一种用高效液相色谱法测定去甲文拉法辛有关物质的方法

摘要

本发明公开了一种去甲文拉法辛有关物质的分离与分析测定方法，采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以含有表面活性剂缓冲盐-有机改性剂为流动相，用于在同一色谱条件下分离分析去甲文拉法辛的有关物质。

说明书

技术领域

本发明属涉及一种高效液相色谱分离分析方法，特别是一种用高效液相色谱法分离分析去甲文拉法辛有关物质的方法。

背景技术

去甲文拉法辛是文拉法辛的活性代谢物，是一种多巴胺的弱抑制剂，能有效地抑制5-羟色胺和去甲肾上腺素的再摄取，对多巴胺的再摄取有一定的抑制作用。主要用于治疗重性抑郁症(MDD)。其结构式为：

分子式为：C₁₆H₂₅NO₂，分子量：263.4

去甲文拉法辛与其中间体相比极性差别较大，在同一色谱条件下不使用梯度洗脱而实现它们的分离有一定的困难，因此，实现去甲文拉法辛与其中间体在同一色谱条件下的分离与分析在去甲文拉法辛的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在同一色谱条件下分离分析去甲文拉法辛有关物质的高效液相色谱方法，从而实现对去甲文拉法辛的质量控制。

申请人发现，用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以含有表面活性剂的缓冲盐-有机改性剂为流动相，可以实现去甲文拉法辛与其中间体在同一色谱条件下的分离与分析，从而可以准确控制去甲文拉法辛及其制剂的质量。

本发明所说的用高效液相色谱法分离分析去甲文拉法辛的方法，选用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸二氢钠缓冲液-乙腈为流动相，其中含有少量的表面活性剂。

本发明采用的色谱柱为氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。

本发明采用的有机改性剂选自乙腈、甲醇，最优选的有机改性剂为乙腈。

本发明方法的流动相中，磷酸二氢钠缓冲液-有机改性剂混合溶液的体积比为80∶20～95∶5。

本发明方法的流动相中包含的表面活性剂选自戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠，最优选的为庚烷磺酸钠，表面活性剂的浓度为0.002mol/L～0.007mol/L。

本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：

(1)称取去甲文拉法辛样品适量，用流动相溶解样品，配制成每1ml约含去甲文拉法辛0.2mg～2mg的样品溶液。

(2)设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为226nm±3nm。

(3)取步骤(1)的样品溶液5-40μl注入液相色谱仪，完成去甲文拉法辛的分离与分析。

其中：

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-10Avp，SCL-10Avp，DGU-12A

色谱柱：氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)

流动相：磷酸二氢钠缓冲液(含0.005mol/L庚烷磺酸钠，用稀磷酸调节pH值为2.6)-乙腈＝90∶10

流速：1.0ml/min

检测波长：226nm

柱温：室温

进样体积：20μl

本发明采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，能够有效的分离分析去甲文拉法辛有关物质；选择流动相溶解样品，可以消除溶剂对检测的干扰；选择进样体积20μl，柱温为室温，加入表面活性剂提高了色谱峰的对称性。本发明解决了在同一色谱条件下不使用梯度洗脱而能简单分离与分析去甲文拉法辛有关物质的问题，从而确保了去甲文拉法辛原料药和制剂的质量可控。

附图说明

图1实施例1，磷酸二氢钠缓冲液-乙腈(90∶10)并加入庚烷磺酸钠的去甲文拉法辛与中间体混合样品高效液相色谱图

图2实施例2，磷酸二氢钠缓冲液-乙腈(90∶10)并加入庚烷磺酸钠的去甲文拉法辛高效液相色谱图

图3实施例3，磷酸二氢钠缓冲液-乙腈(95∶5)并加入庚烷磺酸钠的去甲文拉法辛与中间体混合样品高效液相色谱图

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10ATvp，SPD-10Avp

色谱柱：氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)

流动相：磷酸二氢钠缓冲液(含0.005mol/L庚烷磺酸钠，pH值为2.6)-乙腈(90∶10)

流速：1.0ml/min

检测波长：226nm

柱温：室温

进样体积：20μl

实验步骤

称取去甲文拉法辛50mg，中间体I、杂质I、杂质II各10mg，置于50mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。

图1中保留时间为9.5分钟的色谱峰为去甲文拉法辛的色谱峰。保留时间为17.0分钟的色谱峰为中间体I的色谱峰，保留时间为33.4分钟和14.7分钟的色谱峰分别为杂质I、杂质II的色谱峰。色谱图表明去甲文拉法辛与其中间体及杂质可以在同一色谱条件下达到良好的分离。

实施例2

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10TAvp，SPD-10Avp

色谱柱：氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)

流动相：磷酸二氢钠缓冲液(含0.005mol/L庚烷磺酸钠，pH值为2.6)-

乙腈(90∶10)

流速：1.0ml/min

检测波长：226nm

柱温：室温

进样体积：20μl

实验步骤

称取去甲文拉法辛50mg，置于50mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。

实施例3

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10ATvp，SPD-10Avp

色谱柱：氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)

流动相：磷酸二氢钠缓冲液(含0.005mol/L庚烷磺酸钠，pH值为2.6)-乙腈(95∶5)

流速：1.0ml/min

检测波长：226nm

柱温：室温

进样体积：20μl

实验步骤

称取去甲文拉法辛50mg，中间体I、杂质I、杂质II各10mg，置于50mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。