桦褐孔菌深层培养方法

摘要

本发明涉及一种桦褐孔菌深层培养方法，包括：(1)斜面培养；(2)一级、二级、三级种子培养；(3)深层发酵培养，其中深层发酵培养的条件如下：①发酵培养基组成：玉米糖化液0.1－10％、可溶性淀粉0.1－10％、酵母浸粉0.1－5％、蛋白胨0.1－5％、KH2PO4 0.01－1％，MgSO4 0.01－1％；②发酵周期为3－15d；③培养温度为20－35℃；④培养基初始pH为4－8；⑤摇床转速为50－200r/min；⑥接种量为5－20％；⑦装液量为1/10－4/5。本发明运用发酵工程技术生产桦褐孔菌，通过一级、二级、三级种子培养以及深层发酵得到大量繁殖的菌株，弥补了自然菌产量不足的缺陷，具有显著的经济意义，同时发酵在无菌条件下进行，有效避免了菌种被污染，为制备桦褐孔菌提供有利条件。

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其是一种桦褐孔菌深层培养方法。

背景技术

桦褐孔菌Inonotus obliquus(Fr.)Pilat是十分珍稀而又名贵的药用真菌，又名白桦茸、桦癌褐孔菌、斜生纤孔，在国外也称Inonotus obliquus，Fuscoporia oblique，Chaga，Blackbirchtinder(tuchwood)，birch mushroom，“カバノアナタケ”等，在分类学上属担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、褐卧孔菌属(Poriahypobrunnea Petch)。

桦褐孔菌(Inonotus obliquus(Fr.)Pilat)野生品种只有在活的桦树上生长10-15年才具有很高的药用价值，大致分布于北半球北纬45°～50°的地区，如北美、芬兰、波兰、俄罗斯、中国(黑龙江、吉林省长白山地区)以及日本(北海道)等国家。桦褐孔菌在俄罗斯、北欧、日本、美国和韩国被广泛用来治疗恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病、肝病和艾滋病。

由于野生桦褐孔菌资源十分有限，远远满足不了日益增长的市场需求；而且，固体栽培存在周期长、污染机率高、易受周围环境限制等缺点。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种栽培周期短、产量高、生产成本低的桦褐孔菌深层培养方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种桦褐孔菌深层培养方法，包括：(1)斜面培养；(2)一级、二级、三级种子培养；(3)深层发酵培养，其中深层发酵培养的条件如下：

①发酵培养基组成：玉米糖化液0.1-10％、可溶性淀粉0.1-10％、酵母浸粉0.1-5％、蛋白胨0.1-5％、KH₂PO₄ 0.01-1％，MgSO₄ 0.01-1％；

②发酵周期为3-15d；

③培养温度为20-35℃；

④培养基初始pH为4-8；

⑤摇床转速为50-200r/min；

⑥接种量为5-20％；

⑦装液量为1/10-4/5。

而且，所述斜面培养的培养基为PDA固体培养基。

而且，所述一级、二级、三级种子培养基的构成均为：葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.05％，pH自然，各物质单位均为：m/V。

本发明的优点和有益效果为：

1、本发明运用发酵工程技术生产桦褐孔菌，通过一级、二级、三级种子培养以及深层发酵得到大量繁殖的菌株，弥补了自然菌产量不足的缺陷，具有显著地经济意义，同时发酵在无菌条件下进行，有效避免了菌种被污染，为制备桦褐孔菌提供有利条件。

2、本发明确定了桦褐孔菌深层培养的条件，为进一步确定桦褐孔菌产胞外多糖的最佳条件提供基础，为研究和开发桦褐孔菌资源，提供充足的药用或医用原材料具有很大的现实意义。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

实施例1：

本实施例中，以桦褐孔菌的最佳培养条件为主：

一种桦褐孔菌深层培养方法，其培养的步骤是：

(1)斜面培养：取斜面种子于PDA固体培养基上28℃恒温培养箱培养6d。

(2)一级、二级、三级种子培养：将斜面培养基上菌丝刮下接入一级培养基中，静置4h，然后置于140r/min的恒温调速摇瓶柜中振荡培养7d，接入二级培养基中，同样条件培养4d，最后接入三级培养基中，同样条件培养1d，即可用于深层发酵。

其中：一级、二级、三级种子培养基均采用通用的药用真菌培养基，成分为(m/V)：葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.05％，pH自然(一般为5.5)的液体培养基。

(3)深层发酵培养，条件如下：

培养基为：玉米糖化液2.76％、可溶性淀粉1.9％、酵母浸粉0.75％、蛋白胨0.95％、KH₂PO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.05％；菌丝体生物量最佳积累时间为6d；最佳培养温度为28℃；培养基最佳初始pH为5；确定摇床的最佳转速为130r/min；接种量为10％；装液量为每个250mL的三角瓶装70mL培养基。

实施例2：

本实施例中，以桦褐孔菌胞外多糖的最佳培养条件为主：

一种桦褐孔菌深层培养方法，其培养的步骤是：

(1)斜面培养：取斜面种子于PDA固体培养基上28℃恒温培养箱培养6d。

(2)一级、二级、三级种子培养：将斜面培养基上菌丝刮下接入一级培养基中，静置4h，然后置于140r/min的恒温调速摇瓶柜中振荡培养7d，接入二级培养基中，同样条件培养4d，最后接入三级培养基中，同样条件培养1d，即可用于发酵。

其中：一级、二级、三级种子培养基均采用通用的药用真菌培养基，成分为(m/V)：葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.05％，pH(pH 5.5)自然的液体培养基。

(3)深层发酵条件，条件如下：

培养基：玉米糖化液2.1％、可溶性淀粉2.23％、酵母浸粉0.51％、蛋白胨0.41％、KH₂PO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.05％；胞外多糖最佳积累时间为7d；最佳培养温度为28℃；培养基最佳初始pH为6；确定摇床的最佳转速为130r/min；接种量为10％；装液量为每个250mL的三角瓶装70mL培养基。