强阳保肾药物在制备防治骨质疏松症药物中的应用

摘要

本发明公开了强阳保肾药物在制备防治骨质疏松症药物中的应用。该强阳保肾药物能够改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量，防止老龄动物和人性激素水平的降低等，具有抗衰老和增强性腺功能等功效。

说明书

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是强阳保肾药物在制备防治骨质疏松症药物中的应用。本发明通过动物实验和临床研究证明了强阳保肾丸在制备防治骨质疏松症药物中的新用途。

背景技术

目前，现代医学防治骨质疏症常用性激素及氟化物等，存在价格昂贵，毒副作用多，远期疗效不肯定等缺点。中医理论认为“肾为先天之本”、“肾生骨髓”、“其充在骨”。骨生长发育强劲衰弱与肾精盛衰密切相关，肾精充足则髓生化有源，骨骼得以滋养而强健有力；肾精亏虚则骨髓生化无源，骨骼失养而痿弱无力。从根本上认识到肾虚是骨质疏松的主要病机。中医防治骨质疏松主张辩证分型，如励氏主张分为肾气虚、肾阳虚、肾阴虚和肾阴阳俱虚四型；古龙飞主张分为肾阴亏血俱虚、肾阳亏虚及气滞血瘀四型；魏之玉等将此病分为肾虚、脾虚、肝郁和其它四型等。

强阳保肾丸由淫羊藿、阳起石、肉丛蓉、五味子、胡芦巴、补骨脂、芡实、小茴香、远志、沙苑子、蛇床子、覆盆子、韭菜子、肉桂、茯苓等中药组成，收载于中国药典和国家基本药物目录，具有补肾助阳的功效，用于肾阳不足所致的腰酸腿软、精神倦怠、阳痿遗精等。经检索目前尚无在骨质疏松方面的研究报道。

发明内容

本发明所述之强阳保肾药物具有改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量，提高性激素水平等新的药理作用。

基于上述新药理作用，本发明所述之强阳保肾药物可以是丸剂、片剂、胶囊或颗粒剂。它用于预防和治疗骨质疏松症，具有抗衰老和增强性功能等功效。

强阳保肾药物的有效成分由以下十五味原料组成：淫羊藿(炙)36重量份、阳起石(煅)36重量份、肉丛蓉(酒制)36重量份、五味子(醋制)42重量份、胡芦巴(盐炙)48重量份、补骨脂(盐炙)48重量份、芡实(麸炒)60重量份、小茴香(盐炙)30重量份、远志(甘草制)36重量份、沙苑子36重量份、蛇床子36重量份、覆盆子48重量份、韭菜子42重量份、肉桂24重量份、茯苓36重量份。

本发明的优点在于，提供了一种具有疗效确切、廉价的防治骨质疏松症的中成药，所述之强阳保肾药物是历史悠久、疗效确切的中成药，副作用少，资源丰富，制作工艺简易，质量稳定可控。该方能够改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量，防止老龄动物和人性激素水平的降低等，具有抗衰老和增强性腺功能等功效。

具体实施方式

实施例1

强阳保肾丸的制备方法如下：

取淫羊藿(炙)36g、阳起石(煅)36g、肉丛蓉(酒制)36g、五味子(醋制)42g、胡芦巴(盐炙)48g、补骨脂(盐炙)48g、芡实(麸炒)60g、小茴香(盐炙)30g、远志(甘草制)36g、沙苑子36g、蛇床子36g、覆盆子48g、韭菜子42g、肉桂24g、茯苓36g，备用。

以上十五味，粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥。每1000g用滑石粉111g包衣，再用朱砂粉末28g、滑石粉111g研均匀，包外衣，打光，干燥，即得。本处方还可采用部分提取处理，制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型。

实施例1所得的强阳保肾丸在防治去睾大鼠骨质疏松的实验研究

雄激素减少是老年男性骨质疏松的重要发病原因之一。本研究采用8月龄雄性大鼠去睾复制的肾虚骨质疏松症模型，用不同剂量的强阳保肾丸进行防治，并与特乐定(Tridin)进行比较研究，旨在探讨强阳保肾丸治疗男性骨质疏松症的疗效机理，为强阳保肾丸的进一步开发研究提供科学的依据。

一、材料与方法

1.材料

(1)药物  强阳保肾丸，广州白云山和记黄埔中药有限公司生产，批号F6A001。

特乐定(Tridin)由意大利Rotta药厂提供，批号：20050224，该药用于治疗骨质疏松症已载入欧洲各国药典。

(2)动物  选用8月龄雄性SD大鼠60只，体重280-300g，广东省卫生厅实验动物中心提供，合格证号：05A018。

2.实验方法

(1)造模方法  将60只实验动物随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、强阳保肾丸高、中、低剂量组和特乐定组。各组大鼠均以3％戊巴比妥钠按1ml/kg体重腹腔注射麻醉后，正常对照组行假手术，其余各组大鼠均从腹侧入路行完整双侧睾丸摘除术。

(2)饲养及给药途径  术后第3天开始给药，正常对照组、模型组每天以蒸馏水6ml/kg灌胃，特乐定组给予特乐定60mg/kg灌胃，使用前配成混悬液，强阳保肾丸高、中、低剂量组每天分别给予高、中、低剂量强阳保肾丸灌胃。所有大鼠均在同等条件下喂养，自由摄水，控制食量。

3.观察指标

(1)骨密度检测  各组大鼠于处死前2天在麻醉下用美国HOLOGIG公司QDR-2000型双能X线吸收仪(变异系数(CV)＜1.0％)扫描全身骨矿含量及骨密度，并分别取右股骨和左股骨下端两个敏感点。

(2)血清生化指标的测定造模前及处死动物前分别取血离心后备用，放射免疫分析法测定血睾酮(T)、IL-6和BGP含量。IL-6、BGP试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供，T放免试盒由天津DPC公司提供，测量仪器为BECKMAN DP5500型Υ计数器。

统计学处理  所有数据均采用均数±标准差(X±SD)表示，用SPSS统计软件进行分析，组间比较用方差分析，显著性差异用q检验。

二、结果

1.服用各剂量强阳保肾丸及特乐定防治的去睾大鼠全身及左、右股骨密度及骨矿含量均高于模型组，差异有显著性(p＜0.05-0.01)。

表1：强阳保肾丸对去势大鼠BMD变化的影响(X±SD)n＝10

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**p＜0.01

表2：强阳保肾丸对去势大鼠BMC变化的影响(X±SD)n＝10

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01

2.各组间去睾前血睾酮(T)含量无显著性差异(p＞0.05)，去睾后4个月，强阳保肾丸高、中剂量组明显高于模型组，差异有显著性(p＜0.05)。

表3：强阳保肾丸对去睾大鼠睾酮(T)含量的影响(X±SD)n＝10

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01

3.各组间手术前血清IL-6含量无差别(p＞0.05)，术后给药4个月后，模型组明显高于正常组(p＜0.01)，而中药防治的三个组及特乐定则明显低于模型组(p＜0.05-p＜0.01)。

表4：强阳保肾丸对去睾大鼠血清IL-6含量的影响(X±SD)

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01

4.各组间手术前血清BGP含量无差别(p＞0.05)，术后给药4个月后，模型组明显高于正常组(p＜0.01)，而强阳保肾丸防治的三个组及特乐定则明显低于模型组(p＜0.05-p＜0.01)。

三.结论

本实验结果显示，使用强阳保肾丸防治的各组大鼠，左、右侧股骨骨密度和骨矿含量等项指标明显高于模型组，差异具有显著性和非常显著性意义。表明强阳保肾丸可明显抑制去睾大鼠造成的骨质丢失，提高去睾大鼠的骨密度和骨矿含量。动物研究的结果证实，雄激素能够刺激骨形成增加。强阳保肾丸高、中剂量组血睾酮含量明显高于模型组(p＜0.01)，证明强阳保肾丸防治骨质疏松很可能与其提高血睾酮含量有关。同时中药组血清IL-6含量明显低模型组，更进一步说明强阳保肾丸防止骨丢失的可能机理为使体内雄激素含量升高，从而抑制IL-6分泌细胞的分泌，降低IL-6水平，使骨吸收速度受到抑制，起到防治骨质疏松的作用。

实施例1所得的强阳保肾丸在防治雌性去卵巢(OVX)大鼠骨质疏松的实验研究

材料与方法

1.材料

(1)药物

药物强阳保肾丸，广州白云山和记黄埔中药有限公司生产，批号F6A001。仙灵骨葆胶囊(贵州同济堂制药有限公司生产，批号：050601)每次3粒，每日2次，

IL-6检测试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所提供，批号：070344；

E2检测试剂盒，北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号：070226。

(2)动物  选用12月龄，清洁级、SD雌性大鼠72只，体重(390±20g)，由中山医科大学实验动物中心提供。予普通饲料喂养，参照AIN-93M啮齿类动物饲料配方，用适当的物质替换饲料中来源于大豆的成分，以避免大豆异黄酮等植物激素对实验结果的干扰。自由摄水，照明昼夜明暗交替时间为12-12，适应性喂养7天。

(3)仪器  日本NORLAND双能骨密度测量仪，变异系数CV＜0.1％，扫描次数2次。上海日环一厂SN-695B型智能放免γ测量仪。CV＜1.19％

2.方法  造模方法参照文献，大鼠经腹腔注射30mg/kgBW的戊巴比妥钠溶液麻醉，腹位固定后于腹中线距阴道口3-4cm去毛，分别用碘酒和酒精消毒，将稍干后切开皮肤和腹肌约2-3cm，切口视野可见白色脂肪，拨开脂肪层找到子宫后，轻轻将一测子宫角拉出，在其末端可见被脂肪团包裹的卵巢。分离脂肪团，便可见到粉红的卵巢，以止血钳夹住卵巢，然后将卵巢下输卵管(包括脂肪)用丝线结扎，剪除卵巢(检查是否完全剪除)，顺势将子宫角送回腹腔中，同法剪除另侧卵巢。腹肌和皮肤分层缝合后，再次消毒。最后经后肢肌肉注射2万U青霉素。假手术对照组(10只)开腹剪除一小块脂肪后缝合。术后5天，动物恢复后开始分组给药，分组情况见表。每天灌胃给药一次，一周给药6天，共给药16周。试验期间，继续按照普通饲料喂养及饮水。

3.观察指标

(1)血清生化等指标的测定造模16周后股动脉取血，血样本经处理后，分离血清，各组随机取10个样品进行放射免疫法测定血清雌二醇(E2)、白介素-6(IL-6)；完整取出右侧股骨，剥离干净，称湿重。分离子宫，称重。计算每100g体重的子宫指数以及股骨指数。

(2)骨密度将取出的右侧股骨用日本NORLAND双能骨密度测量仪，扫描测量骨密度及骨矿含量。

结果

1.骨密度的变化

由表5可见，去卵巢16周后，卵巢切除组大鼠右股骨骨密度和骨矿密度均明显低于假手术对照组，差异有显著性(P＜0.01)，表明造模成功。与卵巢切除组比较，强阳保肾丸中剂量组和大剂量组也可明显提高OVX大鼠股骨BMC含量(P＜0.05-P＜0.01)，大剂量组可明显提高OVX大鼠股骨BMD的含量(P＜0.05)。

表5  强阳保肾丸对雌性OVX大鼠股骨BMD、BMC的影响

与模型组比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01

2.血清E₂和IL-6的变化

由表6可见，去卵巢16周后，卵巢切除组大鼠血清E₂含量显著低于假手术对照组，差异有显著性(P＜0.05)，表明造模成功。强阳保肾丸中剂量组及高剂量组E₂含量明显高于模型组，差异有显著性(P＜0.05)。

表6强阳保肾丸对雌性OVX大鼠E₂和IL-6的影响

与模型组比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01

3.子宫指数和股骨指数

由表7可见，与假手术组比较，卵巢切除组子宫指数以及股骨指数明显降低，具有统计学意义(P＜0.05)，提示造模成功。与卵巢切除组比较，高剂量组子宫指数明显增加(P＜0.05)；高中低三个剂量组股骨指数均明显增加(P＜0.05)。

表7  强阳保肾丸对雌性OVX大鼠子宫指数和股骨指数的影响

与模型组比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01

三.结论

结果表明，强阳保肾丸治疗组的骨矿含量及骨密度均高于模型对照组，表明强阳保肾丸有增加骨密度的功能。

与模型组比较，强阳保肾丸可明显阻止大鼠血清E₂水平下降及右股骨湿重下降，表明强阳保肾丸具有预防更年期雌激素水平的降低和增加骨密度功能。

实施例1所得的强阳保肾丸治疗骨质疏松症的临床观察

1.1临床资料

1.1.1西医诊断标准  骨质疏松诊断标准采用与本地男性的骨密度峰值相比，减少2个标准差(SD)以上为骨质疏松症。本研究参考中国成人腰椎骨密度值，男性峰值为1.210±0.102g/cm²，在50～60岁年龄段，标准差为0.102，故以0.790g/cm²为骨质疏松诊断标准，低于此值即为骨质疏松患者。除外继发性骨质疏松症、特发性骨质疏松症及3个月内服用过影响骨代谢药物者。

1.1.2中医诊断标准  ①腰脊酸痛；②胫膝酸软；性欲低下；③耳鸣耳聋；④面色萎黄；⑤发脱齿摇；⑥自汗盗汗；⑦夜尿频数；⑧脉细无力，舌淡或舌紫。具备上述①②③外加2项者，诊为肾虚气血不足证。

1.1.3病例选择2003年4月-2004年1月间，门诊确诊为原发性骨质疏松症肾阳虚证男性患者36例，年龄51-83岁，平均65.2岁。随机分为治疗组20例，对照组16例，两组一般情况比较无明显差异(p＞0.05)。

表8两组一般情况比较(x±s)

1.2方法

1.2.1治疗组给予强阳保肾丸，每次6克，每天2次，连服6个月。对照组：给予仙灵骨葆胶囊(贵州同济堂制药有限公司生产，批号：040202)每次3粒，每日2次，连服6个月。两组观察期间停服其它中药、止痛药与本病相关西药。

1.2.2观察指标  ①BMD用Hologic-QDR-4500A型双能X线骨密度仪(变异系数(CV)＜0.1％)分别于治疗前及治疗6个月后检测腰椎正位(L₂-L₄)的骨密度。②骨钙素(BGP)用RIA法测定。③尿钙及尿肌酐测定：采用清晨空腹尿测定，并计算Ca/Cr比值，试剂盒由中生公司提供，日立7170全自动生化仪测定。④雌二醇(E₂)用RIA法测定。⑤临床表现采用记分法(无症状记0分，症状轻或时而出现记1分，症状反复出现或时轻时重记2分，症状持续出现或严重者记3分；记录中医证前后变化的记分总和)。⑥观察不良反应。

1.2.3疗效判定标准  ①显效：BMD值较前提高5％以上，生化指标明显改善，中医证总积分下降≥2/3。②有效：BMD值较前提高2％-4％，生化指标有所改善，中医证总积分下降≥1/3。③无效：BMD值较前提高＜2％或继续下降，生化指标未改善或改善不明显，中医证总积分下降＜1/3。

1.2.4统计学处理采用X²检验或t检验

1.3结果

1.3.1临床疗效评定  结果如表9所示，治疗组与对照组比较无显著差异(p＞0.05)。

表9  临床疗效比较

1.3.2骨密度变化观察  结果如表10所示：治疗组与对照组的BMD值治疗后比治疗前都有明显提高，两组间比较也无显著性差异。

表10  两组治疗前后BMD的变化(x±s)

1.3.3生化指标变化观察  结果如表11所示，治疗后两组BGP较治疗前比较略有降低，治疗后两组T水平与治疗前比均有显著提高(p＜0.05)，Ca/Cr的比值则有明显的降低。

表11  生化指标变化比较表

注：治疗后与治疗前比较：*P＜0.05

2.结论

临床观察表显示，强阳保肾丸能够升高血清中T水平，降低Ca/Cr，治疗后BMD也有所提高，能明显缓解临床症状，总有效率达85％；无明显不良反应，与仙灵骨葆胶囊相当，但缓解腰背、四肢骨痛的疗效较仙灵骨葆明显，表明强阳保肾丸能够有效地治疗骨质疏松症，防止老年性激素水平的降低。

实施例2.强阳保肾片或强阳保肾胶囊的制备

淫羊藿(炙)72重量份、阳起石(煅)72重量份、肉丛蓉(酒制)72重量份、五味子(醋制)84重量份、胡芦巴(盐炙)96重量份、补骨脂(盐炙)96重量份、芡实(麸炒)120重量份、小茴香(盐炙)60重量份、远志(甘草制)72重量份、沙苑子72重量份、蛇床子72重量份、覆盆子96重量份、韭菜子84重量份、肉桂48重量份、茯苓72重量份。

以上十五味，芡实、肉桂、茯苓粉碎成细粉，过筛，备用；其余淫羊藿等十二味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏，与上述粉末混匀，干燥，粉碎，过筛，加入适量辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得；或装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例3.强阳保肾片或强阳保肾胶囊的制备

淫羊藿(炙)72重量份、阳起石(煅)72重量份、肉丛蓉(酒制)72重量份、五味子(醋制)84重量份、胡芦巴(盐炙)96重量份、补骨脂(盐炙)96重量份、芡实(麸炒)120重量份、小茴香(盐炙)60重量份、远志(甘草制)72重量份、沙苑子72重量份、蛇床子72重量份、覆盆子96重量份、韭菜子84重量份、肉桂48重量份、茯苓72重量份。

以上十五味，芡实、肉桂、茯苓粉碎成细粉，过筛，备用；其余淫羊藿等十二味加75％乙醇提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并提取液，静置，取上清液，回收乙醇并浓缩至适量，与上述粉末混匀，干燥，粉碎，过筛，加入适量辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得；或装入胶囊，制成1000粒，即得。

以上对本发明所提供的强阳保肾药物在制备防治骨质疏松症药物中的应用进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。