作为SMO拮抗剂的三唑衍生物

摘要

本发明提供治疗或预防可由Smo拮抗改善的病症的方法，所述方法包含对需要该方法的患者施加有效量的式I化合物或包含式I化合物的组合物：或其药学可接受的盐或溶剂合物；其中：X、Y和Z中的2个代表氮原子，另一个代表氧原子；R

说明书

本发明涉及三唑衍生物，其为音猬(sonic hedgehog)通路的抑制剂， 特别是为Smo拮抗剂。因此本发明的化合物可用于治疗与异常刺猬通路 激活有关的疾病，包括癌症，例如基底细胞癌，成神经管细胞瘤，前列腺、 胰腺、乳腺、结肠、骨和小细胞肺癌，和上胃肠道(GI)癌症。

刺猬蛋白(Hh)是首先在果蝇(Drosophila)中发现的分泌的信号蛋白。它 们是高度疏水的蛋白质，其在分泌后能够扩散并在对于胚胎的正确发育具 有极为重要作用的组织中形成梯度。已经在人类中鉴别了三种具有不同的 空间和时间分布类型的Hh同系物：音猬(SHH)、印度刺猬(IHH)和沙漠刺 猬(DHH)。

一旦Hh结合至其受体Patched(Ptch)，即启动了Hh信号级联。在不 存在Hh的情况下，Ptch抑制另一种跨膜蛋白Smoothened(Smo)的活性， Smo是Hh信号传导的关键传递器。Smo的结构暗示其属于G蛋白耦合受 体(GPCR)超家族，但是与任何Hh的结合无关。当存在Hh时，它与Ptch 结合，形成无活性复合物，释放Ptch的Smo抑制物质并激活Hh响应通 路。然后通过蛋白质复合物，将Hh信号传送至果蝇中的转录因子cubitus interrupts(Ci)和哺乳动物中的GLI转录因子。在不存在Hh信号传导时， Ci被裂解，并且氨基末端片段作为Hh靶基因转录的抑制子。通过Hh信 号传导可以防止Ci的裂解，并且Ci成为靶基因转录的激活子。

但是SHH信号传导的胚胎死亡可能导致独眼畸形和其他发育缺陷 (Chiang C等，Nature 383：407-413(1996))，人们相信是SHH通路的不正 常激活引起细胞增殖增加和肿瘤的形成，并且与很多不同类型的恶性肿瘤 有关，包括基底细胞癌(BCC)，成神经管细胞瘤，胰腺癌，小肺癌，前列 腺癌(PC)，乳腺癌，消化道肿瘤和皮肤癌(Kiselyov AS Anti-cancer Agents in Medicinal Chemistry 6：445-449(2006)和Sidransky D Nature Genet.14：7-8 (1996))。因此，Hh通路是多种病症的重要的药理靶标。

人们认为癌症中Hh通路的异常激活是由于通路中的突变(与配体无 关)或者通过Hh过表达(与配体相关)而引起的。

已经将Ptch 1中的突变与痣样基底细胞癌综合征(也称作戈林综合 征，Gorlin综合征)联系起来，所述综合征是通过下述表征的病症：多种 发育缺陷和容易发展出多种基底细胞癌(BCC)、成神经管细胞瘤、横纹肌 肉瘤和几种其他肿瘤的易患病体质。在散发性BCC和成神经管细胞瘤和 很多其他散发性肿瘤中也已经发现了使Ptch失活和激活Smo的突变 (Reifenberger J等，Cancer Res.58：1798-1803(1998)和Xie J等，Nature 391：90-92(1998))。

已经证明，植物衍生的致畸生物碱环杷明和蒜藜芦碱通过与Smo结 合(Chen JK等，Genes Dev.16：2743-2748(2002))，直接抑制SHH信号传 导而引起前脑无裂畸形(Cooper MK等，Science 280：1603-1607(1998)和 Incardona JP等，Development 125：3553-3562(1998))。体外测试已经表明， 致畸剂环杷明能抑制Ptch^-/-小鼠的纤维原细胞、几种成胶质细胞瘤/神经胶 质瘤细胞系、成神经管细胞瘤细胞系、鳞状细胞癌细胞系和SCLC细胞系 的异常细胞生长(Bak M等，Pharmacogenomics 4(4)：411-429(2003))。环杷 明在体内在成神经管细胞瘤模型中也表现出了功效(Dahmane N等， Development 128：5201-5212(2001)和Berman CM等，Science 297：1559-1561(2002))。在SHH响应细胞模型中已经鉴别了合成的Hh拮 抗剂，其中一些靶向Smo(Chen JK等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：14071-14076(2002)，Frank-Kamenetsky M等，J.Biol.1：10(2002)和 Williams JA等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100：4616-4621(2003))和其它未 知的Smo下游靶标(Chen JK等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99：14071-14076 (2002))。

报道已经表明，在多种人肿瘤活体检查和细胞系中检测到Hh过表达， 有时伴随Hh靶基因的表达增加，包括小细胞肺癌、胰腺癌、食管癌、胃 癌和胆道癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌和肝癌(Rubin LL等，Nature Reviews Drug Discovery 5：1026-33(2006))。

US2006/040459描述了特定的三唑，其作为11-β-羟基类固醇脱氢酶1 型(11β-HSD1或HSD1)抑制剂，可用于治疗代谢异常。

现在令人惊讶地发现，这些化合物是Hh通路的抑制剂，特别是为Smo 拮抗剂。

本发明提供结构式I的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制 造药物的用途，所述药物用于治疗或预防能由Smo拮抗而改善的病症：

其中：

X、Y和Z中的2个代表氮原子，另一个代表氧原子；

R¹和R²与和它们相连的原子一起代表环丁基环，可选地由1-2个氟原子 取代，并且R³代表氢或氟原子；

或

R¹代表甲基，

R²代表甲基或氟原子和

R³代表氟原子。

本发明还提供用于治疗或预防病症的方法，所述病症能由Smo拮抗 改善，所述方法包含对需要该方法的患者施加有效量的式I的化合物或包 含式I化合物的组合物。

本发明还提供式I化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物的制造用于 治疗或预防癌症的药物的用途。

本发明还提供治疗或预防癌症的方法，所述方法包含对需要该方法的 患者施用有效量的式I化合物或包含式I化合物的组合物。

在一个实施方案中，X和Y之一是O，另一个是N，并且Z是N。

在另一个实施方案中，X是O，Y是N，并且Z是N。

在一个实施方案中，R¹是甲基，R²是氟，并且R³是氟。

在另一个实施方案中，R¹和R²与和它们相连的原子一起形成由2个 氟原子取代的环丁基环，并且R³是氢。

在另一个实施方案中，R¹和R²与和它们相连的原子一起形成3，3-二 氟环丁基，并且R³是氢。

本发明还提供结构式II的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用 于制造药物的用途，所述药物用于治疗或预防能由Smo拮抗而改善的病 症：

其中：R¹、R²和R³如上定义。

关于式II的优选结构如前针对式I所定义的，并作出必要的修正。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

5-(1，1-二氟乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基} 双环[2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

5-(3，3-二氟环丁基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基} 双环[2.2，2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

5-(1-氟-1-甲基乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3- 基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

2-(1，1-二氟乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基} 双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

2-(3，3-二氟环丁基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基} 双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑。

本发明还提供下述化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于制造 治疗与Smo拮抗相关疾病的药物的用途，所述疾病如癌症：

2-(1-氟-1-甲基乙基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3- 基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑。

本发明在其范畴中还包括上述式I化合物的N-氧化物。通常，这些 N-氧化物可以在可获得的任何氮原子上形成。N-氧化物可以通过常规方法 形成，比如式I化合物与过硫酸氢钾(oxone)在存在湿氧化铝的情况下 反应。

本发明在其范畴中包括上述式I化合物的前体药物。通常，此类前体 药物是式I化合物的功能性衍生物，其在体内易于转化成式I的所需化合 物。在例如″Design of Prodrugs″，H.Bundgaard编辑，Elsevier，1985中描述 了合适的前体药物衍生物的选择和制备的常规过程。

前体药物可以是生物活性物质(“母药”或“母分子”)的在药理上没 有活性的衍生物，其需要在体内转化，以释放活性药物，并且其已经改善 了母药分子的传递性质。体内转化可以，例如，是一些代谢过程的结果， 比如羧酸、磷酸或硫酸酯的化学或酶水解，或敏感官能性的还原或氧化。

本发明在其范畴中包括式I化合物的溶剂合物和其盐，例如，水合物。

本发明的化合物可以具有不对称中心、手性轴和手性平面(如E.L. Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley& Sons，New York，1994，1119-1190页中所述)，并且作为外消旋体、外消旋 混合物和单独的非对映异构体出现，包含所有可能的异构体和它们的混合 物，包括光学异构体，所有这些立体异构体都包括在本发明中。此外，本 文所公开的化合物可以作为互变异构体存在，并且两种互变异构形式都意 欲由本发明的范畴所涵盖，即使只描述了一种互变异构结构。

所述化合物可以以不同的异构形式存在，所有这些形式都由本发明所 涵盖。

结构式I的化合物可以通过下述方法分成单独的非对映异构体，例如， 由合适的溶剂如甲醇或乙酸乙酯或其混合物分级结晶，或者使用有光学活 性的固定相进行手性色谱。通过结晶产物或其衍生的结晶中间体的X射 线结晶学可以确定绝对立体化学，必要时，利用包含具有已知绝对构型的 不对称中心的试剂。

或者，使用光学纯净的起始材料或已知绝对构型的试剂，通过立体定 向合成可以获得通用结构式I的化合物的任何立体异构体。

所述化合物可以以多种不同的多晶形式存在。

本发明包括式I化合物的游离碱，以及其药学可接受的盐和立体异构 体。本发明的化合物可以在胺的一个或多个N原子处和/或包含N的杂环 部分上质子化以形成盐。术语“游离碱”指非盐形式的胺类化合物。涵盖 的药学可接受的盐不仅包括对于本文所述特定化合物所提出例证的盐，还 包括式I化合物的游离形式的所有典型的药学可接受的盐。使用本领域已 知的技术可以分离出所述的特定盐化合物的游离形式。例如，通过用合适 的碱的稀释水溶液如稀释的NaOH、碳酸钾、碳酸氢铵和碳酸氢钠水溶液 处理盐可以使游离形式再生。所述游离形式可以与其相应盐在某些物理性 质上不同，比如在极性溶剂中的溶解度，但是就本发明而言，酸和碱盐在 医药上与它们各自的游离形式相当。

通过常规的化学方法，由包含碱性部分的本发明的化合物可以合成所 述化合物的药学可接受的盐。通常，在合适的溶剂或溶剂的各种组合中， 通过离子交换色谱或者使游离碱与化学计量用量或过量的合意成盐无机 或有机酸反应，由此制备碱性化合物的盐。

因此，本发明化合物的药学可接受的盐包括本发明化合物的常规无毒 盐，其通过将碱性的本发明化合物与无机、有机酸或聚合酸反应而形成。 例如，常规无毒盐包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚 硫酸、氨基磺酸、磷酸、亚磷酸、硝酸等的盐，以及由有机酸如马来酸、 双氢萘酸、羟基马来酸、谷氨酸、水杨酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺 酸、草酸、天冬氨酸、乙磺酸、乙酸、二磺酸、三氟乙酸等制备的盐。合 适的聚合盐的实例包括衍生自聚合酸如单宁酸、羧甲基纤维素的盐。优选 地，本发明的药学可接受的盐包含1当量的式(I)的化合物和1、2或3当 量的无机或有机酸。更具体地，本发明的药学可接受的盐是三氟乙酸盐或 氯化物盐。在一个实施方案中，所述盐是三氟乙酸盐。在另一个实施方案 中，所述盐是氯化物。

上述药学可接受的盐和其他通常的药学可接受的盐的制备由Berg等 (1977)J.Pharm.Sci.，‘Pharmaceutical Salts’，66：1-19更加全面地描述。

还应注意的是，本发明的化合物是潜在的内盐或两性离子，因为在生 理条件下，化合物中的脱质子酸部分如羧基基团，可以是阴离子的，并且 这个电子电荷然后可以由带正电荷的质子化或烷基化的碱部分如季氮原 子在内部平衡。

根据标准的医药实践，本发明的化合物可以对哺乳动物施用，优选人 类，可以单独施用或与药学可接受的载体、赋形剂、稀释剂、佐剂、填充 剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂以药物组合物的形式组合施用。

本发明的化合物可以通过任何便利的用药途径对受试者施用，无论是 全身/外周或在期望的作用部位施用，包括但不限于，口服(例如通过吞 咽)；局部(包括例如经皮，鼻内，眼用，颊腔和舌下)；肺部(例如通过 吸入或吹入疗法，其使用例如气雾剂，例如通过口腔或鼻腔)；直肠；阴 道；肠胃外(例如通过注射，包括皮下，皮内，肌肉内，静脉内，动脉内， 心内，鞘内，脊柱内，囊内，囊下，眶内，腹腔内，气管内，表皮下，节 内，蛛网膜下和胸骨内)；和通过储库的植入(例如皮下或肌肉内)。

受试者可以是真核生物、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例 如圭亚那猪、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例 如狗)、猫科动物(例如猫)、马类动物(例如马)、灵长类动物、猿类(例 如猴子或猿)、猴子(例如小猿、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、 长臂猿)，或人类。

本发明还提供药物组合物，其包含本发明的一种或多种化合物和药学 可接受的载体。包含活性成分的药物组合物可以是适于口服的形式，例如， 为片剂、锭剂、糖锭、含水或含油的悬浮液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、 硬或软胶囊或糖浆或酏剂。意欲用于口服的组合物可以根据本领域已知的 任何用于制造药物组合物的方法制备，并且这些组合物可以包含选自下组 的一种或多种药剂：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供医药上外 形精美而口味怡人的制剂。片剂包含活性成分，所述组分与无毒的药学可 接受的赋形剂混合，所述赋形剂适于制造片剂。这些赋形剂可以是例如惰 性稀释剂，比如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂， 例如，微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或海藻酸；粘合剂， 例如淀粉、明胶、聚乙烯-吡咯烷酮或阿拉伯胶，和润滑剂，例如，硬脂 酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包被或者它们可以通过已知技术包被， 遮盖药物的不良口味或延迟在胃肠道中的分解和吸收，并且从而在较长的 时间内提供持续的作用。例如，可以使用水溶性味道遮盖材料比如羟丙基 -甲基纤维素或羟丙基纤维素，或者时间延迟材料比如乙基纤维素、乙酸 丁酸纤维素。

用于口服的制剂也可以呈现为硬明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰 性固体稀释剂混合，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶 囊的形式，其中活性成分与水溶性载体如聚乙二醇或油介质混合，例如花 生油、液体石蜡或橄榄油。

含水悬浮液包含活性成分，其与适于制造含水悬浮液的赋形剂混合。 这些赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基- 纤维素、藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷酮、黄耆胶和金合欢胶；分散剂或湿润 剂可以是天然产生的磷脂，例如卵磷脂，或者烯化氧与脂肪酸的缩合产物， 例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七 环氧乙烷十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol)，或环氧乙烷与衍生自脂 肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯缩合产物，或 者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的偏酯的缩合产物如聚亚乙基 脱水山梨糖醇单油酸酯。含水悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂，例如 乙基或正丙基对羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂， 和一种或多种甜味剂，比如蔗糖、糖精或阿斯巴甜。

含油悬浮液可以通过将活性成分悬浮于植物油中，例如落花生油、橄 榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油，比如液体石蜡中而配制。含油悬浮液 可以包含增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入如前述的甜味剂 和调味剂，提供口味怡人的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂 比如丁基化的羟基苯甲醚或α-生育酚而防腐。

适于通过加入水而制备含水悬浮液的可分散粉末和颗粒提供与分散 剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂 或湿润剂和悬浮剂由上述例举。也可以存在其他赋形剂，例如甜味剂、调 味剂和着色剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂比如抗坏血酸而防腐。

本发明的药物组合物还可以是水包油型乳剂。油相可以是植物油，例 如橄榄油或落花生油，或者矿物油，例如液体石蜡或者它们的混合物。合 适的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和 己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙 烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可以包含甜 味剂、调味剂、防腐剂和抗氧化剂。

可以用甜味剂配制糖浆和酏剂，所述甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨 醇或蔗糖。此类配制剂也可以包含缓和剂、防腐剂、调味剂和着色剂和抗 氧化剂。

药物组合物可以是无菌可注射水溶液的形式。可使用的可接受运载体 和溶剂包括水、Ringer溶液和等渗氯化钠溶液。

无菌可注射制剂也可以是无菌可注射水包油微乳剂，其中活性成分溶 于油相中。例如，活性成分可以首先溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然 后将该油溶液导入水和甘油混合物中，并经过处理形成微乳剂。

可以通过局部大剂量注射而将可注射溶液或微乳剂导入患者的血流。 或者，可以有利地以可以保持本发明化合物的恒定循环浓度的方式施用溶 液或微乳剂。为了保持这样的恒定浓度，可以使用连续静脉内递送设备。 这样的设备的实例是Deltec CADD-PLUS^TM 5400型静脉内泵。

药物组合物可以是用于肌肉内和皮下施用的无菌可注射水性或油性 悬浮液。这种悬浮液可以根据已知技术，使用合适的前述分散剂或湿润剂 和悬浮剂而配制。无菌可注射制剂也可以是处于无毒的肠胃外可接受的稀 释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。 此外，无菌的固定油便利地用作溶剂或悬浮介质。就此目的而言，可以使 用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或二酯。此外，可以在可注射 制剂中使用脂肪酸比如油酸。

式I的化合物还可以以用于直肠用药的栓剂的形式施用。可以通过将 药物与合适的非刺激性赋形剂混合而制备这些组合物，所述赋形剂在常温 为固体，但是在直肠温度为液体，并因此在直肠中融化而释放药物。这些 材料包括可可油、甘油化的明胶、氢化植物油，各种分子量的聚乙二醇的 混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯。

对于局部使用，可使用包含式I化合物的霜剂、软膏、凝胶剂、溶液 或悬浮液等。(对于这种应用，局部应用包括口腔清洗剂和漱口剂。)

本发明的化合物可以通过局部使用合适的鼻内运载体和递送设备在 鼻内施用，或者使用本领域普通技术人员熟知的透皮贴剂的形式，通过透 皮途径施用。为了以透皮递送系统的形式施用，在用药疗程中，剂量施用 当然是连续的，而不是间歇的。本发明的化合物也可以作为栓剂用基体递 送，所述基体比如可可油、甘油化的明胶、氢化植物油、各种分子量的聚 乙二醇的混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯。

当将根据本发明的化合物向受试者施用时，选择的剂量水平将依赖于 多种因素，包括但不限于，特定化合物的活性，个体症状的严重程度，用 药途径，用药时间，化合物的排出速度，治疗的持续时间，联合使用的其 他药物、化合物和/或材料，和患者的年龄、性别、体重、体质、健康情 况和此前的用药史。化合物的量和用药途径将最终由医生判定，但是通常 情况剂量是在作用部位实现的局部浓度可实现期望的效果而不引起实质 的有害或致命的副作用。

体内施用可通过一次剂量、在疗程中连续或间歇(例如在合适的间歇 分别用药)而起作用。确定最有效的途径和用药剂量的方法为本领域的技 术人员所熟知，并将随着治疗所有制剂、治疗的目的、治疗的靶细胞和治 疗受试者而变化。可由主治医生用选择的剂量水平和模式进行单次或多次 用药。通常，活性化合物的合适剂量为约100μg至约250mg每千克受试 者体重每天。其中活性化合物是盐、酯、前体药物等，根据母体化合物计 算用量并且因此使用的实际重量成比例增加。

本发明提供抑制刺猬信号传导通路的激活的方法，例如抑制由表型如 Ptch功能丢失、刺猬蛋白的功能获得、smoothened的功能获得或Gli的功 能获得而产生的异常生长状态，包括使细胞接触有效量的式I化合物，以 降低正常的Ptc活性，与正常的刺猬蛋白活性发生拮抗作用，与smoothened 活性发生拮抗作用，或者与Gli活性发生拮抗作用，例如逆转或控制异常 生长状态。

本发明进一步提供用于治疗、改善增殖障碍(即癌症)以及其他由刺 猬通路介导的障碍或病症的一种或多种症状，和减轻增殖障碍以及其他由 刺猬通路介导的障碍或病症的严重程度的方法。

已经表明，很多肿瘤和增殖症状依赖于刺猬通路。通过用本发明的化 合物治疗能影响这些细胞的生长和存活。例如，已经表明，刺猬通路的小 分子抑制剂能抑制基底细胞癌(Williams等，PNAS 100：4616-21(2003))、 成神经管细胞瘤(Berman等，Science 297：1559-61(2002))、胰腺癌、胃肠 癌和食道癌(Berman等，Nature 425：846-51(2003)和WO 05/013800)、肺癌 (Watkins等，Nature 422：313-7(2003))，和前列腺癌(Karhadkar等，Nature 431：707-12(2004))的生长。

此外，已经表明，很多癌症类型的刺猬通路激活不受控制，例如，乳 腺癌(Kubo等，Cancer Research 64：6071-4(2004))、肝细胞(heptacellular) 癌(Patil等，(2005)96th Annual AACR conference，abstract#2942和Sicklick 等，(2005)ASCO annual meeting，abstract#9610)、血液科恶性疾病(Watkins 和Matsui，未发表数据)、基底癌(Bale等，Human Molec.Genet.B：757-762 (2001)，Xie等，Nature 391：90-92(1998))、成神经管细胞瘤(Pietsch等， Cancer Res.57：2085-88(1997))和胃癌(Ma等，Carcinogenesis May 19， (2005)(EPub))。

已经在散发性和家族性BCC中报道了功能异常的突变patched基因 的表达。在散发性成神经管细胞瘤、脑膜瘤、乳腺癌、食道鳞状细胞癌和 膀胱肿瘤中也已经发现Patched基因的突变或缺失(Oncogene(1998)17， 1167-1172)。

本发明的化合物能用于治疗或预防能由Smo拮抗而改善的病症。本 发明的化合物还可用于制造用于治疗或预防本文所述疾病的药物。

认为本文提供的化合物、组合物和方法对于癌症的治疗特别有用。可 以由本发明的化合物、组合物和方法治疗的癌症包括，但不限于，心脏的： 肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)，粘液瘤，横纹肌 瘤，纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管源癌(鳞状细胞、未分化小细 胞、未分化大细胞、腺癌)，肺泡(细支气管)癌，支气管腺瘤，肉瘤， 淋巴瘤，软骨瘤，错构瘤，间皮瘤；胃肠的：食道(鳞状细胞癌、腺癌、 平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰腺(导管胰腺 癌、胰岛瘤、良性肿瘤、Karposi肉瘤、平滑肌瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、 纤维瘤)，大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)，结 肠，结直肠，直肠；泌尿生殖道：肾(腺癌、Wilm肿瘤[肾胚细胞瘤]，淋 巴瘤，白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)，前列腺 (腺癌、肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜 癌、肉瘤、间隙细胞癌、纤维瘤、纤维腺癌、腺瘤肿瘤、脂肪瘤)；肝： 肝细胞瘤(肝细胞癌)，肝小胆管癌，肝母细胞瘤，血管肉瘤，肝细胞腺 癌，血管瘤；骨：骨原性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维性组织细 胞瘤，软骨肉瘤，Ewing肉瘤，恶性淋巴瘤(网状质细胞肉瘤)，多发性 骨髓瘤，恶性巨细胞肿瘤脊索癌，骨软骨瘤(骨软骨性外生骨疣)，良性 软骨瘤，成软骨细胞瘤，软骨粘液样纤维瘤，骨样骨瘤和巨细胞肿瘤；神 经系统：头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、畸形性骨炎)，脑膜(脑 膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质过多)，脑(星细胞瘤、成神经管细胞瘤、神 经胶质瘤、室鼓膜瘤、胚组织瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突 神经胶质瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)，脊髓神经纤维 瘤(脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科类的：子宫(子宫内膜癌)，子宫 颈(宫颈癌，前癌宫颈发育异常)，卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺瘤、粘液性 囊腺瘤、未分类癌]、颗粒状荚膜细胞肿瘤、Sertoli-Leydig细胞肿瘤、恶 性胚胎瘤、恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉 瘤、黑素瘤)，阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌)，葡萄状肉瘤(胚胎横纹 肌肉瘤)，输卵管(癌)；血液类：血(骨髓白血病[急性和慢性]、急性成 淋巴细胞白血病、急性淋巴球白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、 骨髓发育不良综合征)，霍金奇病，非霍金奇淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤： 恶性黑素瘤，基底细胞癌，鳞状细胞癌，Karposi肉瘤，发育不良痣，脂 肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕瘤，银屑病；和肾上腺：成神经瘤。因 此，术语本文提供的“癌细胞”包括遭受上述鉴别的病症中任何一种的细 胞。

在一个实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗或预防选自下述的 癌症：基底细胞癌，成神经管细胞瘤，前列腺、胰腺、乳腺、结肠、小细 胞肺癌，肉瘤，淋巴瘤，白血病，胃肠癌，多发性骨髓瘤，神经胶质瘤和 肝细胞癌。可以由本发明的化合物治疗或预防的其他癌症包括非小细胞肺 癌、散发性和家族性的基底细胞癌、散发性成神经管细胞瘤、脑膜瘤、乳 腺癌、食道鳞状细胞癌和膀胱癌。

在实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗或预防选自下组的癌 症：前列腺、非小细胞肺癌，胃肠癌和膀胱癌。

已经表明刺猬通路的抑制可以改善银屑病的症状(Tas等， Dermatology 20q：126-131(2004)和US 2004/0072913)。

本发明提供式I化合物用于制造药物的用途，所述药物用于银屑病的 治疗或预防。

本发明还提供用于治疗或预防银屑病的方法，所述方法包括对需要该 方法的患者施用有效量的式I化合物或包含式I化合物的组合物。

已经表明，刺猬蛋白的激活可以刺激血管生成(Pola等，Nature Medicine 7(6)：706-711(2001)和Nagase等，Genes to Cells 10(6)：595-604 (2005))并且因此用作刺猬蛋白拮抗剂的化合物可以用作血管生成拮抗剂。

本发明提供式I化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗或预 防血管生成。

本发明还提供用于治疗或预防血管生成的方法，所述方法包含对需要 该方法的患者施用有效量的式I化合物或包含式I化合物的组合物。

由血管生成引起、由其支持或与其相关，能由式I的化合物治疗或预 防的疾病包括癌症、眼新生血管性疾病、与年龄有关的黄斑退化、糖尿病 性视网膜病变、早产儿视网膜病、角膜移植物排斥、新生血管性青光眼、 晶体后纤维增生症、流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏、长时间佩戴隐 形眼镜、异位角膜炎、上方角膜缘角结膜炎、翼状胬肉干燥角膜结膜炎、 Sjogren氏疾病、粉刺性红斑痤疮、泡性角结膜病(phylectenulosis)、梅毒、 分枝杆菌感染、脂变性、化学烧伤、细菌溃疡、真菌溃疡、单纯疱疹感染、 带状疱疹感染、原生虫感染、Kaposi肉瘤、Mooren溃疡、Terrien角膜边 缘性变性、边缘性角质层分离、类风湿关节炎、全身性狼疮、多动脉炎、 外伤、Wegeners结节病、巩膜炎、Stevens Johnson病、类天疱疮放射性角 膜切开术、角膜移植物排斥、类风湿性关节炎15、骨关节慢性炎症(例 如，溃疡性结肠炎或Crohn氏病)、血管瘤、Osler-Weber-Rendu病和遗传 出血性毛细管扩张。

在一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗和预防与patched功能 丢失有关的癌症。

在另一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗和预防与smoothened 功能获得有关的癌症。

式I的化合物也用作癌症治疗的化学和放射致敏剂。它们用于治疗已 经接受或正在接受或将要接受癌症治疗的哺乳动物。这些其他治疗包括化 学疗法、放射疗法、外科或免疫疗法，比如癌症疫苗。

本发明的化合物与治疗性、抗癌和/或放射治疗剂组合使用特别有效。 因此，本发明提供式I化合物与治疗性、抗癌和/或放射治疗剂的组合物， 同时、分别或顺序施用。本发明的化合物和其他抗癌剂能够加和或协同作 用。本化合物和其他抗癌剂的协同组合允许使用更低剂量的这些药剂中的 一种或两种和/或本化合物和其他抗癌剂中的一种或两种的更低频率用药 和/或更低频率地使用所述药剂能减轻与施用给受试者的药剂相关的任何 毒性，而不降低癌症治疗中所述药剂的作用。此外，协同作用可以导致这 些药剂在治疗癌症中的效果增强和/或降低与单独使用任何一种药剂有关 的任何有害反应或者不期望的副作用。

可以根据本领域已知的治疗规程施用治疗剂、抗癌剂和/或放射疗法。 对于本领域的技术人员显而易见的是，治疗剂、抗癌剂和/或放射疗法的 施用可以根据待治疗的疾病和抗癌剂的已知效果和/或对于该疾病的放射 疗法而变化。此外，根据熟练临床医生的知识，考虑观察到的所用治疗剂 (即，抗瘤剂或辐射)对患者的效果，并且考虑观察到的疾病对所用治疗 剂的响应，和观察到的不良反应，治疗规程(例如剂量和用药次数)可以 不同。

在一个实施方案中，式I的化合物可以与选自下组的一种或多种药剂 组合施用：抗炎剂、抗组织胺、抗癌剂、免疫调节剂、治疗用抗体和蛋白 激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶抑制剂。

在另一个实施方案中提供式I的化合物和抗癌剂的组合，用于同时、 单独或顺序施用。

用于与本发明的化合物组合使用的抗癌剂或化疗剂的实例可以在V.T. Devita和S.Hellman(编者)的Cancer Principles and Practice of Oncology， 第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers和WO 2006/061638中找到。本领域的普通技术人员将能根据药物的特性和涉及 的癌症分辨药剂的哪种组合有效。这些药剂包括下述：雌激素受体调节剂、 雄激素受体调节剂、类维生素A受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、 抗增殖剂、含异戊二烯基的-蛋白质转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制 剂和其他血管生成抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、细胞增 殖和存活信号传导的抑制剂、双磷酸盐、芳香化酶抑制剂、siRNA疗法、 γ-分泌酶抑制剂、干扰受体酪氨酸激酶(RTK)的药剂和干扰细胞循环检查 点的药剂。WO 2006/061638中提供了这些药剂的实例。

适用于本发明的组合疗法的抗癌剂包括，但不限于：1)生物碱类，其 包括微管抑制剂(例如，长春新碱、长春碱和长春地辛等)，微管稳定剂 (例如，紫杉酚[紫杉醇]，和多烯紫杉醇，泰索帝等)，和染色质功能抑制 剂，其包括，拓扑异构酶抑制剂，比如，表鬼臼毒素(例如，表鬼臼毒素 吡喃葡糖苷[VP-161，和表鬼臼毒噻吩糖苷[VM-261等)，和靶向拓扑异构 酶I的药剂(例如，喜树碱和伊力替康[CPT-111等)；2)共价的DNA结 合剂[烷基化剂]，其包括氮芥(例如，Mechloretharnine，苯丁酸氮芥，环 磷酰胺、异环磷酰胺和白消安[马勒兰]等)，亚硝基脲(例如，亚硝基脲氮 芥，环己亚硝脲和甲基环己亚硝脲等)，和其它烷基化剂(例如，氮烯唑 胺，羟甲基三聚氰胺，噻替哌和丝裂霉素等)；3)非共价的DNA结合剂[抗 肿瘤抗生素]，其包括核酸抑制剂(例如，放线菌素[放线菌素D1等)，蒽 环霉素(例如，道诺红霉素[道诺霉素和柔红霉素]，阿霉素[亚德里亚霉素]， 和依达比星[依达霉素]等)，蒽二酮(例如，蒽环霉素类似物，比如，[米 托蒽醌]等)，博莱霉素(争光霉素)，等，和普卡霉素(光神霉素)，等； 4)抗代谢物，其包括抗叶酸剂(例如，甲氨蝶呤，脱叶亚磷和甲氨蝶呤 钠等)，嘌呤抗代谢物(例如，6-巯基嘌呤[6-MP，巯基嘌呤]，6-硫鸟嘌呤 [6-TG]，硫唑嘌呤，阿昔洛韦，更昔洛韦，氯化脱氧腺苷，2-氯化脱氧腺 苷[CdA]，和2’-脱氧助间型霉素[喷司他丁]，等)，吡啶拮抗剂(例如，氟 吡啶[例如，5-氟尿嘧啶(氟尿嘧啶)，5-氟脱氧尿苷(FdUrd)(氟脲苷)等])， 和阿糖胞苷(例如，赛德萨[ara-C]和氟达拉滨，等)；5)酶，包括L-天冬 酰胺酶；6)激素，包括，糖皮质激素，比如，抗雌激素(例如，他莫西 芬，等)，非甾体类抗雄激素(例如，氟他胺，等)，和芳香化酶抑制剂(例 如，阿那曲唑[安美达]，等)；7)铂化合物(例如，顺铂和卡铂，等)；8) 与抗癌药物结合的单克隆抗体，毒素和/或放射性核素，等；9)生物响应 改善剂(例如，干扰素[例如，IFN-α，等]和白细胞介素[例如，IL-2，等])； 10)认养免疫疗法；11)造血生长因子；12)诱导肿瘤细胞分化的药剂(例 如，全反式视黄酸，等)；13)基因疗法技术；14)反义疗法技术；15)肿 瘤疫苗；16)指向肿瘤移位变化的疗法(例如，Batimistat，等)；17)血 管生成的抑制剂和激酶抑制剂。

在一个实施方案中，作为第二种化合物使用的血管生成抑制剂选自下 述化合物：酪氨酸激酶抑制剂，表皮来源生长因子的抑制剂，成纤维来源 生长因子的抑制剂，血小板来源的生长因子的抑制剂，MMP(基质金属 蛋白酶)抑制剂，整合素阻滞剂，干扰素-α，白细胞介素-12，戊聚糖聚 硫酸盐，环氧酶抑制剂，羧胺三唑，combretastatin A-4，角鲨胺，6-O-氟 乙酰基-羰基)-夫马菌素醇，萨拉多胺，厄洛替尼，肌钙蛋白-1，或对VEGF 的抗体。在一个实施方案中，雌激素受体调节剂是他莫西芬或雷洛昔芬。

用于本发明的组合疗法的合适的治疗抗体包括指向HER2蛋白质的 抗体，比如曲妥珠单抗；指向生长因子或生长因子受体的抗体，比如贝伐 单抗，其靶向血管内皮生长因子，和OSI-774，其靶向表皮生长因子；靶 向整合素受体的抗体，比如Vitaxin(也称作MEDI-522)，等。

在一个实施方案中，提供治疗或预防基底细胞癌、胰腺癌、前列腺癌、 肉瘤、淋巴瘤、白血病、胃肠癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、神经胶质 瘤、乳腺癌、肝细胞癌，或成神经管细胞瘤的方法，所述方法包含向有需 要的患者施用有效量的式I化合物，所述化合物与另一种抗癌剂组合使用。

在一个实施方案中，提供治疗或预防银屑病的方法，所述方法包含对 有需要的患者施用有效量的式I化合物，所述化合物与一种或多种其他抗 银屑病剂，包括但不限于皮质激素，焦油，卡泊三醇，他扎罗汀，钙调磷 酸酶抑制剂，紫外辐射，甲氨蝶呤，类维生素A，环磷酰胺，免疫调节药 物，依那西普，阿法赛特，依法利珠和因福利美组合使用。

式I的化合物可以与放射疗法组合使用。短语“放射疗法”指电磁或 微粒子辐射在肿瘤的治疗中的使用，并且包括离子化和非离子化辐射的使 用。

本发明的化合物可以与抗呕吐剂结合使用，以治疗恶心或呕吐，包括 急性、延迟、晚期和预期的呕吐，其可能由于单独或与放射疗法一起使用 本发明的化合物而引起。为了预防或治疗呕吐，本发明的化合物可以与其 它抗呕吐剂结合使用，特别是神经激肽-1受体拮抗剂，5HT3受体拮抗剂， 比如昂丹司琼、格拉司琼、托烷司琼和扎托司琼，GABAB受体激动剂， 比如氯苯氨丁酸，皮脂类固醇如地塞米松(甲氟烯索)，口内膏，曲安西 龙，鼻松，布地奈德，Benecorten或其它比如美国专利2,789,118、2,990,401、 3,048,581、3,126,375、3,929,768、3,996,359、3,928,326和3,749,712中所 公开的，抗多巴胺药，比如吩噻嗪(例如普鲁氯嗪，氟非那嗪，甲硫哒嗪 和美索哒嗪)，灭吐灵或屈大麻酚。在另一个实施方案中，公开了结合选 自下述的抗呕吐剂的疗法用于治疗或预防呕吐，其可能是由于施用本化合 物而引起的：神经激肽-1受体拮抗剂，5HT3受体拮抗剂和皮质类固醇。

本发明的化合物也可以与用于治疗贫血的药剂一起施用。这样的贫血 治疗剂是，例如，连续红血球生成受体激活剂(比如依泊亭α)。

本发明的化合物也可以与用于治疗嗜中性白血球减少症的药剂一起 施用。这样的嗜中性白血球减少症治疗剂是，例如，调节中性白细胞的产 生和功能的造血生长因子，比如人粒细胞群落刺激因子，(G-CSF)。G-CSF 的实例包括非格斯亭。

本发明的化合物也可以与siRNA疗法组合，用于治疗或预防癌症。

本发明的化合物也可以与下述治疗剂组合，用于治疗癌症：阿巴瑞克 ()；阿地白介素()；阿地白介素()；阿伦 单抗()；阿利维A酸()；别嘌呤醇()；六甲 蜜胺()；氨磷汀()；阿那曲唑()；三氧化砷 ()；天门冬酰胺酶()；阿扎胞苷()；贝伐单抗 ()；蓓萨罗丁胶囊()；蓓萨罗丁凝胶()；博莱 霉素()；硼替唑米()；静脉内用白消安()； 口服白消安()；卡鲁睾酮()；卡培他滨()；卡 铂()；亚硝基脲氮芥()；卡莫斯汀()； 卡莫斯汀与聚苯丙生20植入物()；赛来昔布()； 西妥昔单抗()；苯丁酸氮芥()；顺铂()；克拉屈 滨()；克罗拉滨()；环磷酰胺()；环磷酰胺()；环磷酰胺()；阿 糖胞苷()；阿糖胞苷微脂体()；氮烯唑胺 ()；更生霉素，放线菌素D()；Darbepoetin alfa ()；道诺红霉素微脂体()；道诺红霉素，道诺霉素 ()；道诺红霉素，道诺霉素()；Denileukin diftitox ()；右丙亚胺()；多烯紫杉醇()；阿霉素 ()；阿霉素()；阿霉素(Adriamycin PFS)；阿霉素微脂体()；屈他雄酮丙酸酯 ()；屈他雄酮丙酸酯(MASTERONE )；Elliott氏B溶液(Elliott′s B)；表柔比星 ()；依泊亭α()；埃罗替尼()；雌氮芥()； 表鬼臼毒素吡喃葡糖苷磷酸盐()；表鬼臼毒素吡喃葡糖苷， VP-16()；依西美坦()；非格斯亭()；氟脲 苷(动脉内)()；氟达拉滨()；氟尿嘧啶，5-FU()； 氟维斯群()；吉非替尼()；吉西他滨()；吉妥单 抗()；乙酸戈舍瑞林()；乙酸戈舍瑞林 ()；乙酸组胺瑞林()；羟基脲()；伊莫 单抗()；依达比星()；异环磷酰胺()；甲磺酸伊 马替尼()；干扰素α2a()；干扰素α-2b()； 伊力替康()；来那度胺()；来曲唑()；甲酰 四氢叶酸()；乙酸亮脯利特()；左咪唑 ()；环己亚硝脲，CCNU()；meclorethamine，氮芥 ()；乙酸甲地孕酮()；美法仑，L-PAM()； 巯基嘌呤，6-MP()；美司那()；美司那()； 甲氨蝶呤()；甲氧西林()；丝裂霉素C ()；米托坦()；米托蒽醌()；苯丙酸诺 龙()；奈拉滨()；诺莫单抗()；奥普瑞白 介素()；奥沙利铂()；紫杉酚()；紫杉酚 ()；紫杉酚蛋白结合粒子()；palifermin()；帕 米磷酸钠()；培加酶(Adagen)；培门冬酶 ()；聚乙二醇非格斯亭()；培美曲塞二钠()； 喷司他丁()；哌泊溴烷()；普卡霉素，光神霉素 ()；卟吩姆钠()；丙卡巴肼()；奎纳克林 ()；拉布利酶()；利妥普()；沙格司亭()； 沙格司亭()；索拉非尼()；链脲菌素()；马来酸 舒尼替尼()；滑石()；他莫西芬()；替莫唑胺 ()；替尼泊苷，VM-26()；睾内酯()；巯鸟嘌呤， 6-TG()；噻替哌()；拓扑替康()；托瑞 米芬()；托西莫单抗()；托西莫单抗/I-131托西莫单抗 ()；曲妥珠单抗()；维甲酸，ATRA()；脲氮 芥(Uracil Mustard)；戊柔比星()；长春碱()；长 春新碱()；长春瑞滨()；伏林司他()和唑来磷 酸()。

术语“施用”和其变形(例如，“给药”化合物)针对本发明的化合 物时表示将所述化合物或化合物的前体药物导入需要治疗的动物系统。当 本发明的化合物或其前体药物与一种或多种其它活性药剂(例如，细胞毒 性剂等)组合提供时，“施用”及其变形各自应理解为包括同时和顺序导 入化合物或其前体药物和其它药剂。

如本文所使用的，术语“组合物”意欲覆盖以特定量包含特定组分的 产品，以及直接或间接地由特定量的特定组分组合而成的任何产品。

如本文所使用的，术语“治疗有效量”指活性化合物或药物药剂的量， 其引起组织、系统、动物或人体内的生物或医学响应，所述响应可以为研 究者、兽医、药师或其他临床医生发现。

术语“治疗癌症”或“癌症的治疗”指对遭受癌症病症的哺乳动物施 用，并且指通过杀死癌细胞而改善癌症病症的效果，也指导致癌的生长抑 制和/或转移的效果。

在未描述中间产物和起始材料的合成时，这些化合物为商业可提供或 者能通过标准方法或本文上述合成、路线和实施例的外延，由商业可提供 化合物生成的化合物。

式I的化合物可以由已知方法或本文实施例中所述方法转化成式I的 其它化合物。

在本文所述的任何合成顺序中，必要和/或合意的是保护任何相关分 子上的敏感或活性基团。这可以由常规的保护基团实现，比如Protecting Groups in Organic Synthesis，第3版，Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.；Wiley Interscience，1999和Kocienski，P.J.Protecting Groups，Thieme，1994中描述 的那些。保护基团可以在便利的后续阶段使用本领域已知的方法去除。例 如，当存在Boc(叔丁氧基羰基)或苯甲基羰基保护基团时，可以通过在 大约室温加入溶剂比如TFA、DCM和/或MeCN而去除。化合物还可以使 用标准方法氢化，比如用催化剂如Pd/C处理，处理在溶剂如甲醇中在氢 气氛下进行。在存在HCl和1，4-二氧杂环己烷时，也可以在大约室温加入 EtOAc去除Boc或苯甲基羰基保护基团。

当本发明的化合物具有手性中心时，可以通过标准的分离方法比如使 用SFC，从外消旋混合物中分离对映体。

发现本文所述并由下文所述实验测试的示例性化合物的IC₅₀值小于 25μM。

叙述中所用缩写：

AIBN：2，2’-偶氮双异丁腈；BOC：叔丁氧基羰基；9-BBN：9-硼双 环[3.3.1]壬烷；Bn：苯甲基；nBuLi：正丁基锂；Cbz：苯甲氧基羰基；CDI： 1，1’-羰基二咪唑；MeOTf：三氟甲磺酸甲酯；(COCl)₂：草酰氯；DAST： (二乙基氨基)三氟化硫；DCM：二氯甲烷；DIEA：二异丙基乙胺；DMAP： 4-(二甲基氨基)吡啶；DMC：2-氯-1，3-二甲基咪唑啉氯化物；DMF：N，N- 二甲基甲酰胺；Et：乙基；Et₃N：三乙胺；EtOAc：乙酸乙酯；EtOH：乙 醇；Et₂Zn：二乙基锌；FCS：胎牛血清；HATU：O-(7-氮杂苯并三 唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯；Me：甲基；MeCN：乙腈；MeOH： 甲醇；mCPBA：间氯过氧苯甲酸；MS：质谱；NaOAc：乙酸钠；NBS： N-溴代丁二酰亚胺；PBS：磷酸盐缓冲盐水；Ph：苯基；PyBROP：溴三 吡咯烷基鏻六氟磷酸酯；PPh₃：三苯基膦；pyr：吡啶；SOCl₂：亚硫酰氯； TFA：三氟乙酸；TFFH：N，N，N’，N’-四甲基甲脒六氟磷酸酯；THF：四氢 呋喃；TLC：薄层色谱；和TsOH：对甲基苯磺酸；

Shh-LightII报告子(reporter)实验

为在相同孔中测定萤火虫和海肾(renilla)荧光酶而设计的实验。

实验前，将Shh-Light II细胞(ATCC目录号CRL-2795)在生长培养 基中培养。

实验规程：

第-1天：在存在DMSO/抑制剂的情况下，以75μL/孔，将60,000个 Shh-Light II细胞接种于实验培养基中。

第0天：在37℃，10％CO₂下过夜培育后，加入处于水中的3μM Purmorphamine(Calbiochem 540220)。

第1天：在37℃，10％CO₂下培育30小时后，直接在生长培养基中 的细胞上进行实验。

-加入75μl DualGlow荧光酶试剂(Promega，E2940)

-在暗处培育10分钟

-由PerkinElmer的光度计TopCount读板

-加入75μl DualGlow Stop&Glow

-在暗处培育10分钟

-由PerkinElmer的光度计TopCount读板

-输出为萤火虫/海肾读数的比例

生长培养基：

用于生长：

DMEM：Dulbecco’s Mod Eagle培养基，具有0.11G/L Pyr，具有吡多 辛(GIBCO目录号41966-029)。培养基补加有10％FCS(胎牛血清)、1％ 青霉素-链霉素(10mg/ml)(GIBCO，15140-114)和1％L-谷氨酰胺200MM (100x)(GIBCO，3042190)和0.4mg/ml G418(Roche)和0.15mg/ml博莱霉 素(Invitrogen R-250-01)。细胞在10％CO₂下培养。

用于实验：

DMEM：Dulbecco’s Mod Eagle培养基，具有0.11G/L Pyr，具有吡多 辛(GIBCO目录号21063-045)，不含酚红。培养基补加有2％FCS(胎牛 血清)、1％青霉素-链霉素(10mg/ml)(GIBCO，15140-114)和1％L-谷氨 酰胺200MM(100x)(GIBCO，3042190)。细胞在10％CO₂，DMSO 0.25％ 下培养。

SHH Smo结合实验

在转染的Cos7细胞中，我们能测量SMO配体环杷明-氟硼荧 (BODIPY)的结合。

实验规程：

第-1天：在10cm培养皿中接种3,500,000个Cos7细胞。

第0天：用Lipofectamine 2000(Invitrogen)和质粒pSMO-Myc转染细 胞。5小时后，将细胞接种于96孔板中的生长DMEM(10％FCS)中；每 100μl孔中15,000个细胞。

第1天：转染后24小时，将培养基换成实验DMEM(不含酚红，2％ FSC)，并加入化合物/DMSO 0.5％。在37℃，5％CO₂下培育。

第2天：16小时后，以终浓度50nM加入环杷明-氟硼荧(Toronto Research Chemical，B674800)。在37℃，5％CO₂下培育4小时。然后细胞 与3.5％甲醛100μl/孔固定(fix)10分钟。用PBS洗涤细胞3次，并用 1.5μM碘化丙啶将核染色。在Acumen Explorer上读数。

-生长培养基：

用于生长：

DMEM：GIBCO Dulbecco’s Mod Eagle培养基，具有0.11G/L Pyr， 具有吡多辛(GIBCO目录号41966-029)。培养基补加有10％FCS(GIBCO， 10106-169)、1％青霉素-链霉素(10mg/ml)(GIBCO，15140-114)和1％L- 谷氨酰胺200MM(100x)(GIBCO，3042190)。细胞在5％CO₂下培养。

用于实验：

DMEM：GIBCO Dulbecco’s Mod Eagle培养基，具有0.11G/L Pyr， 具有吡多辛(GIBCO目录号21063-045)，不含酚红。培养基补加有2％ FCS(GIBCO，10106-169)、1％青霉素-链霉素(10mg/ml)(GIBCO，15140-114) 和1％L-谷氨酰胺200MM(100x)(GIBCO，3042190)。细胞在5％CO₂， DMSO 0.5％下培养。

对鼠科动物成神经管细胞瘤细胞的抗增殖活性

使用原代、异体移植-扩展的鼠科动物成神经管细胞瘤细胞，测定Smo 拮抗剂抑制细胞增殖的能力。与已经建立的肿瘤细胞系相反，外植后， HH通路在这些细胞中保持活性，并且肿瘤保持对于HH通路激活其存活/ 增殖的特异性依赖。在不存在或存在合成的Smo竞争剂的情况下确定抑 制50％细胞生长所需的浓度(CC₅₀)。

由外植肿瘤获得成神经管细胞瘤(Oncogene(2002)21，7580-7584)， 并以100,000个细胞/mL的浓度再悬浮于NPMM中，并以5000个细胞/ 孔在100μLNPMM中的终浓度接种于96孔微孔板中。在不存在或存在 0.3μM合成的竞争剂的情况下，以连续的稀释度相对于7个点加入Smo 拮抗剂(0.03-25μM的浓度范围，0.25％DMSO)。然后在5％CO₂下，在 37℃培育细胞96小时，并在加入BrdU后再培育24小时。然后固定细胞， 并处理细胞，按照制造商的说明，使用BrdU化学发光免疫试剂盒(Roche Applied Science目录号11669915001)检测引入了DNA的BrdU。使用Top Count设备(Perkin Elmer)测定信号，并根据在存在增加浓度的拮抗剂时的 残余BrdU结合体确定CC₅₀值。

来自本发明的化合物能以剂量依赖方式抑制成神经管细胞瘤细胞增 殖。通过加入选择性的Smo竞争剂可以克服这种阻断，说明由于这些细 胞中HH信号传导的干扰，增殖抑制是选择性的。在不存在竞争剂时测定 的CC₅₀是0.3μM，而加入竞争剂使CC₅₀转移至大于30μM。对于本发明 的狭窄范畴中的所有其它结构相关的化合物，可以合理地预期其具有相似 的活性。

Smo拮抗剂对于皮下植入的原代小鼠成神经管细胞瘤异种移植物的生长的作用

在体内评价了来自本发明的化合物抑制刺猬信号传导依赖型肿瘤的 生长的能力。使用异体移植模型，用来自出生后经过辐射的Ptch-1杂合小 鼠的原代成神经管细胞瘤。

将来自出生后接受辐射的Ptch-/+小鼠小脑的成神经管细胞瘤肿瘤 (Oncogene(2002)21，7580-7584)经皮下在体内连续传代。对于本研究， 将肿瘤外植，并在存在50％Matrigel的情况下，将成神经管细胞瘤细胞的 单细胞悬浮液皮下注射入5周大的免疫系统较弱的小鼠体内。当肿瘤的平 均体积到达150mm³时，随机选取小鼠并口服用0.5％甲基纤维素稀释的 本发明化合物，每日一次40mg/kg或80mg/kg，或者每日两次80mg/kg。 仅用相同体积的载体处理对照小鼠。每周测定两次肿瘤体积。

这个实验证明，来自本发明的化合物在40和80mg/kg/天的剂量引起 了肿瘤生长的抑制，并且在每日两次80mg/kg的剂量引起了肿瘤收缩。

在本发明的狭窄范畴内，可以合理地预期所有其它结构相关的化合物 具有相似的活性。

实施例1

5-(1，1-二氟乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑(1-H)

步骤A：

在氮气氛下将4-(甲氧羰基)双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸1-A(Chapman，N. B.等，J.Org.Chem.，1970，35，917)(4.0g，18.9mmol)溶于12mL无水二氯 甲烷中，用草酰氯(二氯甲烷中2M，28mL，56mmol)处理，然后用0.5 ml DMF处理。在氮气氛下室温搅拌反应物90分钟，然后蒸发并在真空 放置20分钟。将酰基氯溶于无水二氯甲烷(75mL)，冰浴冷却，然后用甲 胺溶液(THF中2M，57mL，113mmol)滴加处理。一旦加入胺，去除 冷却浴，在环境温度搅拌反应30分钟。用1000mL二氯甲烷稀释混合物， 并用1N盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。在无水硫酸钠上 将有机层干燥并蒸发。通过快速硅胶色谱纯化产物，用0-5％MeOH/CH₂Cl₂梯度洗脱，得到白色固体4-[(甲基氨基)羰基]双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸甲酯 1-B。MS(ESI⁺)＝226.2(M+1)。

步骤B：

将4-[(甲基氨基)羰基]双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸甲酯1-B(2.76g，12.3 mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，并向产生的溶液加入草酰氯(DCM中2.0 M，15.3ml)，然后加入DMF(0.19ml，2.45mmol)。然后在氮气下室温搅 拌反应混合物2小时，然后将反应混合物浓缩并用甲苯气提3次。将残余 物重新溶于甲苯(100ml)中，用5-[2-(三氟甲基)苯基]-1H-四唑(3.15g，14.7 mmol)处理，并在氮气下回流12小时。将作为盐酸盐由反应混合物沉淀出 来的产物1，2，4-三唑1-C溶于DCM中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次， 干燥(MgSO₄)并气提，得到白色固体。MS(ESI+)＝394.2(M+1)；¹H NMR (500MHz，CDCl₃)：δ2.00(6H，m)，2.18(6H，m)，3.48(3H，s)，3.72(3H，s)， 7.51(1H，m)，7.71(2H，m)，7.85(1H，m)ppm。

步骤C：

在氮气氛下在60℃用KOH(0.51g，9.0mmol)处理甲酯1-C(1.19g，3.0 mmol)的5％H₂O/MeOH(30ml)溶液18小时。将产生的混合物浓缩，用水 (150ml)稀释，用EtOAc洗涤并用盐酸水溶液(1N)酸化至pH＝3。将沉淀 过滤，用小量水和醚洗涤，并在真空下干燥，得到粉色固体(4-{4-甲基 -5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸(1-D))。 ¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ2.00(6H，m)，2.17(6H，m)，3.55(3H，s)， 7.62(1H，m)，7.85(2H，m)，7.96(1H，m)ppm。

步骤D：

将一份固体4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环 [2.2.2]辛烷-1-羧酸(1-D，0.67g，1.77mmol)悬浮于CH₂Cl₂(15ml)中，并在 氮气氛下室温用1’，1’-羰基二咪唑(0.57g，3.54mmol)处理。2小时后，加入 浓缩的氢氧化铵(40ml)并搅拌反应物18小时。用水(150ml)稀释粗混合物 并用3份CH₂Cl₂(70ml)萃取。将有机洗涤液合并，用盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥，并在减压下去除溶剂，产生白色粉末甲酰胺1-E。MS(ESI⁺)＝379.3 (M+1)。

步骤E：

在氮气氛下室温搅拌甲酰胺1-E(0.64g，1.7mmol)和氰尿酰氯(0.47g， 2.53mmol)的DMF(15ml)溶液。2小时后，在真空中去除DMF，并将固 体重新溶于CH₂Cl₂(100ml)中，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，干燥 (Na₂SO₄)，并在减压下去除溶剂，得到浅黄色固体腈1-F。MS(ESI⁺)＝361.3 (M+1)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.15(6H，m)，2.22(6H，m)，3.47(3H， s)，7.51(1H，m)，7.72(2H，m)，7.87(1H，m)ppm。

步骤F：

在80℃加热腈1-F(0.56g，1.6mmol)和羟胺(50％水溶液，4ml)的 乙醇(40ml)溶液18小时。将得到的混合物冷却至室温并在真空中浓缩。 将固体悬浮于甲苯中，在真空中去除溶剂，并在减压下干燥固体(1-G)， 不经过进一步纯化而在下一步骤中使用。MS(ESI⁺)＝394.3(M+1)。

步骤G：

向2，2-二氟丙酸(0.84g，7.63mmol)和N′-羟基-4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲 基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛烷-1-甲脒(carboximidamide) (1-G)(1.0g，2.54mmol)的无水DMF溶液(30ml)中加入HATU(2.93g，7.63 mmol)，然后加入DIEA(2.2ml，12.7mmol)。在室温搅拌得到的混合物48 小时，然后加热至110℃3小时。冷却至室温后，在减压下去除溶剂。将 残余物溶于乙酸乙酯中，用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。通过柱色谱纯 化粗产物，用100％乙酸乙酯作为洗脱液，得到白色粉末1-H。MS(ESI⁺)＝ 468.3(M+1)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.10-2.34(15H，m)，3.57(3H， s)，7.73-7.75(3H，m)，7.86(1H，m)ppm。Shh-Light II实验：IC₅₀：在5μM 时抑制率为35％。

实施例2

5-(3，3-二氟环丁基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑(2-E)

步骤A：

将3-氧代环丁烷羧酸(2-A)(1.0g，10.0mmol)溶于无水乙醇(25mL)中， 并加入碳酸铯(1.66g，5.1mmol)。在氮气下在室温搅拌4小时后，将反应 混合物浓缩。将残余物再溶于无水乙腈(50ml)中，并用溴化苄(1.2ml，10.0 ml)处理。在氮气下室温搅拌混合物12小时。然后在减压下去除溶剂，并 使残余物在乙酸乙酯和水之间分配。用硅胶色谱纯化粗产物，用100％己 烷到96％己烷/乙酸乙酯的梯度洗脱，得到2-B。¹H NMR(500MHz， CDCl₃)：δ3.30-3.48(5H，m)，5.22(2H，s)，7.37-7.41(5H，m)ppm。

步骤B：

将3-氧代环丁烷羧酸苯甲酯(2-B)(1.23g，6.03mmol)溶于二氯甲烷(35 ml)中。在氮气下加入DAST(8.0ml，6.03mmol)，然后加入无水乙醇(0.4ml， 7.23mmol)。将反应混合物搅拌12小时，然后用二氯甲烷稀释，顺序用饱 和碳酸氢钠、1N盐酸水溶液和盐水洗涤。使有机层通过无水硫酸钠而干 燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱纯化粗产物，用93％己烷/乙酸乙酯作为 洗脱液，得到油状的2-C。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.81-2.93(4H，m)， 3.01-3.04(1H，m)，5.20(2H，s)，7.36-7.42(5H，m)ppm。

步骤C：

将3，3-二氟环丁烷羧酸苯甲酯(2-C)(0.84g，3.72mmol)溶于乙醇(40ml) 中，并加入活性炭上的约20mg钯。在氮气氛下室温将混合物搅拌12小 时，然后通过C盐垫而过滤。浓缩滤液，并在真空中干燥，得到2-D。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.86-2.93(4H，m)，3.02-3.04(1H，m)ppm。

步骤D：

向预搅拌的3，3-二氟环丁烷羧酸2-D(166mg，1.22mmol)和羰基二咪 唑(198mg，1.22mmol)的CH₂Cl₂(8ml)溶液中加入N′-羟基-4-{4-甲基 -5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛烷-1-甲脒(1-G) (120mg，0.305mmol)。在室温将得到的混合物搅拌48小时，然后浓缩。 将固体重悬于甲苯中，并在氮气氛下回流3小时。通过C-18反相HPLC 纯化产物，用包含0.1％TFA的30-80％乙腈/水洗脱，得到白色粉末2-E。 MS(ESI⁺)＝494.2(M+1)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.09(6H，m)，2.31 (6H，m)，3.03-3.11(4H，m)，3.57-3.61(4H，m)，7.56(1H，m)，7.71(2H，m)， 7.86(1H，m)ppm。Shh-Light II实验：IC₅₀：1.4μM。

实施例3

5-(1-氟-1-甲基乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑(3-A)

在氮气氛下室温将2-甲基-2-氟丙酸(108mg，1.02mmol)和1’1’-羰基 二咪唑(144mg，0.888mmol)的无水DMF(2.5ml)溶液搅拌30分钟。向其中 加入N’-羟基-4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2.4-三唑-3-基}双环 [2，2，2]辛烷-1-甲脒(1-G)(139.5mg，0.355mmol)，并在N₂下过夜搅拌溶液。 在加热单元中在100℃将反应物加热1.5小时。在真空中去除DMF，并将 固体重新溶于CH₃CN(4ml)中。通过C-18反相色谱纯化产物，用10-90％ CH₃CN(0.1％TFA)/水(0.1％TFA)洗脱。去除溶剂，并且残余物拾取至DCM 中，由饱和碳酸氢钠水溶液形成游离碱(free-based)。使有机层通过MgSO₄而干燥并过滤。用CH₃CN/水代替溶剂，并冻干，产生白色固体5-(1-氟-1- 甲基乙基)-3-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环 [2.2.2]辛-1-基)-1，2，4-噁二唑(3-A)。MS(ESI⁺)＝464.13(M+1)。¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)：δ7.89-7.85(m，1H)，7.75-7.69(m，2H)，7.55(t，1H)，3.52 (s，3H)，2.30(dd，6H)，2.15(dd，6H)，1.90(s，3H)，1.86(s，3H)。Shh-Light II实验：IC₅₀：4.2μM。

实施例4

2-(1，1-二氟乙基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑(4-B)

步骤A：

将酸1-D(1.0g，2.64mmol)溶于DMF(30mL)中，并加入TFFH(0.84g， 3.18mmol)，然后加入三乙胺(0.88ml，6.34mmol)和无水肼(0.12ml，3.95 mmol)。在氮气下室温将混合物搅拌12小时。然后在减压下将反应混合物 浓缩以去除DMF。将残余物拾取至乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠和盐 水洗涤。在无水硫酸钠上干燥有机层，过滤并浓缩。在用于下个步骤之前， 通过与甲苯共蒸发几次而进一步干燥产物(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯 基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛烷-1-羰酰肼，4-A)。

MS(ESI⁺)＝394.2(M+1)。

步骤B：

将4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛 烷-1-羰酰肼(4-A)(334mg，0.850mmol)和2，2-二氟丙酸(78mg，0.708mmol) 的混合物悬浮于二氯甲烷中，并加入固体DMC(1.2g，7.08mmol)。在氮气 下室温将混合物搅拌48小时，然后用二氯甲烷稀释，用水、饱和碳酸氢 钠和盐水洗涤。通过柱色谱纯化粗产物，得到白色固体4-B。MS(ESI⁺)＝ 468.3(M+1)；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ2.15-2.33(15H，m)，3.52(3H， s)，7.61(1H，m)，7.72(2H，m)，7.85(1H，m)ppm。Shh-Light II实验：IC₅₀： 9.3μM。

实施例5

2-(3，3-二氟环丁基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑(5-A)

步骤A：

使用实施例4的步骤B中所述方法，由酰肼4-A(119mg，0.303mmol) 和3，3-二氟环丁烷羧酸(49.4mg，0.363mmol)制备三唑5-A。在用C-18反 相HPLC纯化两次(分别用20-80％和25-50％乙腈/水洗脱，包含0.1％TFA) 后分离得到白色粉末2-(3，3-二氟环丁基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯 基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑(5-A)。MS(ESI⁺) ＝494.2(M+1)。Shh-Light II实验：IC₅₀：2μM。

实施例6

2-(1-氟-1-甲基乙基)-5-(4-{4-甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1-基)-1，3，4-噁二唑(6-B)

步骤A：

在氮气氛下室温将2-甲基-2-氟丙酸(70mg，0.66mmol)和1’1’-羰基二 咪唑(107mg，0.66mmol)的无水DMF溶液(2ml)搅拌30分钟。向该溶液中 加入酰肼4-A(200mg，0.509mmol)，并在N₂下过夜搅拌溶液。在真空中 去除DMF，并用一些DMSO将固体重新溶解于CH₃CN(4ml)中。通过C-18 反相色谱纯化产物，用10-90％CH₃CN(0.1％TFA)/水(0.1％TFA)洗脱。在 真空中去除溶剂，并将产物由DCM和饱和碳酸氢钠水溶液游离碱化。在 MgSO₄上干燥有机层并过滤。去除溶剂，得到产物6-A。MS(ESI⁺)＝482.30 (M+1)。

步骤B：

向步骤A中获得的材料中加入甲苯(3mL)和亚硫酰氯(2mL)，并备有 回流浓缩器，在氮气下将溶液加热至85℃。1小时后在减压下去除溶剂， 并将残余物溶于甲苯中，甲苯在减压下去除。将残余物溶于CH₃CN(4ml)， 并通过C-18反相色谱纯化产物，用10-90％CH₃CN(0.1％TFA)/水(0.1％ TFA)洗脱。在真空中去除溶剂，并将产物从DCM和饱和碳酸氢钠水溶液 游离碱化。用盐水洗涤有机层，在MgSO₄上干燥，并过滤。去除溶剂， 并冻干产物中的CH₃CN和水，得到白色固体2-(1-氟-1-甲基乙基)-5-(4-{4- 甲基-5-[2-(三氟甲基)苯基]-4H-1，2，4-三唑-3-基}双环[2.2.2]辛-1- 基)-1，3，4-噁二唑(6-B)。MS(ESI⁺)＝463.98(M+)；¹H NMR(500MHz， CDCl₃)：δ7.89-7.85(m，1H)，7.76-7.70(m，2H)，7.58(s，1H)，3.53(s， 3H)，2.32(dd，6H)，2.20(dd，6H)，1.92(s，3H)，1.87(s，3H)。