一种含油食品中多种农药残留的检测方法

摘要

本发明公开了一种含油食品中多种农药残留的检测方法，是将含油样品加水、丙酮－正己烷混合液提取，GPC净化，流动相采用丙酮－环己烷，分离柱为Shodex EV－2000，根据出峰时间的不同，把分别收集到的液体减压浓缩至干，残留物用甲苯－乙腈溶解，甲苯－乙腈预淋洗ENVI－Carb/LC－NH2固相萃取柱，把残留物甲苯－乙腈溶解液过柱并收集，用甲苯－乙腈洗脱，洗脱液合并收集，减压浓缩至近干，氮气吹干，然后用丙酮－正己烷溶解，过滤膜，GC/MS检测，本发明基于凝胶渗透色谱净化原理实现了含油食品中农药残留与大分子油脂分离、可快速实现残留农药与油脂等大分子干扰物质的分离，能够很好的降低检出限、满足高含油食品中农药残留的分析、检测结果准确。

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其是涉及一种含油食品中多种农药残留的检测方法。

背景技术

随着日本肯定列表的实施，各种农产品限量标准越来越低，出口形势变的十分严峻。特别是日本“毒饺子”事件以后，动植物性等油脂含量高的食品中农药残留的检测也逐渐被大家所重视。过去由于含油食品基质复杂，同时仪器设备等的制约，一直以来没有一个很好的方法能够检测含油食品中的农药残留。

在食品检测中传统的净化方法一般采用液一液萃取法或者SPE净化。液一液萃取法消耗溶剂量大，且易形成乳化现象，操作较为繁琐。固相萃取法常用Florisil柱吸附脂类杂质，然后用低极性溶剂淋洗，是分析有机氯、菊酯类农药常用的方法。但是对于含油脂较高的复杂基质，采用常规的液一液萃取、SPE净化等方法不能将油脂除去，且操作步骤复杂。

发明内容

本发明的目的在于改进已有技术的不足而提供一种基于凝胶渗透色谱净化原理实现了含油食品中农药残留与大分子油脂分离、可快速实现残留农药与油脂等大分子干扰物质的分离、能够很好的降低检出限、满足高含油食品中农药残留的分析、检测结果准确的含油食品中多种农药残留的检测方法。

本发明的目的是这样实现的，一种含油食品中多种农药残留的检测方法，其特点是该方法包括以下步骤：

a、提取：是将待检含油样品加水，加丙酮-正己烷混合液进行提取；

b、GPC净化：流动相采用丙酮-环己烷，分离柱为ShodexEV-2000，根据出峰时间的不同分别收集，把收集到的液体减压浓缩至干，残留物用甲苯-乙腈溶解；

c、ENVI-Carb/LC-NH2 SPE柱净化：用甲苯-乙腈预淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC净化中得到的残留物甲苯-乙腈溶解液过柱并收集，用甲苯-乙腈洗脱，洗脱液合并收集，减压浓缩至近干，氮气吹干，然后用丙酮-正己烷溶解，过滤膜，供气相色谱-质谱检测用；

d、GC/MS检测：

仪器条件：载气：纯度99.999％的氦气；色谱柱：DB-17ms，30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：250℃，不分流模式；柱温程序：初始温度60℃，保持1min，以25℃/min，升温至150℃，再以4.5℃/min升温至280℃，最后以10℃/min，升温至300℃，保持10min；柱流速：1.1mL/min；进样量：2μL；色谱-质谱接口温度：280℃；离子源温度230℃，四极杆温度150℃；离子化方式：电子轰击模式(EI)；电子能量：70eV；质谱检测方式：选择离子监测模式。

所述的提取是称取待测含油样品10.0g于100mL离心管中，加10mL水，充分混匀后加丙酮正己烷体积比为1∶2的混合液50mL，激烈震荡1min，超声提取15min后3000r/min离心5min，上层清液过铺有少量无水硫酸钠漏斗，收集滤液于250mL梨形瓶中，残留物用30mL正己烷再提取，合并滤液，40℃减压浓缩至干，残留物用10mL丙酮正己烷体积比为2∶8的混合液溶解。

所述的GPC净化是流动相采用丙酮环己烷体积比为2∶8的混合液，流速为5mL/min，进样体积5mL，分离柱：：Shodex EV-2000，根据农药标准品在凝胶渗透色谱中在GPC出峰时间来确定收集时间段，进行分别收集，把收集到的液体转移到250mL梨形瓶中，40℃下减压浓缩至干，残留物用2mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液溶解。

所述的ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱净化是用10mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液预淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC净化中得到的2mL残留物的甲苯-乙腈溶解液过柱并收集，20mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液洗脱，洗脱液合并收集于50mL茄形瓶中，40℃减压浓缩至近干，氮气吹干，用2.00mL丙酮正己烷体积比为1∶1的混合液溶解，过0.45μm滤膜，供气相色谱-质谱检测用。

本发明基于凝胶渗透色谱净化原理实现了含油食品中农药残留与大分子油脂分离，建立了GC/MS检测含油食品中多农药残留的方法，方法采用丙酮正己烷超声震荡提取，经GPC除油浓缩、ENVI-Carb/LC-NH2SPE进一步净化，最终通过GC/MS对高含油食品中农药残留进行检测，实验通过对65种农药进行验证，回收率均在70％～120％；本发明方法可快速实现残留农药与油脂等大分子干扰物质的分离，并能够很好的降低检出限，满足高含油食品中农药残留的分析，本发明方法最低检出限为0.02mg/kg。

本发明主要采用GPC对含油食品进行除油，同时将其与GC/MS联用应用于肉和调理食品等高含油食品中农药的多残留分析。本发明具有以下特点：

1、净化效果：

本发明中所用到凝胶渗透色谱其基本原理是：以不同孔径的多孔凝胶装柱，不同配比的环己烷和丙酮作为洗脱剂，根据多孔凝胶对不同大小分子的排阻效应进行分离，大分子的油脂、色素(叶绿素、叶黄素)、生物碱、聚合物等先淋洗出来，农药等相对分子质量较小，后淋洗出。GPC法的柱填料和被分离试样没有任何相互作用，完全靠分子自身的大小进行分离。这种按体积大小的分离方式决定了GPC技术可在温和条件下进行，因为没有可逆吸附，所以每个适用于GPC分离的样品都能完全洗脱，并能得到非常好的净化。GPC可去除大分子干扰物，适用于更加广泛、更加复杂的基质。

以油炸土豆为例，采用GPC进行净化，得到其净化分离时间图1；通过对图1中0～11.5min、11.5～37.0min和37.0～40.0min三个时间段收集液分别蒸干后进行称量，得到的差重与提取质量比较发现，约98％的杂质在0～11.5min流出，可见GPC对大分子油脂分离效果非常明显；实验过程中还发现，一些色素和目标化合物流出时间重叠，GPC无法进一步净化，为此我们考虑采用了ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱再进一步净化，结果显示通过以上两步净化后，检测过程中干扰明显减少，图2为净化前样品色谱图，图3为净化后样品色谱图，同时提高了检测灵敏度，降低了假阳性的几率，实现了多残留、高灵敏度的分析。

2、方法的准确度、精密度及检出限

以瘦肉为例，分别添加0.02mg/kg、0.04mg/kg、0.08mg/kg农药标准品做回收，每个含量水平重复3次，所得到的各种农药化合物的平均回收率及相对标准偏差：当添加水平在0.02～0.08mg/kg范围内，农药回收率在70％～110％，相对标准偏差为0.7％～20.0％，n＝3，回收率及相对标准偏差均符合农残检测要求，农药最低检出限为0.02mg/kg。

具体数据如下表：

表1平均回收率和相对标准偏差n＝3

附图说明

图1为油炸土豆GPC净化分离时间图。

图2为净化前油炸土豆样品色谱图。

图3为净化后油炸土豆样品色谱图。

在图1中：收集时间段①：0-11.5min，约98％的大分子杂质被收集；收集时间段②：11.5min-37min，氟丙菊酯到三唑磷时间段中大部分农药的收集；收集时间段③：37min以后，小分子杂质和化合物的收集。

具体实施方式

实例1，一种含油食品中多种农药残留的检测方法，本实施例以油炸土豆为待测品，是称取油炸土豆10.0g于100mL离心管中，加10mL水，充分混匀后加丙酮正己烷体积比为1∶2的混合液50mL，激烈震荡1min，超声提取15min后3000r/min离心5min，上层清液过铺有少量无水硫酸钠漏斗，收集滤液于250mL梨形瓶中，残留物用30mL正己烷再提取，合并滤液，40℃减压浓缩至干，残留物用10mL丙酮环己烷体积比为2∶8的混合液溶解；流动相采用丙酮环己烷体积比为2∶8的混合液，流速为5mL/min，进样体积5mL，分离柱：：Shodex EV-2000，根据农药标准品在凝胶渗透色谱中在GPC出峰时间来确定收集时间段，进行分别收集，把收集到的液体转移到250mL梨形瓶中，40℃下减压浓缩至干，残留物用2mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液溶解；ENVI-Carb/LC-NH2 SPE柱净化是用10mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液预淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC净化中得到的2mL残留物的甲苯-乙腈溶解液过柱并收集，20mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液洗脱，洗脱液合并收集于50mL茄形瓶中，40℃减压浓缩至近干，氮气吹干，用2.00mL丙酮正己烷体积比为1∶1的混合液溶解，过0.45μm滤膜，供气相色谱-质谱检测用；GC/MS检测是使用的仪器条件为：载气：纯度99.999％的氦气；色谱柱：DB-17ms，体积30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：250℃，不分流模式；柱温程序：初始温度60℃，保持1min，以25℃/min，升温至150℃，再以4.5℃/min升温至280℃，最后以10℃/min，升温至300℃，保持10min；柱流速：1.1mL/min；进样量：2μL；色谱-质谱接口温度：280℃；离子源温度230℃，四极杆温度150℃；离子化方式：电子轰击模式；电子能量：70eV；质谱检测方式：选择离子监测模式-SIM。

本实施例样品油炸土豆在加工之前，原料有低浓度的β-六六六检出，检出值为0.024mg/kg，采用方法为GB/T 5009.146.-2003，农残药物类型：六六六-有机氯类农药。检出结果：按照本实施例检测方法，对油炸土豆进行检测分析，β-六六六检出值：0.020mg/kg，按照GB/T 5009.146-2003对油炸土豆检测分析，β-六六六检出值：ND。上述实例说明，加工之后的油炸土豆与加工之前在结果上无显著差异，说明本方法得到了一个比较好的净化和定量。

实例2，一种含油食品中多种农药残留的检测方法，本实施例以鳕鱼为待测品，是称取鳕鱼10.0g于100mL离心管中，加10mL水，充分混匀后加丙酮正己烷体积比为1∶2的混合液50mL，激烈震荡1min，超声提取15min后3000r/min离心5min，上层清液过铺有少量无水硫酸钠漏斗，收集滤液于250mL梨形瓶中，残留物用30mL正己烷再提取，合并滤液，40℃减压浓缩至干，残留物用10mL丙酮环己烷体积比为2∶8的混合液溶解；流动相采用丙酮环己烷体积比为2∶8的混合液，流速为5mL/min，进样体积5mL，分离柱：：ShodexEV-2000，根据农药标准品在凝胶渗透色谱中在GPC出峰时间来确定收集时间段，进行分别收集，把收集到的液体转移到250mL梨形瓶中，40℃下减压浓缩至干，残留物用2mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液溶解；ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱净化是用10mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液预淋洗ENVI ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC净化中得到的2mL残留物的甲苯乙腈溶解液过柱并收集，20mL甲苯乙腈体积比为1∶3的混合液洗脱，洗脱液合并收集于50mL茄形瓶中，40℃减压浓缩至近干，氮气吹干，用2.00mL丙酮正己烷体积比为1∶1的混合液溶解，过0.45μm滤膜，供气相色谱-质谱检测用；GC/MS检测是使用的仪器条件为：载气：纯度99.999％的氦气；色谱柱：DB-17ms，体积30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：250℃，不分流模式；柱温程序：初始温度60℃，保持1min，以25℃/min，升温至150℃，再以4.5℃/min升温至280℃，最后以10℃/min，升温至300℃，保持10min；柱流速：1.1mL/min；进样量：2μL；色谱-质谱接口温度：280℃；离子源温度230℃，四极杆温度150℃；离子化方式：电子轰击模式；电子能量：70eV；质谱检测方式：选择离子监测模式-SIM。

本实施例检测的农残药物类型：日本通关57项有机磷类农药，结果：均未检出。加标回收：添加0.2mg/kg标准品做回收，设3个平行，分析物回收率75％-110％，相对标准偏差2.8％～19.8％n＝3，数据见表2。

表2.平均回收率和相对标准偏差n＝3

以上所述的实例仅仅是对本发明的具体实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定。