取代苯丙烯基哌嗪基烷基多羟基苯甲酰胺化合物及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及通式(I)表示的(E)－N－3－(4－取代苯丙烯基哌嗪－1－基)烷基苯甲酰胺化合物或其盐，其中，R

说明书

技术领域

本发明涉及(E)-N-3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺化合物和它们的盐、其制备方法以及其在制备HIV-1整合酶抑制剂中的应用。

背景技术

艾滋病是一种逐步摧毁人体免疫系统并严重威胁人类健康和生存的重大传染性疾病。自1981年首次发现以来，在世界范围内迅速蔓延，截至2008年底，全球存活的HIV-1感染人数共有3320万，2008年新增感染人数为250万，死亡210万，累计全球HIV/AIDS约7000万人。

属于逆转录酶病毒的HIV-1(人类免疫缺陷性病毒-I型)是引起AIDS(获得性免疫缺陷综合症，艾滋病)的病毒。

HIV-1以CD4阳性细胞群例如辅助T细胞、巨噬细胞和树突状细胞等为目标，并且破坏这些免疫活性细胞，导致免疫缺陷。

因此，根除体内HIV-1或抑制其生长的药物可以有效的治疗或预防AIDS。

HIV-1附着并侵袭宿主细胞，导致脱壳，并在细胞质中释放RNA与整合酶的复合物等。逆转录酶由RNA转录DNA，并产生全长的双链DNA。DNA被引入宿主细胞核，并通过整合酶整合到宿主细胞的DNA中。整合的DNA被宿主细胞的聚合酶转化成mRNA，并由该mRNA通过HIV-1蛋白酶等合成形成病毒所需的各种蛋白质，最终形成病毒颗粒，然后进行该病毒颗粒的出芽和释放。

据认为，这些病毒特异酶是HIV-1生长所必需的。这些酶作为开发抗病毒药物的靶标，吸引了人们的注意力，而且已经开发出若干种抗HIV-1药物。例如，市场上作为逆转录酶抑制剂出售的齐多夫定(Retrovir，AZT)、拉米夫定(Epivir，3TC)、司它夫定(Zerit，d4T)、去羟肌苷(Videx)等，及作为蛋白酶抑制剂的茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir)等。

另外，广泛应用于治疗艾滋病的“高效抗逆转录病毒疗法(HAART)”能延缓发病，可明显降低死亡率，例如，临床上已经联合使用两种逆转录酶抑制剂(齐多夫定和去羟肌苷)，及联合使用逆转录酶抑制剂(齐多夫定和拉米夫定)及蛋白酶抑制剂(奈非那韦)的三种药剂等。(参见The HIV-1 trial guide：a guide to major studies，trials and acronyms of HIV-1 antiretroviraltherapy(1985-2004)，Boehringer Ingelheim，2004)。

然而，一些目前正在使用的药物会导致诸如肝功能衰竭、中枢神经紊乱(如眩晕)等副作用。另外，但长期使用会产生严重抗药性等问题。更糟糕的是，已经了解到HIV-1在多种药物联合疗法中表现出多重耐药性。

在这种情况下，需要进一步地开发新的药物，特别是开发基于新的靶标的抗HIV-1新药，HIV-1整合酶与逆转录酶和蛋白酶一样，是HIV-1 pol基因产物，在人类细胞中又无整合酶的功能类似物，所以整合酶是一个寻找治疗HIV-1药物的理想靶点。Raltegravir是由美国默克公司开发的HIV-1-整合酶抑制剂，FDA已于2007年10月批准上市，商品名Isentress，是药理学上首个HIV-1整合酶抑制剂的抗逆转录病毒药物，它通过抑制病毒复制所需的HIV-1整合酶减缓HIV-1感染的发生(Clinical Therapeutics，2008，30(10)，1747-1765)。已经报道的整合酶抑制剂主要有肽类、羟基化芳香族化合物、核苷酸类、二酮酸类及其他抑制剂。目前，二酮酸类为研究最为成功的一类，作用机制可能是与底物DNA竞争性结合至整合酶的活性位点，抑制整合过程的链转移反应。

CN 1482116A(公开日：2004.3.17)公开了咖啡酰萘磺酰胺类化合物用于HIV-1整合酶抑制剂的应用。

在“多羟基芳香族化合物对HIV-1整合酶的抑制作用”(药学学报，2002，37(4)：253)一文中报道了双羟基-1，4-萘醌对HIV-1整合酶有抑制活性。

WO 03/35076(公开日：2003.05.01)公开了一些5，6-二羟基嘧啶-4-羧酰胺用作HIV-1整合酶抑制剂和WO 03/35077(公开日：2003.05.01)公开了一些N-取代5-羟基-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-4-羧酰胺用作HIV-1整合酶抑制剂。

发明内容

本发明的目的是提供(E)-N-3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺化合物或其盐及其制备方法和其在制备HIV-1整合酶抑制剂中的应用。

本发明提供了式(I)表示的(E)-N-3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺化合物或其盐，

其中，R¹、R²、R³表示-H、-OH、-ONa、-OK或-ONH₄，优选R¹、R²、R³表示-OH、-ONa或-OK，R¹、R²、R³相同或不同，R⁴、R⁵表示-H、卤素、C_1-3烷基、-OH、-ONa、-OK、-ONH₄、-NO₂或-CN，优选R⁴、R⁵表示-F、-Cl、-CH₃、-CH(CH₃)₂、-OH、-ONa、-OK或-NO₂，R⁴、R⁵相同或不同，n为1-3的整数。

本发明化合物或它们的盐，无论是与或不与其它HIV/AIDS抗病毒药物联合，均对HIV-1整合酶具有显著的抑制作用，因而可以作为治疗艾滋病药物的有效成分。

本发明所提供的(E)-N-3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺化合物或其盐的制备方法，当R¹、R²、R³表示-H或-OH，R¹、R²、R³相同或不同，R⁴、R⁵表示-H、卤素、C_1-3烷基、-OH、-NO₂或-CN，R⁴、R⁵相同或不同，n为1-3的整数时，包括以下步骤：

(a)以式(II)表示的多取代苯甲酰氯和以式(III)表示的氯代烷基氨的盐酸盐在有机溶剂和碱的作用下反应，式(II)和式(III)化合物的物质的量比为1∶3～5，反应温度0～60℃，反应时间8～15小时，得到式(IV)表示的N-氯代烷基取代苯胺，

其中，R⁶、R⁷、R⁸表示-H或C_1-3烷氧基，n为1～3的整数；

(b)将式(IV)化合物与哌嗪在有机溶剂中，在催化剂碘化钾和碱的作用下反应，式(IV)化合物与哌嗪的物质的量比为1∶5～10，反应温度50～110℃，反应时间8～15小时，得到式(V)表示的N-哌嗪基烷基多取代苯甲酰胺，

其中，R⁶、R⁷、R⁸表示的基团同上所述；

(c)将式(V)化合物与式(VI)表示的取代苯丙烯酰氯在有机溶剂和碱的作用下反应，式(V)和式(VI)化合物的物质的量比为1∶1.2～1.4，反应温度0～60℃，反应时间8～12小时，得到式(VII)表示的(E)-N-(3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺，

其中，R⁶、R⁷、R⁸表示的基团同上所述，R⁹、R¹⁰表示-H、卤素、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、-NO₂或-CN，R⁹、R¹⁰相同或不同，n为1～3的整数；

(d)将式(VII)化合物在有机溶剂中与脱保护试剂反应，式(VII)化合物与脱保护试剂的物质的量比为1∶2～10，反应时间1～5小时，反应温度0～50℃，然后再水解脱除烷基，水解温度0～40℃，时间0.5～2小时，最后得到式(I)化合物。

上文步骤(a)中所述的有机溶剂为卤代烃、芳烃、酮或它们的混合溶剂，优选氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯或丙酮；所述的碱为无机碱或有机碱，优选吡啶、叔胺、碳酸氢钠或碳酸氢钾。

上文步骤(b)中所述的有机溶剂为卤代烃、芳烃、酮、酯或它们的混合溶剂，优选氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯、丙酮或乙酸乙酯；所述的碱为无机碱或有机碱，优选吡啶、叔胺、碳酸钠或碳酸钾。

上文步骤(c)中所述的有机溶剂为卤代烃、芳烃、酮或它们的混合溶剂，优选氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、丙酮或甲苯；所述的碱为无机碱或有机碱，优选叔胺、碳酸氢钠或碳酸氢钾。

上文步骤(d)中所述的脱保护试剂为BBr₃乙醚溶液或BF₃乙醚溶液。化合物(VII)与脱保护试剂的物质的量比优选1∶4～6。反应温度优选20～30℃。所述的有机溶剂为醚、卤代烃、芳烃、酮或它们的混合溶剂，优选乙醚、氯仿、二氯甲烷、丙酮或甲苯。

通过上述方法得到的式(I)化合物形成盐时，还包括以下步骤：

式(I)化合物与无机碱在有机溶剂和水中反应，式(I)化合物与无机碱的物质的量比为1∶2～6，反应时间为1～3小时，反应温度为0～60℃。

所述的无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾或浓氨水。有机溶剂为醇、醚或酮，优选甲醇、乙醇、乙醚或丙酮。式(I)化合物与无机碱的物质的量比优选1∶2～4。反应温度优选25～50℃。

本发明所述(E)-N-3-(4-取代苯丙烯基哌嗪-1-基)烷基苯甲酰胺化合物的盐是指其钾盐、钠盐或铵盐。

本发明方法使用工业上普通的试剂和常规的生产条件，反应条件温和，步骤简单。

具体实施方式

实施例1

(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)将0.03mol的3-氯丙胺盐酸盐，加入到三口瓶中，再加入30mL的经无水处理过的二氯甲烷，向3-氯丙胺盐酸盐的二氯甲烷溶液滴加10mL的三乙胺溶液，搅拌反应半小时后，再在0℃下滴加0.01mol的3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯的二氯甲烷溶液，滴加完毕后，撤去冰浴，常温反应过夜。反应体系分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2mol/L的盐酸溶液和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，分离出有机相并用无水硫酸钠干燥，真空脱溶即可得到N-3-氯丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺，产率：88％。

(b)N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

室温下向N-3-氯丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(0.01mol)的三氯甲烷溶液中加入哌嗪(0.05mol)，K₂CO₃(0.01mol)和催化量的碘化钾，加热至回流，反应8-10小时后冷却至室温，过滤，减压蒸馏脱除溶剂，残留物柱层析纯化得到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺，产率：58％

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.76-1.82(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.45(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，2.50-2.54(m，2H，-CH₂-N-)，2.86(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.54-3.57(m，2H，-NH-CH₂-)，3.89(s，3H，CH₃O-Ph)，3.91(s，6H，CH₃O-Ph)，7.04(s，2H，Ph)，7.67(b，1H，NH).

(c)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：75％熔点：99-103℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.81-1.87(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.52-2.58(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.54-3.58(m，2H，-NH-CH₂-)，3.70(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.88(s，3H，CH₃O-Ph)，3.90(s，6H，CH₃O-Ph)，6.84(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.03(s，2H，Ph)，7.15(b，1H，NH)，7.35-7.53(m，5H，Ph)，7.67(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O).

ESI-MS：m/z＝468.1[M+H]⁺

(d)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g(E)-N-(3-(4-取代苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：40％ 熔点：178-181℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.99(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.83(s，2H，Ph)，7.29(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.39-7.45(m，3H，Ph)，7.54(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.73-7.46(m，2H，Ph)，8.22(s，1H，NH)，8.69(s，1H，HO-Ar)，9.01(s，2H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝426.0[M+H]⁺，448.0[M+Na]⁺

(e)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺的钠盐制备

取0.10g(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺溶于10mL的乙醇中，常温下，向溶液中缓慢加入4倍量的1molL^-1的氢氧化钠溶液，加热至50℃反应3小时，脱除溶剂后在乙醇中重结晶。

实施例2

(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例1

(c)(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的对甲基肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将对甲基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：66％  熔点：129-132℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.81-1.84(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.36(s，3H，CH₃-Ph)，2.48-2.54(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂- of piperazine)，3.52-3.57(m，2H，-NH-CH₂-)，3.68(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.87(s，3H，CH₃O-Ph)，3.89(s，6H，CH₃O-Ph)，6.80(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.04(s，2H，Ph)，7.17(d，2H，³J＝8.0Hz Ph)，7.31(b，1H，NH)，7.41(d，2H，³J＝8.0Hz Ph)，7.63(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O).

(d)(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：72％ 熔点：170-174℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.95(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.33(s，3H，CH₃-Ph)，3.11(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.24-3.27(m，2H，-NH-CH₂-)，3.47(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.84(s，2H，Ph)，7.22-7.23(m，2H，PH)，7.26(d，1H，³J＝12.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.52(d，1H，³J＝12.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.63(d，2H，³J＝8.0Hz，Ph)，8.23-8.26(t，1H，³J＝5.6Hz，NH)，8.72(s，1H，HO-Ar)，9.04(s，2H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝440.0[M+H]⁺

(e)(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺的钠盐制备

取0.10g(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺溶于10mL的乙醇中，常温下，向溶液中缓慢加入3倍量的1molL^-1的氢氧化钠溶液，加热至50℃反应3小时，脱除溶剂后在乙醇中重结晶。

实施例3

(E)-N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例1

(c)(E)-N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

向3.8mmol的对氯肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将对氯苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为淡黄色固体，产率：60％  熔点：120-122℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.96-2.04(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.72(b，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.60(b，2H，-NH-CH₂-)，3.70-3.81(m，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.88(s，3H，CH₃O-Ph)，3.92(s，6H，CH₃O-Ph)，6.79(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.11(s，2H，Ph)，7.35(d，2H，³J＝8.0Hz Ph)，7.45(d，2H，³J＝8.0Hz Ph)，7.63(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O).

(d)(E)-N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BF₃的乙醚溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：37％  熔点：152-157℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.11(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.25-3.29(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.84(s，2H，Ph)，7.22(s，1H，Ph)，7.34(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.48-7.50(m，2H，Ph)，7.54(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.79(d，2H，³J＝8.0Hz，Ph)，8.23(s，1H，NH)，8.70(s，1H，HO-Ar)，9.02(s，2H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝460.5[M+H]⁺

实施例4

(E)-N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例1

(c)(E)-N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的邻氯肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将邻氯苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为浅黄色固体，产率：70％  熔点：93-95℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.82-1.85(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.54(b，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.54-3.57(m，2H，-NH-CH₂-)，3.63-3.75(m，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.88(s，3H，CH₃O-Ph)，3.92(s，6H，CH₃O-Ph)，6.82(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.02(s，2H，Ph)，7.15(m，1H，-NH-)，7.25-7.28(m，1H，Ph)，7.40-7.42(m，1H，Ph)，7.56-7.59(m，1H，Ph)7.98(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O).

(d)(E)-N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL-1的BF₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：44％  熔点：168-171℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.11(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.25-3.29(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.83(s，2H，Ph)，7.36(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.40-7.53(m，4H，Ph)，7.84(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.02-8.04(m，1H，Ph)，8.22(s，1H，NH)，8.71(s，1H，HO-Ar)，9.04(s，2H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝460.5[M+H]⁺

实施例5

(E)-N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例1

(c)(E)-N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

向3.8mmol的邻硝基肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将邻硝基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为棕色固体，产率：58％  熔点：99-101℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.84-1.88(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.56-2.61(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.54-3.58(m，2H，-NH-CH₂-)，3.72(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.88(s，3H，CH₃O-Ph)，3.90(s，6H，CH₃O-Ph)，6.67(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.04(s，2H，Ph)，7.12(b，1H，NH)，7.49-7.64(m，3H，Ph)，7.90(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.02-8.04(m，2H，Ph).

ESI-MS：m/z＝513.1[M+H]⁺，535.0[M+Na]⁺

(d)(E)-N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入8倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：74％  熔点：153-158℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.34(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.84(s，2H，Ph)，7.33(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.64-7.69(m，1H，Ph)，7.79(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.79-7.83(m，1H，Ph)，8.03-8.07(m，2H，Ph)，8.24(t，1H，NH)，8.70(s，1H，HO-Ar)，9.03(s，2H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝471.0[M+H]⁺

IR(KBr)(υ_max/cm^-1)3436(ν_OH，NH，CH)，1641(ν_{C＝O，C＝C，C-N})，1523(ν_as N＝O)，1443(δ_-CH，-NH-)，1346(ν_s N＝O，δ_＝C-H).

实施例6

(E)-N-(3-(4-间羟基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例1

(c)(E)-N-(3-(4-间甲氧基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺的制备

在0℃下，向4.2mmol的间甲氧基肉桂酸加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将间甲氧基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

3mmolN-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺、3mmol的DCC的DMF溶液中缓慢滴加HOBt(3mmol)的DMF溶液，滴加完后撤去冰浴，常温反应30个小时。除去溶剂DMF，残留物用二氯甲烷溶解，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸去二氯甲烷，残留物经柱层析分离纯化。

纯品为黄色固体，产率：57％  熔点：111-114℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.86(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.58(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.56(m，2H，-NH-CH₂-)，3.72(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.83(s，3H，m-CH₃O-Ph)，3.88(s，3H，CH₃O-Ph)，3.90(s，6H，CH₃O-Ph)，6.82(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.90-7.12(m，4h，Ph)，7.06(s，2H，Ph)，7.31(b，1H，NH)，7.62(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O).

(d)(E)-N-(3-(4-间羟基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-间甲氧基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：58％  熔点：156-160℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.26-3.29(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.55(b，2H，-CH₂-N-)，6.80-6.83(m，1H，Ph)，6.84(s，2H，Ph)，7.09-7.10(m，1H，Ph)，7.80(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.14-7.23(m，2H，Ph)，7.44(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.79-7.83(m，1H，Ph)，8.03-8.07(m，2H，Ph)，8.24(s，1H，NH)，8.71(s，1H，HO-Ar)，9.03(s，2H，HO-Ar)，9.55(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝442.0[M+H]⁺

IR(KBr)(υ_max/cm^-1)3436(ν_OH，NH，CH)，1642(ν_{C＝O，C＝C，C-N})，1446(δ_-CH，-NH-)，1346(δ_＝CH).

实施例7

(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

(a)将0.03mol的3-氯丙胺盐酸盐，加入到三口瓶中，再加入30mL的经无水处理过的二氯甲烷，向3-氯丙胺盐酸盐的二氯甲烷溶液滴加10mL的三乙胺溶液，搅拌反应半小时后，再在0℃下滴加0.01mol的3，4-二甲氧基苯甲酰氯的二氯甲烷溶液，滴加完毕后，撤去冰浴，常温反应过夜。反应体系分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2mol/L的盐酸溶液和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，分离出有机相并用无水硫酸钠干燥，真空脱溶即可得到N-3-氯丙基-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，产率：91％。

(b)N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

室温下向N-3-氯丙基-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(0.01mol)的三氯甲烷溶液中加入哌嗪(0.05mol)，K₂CO₃(0.01mol)和催化量的碘化钾，加热至回流，反应8-10小时后冷却至室温，过滤，减压蒸馏脱除溶剂，残留物柱层析纯化得到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，产率：78％

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.77-1.84(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.42(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，2.50-2.54(m，2H，-CH₂-N-)，2.88(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.54-3.57(m，2H，-NH-CH₂-)，3.87(s，3H，CH₃O-Ph)，3.89(s，3H，CH₃O-Ph)，7.04(s，3H，Ph)，7.67(b，1H，NH).

(c)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：68％  熔点：185-187℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.79(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.60(b，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.29-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.72(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.79(s，3H，CH₃O-Ph)，3.80(s，3H，CH₃O-Ph)，6.99(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.25-7.53(m，8H，Ph)，7.71(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.54(b，1H，NH).

ESI-MS：m/z＝438.0[M+H]⁺

(d)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g(E)-N-(3-(4-取代苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：64.5％  熔点：153-157℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.15(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.26-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.47(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.55(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.19-7.42(m，5H，Ph)，7.54(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.73-7.75(m，2H，Ph)，8.31(s，1H，NH)，9.09(s，1H，HO-Ar)，9.49(s，1H，HO-Ar).

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ＝166.9，165.0，148.9，145.3，142.9，135.4，130.2，129.2，128.6，126.0，119.4，118.0，115.6，115.3，54.4，51.6，36.9，24.6.

ESI-MS：m/z＝410.0[M+H]⁺

IR(KBr)(υ_max/cm^-1)3436(ν_OH，NH，CH)，1643(ν_{C＝O，C＝C，C-N})，1514(δ_-NH-，-CH)，1437(δ_＝CH).

(e)(E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺的钠盐制备

取0.10g (E)-N-(3-(4-苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺溶于10mL的乙醇中，常温下，向溶液中缓慢加入3倍量的1molL^-1的氢氧化钠溶液，加热至50℃反应3小时，脱除溶剂后在乙醇中重结晶。

实施例8

(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例7

(c)(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的对甲基肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将对甲基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：74％  熔点：203-208℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.76(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.30(s，3H，CH₃-Ph)，2.50(b，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.33(m，2H，-NH-CH₂-)，3.61(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.78(s，3H，CH₃O-Ph)，3.80(s，3H，CH₃O-Ph)，6.99(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.18-7.52(m，7H，Ph)，7.59(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.57(s，1H，NH).

(d)(E)-N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-对甲基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：87％ 熔点：150-154℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.97(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.33(s，3H，CH₃-Ph)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.26-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.56(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.54(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.19-7.29(m，5H，Ph)，7.51(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.63(d，2H，³J＝8.0Hz，Ph)，8.31(s，1H，NH)，9.09(s，1H，HO-Ar)，9.50(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝424.0[M+H]⁺

IR(KBr)(υ_max/cm^-1)3435(ν_OH，NH，CH)，1643(ν_{C＝O，C＝C，C-N})，1514(δ_-NH-，-CH)，1439(δ_＝CH).

实施例9

N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例7

(c)(E)-N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的对氯肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将对氯苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：62％ 熔点：178-182℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ2.19(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.05(b，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.33(m，2H，-NH-CH₂-)，3.65(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.92(s，3H，CH₃O-Ph)，3.98(s，3H，CH₃O-Ph)，6.75(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.91(d，1H，³J＝12.0Hz，Ph)，7.36(d，2H，³J＝8.0Hz，Ph)，7.45(d，1H，³J＝8.0Hz，Ph)，7.59(s，1H，Ph)，7.66(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.13(b，1H，NH).

(d)N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-对氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BF₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：34％，熔点：160-164℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.95(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.19-7.29(m，2H，Ph)，7.34(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.45-7.80(m，5H，Ph)，8.32(s，1H，NH)，9.10(s，1H，HO-Ar)，9.51(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝444.5[M+H]⁺

实施例10

(a)、(b)步骤同实施例7

(c)(E)-N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.0mmol的邻氯肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将邻氯苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为浅黄色固体，产率：64％ 熔点：177-180℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ2.24(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.82-3.16(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.59-3.64(m，2H，-NH-CH₂-)，3.91(s，3H，CH₃O-Ph)，3.96(s，3H，CH₃O-Ph)，4.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O ofpiperazine)，6.77(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.89(d，1H，³J＝8.0Hz，Ph)，7.26-7.65(m，6H，Ph)，8.03(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.32(b，1H，NH).

(d)(E)-N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-邻氯苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：58％  熔点：148-151℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.99(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.57(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.19-7.55(m，6H，Ph)，7.86(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.03-8.05(m，1H，Ph)，8.32(s，1H，NH)，9.10(s，1H，HO-Ar)，9.50(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝444.5[M+H]⁺

实施例11

N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例7

(c)(E)-N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.2mmol的邻硝基肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将邻硝基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为白色固体，产率：60％  熔点：130-132℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ2.18(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.84-3.15(m，6H，-CH₂-N-，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.58(m，2H，-NH-CH₂-)，3.86(s，3H，CH₃O-Ph)，3.89(s，3H，CH₃O-Ph)，4.09(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O ofpiperazine)，6.66(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.83(d，1H，³J＝8.0Hz，Ph)，7.48-7.58(m，5H，Ph)，7.88(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.96-7.98(m，1H，Ph)，8.28(b，1H，NH).

(d)N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g N-(3-(4-邻硝基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：63％  熔点：168-170℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.99(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.57(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.19-7.55(m，6H，Ph)，7.86(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.03-8.05(m，1H，Ph)，8.32(s，1H，NH)，9.10(s，1H，HO-Ar)，9.50(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝455.0[M+H]⁺

实施例12

(E)-N-(3-(4-间羟基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

(a)、(b)步骤同实施例7

(c)(E)-N-(3-(4-间甲氧基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺的制备

向4.2mmol间甲氧基肉桂酸中加入10mL的二氯亚砜，回流4～5小时后减压脱除过量的二氯亚砜，冷却后加入15mL的二氯甲烷备用。

将3mmol的NaHCO₃加到N-3-(哌嗪-1-基)丙基-3，4，-二甲氧基苯甲酰胺(3mmol)的二氯甲烷溶液中，再将间甲氧基苯丙烯酰氯的二氯甲烷溶液在0℃下缓慢滴加到搅拌的溶液中，1小时后撤去冰浴，静置过夜，再分别用30mL饱和NaHCO₃溶液、30mL的2molL^-1的盐酸和30mL的饱和食盐水溶液洗涤，用分液漏斗分出有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸溜脱除溶剂二氯甲烷，残留物经过柱层析分离纯化。

纯品为黄色固体，产率：55％  熔点：172-174℃

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ1.73(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，2.48(m，6H，-CH₂-N，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.38(m，2H，-NH-CH₂-)，3.60(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，3.68(s，3H，m-CH₃O-Ph)，3.78(s，6H，CH₃O-Ph)，6.72(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，7.47(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.91-7.39(m，7H，Ph)，7.78(b，1H，NH).

(d)(E)-N-(3-(4-间羟基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)-丙烷基)-3，4-二羟基苯甲酰胺制备

取0.10g(E)-N-(3-(4-间甲氧基苯丙烯酰基哌嗪-1-基)丙烷基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺溶于20mL的二氯甲烷中，常温下，向溶液中缓慢加入10倍量的1molL^-1的BBr₃的二氯甲烷溶液，反应3小时后再缓慢滴加40mL的水，继续反应半小时，过滤后获得粗品，柱层析分离提纯。

纯品为白色固体，产率：34％  熔点：159-163℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)：δ1.91-1.95(m，2H，-CH₂-CH₂-CH₂-)，3.12(b，4H，-(CH₂)₂-N-CH₂-of piperazine)，3.27-3.31(m，2H，-NH-CH₂-)，3.57(b，4H，-(CH₂)₂-N-C＝O of piperazine)，4.56(b，2H，-CH₂-N-)，6.77(d，1H，³J＝8.0Hz，CH＝CH-C＝O)，6.81-7.30(m，7H，Ph)，7.45(d，1H，³J＝16.0Hz，CH＝CH-C＝O)，8.33(s，1H，NH)，9.10(s，1H，HO-Ar)，9.50(s，1H，HO-Ar)，9.56(s，1H，HO-Ar).

ESI-MS：m/z＝423.0[M+H]⁺

实施例13

整合酶链转移反应抑制活性测定

反应在96孔板中进行，总体积为50μL，反应缓冲液为：25mmol/L PIPES，pH 7.0，5％glycerol，0.1g/L BSA。将待测样品和800ng整合酶在反应缓冲体系中37℃孵育20min，随后，加入终浓度为10mmol/L的MnCl₂、1.5pmol供体DNA和15pmol靶DNA，在37℃反应1h。加入51.5μL结合缓冲液(10mmol/LTris-HCl，pH 7.6，2mol/L NaCl，20mmol/L EDTA，0.1％Tween 20)和1.5μL磁珠，混匀后20℃孵育15min。将微孔板置于磁珠收集器上90s，弃上清。PBST洗板3次。加入100μL以PBS 1∶5000稀释的碱性磷酸酶标记的地高辛抗体，37℃孵育30min，PBST洗板3次，将磁珠转移至新的微孔板中，加入100μL显色底物(0.1mol/L Na₂CO₃，pH 9.5，6.7mmol/L PNPP，2mmol/L MgCl₂)，测定405nm处OD值。设置不加入样品的DMSO阴性对照，以25μmol/L的baicalein为标准，其活性测定结果见表1。

表1  化合物抑制整合酶活性测定结果

阳性对照，计算样品抑制率和IC₅₀值。(详细方法见H.Q.He et al.ActaPharma-cologica Sinica 2008，29(3)：397-404.)