添加回收率。因为污染配方的样品中实测二硫代氨基甲酸盐类农药浓度是0.23μg/mL，所以进行了添加回收率的实测值修正，得到70～120％的添加回收率。

在表23中表示当归芍药散、补中益气汤、大建中汤中的福美锌、有机镍、福美铁、代森锰、代森锰锌、福代锌的添加回收率。

[表23]

所有农药、样品均达到70～120％的添加回收率。并且，添加回收率的偏差(RSD)也在10％以内。

表24中表示Tokon Syrup“tsumura”中福美联、代森锌、丙森锌的添加回收率。

[表24]

对于Tokon Syrup“tsumura”，添加回收率达到了标准。

在表25中表示一般用医药品及其它制品中福美联、代森锌和丙森锌的添加回收率。

[表25]

可以确认，不管制剂形态(颗粒、固体、液体)如何，除熊胆丸以外的所有制品均能达到70～120％的添加回收率的基准值。熊胆丸的福美联、代森锌的添加回收率大于120％，但样品中实测二硫代氨基甲酸盐类农药浓度是0.29μg/mL，通过进行实测值补正，得到120％以内的添加回收率。另外，此时丙森锌的添加回收率为70％以上。

产业上的可利用性

本发明可以用作存在于生药或含有生药的制剂中的二硫代氨基甲酸盐类农药的分析方法。