含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物及其应用

摘要

本发明涉及一种含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂与组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用，本发明药物组合物具有显著的协同效应，提高了药物的疗效，降低了给药剂量，减少了副作用的发生。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用，具体涉及含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。

背景技术

世界卫生组织调查报告表明，全球癌症状况日益严重，今后20年新患者的人数将由目前的每年1000万增加到1500万，因癌症而死亡的人数也将由每年的600万增加至1000万。其中肺癌为常见的恶性肿瘤之一，源于各级支气管上皮，分为细胞肺癌和非小细胞肺癌；原发性肝癌为发生在肝细胞与肝内胆管上皮细胞的癌变，是人类最常见的恶性肿瘤之一；结肠癌的发病与环境、生活习惯，尤其是饮食方式有关。一般认为高脂肪饮食和纤维素不足是主要发病原因。随着生活水平的提高，饮食结构的改变，结肠癌的发病率呈逐年上升趋势；神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，其起源于神经间质细胞，为颅内常见恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的35-60％。

目前已上市的抗肿瘤药物较多，如烷化剂药物、抗代谢药物、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂等，但是大多药物由于毒性较大，病人不耐受。随着对肿瘤的发生发展的分子机制研究越来越清楚，分子靶向治疗多种恶性肿瘤受到了广泛的关注和高度重视。分子靶向药物选择性高、广谱有效，其安全性优于细胞毒性化疗药物，是目前肿瘤治疗领域发展的新方向。

胰岛素样生长因子-I受体(IGF-IR)为酪氨酸激酶受体家族成员，广泛表达于多种类型的细胞表面，它介导IGF-I和大部分IGF-II的生物学活性，可促进机体的蛋白质和核酸DNA的合成以及碳水化合物的代谢，与细胞的生长分化，胚胎的发育密切相关。IGF-IR在肿瘤细胞增殖、分化、转移中起重要作用，在多种肿瘤细胞中包括结肠癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌等均有过量表达。抑制IGF-IR的表达或功能可以有效控制肿瘤细胞的生长和转移，因此IGF-IR已成为抗肿瘤治疗的药物靶标。目前国际上在研的胰岛素样生长因子-I受体抑制剂主要有Bristol-MyersSquibb公司的BMS-536924和OSI药物公司的OSI-906等。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有抑制肿瘤细胞增殖、细胞周期阻滞、诱导细胞分化及促进细胞凋亡的作用。其中SAHA已上市，此外MS-275、LBH589、Trichostatin(TSA)、FK228及西达苯胺等多种组蛋白去乙酰化酶抑制剂进入临床研究。

随着肿瘤分子生物学的研究进展，肿瘤分子靶向治疗已成为肿瘤研究的热点，在多种肿瘤的治疗中发挥了重要的作用。然而，大部分肿瘤的生物学行为并非由单一信号传导通路所支配，而是多个信号传导通路共同起作用的，因此联合用药针对多靶点进行靶向治疗将不仅旨在减少或延缓耐药性的出现、降低毒性，而且通过多种药物对癌细胞杀伤的协同作用取得更好的疗效。

发明内容

针对以上技术缺陷，本发明提供一种药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、或前列腺癌的药物中的应用，具体为含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。

本发明含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂可以为BMS-536924和OSI-906及其相应的类似物、衍生物等。

本发明药物组合物中的胰岛素样生长因子-I受体抑制剂优选为：BMS-536924和OSI-906，其相应的结构式分别为式I和式II。

本发明药物组合物中，所述组分不限于BMS-536924和OSI-906药物本身，还可以是其可药用的盐、水合物或衍生物等。

本发明中，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以为任何结构类型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物，如羟肟酸类、环肽类、苯甲酰胺类、脂肪酸类等，具体可以为但不限于如，suberoylanilide hydroxamicacid(SAHA)、Trichostatin(TSA)、LBH589、MS-275、depsipeptide(FK228)、apicidin、西达苯胺、丁酸钠、苯基丁酸钠。

本发明药物组合物中组蛋白去乙酰化酶抑制剂优选为SAHA、TSA(Trichostatin)、LBH589和MS-275。

其中SAHA为JMC，38，8，1995，1411-1413和JMC，48，15，2005，5047-5051中所记载的式III的化合物：

其中MS-275为EP0847992中所记载的式IV化合物：

其中LBH-589由Novartis公司研发，商品名为panobinstat，正处于II期临床，其结构式为式V所示：

其中Trichostatin(TSA)的结构式如式VI所示：

本发明药物组合物中，所述组分不限于上述药物本身，还可以是它们的水合物、类似物、衍生物及其它有机或无机的盐。

本发明含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物中，胰岛素样生长因子-I受体抑制剂与组蛋白去乙酰化酶抑制剂的摩尔比为0.05-20∶0.003-5.0；本发明进一步优选所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂与组蛋白去乙酰化酶抑制剂的摩尔比为0.1-15∶0.005-3.0。

本发明含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物可以用于制备治疗各种肿瘤的药物，所述肿瘤包括但不限于肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌。

本发明优选胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合物用于制备治疗结肠癌、肝癌、肺癌及神经胶质瘤的药物中的应用。

本发明药物组合物在制备治疗肝癌的药物的应用中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的优选摩尔比为0.1-10∶0.005-2.0。

本发明在制备治疗HepG2类型肝癌的药物的应用中，其中所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂BMS-536924和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的摩尔比为3.0-10∶0.75-2.0；优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为7.5-10∶1.25-2.0；进一步优选为所述BMS-536924和SAHA的摩尔比为10∶2.0。

本发明在制备治疗HepG2类型肝癌的药物的应用中，其中所述BMS-536924和MS275的摩尔比为3.0-10∶0.5-1.5；优选所述BMS-536924和MS275的摩尔比为7.5-10∶1.0-1.5；进一步优选所述BMS-536924和MS275的摩尔比为10∶1.5。

本发明在制备治疗HepG2类型肝癌的药物的应用中，其中所述BMS-536924和LBH589的摩尔比为3.0-10∶0.005-0.02；优选所述BMS-536924和LBH589的摩尔比为7.5-10∶0.01-0.02；进一步优选所述BMS-536924和LBH589的摩尔比为10∶0.02。

本发明在制备治疗HepG2类型肝癌的药物的应用中，其中所述BMS-536924和TSA的摩尔比为3.0-10∶0.05-0.15；优选所述BMS-536924和TSA的摩尔比为7.5-10∶0.075-0.15；进一步优选所述BMS-536924和TSA的摩尔比为10∶0.15。

本发明在制备治疗Hep3B类型肝癌的药物的应用中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂BMS-536924和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的摩尔比为0.1-0.5∶1.0-2.0；优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为0.2-0.5∶1.5-2.0；更进一步优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为0.5∶2.0。

本发明药物组合物在制备治疗肺癌的药物的应用中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂BMS-536924和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的摩尔比为1.0-5.0∶0.75-2.0；优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为2.0-5.0∶1.25-2.0；更进一步优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为5.0∶2.0。

本发明药物组合物在制备治疗神经胶质瘤的药物的应用中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂BMS-536924和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的摩尔比为0.5-1.5∶0.5-1.25；优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为0.75-1.5∶0.75-1.25；更进一步优选为BMS-536924和SAHA的摩尔比为1.5∶1.25。

本发明药物组合物在制备治疗结肠癌的药物的应用中，所述胰岛素样生长因子-I受体抑制剂与组蛋白去乙酰化酶抑制剂的摩尔比为0.5-5.0∶0.0075-2.0。

本发明在制备治疗结肠癌的药物的应用中，其中所述BMS-536924和SAHA的摩尔比为0.5-3.0∶0.75-2.0；优选为所述BMS-536924和SAHA的摩尔比为0.75-3.0∶1.0-2.0；进一步优选为所述BMS-536924和SAHA的摩尔比为3.0∶1.5或1.5∶2.0。

本发明在制备治疗结肠癌的药物的应用中，其中所述OSI-906和SAHA的摩尔比为1.0-5.0∶0.75-2.0；优选所述OSI-906和SAHA的摩尔比为2.5-5.0∶1.25-2.0；进一步优选所述OSI-906和SAHA的摩尔比为5.0∶2.0。

本发明在制备治疗结肠癌的药物的应用中，其中所述OSI-906和MS275的摩尔比为1.0-5.0∶0.1-0.4；优选所述OSI-906和MS275的摩尔比为2.5-5.0∶0.2-0.4；进一步优选所述OSI-906和MS275的摩尔比为5.0∶0.4。

本发明在制备治疗结肠癌的药物的应用中，其中所述OSI-906和LBH589的摩尔比为1.0-5.0∶0.0075-0.02；优选所述OSI-906和LBH589的摩尔比为2.5-5.0∶0.0125-0.02；进一步优选所述OSI-906和LBH589的摩尔比为5.0∶0.02。

本发明在制备治疗结肠癌的药物的应用中，其中所述OS I-906和TSA的摩尔比为1.0-5.0∶0.05-0.1；优选所述OSI-906和TSA的摩尔比为2.5-5.0∶0.075-0.1；进一步优选所述OSI-906和TSA的摩尔比为5.0∶0.1。

含有胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物的应用中，在将本发明组合物制成同时给药的药剂的方案中，胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以含在同一种药物制剂如片剂或胶囊中，也可以将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂分别做成制剂，如分别做成片剂或胶囊，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书的指示同时服用；在将本发明组合物制成先后给药的药剂的方案中，可以将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的先后顺序进行服用，或将上述组合物中的两种成分制成一种控释的制剂，先释放组合物中的一种成分、然后再释放组合物中的另一种成分，患者只需要服用该控释组合物制剂；在将本发明组合物制备成交叉给药的药剂的方案中，可以将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的交叉顺序服用，或者将该药物组合物制备成胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂交叉释放的控释制剂。

胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌、脑瘤、肉瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用中，所述组合物中的胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以同时使用或以任何先后的顺序使用，如可以将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂同时给患者服用；也可以先将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂药物给患者服用、然后服用组蛋白去乙酰化酶抑制剂，或先服用组蛋白去乙酰化酶抑制剂、然后服用胰岛素样生长因子-I受体抑制剂药物，对于两者服用的时间间隔没有特别要求，但优选服用两种药物的时间间隔不超过一天；或者两种药物交替给药。

本发明中，可将本发明胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂采用本领域常规的方法制备成适于胃肠道给药或非胃肠道给药的药物制剂，本发明优选将胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂制成胃肠道给药的药物制剂，其制剂形式可以为常规片剂或胶囊、或控释、缓释制剂。在本发明胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组合物的药物制剂中，根据不同的制剂形式和制剂规格，所述组合物在制剂中的含量可以为质量计为1-99％，优选为10％-90％；制剂使用的辅料可采用本领域常规的辅料，以不和本发明组合物发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提；所述制剂的制备方法可采用本领域常规的制备方法进行制备。

本发明中，组合物的制备方法没有什么限制，胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂两者可以进行直接混合然后做成制剂，或分别和/或相应的辅料混合分别做成制剂，然后再按照本领域常规的方式包装在一起，或分别和相应的辅料混合然后再混合做成制剂。

本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象、给药途径或药物的制剂形式不同可以进行适当的变化，但以保证该药物组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度为前提。

本发明分别进行了胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组合杀死HepG2和Hep3B(肝癌细胞株)、A549(肺癌细胞株)、HCT-116和HT29(结肠癌细胞株)、D37(神经胶质瘤)的试验，结果提示，本发明胰岛素样生长因子-I受体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组合治疗肝癌、肺癌、结肠癌及神经胶质瘤具有显著的协同效应，提高了药物的疗效，降低了用药剂量，减少了副作用的发生。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明作进一步的阐述，但本发明并不受限于此。

实施例

试剂和方法：

细胞：HepG2和Hep3B(肝癌细胞株)、A549(肺癌细胞株)、HCT-116和HT29(结肠癌细胞株)、D37(神经胶质瘤)，均购自American TypeCulture Collection(ATCC)，Rockville，MD，USA。

药品：以下实施例中所用药物组合物均按下列方法1或方法2所述来制备；胰岛素样生长因子-I受体抑制剂均按文献合成而得，BMS-536924的合成参考文献为：J.Med.Chem.，2005，48，5639-5643；OSI-906的合成参考文献为：Bioorg.Med.Chem.Lett.，2007，17，1091-1097；组蛋白去乙酰化酶抑制剂均按文献合成而得，SAHA的合成参考文献为：J.Med.Chem.，1995，38，1411-1413；MS-275的合成参考文献为：J.Med.Chem.，1999，42，3001-3003；LBH-589的合成参考文献为：WO2002022577；Trichostatin的合成参考文献为：1)Tetrahedron，39(6)，841-846，2)EP331524。

方法1：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在-20℃下保存，使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液，混合在一起备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI 1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表1中第1-18。

药物处理后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

方法2：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在-20℃下保存。使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI 1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后以任意次序向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物的各组分溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表1中第19-39。

药物处理后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

下列表1所示的药物组合中，第1-18的组合按方法1，第19-39的组合按方法2制备。

表1

实施例1不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进HepG2细胞死亡试验，见表2。

表2

在考察相关化合物导致肝癌细胞株HepG2细胞死亡的试验中，发现当单独使用10.0μM BMS-536924或更低浓度、2.0μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μMBMS-536924+1.25μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约55％的癌细胞死亡；当两者以10.0μM BMS-536924+2.0μM SAHA的比例合用时，则产生更加显著的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例2不同比例的BMS-536924与MS275的组合协同增效促进HepG2细胞死亡试验，见表3。

表3

在考察相关化合物导致肝癌细胞株HepG2细胞死亡的试验中，发现当单独使用10.0μM BMS-536924或更低浓度、1.5μM MS275或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μMBMS-536924+1.0μM MS275)则产生明显的协同作用，导致约50％的癌细胞死亡；当两者以10.0μM BMS-536924+1.5μM MS275的比例合用时，则产生更加显著的协同作用，导致90％的癌细胞死亡。

实施例3不同比例的BMS-536924与LBH589的组合协同增效促进HepG2细胞死亡试验，见表4。

表4

在考察相关化合物导致肝癌细胞株HepG2细胞死亡的试验中，发现当单独使用10.0μM BMS-536924或更低浓度、0.01μM LBH589或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至0.02μM LBH589时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μMBMS-536924+0.01μM LBH589)则产生明显的协同作用，导致52％的癌细胞死亡；当两者以10.0μM BMS-536924+0.02μM LBH589的比例合用时，则产生更加显著的协同作用，导致92％的癌细胞死亡。

实施例4不同比例的BMS-536924与TSA的组合协同增效促进HepG2细胞死亡试验，见表5。

表5

在考察相关化合物导致肝癌细胞株HepG2细胞死亡的试验中，发现当单独使用10.0μM BMS-536924或更低浓度、0.075μM TSA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至0.15μM TSA时，也只有约15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μM BMS-536924+0.075μM TSA)则产生明显的协同作用，导致约30％的癌细胞死亡；当两者以10.0μM BMS-536924+0.15μM TSA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致82％的癌细胞死亡。

实施例5不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进A549细胞死亡试验，见表6。

表6

在考察相关化合物导致非小细胞肺癌细胞株A549细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.0μM BMS-536924或更低浓度、1.25μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至5.0μMBMS-536924或2.0μM SAHA时，也只有约10-15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.0μM BMS-536924+1.25μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以5.0μM BMS-536924+2.0μMSAHA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约95％的癌细胞死亡。

实施例6不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进HCT116细胞死亡试验，见表7。

表7

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HCT116细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.0μM BMS-536924或更低浓度、1.0μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至3.0μM BMS-536924或1.5μM SAHA时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.0μM BMS-536924+1.0μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约35％的癌细胞死亡；当两者以3.0μM BMS-536924+1.5μM SAHA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例7不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进HT29细胞死亡试验，见表8。

表8

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HT29细胞死亡的试验中，发现当单独使用0.75μM BMS-536924或更低浓度、1.25μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至1.5μM BMS-536924或2.0μM SAHA时，也只有10-15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(0.75μM BMS-536924+1.25μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约40％的癌细胞死亡；当两者以1.5μM BMS-536924+2.0μM SAHA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例8不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进D37细胞死亡试验，见表9。

表9

在考察相关化合物导致神经胶质瘤细胞株D37细胞死亡的试验中，发现当单独使用0.75μM BMS-536924或更低浓度、0.75μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至1.5μMBMS-536924或1.25μM SAHA时，也只有10-15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(0.75μM BMS-536924+0.75μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以1.5μM BMS-536924+1.25μM SAHA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例9不同比例的OS I-906与SAHA的组合协同增效促进HT29细胞死亡试验，见表10。

表10

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HT29细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.5μM OSI-906或更低浓度、1.25μM SAHA或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至5.0μM OS I-906或2.0μMSAHA时，也只有10-20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.5μMOSI-906+1.25μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致约35％的癌细胞死亡；当两者以5.0μM OSI-906+2.0μM SAHA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致82％的癌细胞死亡。

实施例10不同比例的OSI-906与MS275的组合协同增效促进HT29细胞死亡试验，见表11。

表11

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HT29细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.5μM OSI-906或更低浓度、0.1μM MS275时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至5.0μM OSI-906或0.4μM MS275时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.5μM OSI-906+0.2μM MS275)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以5.0μM OSI-906+0.4μM MS275的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致80％的癌细胞死亡。

实施例11不同比例的OSI-906与LBH589的组合协同增效促进HT29细胞死亡试验，见表12。

表12

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HT29细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.5μM OSI-906或更低浓度、0.0075μM LBH589时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至5.0μM OSI-906或0.02μM LBH589时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.5μMOSI-906+0.0125μM LBH589)则产生明显的协同作用，导致约50％的癌细胞死亡；当两者以5.0μM OSI-906+0.02μM LBH589的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例12不同比例的OSI-906与TSA的组合协同增效促进HT29细胞死亡试验，见表13。

表13

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HT29细胞死亡的试验中，发现当单独使用2.5μM OSI-906或更低浓度、0.05μM TSA时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至5.0μM OSI-906或0.1μM TSA时，也只有约20％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(2.5μM OSI-906+0.075μM TSA)则产生明显的协同作用，导致约45％的癌细胞死亡；当两者以5.0μM OSI-906+0.1μM TSA的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约85％的癌细胞死亡。

实施例13不同比例的BMS-536924与SAHA的组合协同增效促进Hep3B细胞死亡试验，见表14。

表14

在考察相关化合物导致肝癌细胞株Hep3B细胞死亡的试验中，发现当单独使用0.2μM BMS-536924或更低浓度、2.0μM SAHA或更低浓度时只有约10-15％的细胞死亡；即使增加单药的浓度至0.5μM BMS-536924时，也只有约25％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(0.2μMBMS-536924+1.5μM SAHA)则产生明显的协同作用，导致41％的癌细胞死亡；当两者以0.5μM BMS-536924+2.0μM SAHA的比例合用时，则产生更加显著的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。