从牛初乳中分离乳腺上皮细胞的体外培养方法

摘要

本发明公开了一种从牛初乳中分离乳腺上皮细胞的体外培养方法。针对目前乳腺上皮细胞体外培养方法中存在的组织取材不易、培养成功率低等问题，我们采用从泌乳2－7天的牛初乳中分离培养乳腺上皮细胞，进行原代培养。培养液为：RPMI－1640，添加胎牛血清20％、胰岛素1μg/ml、醋酸钠5mM、转铁蛋白10μg/ml、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml等，培养条件为37℃，5％CO2。细胞接种在胶原包被的培养瓶内，经过15－18天培养，细胞可铺满瓶子底壁，并可传代。用角蛋白－18抗体对所培养细胞进行免疫组化鉴定，结果呈阳性，证明所培养细胞系确为乳腺上皮细胞。用ELLISA和RT－PCR方法从原代培养的牛乳腺上皮细胞中均检测到了β－酪蛋白，表明所培养的乳腺上皮细胞具有泌乳功能，可用于多种体外研究。