一种从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法

摘要

本发明公开了一种从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法，属于食用菌有效成份提取方法技术领域。该方法包括：(1)原料预处理；(2)酶解；(3)水提取；(4)乙醇提取；(5)醇沉多糖；(6)树脂纯化多酚等步骤。本发明将超微粉碎、酶解，辅助萃取，树脂吸附等工艺有机结合，同时提取不同生物活性的多糖和多酚，具有产量高、纯度高、成本低、安全可靠的特点，对于挖掘姬松茸的潜在价值具有较大的意义。本发明可在保健食品企业推广应用。

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌有效成份提取方法技术领域，尤其涉及一种从食药用菌姬松茸中同时高效提取多糖及多酚的方法。

背景技术

姬松茸，又称巴西蘑菇，是一种珍贵的食用真菌，属于担子菌亚门，层菌纲，散菌目，蘑菇科，蘑菇属，拉丁学名为Agaricus blazei Murill.。该菌原产于巴西、美国等地，日本于上世纪70年代成功引种栽培，并于上世纪90年代初传入我国。现在福建、浙江等地有大量栽培。

目前，我国的姬松茸产品以盐渍品、子实体干品及鲜品消费为主，深加工保健产品研发和应用还处在起步阶段。研究表明，姬松茸的水提液及水溶性多糖具有抗肿瘤、调节免疫、保肝、降血糖等广泛的药理活性。目前有关姬松茸多糖提取方法的研究报导较多，如公开号CN1647695A，先用乙醇除去小分子杂质，再用水提取水溶性的多糖，然后将水溶液直接浓缩。这种方法虽然除去了部分杂质，但是不能排除蛋白质的干扰，而且提取率比较低；公开号为CN1663965A，采用超临界来除杂质，然后水提，这种方法对实验设备要求比较高，而且蛋白的去除也不彻底，并且多糖的提取率也不高，活性较低。

现已了解在姬松茸中，不仅含有较多的多糖成分，而且还有较高的多酚成分。多酚是一类具有多酚羟基化合物的总称，具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌，预防心脑血管疾病等多种生理和药理活性。现在对姬松茸多糖的研究较多，且已有多种姬松茸多糖产品上市，然而对多酚等其它的活性成分没有很好的研究。因此，当我们利用现有的技术来提取分离姬松茸多糖时，往往造成对其它的活性成分如多酚等被白白的浪费掉，这不但提高了多糖的提取成本，而且造成了多酚等资源的浪费。

发明内容

本发明目的是，针对已有技术在从姬松茸中提取多糖时，不能排除蛋白质干扰、提取率与活性较低及不能同时提取多酚成分导致浪费等的缺陷，提供一种能从姬松茸中同时、高效、低成本、去除蛋白杂质较彻底的提取多糖和多酚的方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法，该方法按以下步骤进行：

(1)原料预处理：干燥姬松茸子实体超微粉碎后，将其与蒸馏水按重量1∶30～50比例混合成混合液后，备用；

(2)酶解处理：将占混合液重量0.05％～0.5％的复合酶加入混合液中，调节pH值至4-6，置震荡器上在45～55℃下酶解15-120分钟；

(3)水提取：将步骤(2)酶解液进行超声或微波处理15-30分钟后，将该液加热至90～100℃，提取30-60分钟后，在6000转/分下离心10分钟，得上清液I和沉淀物；

(4)乙醇提取：将步骤(3)沉淀物与浓度为50～60％的乙醇按重量体积1公斤∶30～50升比例混合，在80～90℃下震荡提取1小时，过滤得滤液II；将滤渣与浓度为90％～100％的乙醇按同上方法提取、过滤，弃滤渣，得滤液III；

(5)醇沉多糖：将步骤(3)的上清液I和步骤(4)的滤液II及滤液III合并，用旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的五分之一后，再加入3倍体积的95％乙醇进行醇沉后，在6000转/分下离心10分钟，得上清液和即为姬松茸多糖的沉淀物；

(6)树酯纯化多酚：将步骤(5)的上清液用旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的五分之一后，过大孔树酯，以50％的乙醇为洗脱液进行洗脱纯化，得到姬松茸多酚。

所述复合酶为纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶＝3-5∶1∶2-4的混合物。

所述超声处理为100～500Hz，100～1000W；所述微波处理为50～100Hz，300～800W。

所述大孔树脂为：PN100、PN400、CDA40或YWD04B2。

本发明的有益效果是：

1、由于姬松茸先超微粉碎，更便于多糖和多酚的提取。

2、乙醇提取则破坏了细胞膜的脂质结构，也有利于细胞内容物的溶出。

3、针对姬松茸本身具有纤维素、果胶和蛋白质的干扰，不同配比的复合酶作用则破坏了纤维素和果胶的阻碍，使多糖和多酚的提取更为有效。

4、超声或微波也有利于活性物质的溶出，同时蛋白酶能够水解多糖和多酚中混入的蛋白，提高多糖和多酚的纯度。

5、用水-低浓度醇-高浓度醇的提取方式则有利于更好的将水溶性和脂溶性的物质提出，便于更好的提取多糖和多酚。

6、此方法高效，无毒，无污染，纯度高，条件温和，提出的成分具有不同的生物活性，多糖具有抗肿瘤和免疫的活性，而多酚具有较强的抗氧化活性。

因此本发明将超微粉碎、酶解，辅助萃取，树酯吸附有机结合，同时提取的多糖和多酚，具有产量高、纯度高的特点，对于挖掘姬松茸的潜在价值具有非常重要的意义。

附图说明

图1从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的工艺流程图

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步的具体说明，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。

对以下实施例所涉材料的说明：

纤维素酶：160000u/g，湖州礼来生物科技有限公司

果胶酶：15000-25000u/g，天津市利华酶制剂厂

中性蛋白酶：80000-100000u/g，苏州维邦生物科技有限公司

大孔树脂PN100：天津市海光化工有限公司

大孔树脂PN400：天津市海光化工有限公司

大孔树脂CDA40：天津市海光化工有限公司

大孔树脂YWD04B2；天津市海光化工有限公司

实施例1：(从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法1)

(1)原料预处理：干燥姬松茸子实体超微粉碎后，将其与蒸馏水按重量1∶30比例混合成混合液后，备用；

(2)酶解处理：将占混合液重量0.1％的复合酶(纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶＝3∶1∶4)加入混合液中，调节混合液pH值为4，并置震荡器上在45℃酶解15分钟；

(3)水提取处理：将步骤(2)酶解液进行超声(200Hz，800W)处理15分钟后，将该液加热至90℃，提取30分钟后，在6000转/分下离心时间10分钟，得上清液I和沉淀物；

(4)乙醇提取：将步骤(3)沉淀物与浓度为50％的乙醇按重量体积1公斤∶30升比例混合，在80℃下震荡提取1小时，过滤得滤液II；将滤渣与浓度为90％的乙醇按同上方法提取、过滤，弃滤渣，得滤液III；

(5)醇沉多糖：将步骤(3)的上清液I和步骤(4)的滤液II及滤液III合并，用旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的五分之一后，再加入3倍体积的95％乙醇进行醇沉后，在6000转/分下离心10分钟，得上清液和即为姬松茸多糖的沉淀物；

(6)树酯纯化多酚：将步骤(5)的上清液用旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的五分之一，过PN100大孔树酯，以50％的乙醇为洗脱液进行洗脱得到姬松茸多酚。

上述条件下姬松茸多糖得率为13.7％，多酚得率为0.92％。

实施例2：(从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法2)

本例中，步骤(1)将姬松茸超微粉碎子实体与蒸馏水按重量1∶40混合；步骤(2)将占混合液重量0.2％的复合酶(纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶＝4∶1∶3)加入混合液中，在48℃，pH值4.5下，震荡、酶解30分钟；步骤(3)将步骤(2)酶解液进行超声(400Hz，200W)处理20分钟后，将该液加热至95℃，提取40分钟；步骤(4)将步骤(3)沉淀物与浓度为55％的乙醇按重量体积1公斤∶40升比例混合，在85℃下震荡提取1小时；将滤渣与浓度为95％的乙醇按同上方法提取、过滤；步骤(6)所用的大孔树酯为PN400。其余步骤、工艺同实施例1。上述条件下姬松茸多糖得率为15.1％，多酚得率为1.34％。

实施例3：(从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法3)

本例中，步骤(1)将姬松茸超微粉碎子实体与蒸馏水按重量1∶45混合；步骤(2)将占混合液重量0.3％的复合酶(纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶＝5∶1∶2)加入混合液中，在50℃，pH值5下，震荡、酶解60分钟；步骤(3)将步骤(2)酶解液进行微波(50Hz，800W)处理25分钟后，将该液加热至95℃，提取50分钟；步骤(4)将步骤(3)沉淀物与浓度为55％的乙醇按重量体积1公斤∶45升比例混合，在85℃下震荡提取1小时；将滤渣与浓度为95％的乙醇按同上方法提取、过滤；步骤(6)所用的大孔树酯为CDA40。其余步骤、工艺同实施例1。上述条件下姬松茸多糖得率为14.8％，多酚得率为1.15％。实施例4：(从姬松茸中同时高效提取多糖和多酚的方法4)

本例中，步骤(1)将姬松茸超微粉碎子实体与蒸馏水按重量1∶50混合；步骤(2)将占混合液重量0.45％的复合酶(纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶＝4∶1∶3)加入混合液中，在55℃，pH值5.5下，震荡、酶解120分钟；步骤(3)将步骤(2)酶解液进行微波(100Hz，300W)处理30分钟后，将该液加热至100℃，提取60分钟；步骤(4)将步骤(3)沉淀物与浓度为60％的乙醇按重量体积1公斤∶50升比例混合，在90℃下震荡提取1小时；将滤渣与浓度为100％的乙醇按同上方法提取、过滤；步骤(6)所用的大孔树酯为YWD04B2。其余步骤、工艺同实施例1。上述条件下姬松茸多糖得率为18.6％，多酚得率为1.33％。