作为P2X7－受体拮抗剂的被取代的N－苯基甲基－5－氧代－脯氨酸－2－酰胺及它们的使用方法

摘要

本发明涉及新颖的式(I)的氧代－脯氨酰胺衍生物，其调节P2X7受体功能，且能够拮抗ATP对P2X7受体的作用，和这些化合物或其药物组合物在治疗P2X7受体介导的疾病中的用途，所述疾病例如疼痛、炎症和神经退行性病变。

说明书

本发明涉及杂环酰胺衍生物，其调节P2X7受体功能，且能够拮抗ATP 对P2X7受体的作用(P2X7受体拮抗剂)；涉及它们的制备方法；涉及含有它 们的药物组合物；和涉及这些化合物在治疗中的用途。

P2X7受体为配体门控离子通道，其在造血谱系细胞中表达，例如巨噬 细胞、小胶质细胞、肥大细胞和淋巴细胞(T和B)(参见，例如，Collo，等人 Neuropharmacology，Vol.36，pp1277-1283(1997))，且该受体被细胞外核苷酸， 尤其是三磷酸腺苷(ATP)激活。已表明P2X7受体的激活与下述行为有关：巨 细胞形成、脱粒、溶细胞的细胞死亡、CD62L脱落、调节细胞增殖、和促炎 细胞因子释放，如白介素1β(IL-1β)(如Ferrari，等人，J.Immunol.，Vol.176， pp3877-3883(2006))和肿瘤坏死因子α(TNFα)(如Hide，等人Journal of Neurochemistry，Vol.75，pp965-972(2000))。P2X7受体还位于抗原呈递细胞、 角质化细胞、腮腺细胞、肝细胞、红细胞、红白血病细胞、单核细胞、成纤 维细胞、骨髓细胞、神经元和肾小球系膜细胞。而且，P2X7受体通过突触 前末梢在中枢和外周神经系统中表达，且表现出调节神经胶质细胞中的谷氨 酸的释放(Anderson，C.等人Drug.Dev.Res.，Vol.50，page 92(2000))。

P2X7受体定位于免疫系统的关键细胞，以及其具有使得由这些细胞释 放重要炎症介质的能力表明P2X7受体拮抗剂在治疗大范围的疾病中的潜在 作用，所述疾病包括疼痛和神经变性疾病。最近临床前的体内研究已经直接 表明P2X7受体与炎症和神经性疼痛有关(Dell’Antonio等人，Neurosci.Lett.， Vol.327，pp87-90(2002)，.Chessell，IP.，等人，Pain，Vol.114，pp386-396(2005)， Honore等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.，Vol.319，p1376-1385(2006))，而体外研 究表明P2X7受体调节皮质神经元的小神经胶质细胞介导的死亡(Skaper， S.D.，等人，Glia，Vol.54，p234-242(2006))。而且，已经在阿耳茨海默病的转基 因小鼠模型中观察到了P2X7受体对于β-淀粉样蛋白斑的增量调节 (Parvathenani，L.等人J.Biol.Chem.，Vol.278(15)，pp13309-13317(2003))。

本发明提供了调节P2X7受体功能且能够拮抗ATP对P2X7受体的作用 的化合物(P2X7受体拮抗剂)。在第一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可 接受的盐：

其中：

R¹表示C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基甲 基-或吡啶基甲基-，任何这些基团任选被1、2或3个卤素原子取代；或未取 代的苯基或苄基；

R²和R³独立地表示氢、卤素、C_1-6烷基、芳基甲基-、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-；且任何所述的C_1-6烷基、芳基甲基-、C_2-6链烯基、 C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-任选被1、2或3个卤素原子取代；

R⁴、R⁵和R⁶独立地表示氢、氟或甲基；且

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_2-6链 烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基，且任何所述的C_1-6烷基、C_2-6链烯基、 C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基任选被1、2或3个卤素原子取代；或R¹⁰和 R¹¹与和它们相连的碳原子一起形成苯环，其任选被1、2或3个卤素原子取 代；

条件是当R⁷和R¹¹均选自氢或氟时，R⁸、R⁹和R¹⁰中至少一个为卤素 原子，或R⁸、R⁹和R¹⁰选自氢和CF₃，且R⁸、R⁹和R¹⁰中的一个但至多一个 为CF₃。

在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

(I)

其中：

R¹表示C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基或C_3-6环烷基甲 基，任何这些基团可任选被1、2或3个卤素原子取代；或未取代的苯基或 苄基；

R²和R³独立地表示氢、卤素、C_1-6烷基、芳基甲基、C_2-6链烯基、C_2-6炔 基或C_3-6环烷基甲基；任何所述的C_1-6烷基、芳基甲基、C_2-6链烯基、C_2-6炔 基或C_3-6环烷基甲基可任选被1、2或3个卤素原子取代；

R⁴、R⁵和R⁶独立地表示氢或氟；且

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_2-6链 烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基；且任何所述的C_1-6烷基、C_2-6链烯基、 C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基可任选被1、2或3个卤素原子取代；

条件是当R⁷和R¹¹独立地表示氢或氟时，R⁸，R⁹和R¹⁰中至少一个为卤 素原子。

在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R¹表示C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基甲 基-或吡啶基甲基-，任何这些基团任选被1、2或3个卤素原子取代；或R¹表示未取代的苯基或苄基；

R²和R³独立地表示氢、卤素、C_1-6烷基、芳基甲基-、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-；且任何所述的C_1-6烷基、芳基甲基-、C_2-6链烯基、 C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-任选被1、2或3个卤素原子取代；

R⁴、R⁵和R⁶独立地表示氢、氟或甲基；且

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_2-6链 烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基，且任何所述的C_1-6烷基、C_2-6链烯基、 C_2-6炔基、C_3-6环烷基或苯基任选被1、2或3个卤素原子取代；或R¹⁰和 R¹¹与和它们相连的碳原子一起形成苯环，其任选被1、2或3个卤素原子取 代；

条件是当R⁷和R¹¹均选自氢或氟时，R⁸、R⁹和R¹⁰中至少一个为卤素原 子，或R⁸、R⁹和R¹⁰中至多一个为CF₃基团。

本文所用的术语“烷基”(当用作基团或基团的一部分时)是指直链或支链 的含有一定数量碳原子的烃链。例如，C_1-6烷基指直链或支链的含有至少1 个且至多6个碳原子的烃链。烷基的实例包括，但不限于：甲基(Me)、乙 基(Et)、正丙基、异丙基、正己基和异己基。

本文所用的术语“链烯基”是指直链或支链的含有一定数量碳原子的烃 链，其中至少一个碳-碳键为双键。链烯基的实例包括，但不限于：乙烯基、 丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、正戊烯基和异戊烯基。

本文所用的术语“炔基”是指直链或支链的含有一定数量碳原子的烃链， 其中至少一个碳-碳键为三键。炔基的实例包括，但不限于乙炔基、丙炔基、 丁炔基、异戊炔基、正戊炔基、异己炔基和正己炔基。

术语‘环烷基’(除有其它解释外)是指闭合的3-6元非芳香环，例如环 丙基、环丁基、环戊基或环己基。

本文所用的术语‘芳基’是指C_6-10单环或双环烃环，其中至少一个环为芳 香环。这些基团的实例包括苯基和萘基。

本文所用的术语′卤素′(除有其它解释外)是指选自氟、氯、溴或碘的 基团。

在本发明的一些实施方案中，R¹表示C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、 C_3-6环烷基或吡啶基甲基-，任何这些基团任选被1、2或3个卤素原子取代； 或R¹表示未取代的苯基或苄基。在一个实施方案中，R¹表示未取代的C_1-6烷 基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、吡啶基甲基-、苯基或苄基。在另 一个实施方案中，R¹表示未取代的C_1-4烷基、C_3-5环烷基、吡啶基甲基-、苯 基或苄基。在另一个实施方案中，R¹表示甲基或乙基。

在本发明的一些实施方案中，R²和R³独立地表示氢、卤素、C_1-6烷基、 苄基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-；且任何所述的C_1-6烷基、 苄基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-可任选被1、2或3个卤素 原子取代。

在一个实施方案中，R²和R³独立地表示氢或卤素；未取代的C_1-6烷基、 苄基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基或C_3-6环烷基甲基-。

在另一个实施方案中，R²和R³独立地表示氢、氟或甲基。在另一个实 施方案中，R²和R³均表示氢。

在本发明的一个实施方案中，R⁴和R⁵独立地表示氢或甲基。在另一个 实施方案中，R⁶表示氢或甲基。在另一个实施方案中，R⁴、R⁵和R⁶均表示 氢。

在本发明的另一个实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、 卤素、氰基、三氟甲基或未取代的C_1-6烷基；或R¹⁰和R¹¹与和它们相连的 碳原子一起形成未取代的苯环。在另一个实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和 R¹¹独立地表示氢、卤素、氰基、甲基或三氟甲基；或R¹⁰和R¹¹与和它们相 连的碳原子一起形成未取代的苯环。在另一个实施方案中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、氯、氟、溴、甲基或三氟甲基。

在本发明的一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的 盐，其中：

R¹表示未取代的C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_3-5环烷基、吡啶基甲基-、 苯基或苄基；

R²和R³均表示氢；

R⁴、R⁵和R⁶独立地表示氢或甲基；且

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹独立地表示氢、氯、氟、溴、甲基或三氟甲基；

条件是当R⁷和R¹¹均选自氢或氟时，R⁸、R⁹和R¹⁰中至少一个为卤素原 子，或R⁸、R⁹和R¹⁰选自氢和CF₃，且R⁸、R⁹和R¹⁰中的一个但至多一个为 CF₃。

本发明的具体化合物包括下述实施例1-136的化合物或其药学上可接受 的盐。

P2X7的拮抗剂可用于预防、治疗或缓解多种疼痛状态(如神经性疼痛、 慢性炎性疼痛和内脏疼痛)、炎症和神经退行性变，尤其是阿耳茨海默病。 P2X7拮抗剂也可用于组成处理类风湿性关节炎和炎性肠病的治疗剂。

可调节P2X7受体功能且能够拮抗ATP对P2X7受体的作用的本发明化 合物(P2X7受体拮抗剂)可以为受体功能的竞争性拮抗剂、反激动剂、负的变 构调节剂(negative allosteric modulator)或间接调节剂。

一些式(I)化合物可在一些情况中形成其酸加成盐。在药物中将式(I)化合 物作为盐使用是可以理解的，在这些情况下盐应该是药学上可接受的。药学 上可接受的盐包括Berge、Bighley和Monkhouse，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19 中描述的那些。碱性的式(I)化合物可与药学上可接受的酸形成盐，所述酸包 括无机和有机酸。这些酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、 乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来 酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀 酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。

药学上可接受的盐的实例包括由马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、 双羟萘酸、琥珀酸、盐酸、硫酸、双二亚甲基水杨酸(bismethylenesalicylic)、 甲磺酸、乙二磺酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡糖酸、天冬氨酸、 硬脂酸、棕榈酸、亚甲基丁二酸、羟乙酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、 环己基氨基磺酸、磷酸和硝酸形成的盐。

式(I)化合物可制备成晶体或非晶体形式，且如果为晶体可任选为溶剂合 物，如水合物。本发明在其范围内包括化学计量的溶剂合物(如水合物)，以 及含可变量溶剂(如水)的化合物。

式(I)化合物能够以立体异构形式(如非对映异构体和对映异构体)存在， 且本发明包括这些立体异构形式中的每一种，且包括其混合物包括外消旋 体。不同立体异构形式可通过常规方法从其它形式中分离出一种，或可通过 立体特异性或不对称合成得到任何指定的异构体。在其中终产物的立体化学 组成已经通过手性HPLC(更具体地通过在实施例中所述的方法(A)、(B)、(C) 或(D))确定的实施例中，已经在终产物中指定了相应的立体特异性名称和结 构，其中所述产物的对映异构体过量大于70％。绝对立体化学的指定基于起 始材料的已知手性。在其中终产物的组成没有通过手性HPLC表征的实施例 中，没有标识终产物的立体化学。然而，预期产物混合物的主要成分的手性 将表明起始材料的手性，且对映异构体过量将依赖于所用的合成方法且可能 类似于相似实施例(若该实施例存在对映异构体过量)所测的对映异构体过 量。因此，预期一种手性形式的化合物能够使用合适的起始材料制备为另一 种手性形式。或者，如果使用外消旋起始材料，预期将得到外消旋产物，且 单个对映异构体能够使用常规方法分离。本发明也包括任何互变异构形式及 其混合物。

本发明也包括同位素标记的化合物，其与式(I)和下述中所述的那些化合 物相同，除了一个或多个原子被原子量或质量数与自然界常见的原子量或质 量数不同的原子替代。可并入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、 氮、氧、磷、氟、碘和氯的同位素，如3H、11C、14C、18F、123I和125I。

含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物和所述化 合物的药学上可接受的盐在本发明的范围内。同位素标记的本发明化合物 (例如并入放射性同位素如3H、14C的那些化合物)可用于药物和/或底物组 织分布测定。氚代即³H、和碳-14即¹⁴C同位素由于制备方便且具有可检测 性，尤其优选。¹¹C和¹⁸F同位素尤其适合用于PET(正电子发射断层扫描术)， ¹²⁵I同位素尤其适合用于SPECT(单光子发射计算机化断层扫描术)，PET和 SPECT均可用于脑成像。另外，用较重的同位素例如氘即²H进行取代可以 获得某些由于更高的代谢稳定性而带来的治疗优势，例如体内半衰期延长或 者所需剂量降低，因此这在某些情形中可能是优选的。同位素标记的式(I) 化合物及下述的本发明化合物通常可以由下面的流程图和/或实施例中所公 开的步骤，用可方便获得的同位素标记的试剂替代无同位素标记的试剂进行 制备。

或者，式(I)化合物可以前药给药。本文所用的式(I)化合物的＂前药＂为化 合物的官能衍生物，在向患者给药后，在体内最终释放式(I)化合物。作为前 药给药式(I)化合物使本领域技术人员能够进行：(a)改变化合物在体内的起 始；(b)改变化合物在体内作用的持续时间；(c)改变化合物在体内的转运或 分配；(d)改变化合物在体内的溶解度；和(e)克服化合物产生的副作用或遇 到的其它困难。一般用于制备前药的官能衍生物包括化合物的修饰，其在体 内被化学或酶分解。这些修饰对于本领域技术人员是已知的。

化合物的制备

(I)

式(I)化合物(其中变量如上定义)及其盐和溶剂合物可通过下述的方法 制备，这构成本发明的另一方面。

本发明制备式(I)化合物的方法包括：

(a)将式(2)的羧酸(或其活化的衍生物)与式(3)的胺偶联(见流程1)，其中 R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹如上定义。化合物(2)和(3) 任选被保护；

(b)式(4)的二羰基化合物、式(5)的异氰化物和式(6)的胺在合适的溶剂 如甲醇中且在适合温度如100℃下反应(见流程2)，其中R¹、R²、R³、R⁴、 R⁵、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹如上定义，且R⁶＝H或甲基。化合物(4)、(5)和(6) 任选被保护。这种方法以前已经描述于化学文献中(如H.Tye，和M.Whittaker， Org.Biomol.Chem.，2004，2，813-815；G.C.B.Harriman WO 9900362 A1)；

(c)对于被保护的式(I)化合物进行脱保护。保护基的实例和它们的去除 方法可见于T.W.Greene和P.G.M.Wuts‘Protective Groups in Organic Synthesis’(J.Wiley和Sons，3^rd Ed.1999)；或

(d)将式(I)化合物互变为其它式(I)化合物。常规的转化方法的实例包括 差向异构、氧化、还原、烷基化、芳香取代、亲核取代、酰胺偶联和酯水解。

流程1.

式(2)的酸和式(3)的胺的偶联一般包括使用活化试剂，如N-(3-二甲基氨 基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐或聚合物-承载的碳化二亚胺、1-羟基苯并 三唑(HOBT)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)，且任选使用合适的碱如叔烷 基胺(如二异丙基乙胺、N-乙基吗啉、三乙胺)或吡啶，在合适的溶剂如DMF 和/或二氯甲烷中，且在合适的温度如0℃至室温下。或者(2)和(3)的偶联可 通过在合适的溶剂如二甲基甲酰胺中，在合适的温度如室温下，用O-(7-氮 杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和合适的叔烷基胺如二 异丙基乙胺处理。或者，可以使用式(2)化合物作为活化的衍生物(如酰氯、 混合酸酐、活性的酯(如O-酰基-异脲))，并在该条件下，方法(a)通常包括用 胺处理所述活化的衍生物(Ogliaruso，M.A.；Wolfe，J.F.in The Chemistry of Functional Groups(Ed.Patai，S.)Suppl.B：The Chemistry of acid derivate，Pt.1 (John Wiley和Sons，1979)，pp442-8；Beckwith，A.L.J.in The Chemistry of Functional Groups(Ed.Patai，S.)Suppl.B：The Chemistry of Amides(Ed. Zabricky，J.)(John Wiley和Sons，1970)，pp73ff)。

流程2.

制备式(2)化合物的代表性的方法如下述流程3-9所示：

流程3

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上定义，R⁶＝H或F，且P¹和P²表示合适 的保护基，如C_1-6烷基或P¹和P²＝H。

对于下述流程3中所示的转化的类似方法已经描述于先前的化学文献 中(如G.Verardo，P.Geatti，E.Pol，and A.G.Giumanini，Can.J.Chem.，80： 779-788(2002)；T.Godet，等人，Organic Letters，(2004)，6(19)，3281-3284)。

步骤(i)通常包括在合适的溶剂如甲醇中，在合适的温度如0℃下，将(7) 用碱如氢氧化钠进行最初的处理，然后在合适的温度如0℃至室温下进行还 原烷基化，所述还原烷基化通常包括用醛或酮和酸如乙酸进行后续的处理， 然后加入还原剂如硼氢化钠。

步骤(ii)可自发进行，其中所述实例(9)从上述步骤(i)中的(7)的反应中分 离出来，但是更典型地，在合适的温度如110℃下，在合适的溶剂如甲苯中， 加热化合物(8)得到化合物(9)。

脱保护步骤(iii)一般包括将羧酸酯转化为酸的标准步骤，如使用合适的 氢氧化盐(如氢氧化钠)，在合适的溶剂如甲醇中，在合适的温度如0℃至室 温下。

流程4

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上定义，R⁶＝H或F，L¹为合适的基团如 卤素(如氯或溴)或硼酸或硼酸酯，且P³表示合适的保护基，如C_1-6烷基。

与下述流程4中所示的转化类似的方法已经描述于先前的化学文献中 (如T.Itoh等人，Tetrahedron.，59(2003)，3527-3536；T.Simandan和M.B. Smith，Synthetic Communications，26(9)，1827-1838(1996))。

步骤(i)通常包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如0℃至 室温下，将(10)用碱如氢化钠和烷基化试剂如烷基卤化物处理，或步骤(i)可 以包括在合适的溶剂如甲苯中，在合适的催化剂如三(二亚苄基丙酮)合二钯 (0)和Xantphos^TM(9，9-二甲基-4，5-双(二苯基膦基)呫吨)的混合物，以及合适的 碱如碳酸铯存在下，在合适的温度如120℃下，将(10)用芳基卤化物或芳基 或烯基硼酸(或酯)处理。

脱保护(ii)一般包括将羧酸酯转化为酸的标准方法，如使用合适的氢氧 化盐(如氢氧化钠)，在合适的溶剂如甲醇中，在合适的温度如0℃至室温下； 或使用合适的酸(如三氟乙酸)，在合适的溶剂如二氯甲烷中，在合适的温度 如0℃至室温。

流程5

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上定义，且R⁶＝H或F。

与下述流程5中所示的转化类似的方法已经描述于先前的化学文献中 (如S.Aoki，等人，Tetrahedron，60(2004)7053-7059)。

步骤(i)一般包括在反应釜或密封管中，在合适的溶剂如水中，在合适 的温度如100-140℃下，用或不用微波辐射加热(12)。

流程6

其中R¹、R⁴和R⁵如上定义，R²表示上述除氢或卤素外的其它基团，R⁶＝H或F，L¹为合适的离去基，如卤素(如氯或溴)，且P⁴和P⁵表示合适的保 护基，分别为如C_1-6烷基和C_1-6烷氧基羰基。

与下述流程6中所示的转化类似的方法已经描述于先前的化学文献中 (如A.Bassoli，等人，Eur.J.Org.Chem.，2005，2518-2525)。

步骤(i)一般包括将(13)通过标准方法进行保护，如在合适的溶剂如二氯 甲烷中，在合适的温度如室温下，用烷氧基羰基酸酐如焦碳酸二叔丁基酯和 碱如三乙胺和催化剂如4-二甲基氨基吡啶处理。

步骤(ii)一般包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如-78℃ 至室温下，将(14)用碱如双(三甲基硅烷基)氨基化锂和烷基化试剂如烷基卤 化物处理。

步骤(iii)一般包括将(15)通过标准方法进行脱保护，如当P5为叔丁氧基 羰基时，在合适的溶剂如二噁烷中，在合适的温度如室温下，用盐酸处理。

步骤(iv)一般包括上述流程4中所述的步骤。

流程7

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上定义，且R⁶＝H或F。P⁵、P⁶和P⁷表示 合适的保护基，例如P⁵可以为C_1-6烷氧基羰基，且P⁶和P⁷可以为C_1-6烷基 (P⁶和P⁷不必相同)。L¹为合适的离去基，如卤素(如氯或溴)。

步骤(i)一般包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如-78℃至 室温下，将(17)用合适的碱如六甲基二硅烷基胺钾(potassium hexamethyldisilazide)和烷基化试剂如烷基卤化物处理。

步骤(ii)一般包括使用羧酸酯转化为酸的标准方法，如在合适的溶剂如 二氯甲烷中，在合适的温度如室温下，使用合适的酸(如三氟乙酸)处理。

流程8

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如上定义，且R⁶＝H或F。P⁸、P⁹和P¹⁰表 示合适的保护基，如P⁸和P⁹为C_1-6烷基(P⁸和P⁹不必相同)且P¹⁰为从合适的 非环状或环状酮衍生的基团。

与下述流程8的步骤(i)-(iii)中所示的转化类似的方法已经描述于先前的 化学文献中(如J.Wehbe，等人，Tetrahedron：Asymmetry.，14(2003)， 1123-1126)。

步骤(i)一般包括在合适的溶剂如甲苯中，在合适的温度如110℃下， 将(19)用合适的酮如(1R，2R，5R)-2-羟基蒎烷-3-酮和路易斯酸如三氟化硼-乙 醚络合物(boron trifluoride etherate)处理。

步骤(ii)一般包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如-30℃ 下，将(20)用Grignard试剂如溴化甲基镁，和碱如1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一 碳-7-烯，然后用不饱和的酯(21)如巴豆酸乙酯处理。

步骤(iii)一般包括使用亚胺转化为胺的标准方法，如在合适的溶剂如四 氢呋喃中，在合适的温度如室温下，使用合适的酸(如15％柠檬酸水溶液)处 理。

步骤(iv)一般包括在合适的溶剂如甲苯中，在合适的温度如室温至 120℃下加热(23)。

步骤(v)一般包括上述流程4中描述的步骤。

流程9

其中R¹、R⁴、R⁵和R⁶如上定义，R²和R³各自表示上述除卤素外的基 团，L¹和L²为合适的离去基，如卤素(如氯或溴)，且P¹¹表示合适的保护基， 如三苯甲基。

步骤(i)一般包括在合适的溶剂如二甲基甲酰胺中，在合适的温度如0℃ 至室温下，将(25)用碱如氢化钠和烷基化试剂如烷基卤化物处理。

步骤(ii)一般包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如-78℃ 至室温下，将(26)用碱如二异丙基氨基化锂和烷基化试剂如烷基卤化物处理。

步骤(iii)一般包括在合适的溶剂如四氢呋喃中，在合适的温度如-78℃ 至室温下，将(27)用碱如二异丙基氨基化锂和烷基化试剂如烷基卤化物处理。

步骤(iv)一般包括使用醇脱保护的标准方法。例如，当P¹¹为三苯甲基 时，在合适的溶剂如甲醇中，并在合适的温度如室温下，将(28)用合适的酸 如Amberlyst 处理。

步骤(v)一般包括使用醇氧化成相应的羧酸的标准方法，如在合适的溶 剂如磷酸二氢钠缓冲水溶液和乙腈的混合物中，在合适的温度如40℃下， 将醇(29)用氧化剂如亚氯酸钠、TEMPO(2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧自由基) 和漂白剂(次氯酸钠溶液)的组合处理。

步骤(ii)或步骤(iii)视需要可以省略以制备化合物，其中分别R²＝H或 R³＝H。

通式(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(10)、(12)、(13)、(17)、(19)、(21)和(25) 的化合物一般来自市售或可由本领域技术人员使用化学文献中描述的方法 (或使用类似方法)制备。

相关的，药学上可接受的盐可以通过与合适的酸或酸衍生物的反应而方 便地制备。

临床适应症

据信本发明化合物可调节P2X7受体功能且能够拮抗ATP对P2X7受体 的作用，本发明的化合物可用于治疗疼痛，包括急性疼痛、慢性疼痛、慢性 关节疼痛、肌肉骨骼疼痛、神经性疼痛、炎性疼痛、内脏疼痛、与癌症有关 的疼痛、与偏头痛、紧张性头痛和丛集性头痛有关的疼痛、与功能性肠紊乱 有关的疼痛、下背和颈部疼痛、与扭伤和劳损有关的疼痛、交感性持续疼痛 (sympathetically maintained pain)；肌炎、与流行性感冒或其它病毒感染(如普 通感冒)有关的疼痛、与风湿热有关的疼痛、与心肌缺血有关的疼痛、术后 疼痛、癌症化疗、头痛、牙痛和痛经。

慢性关节疼痛病症包括类风湿性关节炎、骨关节炎、类风湿性脊椎炎、 痛风性关节炎和幼年型关节炎。

与功能性肠紊乱有关的疼痛包括非溃疡性消化不良、非心脏性胸疼痛和 过敏性肠综合征。

神经性疼痛综合征包括：糖尿病性神经病，坐骨神经痛，非特异性下腰 痛，三叉神经痛，多发性硬化疼痛，纤维肌痛，HIV-相关的神经病，疱疹后 神经痛，三叉神经痛和由于身体外伤、截肢术、幻肢综合征、脊柱手术、癌 症、毒素或慢性炎性病症引起的疼痛。而且，神经性疼痛病症包括与通常的 非疼痛性感觉有关的疼痛，所述的感觉如＂发麻＂(感觉异常和感觉迟钝)、对 接触的敏感性增加(感觉过敏)、无害刺激后的疼痛性感觉(动态、静止、热或 冷异常性疼痛)、对有害刺激的敏感性增加(热、冷、机械痛觉增敏)、移除刺 激后的持续痛觉(痛觉过敏)或选择性感觉传导通路中的缺失或缺乏(痛觉感 退)。

能用本发明化合物治疗的其它病症包括发热、炎症、免疫性疾病、异常 血小板功能疾病(如闭塞性血管病)、性无能或勃起机能障碍；特征为异常骨 代谢或再吸收的骨疾病；非甾抗炎药(NSAID′s)和环氧合酶-2(COX-2)抑制剂 的血液动力学副作用、心血管疾病；神经变性疾病(neurodegenerative diseases) 和神经退行性变(neurodegeneration)、创伤后的神经退行性变、耳鸣、对成瘾 药物如阿片样物质(如吗啡)、CNS镇静剂(如乙醇)、精神兴奋剂(如可卡因) 和尼古丁的依赖性(dependence on a dependence-inducing agent)；I型糖尿病并 发症、肾功能障碍、肝功能障碍(如肝炎、肝硬变)、胃肠功能紊乱(如腹泻)、 结肠癌、膀胱活动过度和欲望性尿失禁。抑郁症和酒精中毒也能用本发明化 合物治疗。

炎症和与所述炎症有关的炎性病症包括皮肤病症(如晒伤、烧伤、湿疹、 皮炎、过敏性皮炎、牛皮癣)、髓膜炎、眼病如青光眼、视网膜炎、视网膜 病、葡萄膜炎和眼组织的急性损伤(如结膜炎)、炎性肺病(如哮喘、支气管炎、 肺气肿、过敏性鼻炎、呼吸窘迫综合征、好鸽者病、农民肺、慢性阻塞性肺 病(COPD)、气道高反应性)；胃肠道疾病(如口疮性溃疡、克罗恩病、特应性 胃炎、痘疹状胃炎(gastritis varialoforme)、溃疡性结肠炎、腹部疾病、节段性 回肠炎、过敏性肠综合征、炎性肠病、胃肠回流疾病(gastrointestinal reflux disease))；器官移植和其它具有炎性成分的病症，如脉管疾病、偏头痛、结 节性动脉周围炎、甲状腺炎、再生障碍性贫血、霍奇金病、硬皮病、重症肌 无力、多发性硬化、结节病(sorcoidosis)、肾病综合征、黑奇特综合征(Bechet’s syndrome)、龈炎、心肌缺血、发热、全身性红斑狼疮、多发性肌炎、腱炎、 滑囊炎和舍格伦综合征。

免疫性疾病包括自身免疫性疾病、免疫缺陷疾病或器官移植。

特征为异常骨代谢或再吸收的骨疾病包括骨质疏松症(尤其是绝经后骨 质疏松症)、高钙血综合征、甲状旁腺功能亢进症、佩吉特骨疾病(Paget’s bone diseases)、骨质溶解、具有或没有骨转移的恶性肿瘤的高钙血综合征、类风 湿性关节炎、牙周炎、骨关节炎、骨痛、骨质减少、癌性恶病质、结石病、 结石形成(尤其是尿石病)、实体癌、痛风和强直性脊柱炎、腱炎和滑囊炎。

心血管疾病包括高血压或心肌缺血；动脉粥样硬化；功能性或器官静脉 机能不全(functional or organic venous insufficiency)；曲张的治疗；痔；和与 动脉亚明显下降有关的休克状态(如感染性休克)。

神经变性疾病包括痴呆、尤其是退行性痴呆(包括老年性痴呆、具有路 易体痴呆(dementia with Lewy bodies)、阿耳茨海默病、皮克病、亨廷顿舞蹈 病、帕金森病和克雅病、肌萎缩侧索硬化(ALS)和运动神经元疾病)；血管性 痴呆(包括多发梗塞性痴呆)；以及与颅内占位性病相关的痴呆；创伤；感染 和相关的病症(包括HIV感染、髓膜炎和带状疱疹)；代谢；毒素；缺氧和维 生素缺乏；以及与年龄相关的轻度认知缺损，尤其是与年龄相关的记忆损伤。

式(I)化合物也可用于神经保护和治疗创伤后的神经退行性变，如中风、 心脏停搏、肺动脉旁路、外伤性脑损伤、脊髓损伤等。

本发明的化合物也可用于治疗恶性细胞生长和/或转移，和成肌细胞白 血病。

1型糖尿病的并发症包括糖尿病性微血管病、糖尿病性视网膜病、糖尿 病性肾病、黄斑变性、青光眼、肾病综合征、再生障碍性贫血、葡萄膜炎、 川畸病和结节病。

肾功能障碍包括肾炎、肾小球肾炎，尤其是肾小球膜增生性肾小球肾炎 和肾炎综合征。

应该理解除非另由说明，涉及的治疗包括对已经形成的症状的治疗和预 防性治疗。

根据本发明的另一方面，由此我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受 的盐，其用于人或兽用药。

根据本发明的另一方面，我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受的 盐，其用于治疗由P2X7受体介导的病症。

根据本发明的另一方面，我们提供了治疗患有由P2X7受体介导的病症 的人或动物患者的方法，该方法包括向所述患者给予有效量的式(I)化合物或 其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，我们提供了治疗患有疼痛、炎症或神经变性疾 病的人或动物患者的方法，该方法包括向所述患者给予有效量的式(I)化合物 或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，我们提供了治疗患有炎性疼痛、神经性疼痛或 内脏疼痛的人或动物患者的方法，该方法包括向所述患者给予有效量的式(I) 化合物或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，我们提供了治疗患有阿耳茨海默病的患者，例 如人患者的方法，该方法包括向所述患者给予有效量的式(I)化合物或其药学 上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗由P2X7受体的作用所介导的病症的药物中的用途。

根据本发明的另一方面，我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗或预防疼痛、炎症或神经变性疾病的药物中的用途。

根据本发明的另一方面，我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗或预防炎性疼痛、神经性疼痛或内脏疼痛的药物中的用途。

在本发明的一个方面中，我们提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗或预防阿耳茨海默病的药物中的用途。

为了使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐来治疗人和其它哺乳动物， 通常将其用标准药物方法配制成药物组合物。因此，在本发明的另一方面中 提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，其适合用于人 或兽用药物。

为了在治疗中使用式(I)化合物，通常用标准药学方法将它们配制成药物 组合物。本发明也提供了药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受 的盐，和任选的药学上可接受的载体。

本发明的药物组合物(其可以通过在环境温度和大气压下混合制备)通 常适合用于口服、胃肠外或直肠给药，且由此可为片剂、胶囊、口服液体制 剂、粉末、颗粒、锭剂、可重构粉末(reconstitutable powders)、注射或输注溶 液或混悬剂或栓剂。通常优选口服给药的组合物。

口服给药的片剂和胶囊可以为单位剂量形式，且可以含有常规的赋形 剂，如粘合剂、填充剂、压片润滑剂、崩解剂和可接受的湿润剂。片剂可根 据常规药学实践中公知的方法包衣。

口服液体制剂可以为，例如水性或油性混悬剂、溶液、乳剂、糖浆剂或 酏剂的形式，或可以为用于在使用前用水或其它合适的溶媒重构的干燥产品 的形式。这些液体制剂可以含有常规添加剂如助悬剂、乳化剂、非水溶媒(其 可包括食用油)、防腐剂，且视需要常规的香味剂或着色剂。

对于胃肠外给药，使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐和无菌溶 媒制备液体单位剂型。化合物，根据所用的溶媒和浓度，可混悬或溶解在溶 媒中。在制备溶液中，可溶解化合物用于注射，并无菌过滤，然后填充入合 适的小瓶或安瓿中并密封。有利地，将佐剂，如局麻药、防腐剂和缓冲剂溶 解到溶媒中。为了提高稳定性，填充到小瓶中并在真空下移除水后可以将组 合物冷冻。胃肠外混悬剂可以基本相同的方式制备，除了化合物是混悬而不 是溶解在溶媒中，且不用过滤进行灭菌。化合物可通过暴露于环氧乙烷中进 行灭菌，然后混悬在无菌溶媒中。有利地，在组合物中包含表面活性剂或湿 润剂以促进化合物的均匀分布。

取决于给药方法，组合物可含有0.1％至99％重量，优选10至60％重量 的活性物质。

在治疗上述疾病中所用的化合物的剂量将根据疾病的严重程度、患者体 重和其它相似因素以常规方法改变。然而，作为通常的指导，合适的单位剂 量可为0.05至1000mg，更适合为0.05至200mg，例如20-40mg；且该单 位剂量将优选每天给药一次，但可能需要每天给药多于一次；且该治疗可持 续多周或多个月。

说明书中所引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请在本文中 引入作为参考，如同每篇出版物具体地和分别地表示全部并入本文作为参考。

下述说明书和实施例说明本发明化合物的制备，但不是为了限制本发 明。

实施例：

通用方法(a)-(d)，与上述流程1-9中所示的合成方法，用于制备本发明 的化合物，这些方法将进一步通过下述实施例进行说明。

实施例1 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酰胺(E1)

在氩气氛下，将5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酸(0.176g，0.80mmol，如下 制备)溶于二氯甲烷(3ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.119g，0.88 mmol)、三乙胺(0.113ml，0.81mmol)、[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.134g，0.84 mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.169g，0.88 mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，且依次用2M盐 酸水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层通过分相器过滤，然后蒸发得 到粗产物。粗物质通过质谱检测的自动(mass-directed automated)HPLC纯化 得到纯的N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酰胺(0.112g)， 为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝361.2，保留时间＝2.55分钟。

上述方法中所用的5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酸如下制备：

(i)将L-谷氨酸二甲酯盐酸盐(0.500g，2.37mmol)溶于甲醇(10ml)中，并 冷却至0℃。然后将混合物用氢氧化钠(0.099g，2.49mmol)处理，然后用乙 酸(0.136ml，2.37mmol)和苯甲醛(0.361ml，3.55mmol)处理。于0℃搅拌10 分钟后，加入硼氢化钠(0.088g，2.37mmol)，且将混合物温热至室温，并搅 拌过夜。将混合物再次冷却至0℃，并用另一些硼氢化钠(0.044g，1.18mmol) 处理。混合物再次温热至室温，并搅拌过夜。蒸发甲醇得到残余物，将其溶 于乙酸乙酯中并过滤。然后将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，通过分相器 过滤(同时搅拌)，并蒸发得到澄清油状物(0.56g)。将该油状物溶于甲醇中， 并在密封的管中在微波反应器中于120℃加热10分钟，然后于140℃加热 15分钟(LC/MS表明加热期间混合物的组成没有明显改变)。蒸发溶剂，且将 残余物通过快速硅胶柱色谱法，用15-20％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱 来纯化，得到纯的5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酸甲酯(0.212g)，为澄清油状物。

LC/MS[M+H]⁺＝234，保留时间＝2.15分钟。

(ii)将5-氧代-1-(苯基甲基)-脯氨酸甲酯(0.212g，0.91mmol)溶于水(3ml) 和甲醇(0.5ml)中，并用2M氢氧化钠水溶液(0.682ml，1.36mmol)处理。混合 物在室温下搅拌过夜，然后用二氯甲烷洗涤。蒸发水层，且残余物用过量的 1M氯化氢的醚溶液(～5ml)处理。再次蒸发混合物，且残余物用二氯甲烷研 磨。排出固体物质，并蒸发合并的二氯甲烷级分(fractions)，得到5-氧代-1-(苯 基甲基)-脯氨酸(0.182g)，为黄色油状物，其没有进一步纯化即使用。

LC/MS[M+H]⁺＝220，保留时间＝1.72分钟。

实施例2 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酰胺 (E2)

在氩气氛下，将1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酸(0.060g，0.35mmol，如下 制备)溶于二氯甲烷(3ml)和二甲基甲酰胺(1ml)中，并向其中加入1-羟基苯 并三唑(0.052g，0.39mmol)、[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.061g，0.39mmol)和 N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.074g，0.39mmol)。混合 物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，并依次用2M盐酸水溶液和 饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层通过分相器过滤，然后蒸发得到粗产物。 粗物质通过质谱检测的自动HPLC纯化，得到纯的N-[(2-氯-4-氟苯基)甲 基]-1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酰胺(0.032g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝ 313.1，保留时间＝2.26分钟。

上述方法中所用的1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酸如下制备：

(i)将L-谷氨酸二甲酯盐酸盐(0.500g，2.37mmol)溶于甲醇(4ml)和四氢 呋喃(8ml)中，然后将混合物用粉碎的氢氧化钠(0.099g，2.49mmol)处理10 分钟。这时，将乙酸(0.136ml，2.37mmol)和丙酮(0.261ml，3.55mmol)一起加 入至为四氢呋喃溶液(1ml)的混合物中。搅拌10分钟后，将混合物冷却至 0℃，并用硼氢化钠片(pellets)(0.088g，2.37mmol)处理。然后将混合物温热 至室温，并搅拌过夜。蒸发甲醇得到残余物，将其溶于乙酸乙酯中并过滤。 然后滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，通过分相器过滤(同时搅拌)，并蒸发 得到澄清油状物(0.217g)。油状物通过快速硅胶柱色谱法纯化得到纯N-(1- 甲基乙基)-谷氨酸二甲酯(0.200g)。

(ii)将N-(1-甲基乙基)-谷氨酸二甲酯(0.200g)溶于甲醇中，并在密封管 中在微波反应器中于140℃加热20分钟。薄层色谱表明起始物质保持原样， 因而蒸发溶剂，并用甲苯代替。将混合物于回流温度加热～3小时，然后蒸 发得到1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酸甲酯(0.152g)，为淡黄色油状物，其没 有进一步纯化就用于下一步骤。

(iii)将1-(1-甲基乙基)-5-氧代-脯氨酸甲酯(0.152g，0.82mmol)溶于水(3 ml)和甲醇(0.5ml)中，并用2M氢氧化钠水溶液(0.682ml，1.36mmol)处理。 混合物于室温搅拌～4小时，然后用二氯甲烷洗涤。蒸发水层，且残余物用 过量1M氯化氢的醚溶液(～5ml)处理。再次蒸发混合物，且残余物用二氯甲 烷研磨。排出固体物质，且蒸发合并的二氯甲烷级分，得到1-(1-甲基乙基)-5- 氧代-脯氨酸(0.060g)，为黄色油状物，静置结晶。

实施例3 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-脯氨酰胺(E3)

将1-乙基-5-氧代-脯氨酸甲酯(0.135g，0.79mmol，如下制备)溶于甲醇(4 ml)中，并用2M氢氧化钠水溶液(0.592ml，1.18mmol)处理。混合物于室温 搅拌～4小时，然后蒸发得到残余物，其然后用过量1M氯化氢的醚溶液(～5 ml)处理10分钟。再次蒸发混合物，且将残余物溶于二氯甲烷(4ml)和二甲 基甲酰胺(2ml)中，并过滤移除固体。将所得溶液转移至反应管中，然后加 入1-羟基苯并三唑(0.117g，0.87mmol)、[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.138g， 0.87mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.167g，0.87 mmol)。混合物用氩气吹扫，然后于室温搅拌过周末。然后混合物用二氯甲 烷稀释，并依次用2M盐酸水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层通过 分相器过滤，且然后蒸发得到粗产物。粗物质通过质谱检测的自动HPLC纯 化得到纯的N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-脯氨酰胺(0.086g)，为白 色固体。LC/MS[M+H]⁺＝299.1，保留时间＝2.13分钟。

对映异构体过量＝100.0％，通过手性色谱法B检测，表明为N-[(2-氯-4- 氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-L-脯氨酰胺

保留时间＝8.05分钟

上述方法中所用的1-乙基-5-氧代-脯氨酸甲酯如下制备：

(i)将L-谷氨酸二甲酯盐酸盐(0.500g，2.37mmol)溶于甲醇(4ml)和四氢 呋喃(8ml)中，且混合物用粉碎的氢氧化钠(0.099g，2.49mmol)处理10分钟。 这时，将乙酸(0.136ml，2.37mmol)和乙醛(0.199ml，3.55mmol)一起加入至为 四氢呋喃溶液(1ml)的混合物中。搅拌10分钟后，将混合物冷却至0℃，且 用硼氢化钠片(0.088g，2.37mmol)处理。然后将混合物温热至室温。当混合 物达到室温后，将其用乙酸乙酯(30ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤， 通过分相器过滤(同时搅拌)，并蒸发得到油状残余物。将该油状物溶于甲苯 中，并于回流下加热4小时。为确保完成，然后将混合物于回流下加热过夜。 然后蒸发溶剂，且所得残余物通过快速硅胶柱色谱法，梯度为30-50％乙酸 乙酯的己烷溶液洗脱来纯化，得到粗的1-乙基-5-氧代-脯氨酸甲酯(0.135g)， 为澄清油状物，其没有进一步纯化即使用。

实施例4-8

用与上述实施例3中所述相似的方法，通过用合适的醛(或酮)代替上述 方法中使用的乙醛而制备下表(表1)中的化合物。所有用于制备表1中所示的 化合物的醛和酮来自市售或可使用化学文献中已经描述的途径制备。

表1

实施例9 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-苯基-脯氨酰胺(E9)

将5-氧代-1-苯基-脯氨酸(0.047g，0.23mmol，如下制备)溶于二氯甲烷 (～2ml)和二甲基甲酰胺(1ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.034g，0.25 mmol)、[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.040g，0.25mmol)、N-乙基吗啉(0.032ml， 0.25mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.048g，0.25 mmol)。将混合物于室温搅拌4.5小时。将混合物再用二氯甲烷稀释，并依 次用2M盐酸水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。有机层通过分相器过滤， 然后蒸发得到粗产物。粗物质通过质谱检测的自动HPLC纯化，得到纯的 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-苯基-脯氨酰胺(0.032g)，为白色固体。 LC/MS[M+H]⁺＝347.1，保留时间＝2.51分钟。

上述方法中使用的5-氧代-1-苯基-脯氨酸如下制备：

(i)将5-氧代-L-脯氨酸甲酯(0.204ml，1.75mmol)溶于甲苯(5ml)中，并 用三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(0.024g，0.03mmol)、溴苯(0.184ml，1.75 mmol)、碳酸铯(0.795g，2.45mmol)和Xantphos^TM(0.040g，0.07mmol)处理。 所得混合物于120℃加热～18小时，然后冷却至室温。混合物用乙酸乙酯稀 释，并依次用2M盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。通过分相 器过滤，然后蒸发得到黄色/褐色油状物(～0.200g)。粗物质通过质谱检测的 自动HPLC纯化得到纯5-氧代-1-苯基脯氨酸甲酯(0.054g)，为油状物，将其 静置结晶。LC/MS[M+H]⁺＝220，保留时间＝2.03分钟。

(ii)将5-氧代-1-苯基脯氨酸甲酯(0.054g，0.25mmol)与2M氢氧化钠水 溶液(0.160ml，0.32mmol)在甲醇(1ml)中合并，并于室温搅拌过夜。然后蒸 发溶剂，且将残余物溶于乙酸乙酯中，并用2M盐酸水溶液洗涤。分离水层， 并用乙酸乙酯洗涤两次，然后合并的乙酸乙酯层用分相器干燥，并蒸发得到 5-氧代-1-苯基-脯氨酸(0.047g)，为澄清油状物。

实施例10 N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(E10)

将1-甲基-5-氧代-脯氨酸(0.057g，0.4mmol，如下制备)溶于无水二氯甲 烷(6ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.060g，0.4mmol)、[(2，4-二氯- 苯基)甲基]胺(0.055ml，0.4mmol)、二异丙基胺(0.140ml，0.8mmol)和O-(7- 氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.152g，0.4mmol)。 混合物于室温(20℃)氩气下搅拌3小时，然后过夜。混合物再用二氯甲烷稀 释(25ml)，且依次用2M盐酸水溶液(20ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)、 10％碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。有机层通过疏水性玻璃料过滤， 然后蒸发得到粗产物。将粗物质溶于二甲基亚砜(0.9ml)和乙腈(0.9ml)的混 合物中，然后通过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-[(2，4-二氯苯基)甲 基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(0.085g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝301，保 留时间＝2.16分钟。

上述方法中使用的1-甲基-5-氧代-脯氨酸如下制备：

(i)将N-甲基-L-谷氨酸(0.500g，3.1mmol)溶于水(1ml)中，且在微波反 应器中，在密封管中于140℃加热30分钟。然后蒸发水，且残余物用醚研 磨，干燥后得到1-甲基-5-氧代-脯氨酸(0.298g)，为白色固体。

N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺也可以如下制备：

将1-甲基-5-氧代-脯氨酸(36.79g，0.257摩尔，如上制备)混悬于DCM(二 氯甲烷)(500ml)中。一次性加入EEDQ(2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉， 66.7g，0.27摩尔，1.05当量)。看起来所有物质溶解后得到不透明混合物，且 温度从21℃降至10℃。氩气下搅拌20分钟，然后经40分钟滴加2，4-二氯 苄基胺(36ml，0.27摩尔，1.05当量)的DCM溶液(100ml)。加入过程中，在滴 液漏斗中形成白色沉淀。混合物轻微产生气泡，且使用冰/水浴以保持温度为 15-20℃。加入胺完成后，滴液漏斗再用DCM(50ml)洗涤以将所有沉淀洗入 反应混合物中。然后将混合物温热至室温，并搅拌大约18小时。将饱和碳 酸氢钠水溶液(200ml)加入至混合物中，并搅拌5分钟。然后分离有机层，并 用2N的HCl(3 x 250ml)洗涤。酸洗过程中，在有机层中开始形成晶体，因 此再用DCM(200ml)稀释。有机层通过疏水性玻璃料干燥，然后真空浓缩得 到65g粉色固体。固体形成大块，因此粗物质用杵和钵研磨。然后用乙醚 (400ml)研磨，并滤出固体，并再用Et₂O(2 x 200ml)洗涤。然后干燥得到52.96g 淡粉色固体。其与用相同方法制备的2批物质合并(共141.42g)，然后混悬于 乙醇(430ml)和水(715ml)中，并逐渐温热至65℃(溶液温度)。混合物得到几 乎澄清的溶液(深粉色)，只是存在非常细的固体悬浮物。于65℃加热20分 钟后，从加热上移走烧瓶，并温热至室温过夜。之后，从溶液中沉淀出白色 针状物。将混合物在冰浴中冷却20分钟以确保所有的固体沉淀。然后从粉 色溶液中滤出白色固体，并用3:5比例的EtOH/H₂O(2 x 400ml)(其已经在 冰浴中冷却)洗涤。在真空烘箱中(40℃)干燥该固体总共5天得到纯N-[(2，4- 二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(125.37g)，为无色晶体。

LC/MS[M+H]⁺＝301，保留时间＝2.34分钟。

¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ 2.01(m，1H)，2.34(m，1H)，2.37(m，1H)， 2.46(m，1H)，2.80(s，3H)，3.99(dd，1H，J＝9.1，4.2Hz)，4.49(dd，1H，J＝14.9， 5.9Hz)，4.55(dd，1H，J＝14.8，6.1Hz)，6.56(宽t，1H，J＝5.7Hz)，7.24(dd，1H， J＝8.2，2.1Hz)，7.33(d，1H，J＝8.2Hz)，7.40(d，1H，J＝2.1Hz)；¹³C NMR δ 175.9，171.3，134.5，134.3，133.7，131.5，129.6，127.5，63.8，41.2，29.4，29.2， 23.4。

对映异构体过量＝99.5％，通过手性色谱法A检测表明为N-{[2-氯-3-(三 氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代-L-脯氨酰胺

保留时间＝9.89分钟

[α]_D＝-2.1°(c＝1，MeOH)，温度＝29.3℃，波长＝589nm

熔点＝144.0-144.8℃

实施例11 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(E11)

将1-甲基-5-氧代-脯氨酸(0.050g，0.35mmol，如下制备)溶于无水二氯 甲烷(～7ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.047g，0.42mmol)、[(2-氯-4- 氟苯基)甲基]胺(0.056ml，0.42mmol)、N-乙基吗啉(0.166ml，1.04mmol)和 N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.067g，0.42mmol)。混合 物在室温下搅拌过夜。将另一等份(aliquot)的[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.100 ml，0.8mmol)加入至混合物，并继续搅拌更长的时间，但HPLC表明没有进 一步的产物形成。将混合物依次用2M盐酸水溶液(5ml)和饱和碳酸氢钠水 溶液(5ml)洗涤。收集有机层并蒸发得到粗产物。粗物质通过质谱检测的自 动HPLC纯化得到纯N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(0.015 g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝285，保留时间＝2.04分钟。

上述方法中使用的1-甲基-5-氧代-脯氨酸如下制备：

(i)将(L)-焦谷氨酸甲基酯(1g，6.99mmol)溶于/混合于四氢呋喃(10ml) 中，且使用冰浴冷却至0℃。将氢化钠(0.201g，60％在油中的混悬液，8.38 mmol)加入至混合物。停止产生气泡后，加入碘甲烷(0.522ml，8.38mmol)， 并将混合物温热至室温，然后搅拌1小时。蒸发溶剂，并加入水(1ml)。然 后水层用二氯甲烷萃取。蒸发二氯甲烷得到粗1-甲基-5-氧代-脯氨酸甲酯 (0.308g)，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(ii)将1-甲基-5-氧代-脯氨酸甲酯(0.308g，1.96mmol)溶于甲醇(～10ml) 中，并向其中加入氢氧化钠(0.157g，3.92mmol)的水(～10ml)溶液。混合物于 回流加热3小时，然后冷却并蒸发至留下最少量的水。将其用2M盐酸水溶 液酸化至pH1。水层用二氯甲烷洗涤，然后分离并蒸发得到1-甲基-5-氧代- 脯氨酸，为白色固体(0.300g)。

实施例12 1-乙基-5-氧代-N-[(2，3，4-三氟苯基)甲基]-脯氨酰胺(E12)

将1-乙基-5-氧代-脯氨酸(0.050g，0.32mmol)溶于无水二氯甲烷(～7ml) 和二甲基甲酰胺(1ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.052g，0.38 mmol)、[(2，3，4-三氟苯基)甲基]胺(0.103g，0.64mmol)、N-乙基吗啉(0.151ml， 0.95mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.073g，0.38 mmol)。混合物于室温振摇过周末。将另一等份的[(2，3，4-三氟苯基)甲基]胺 (0.051g，0.32mmol)加入至混合物中，并继续搅拌更长的时间直到HPLC表 明没有进一步的产物生成。混合物用2M盐酸水溶液(5ml)稀释，然后通过 分相器过滤。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次通过分相器过滤。 然后蒸发有机层得到粗产物。粗物质通过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯 1-乙基-5-氧代-N-[(2，3，4-三氟苯基)甲基]-脯氨酰胺(0.032g)。

LC/MS[M+H]⁺＝301，保留时间＝2.03分钟。

上述方法中使用的1-乙基-5-氧代-脯氨酸如下制备(方法A)：

(i)将L-谷氨酸二甲酯盐酸盐(5.0g，23.7mmol)溶于甲醇(100ml)中，然 后混合物在氩气下于室温用磨碎的氢氧化钠(1.0g，24.9mmol)处理。5分钟 后，加入乙醛(1.99ml，35.5mmol)并继续搅拌10分钟。将混合物冷却至0℃， 并用硼氢化钠颗粒(0.701g，18.95mmol)处理。于0℃继续搅拌1小时，然 后蒸发出甲醇，且将残余物溶于乙酸乙酯并过滤。然后滤液用盐水洗涤，且 该盐水洗液用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯级分通过疏水性玻璃料过滤， 并蒸发得到澄清油状物(3.2g)。将油状物溶于甲苯(30ml)中，并于回流加热 过夜。然后蒸发甲苯得到淡橙色残余物，其通过快速硅胶柱色谱法，用梯度 20-60％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱来纯化，得到部分纯的1-乙基-5-氧代-脯 氨酸甲酯(1.9g)，为澄清油状物。其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(ii)将1-乙基-5-氧代-脯氨酸甲酯(1.91g，11.17mmol)溶于甲醇(25ml) 中，并用2M氢氧化钠水溶液(7.3ml，14.52mmol)处理。混合物于室温搅拌 4小时，然后用二氯甲烷洗涤。蒸发水层，且残余物用过量1M氯化氢的醚 溶液(～5ml)处理。再次蒸发混合物，且残余物用二氯甲烷研磨。除去固体 物质，且蒸发合并的二氯甲烷级分，得到澄清油状物，静置结晶。用己烷和 醚研磨，并干燥得到纯1-乙基-5-氧代-脯氨酸(0.271g)，为白色固体。

或者，1-乙基-5-氧代-脯氨酸可如下制备(方法B)：

(i)将5-氧代-L-脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(2.7g，12mmol，如 Synth.Comm.，2005，35(8)，1129中制备)加入至氢化钠(0.428g(60％在油中的 混悬液)，10.7mmol)在四氢呋喃(6ml)中的混悬液中，且混合物于室温搅拌5 分钟。然后加入碘乙烷(1.67g，10.7mmol)，且混合物于40℃加热2小时。 加入另一些氢化钠(0.24g)，并于室温继续搅拌过夜。这时，再将另一部分碘 乙烷(0.86ml)加入至混合物中。将混合物于室温放置过周末。将水(～10ml) 加入至混合物中，并将其搅拌15分钟。蒸发四氢呋喃，且剩余的水层用二 氯甲烷(2x50ml)以及氯仿和异丙醇的3:1混合物(50ml)萃取。合并的有机相 通过疏水性玻璃料过滤，并蒸发得到黄色油状物。将甲苯加入至混合物中， 并再次蒸发得到黄色油状物。该物质通过自动硅胶快速色谱(Biotage SP4)， 用15-100％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱来纯化，得到纯1-乙基-5-氧代- 脯氨酸1，1-二甲基乙基酯。

(ii)将1-乙基-5-氧代-脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(0.965g)溶于二氯甲烷 (～5ml)中，并用三氟乙酸(1ml)处理。混合物于室温搅拌1.5小时，然后蒸发。 所得物质大部分为起始物质，因此再加入三氟乙酸(1ml)和二氯甲烷(～5ml)， 且于室温搅拌混合物36小时。蒸发混合物，然后将甲苯加入至残余物中， 再次蒸发。再次重复该过程，得到粗的1-乙基-5-氧代-脯氨酸，为暗黄色油 状物，其没有再纯化即使用。

或者，1-乙基-5-氧代-脯氨酸可如下制备(方法C)：

(i)将5-甲基-L-谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)酯盐酸盐(5.0g，19.71mmol) 溶于甲醇(30ml)和四氢呋喃(60ml)的混合物中，然后在氩气下于室温下，将 混合物用粉碎的粉末化的氢氧化钠(0.828g，20.69mmol)处理。搅拌10分钟 后，加入乙醛(1.11ml，19.71mmol)和乙酸(1.13ml，19.71mmol)，并继续搅拌 10-15分钟。将混合物在冰浴中冷却至0℃，并用硼氢化钠片(0.746g，19.71 mmol)处理。继续于0℃氩气下搅拌～1小时。将混合物温热至室温得到浓的 混悬液。滤出细粒的白色固体，然后蒸发出甲醇，且将残余物溶于二氯甲烷 (～50ml)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(～25ml)洗涤。使用分相器分离有机层， 然后水层再用二氯甲烷(2 x 20ml)反萃取(back extract)。蒸发合并的有机层得 到无色油状物(～4g)。将该油状物(3g，假定14.8mmol)溶于甲苯(30ml)中， 并于回流下加热～16小时，过夜得到橙色溶液。然后蒸发甲苯得到橙色油状 物(2.6g)。其与另一批使用相同方法得到的油状物(0.850g)合并，然后通过 自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用梯度20-80％乙酸乙酯的己烷溶液洗 脱纯化，得到纯1-乙基-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(2.14g)。

(ii)将1-乙基-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(0.933g)溶于二氯甲烷(～5 ml)中，并用三氟乙酸(1ml)处理。混合物于室温搅拌3小时，然后蒸发。将 残余物溶于甲苯中，并再次蒸发。得到部分纯(>95％)的1-乙基-5-氧代-脯氨 酸，为橙色/黄色油状物(0.914g)，其没有进一步纯化即使用。

实施例13-36

用与上述实施例12相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替上述方法 中使用的[(2，3，4-三氟苯基)甲基]胺制备下表(表2)中的化合物。制备表2中所 示化合物所用的所有胺来自市售或可通过化学文献中已经描述的途径制备 或通过与其类似的方法制备。每种情况中，反应中所用的1-乙基-5-氧代-脯 氨酸通过所示方法制备。当检测(通过手性HPLC)时，也列出了所示异构体的 对映异构体过量(e.e.)，以及立体特异性名称，所用的手性分离方法和该方法 中相应的保留时间(r.t.)。

表2

合成N-[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(实施例36)所 需的[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]胺盐酸盐以下述方法制备：

(i)将N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(39.6ml，264mmol)的四氢呋喃(170ml) 溶液在氩气下冷却至-70℃，然后加入仲丁基锂(205ml，288mmol)。然后经 过40分钟，向混合物中加入3，4-二氟苯甲酸(19g，120mmol)的四氢呋喃(80 ml)溶液，确保混合物温度不高于-60℃。然后混合物于-68℃至-70℃的温度 搅拌1小时，然后经35分钟加入六氯乙烷(100g，422mmol)的四氢呋喃(170 ml)溶液，同时保持混合物的温度低于-60℃。混合物于-65℃至-70℃的温度 搅拌2小时。将混合物温热至-10℃，然后加入水(500ml)淬灭反应。混合物 用乙醚(250ml)稀释，且分离所得的两层。水层用浓盐酸水溶液酸化至pH为 1，然后用2 x 500ml等份的乙醚萃取。合并的有机萃取液通过疏水性玻璃 料，并在真空中浓缩得到黄色固体。其从乙酸乙酯中重结晶得到两批(8.35g 和4.47g)的纯2-氯-3，4-二氟苯甲酸。

(ii)将2-氯-3，4-二氟苯甲酸(2g，10.4mmol)用亚硫酰氯(3.04ml)处理， 将混合物加热至80℃，保持90分钟。然后冷却混合物，并在真空中浓缩。 残余物溶于无水1，4-二噁烷(10ml)中，然后混合物于冰水浴中冷却。将0.88 氨水(水溶液，25ml)滴加至混合物中，随后经2小时将其温热至22℃。使用 10.8g的2-氯-3，4-二氟苯甲酸、8.2ml的亚硫酰氯和45ml的0.88氨水重复 该过程，然后合并两份混合物，并在乙酸乙酯(150ml)和水(100ml)中分配。 分离水层并用2 x 150ml等份的乙酸乙酯萃取。然后合并的有机萃取液用饱 和碳酸氢钠水溶液(100ml)洗涤，使用疏水性玻璃料干燥，并真空浓缩得到 2-氯-3，4-二氟苯甲酰胺(11.86g)，为白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝192/194，保留时间＝1.69分钟。

(iii)将2-氯-3，4-二氟苯甲酰胺(11.85g，62mmol)溶于四氢呋喃(200ml) 中，并用1M硼烷四氢呋喃(247ml，247mmol)处理。将混合物加热至70℃， 并搅拌18小时。然后将混合物在冰水浴中冷却，并滴加浓盐酸水溶液(150 ml)。然后再于70℃加热并搅拌2小时。然后冷却混合物，并真空蒸发溶剂。 残余物在乙酸乙酯(200ml)和2N盐酸水溶液(200ml)之间分配。分离水层， 并通过滴加5N氢氧化钠水溶液调节pH至8-9。所得浑浊混悬液用乙酸乙酯 (4 x 200ml)萃取，然后合并的有机萃取液通过疏水性玻璃料，并浓缩至体积 为～200ml。然后混合物通过加入1M氯化氢的乙醚溶液(100ml)酸化，形成 沉淀。真空蒸发溶剂得到白色固体。从甲基化酒精(60ml)中重结晶该固体得 到3份纯[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]胺盐酸盐(合并质量＝4.46g)，为白色固 体。

实施例37 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨 酰胺(E37)

将粗1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸(0.052g，0.09mmol，如下制备) 混悬于二氯甲烷(0.5ml)和二甲基甲酰胺(0.5ml)的混合物中，并向其中加入 N-乙基吗啉(0.034ml，0.27mmol)使大部分物质溶解。然后加入1-羟基苯并 三唑(0.016g，0.12mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸 盐(0.022g，0.12mmol)，并搅拌混合物10分钟，然后加入[(2-氯-4-氟苯基) 甲基]胺(0.019g，0.12mmol)。然后将混合物于室温放置过夜。将饱和碳酸氢 钠水溶液(～2ml)加入至混合物中，并搅拌10分钟。有机层通过分相器过滤 分离，然后用2M盐酸水溶液洗涤。再次分离有机层并蒸发得到黄色油状物， 其通过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5- 氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酰胺(0.004g)，为无色油状物。LC/MS[M+H]⁺＝389， 保留时间＝2.90分钟。

上述方法中使用的1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸如下制备(方法 A)：

(i)将(S)-(+)-2-吡咯烷酮-5-甲酸甲酯(0.85g，5.94mmol)溶于二氯甲烷(5 ml)中，并用三乙胺(0.869ml，6.24mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.010g)处理。 向其中加入焦碳酸二叔丁基酯(di-tertbutyl dicarbonate)(1.36g，6.24mmol)， 且将所得橙色溶液搅拌过夜。混合物变为蓝/灰色，并蒸发溶剂得到淡灰色油 状物(1.4g)。其通过自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用梯度0-60％乙酸 乙酯的己烷溶液洗脱纯化得到2-甲基-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸1-(1，1-二甲 基乙基)酯(1.37g)，为无色油状物，静置结晶。

(ii)将2-甲基-5-氧代-1，2-吡咯烷二甲酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(0.324g， 1.33mmol)溶于四氢呋喃(3ml)中，且在氩气氛下使用丙酮/cardice浴将混合 物冷却至-78℃。滴加1M二(三甲基甲硅烷基)氨基化锂的四氢呋喃(1.4ml， 1.40mmol)溶液，并在氩气下搅拌1小时。然后向其中加入苄基溴(0.174ml， 1.46mmol)，且混合物于-78℃再搅拌2.5小时。然后将混合物温热至室温， 并通过加入饱和氯化铵水溶液(～5ml)淬灭，然后于室温放置过夜。分离有机 层，且水层再用水(5ml)稀释，并用乙酸乙酯(3 x 10ml)萃取。合并的有机层 经无水硫酸钠干燥，然后过滤，并浓缩得到黄色油状物(0.700g)。其通过自 动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用0-35％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯 化，蒸发溶剂后，得到2-甲基-5-氧代-4-(苯基甲基)-1，2-吡咯烷二甲酸1-(1，1- 二甲基乙基)酯，为白色固体(0.418g)。

(iii)将2-甲基-5-氧代-4-(苯基甲基)-1，2-吡咯烷二甲酸1-(1，1-二甲基乙 基)酯(0.415g，1.24mmol)溶于4M氯化氢的二噁烷(2ml)溶液中，并于室温 搅拌2小时。蒸发溶剂得到无色油状物，静置结晶得到5-氧代-4-(苯基甲基)- 脯氨酸甲酯，为米色/白色固体(0.205g)。其没有纯化就用于下一步骤。

(iv)将5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸甲酯(0.205g，0.88mmol)溶于四氢呋 喃(2.5ml)中，并用碘乙烷(0.077ml，0.97mmol)处理。然后将混合物冷却至 0℃，并用氢化钠(0.037g，60％在油中的混悬液，0.92mmol)处理。于0℃ 搅拌10-15分钟后，将溶液温热至室温，并再搅拌3.5小时。然后混合物用 饱和氯化铵水溶液(～2ml)处理，随后用二氯甲烷(5ml)稀释。有机层通过疏 水性玻璃料(用另一些等份的二氯甲烷(2 x 5ml)洗涤水层)过滤分离。蒸发合 并的有机相得到褐色油状物(～0.100g)。其通过自动快速硅胶柱色谱，用 0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到部分纯的(～90％纯)1-乙基 -5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸甲酯(0.024g)，为黄色油状物，其没有进一步纯 化就用于下一步骤。

(v)将1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸甲酯(0.024g，0.09mmol)溶于 甲醇(0.5ml)，并在冰浴中冷却至0℃。将2M氢氧化钠水溶液(0.137ml，0.27 mmol)加入至混合物中，并于0℃继续搅拌3小时。蒸发溶剂，且残余物通 过用2M盐酸水溶液(～0.2ml)处理酸化得到浑浊溶液。蒸发得到粗1-乙基-5- 氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸(0.052g)，为白色固体和黄色油状残余物的混合 物。其没有进一步纯化即使用。

或者1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸也可以用下述方法制备(方法 B)：

(i)于0℃将(S)-(+)-L-5-三甲苯基氧基甲基-2-吡咯烷酮(1.88g，20mmol) 溶于二甲基甲酰胺(9ml)中，并用氢化钠(60％在油中的混悬液，0.220g，5.5 mmol)处理。混合物于0℃搅拌30分钟，然后用碘乙烷(0.444ml，5.5mmol) 处理。将混合物温热至室温，然后搅拌过夜。然后将混合物在乙酸乙酯和饱 和氯化铵水溶液中分配，并用乙酸乙酯(x3)萃取。合并的有机萃取液依次用 水，50％氯化钠水溶液(x2)，和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后经硫酸钠干燥。 浓缩得到米色固体，其通过自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用0-100％梯 度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到纯1-乙基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲 基}-2-吡咯烷酮(1.78g)。

(ii)将2M二异丙基氨基化锂的四氢呋喃(1.050ml，2.1mmol)溶液于 -78℃加入到1-乙基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(0.771g，2 mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液中，且于-78℃搅拌所得混合物1小时。然后 加入苄基溴(0.262ml，2.2mmol)，且再于-78℃搅拌1小时后，将混合物温 热至室温过夜。混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用乙酸乙酯(x3)萃取。 然后合并的有机萃取液用水洗涤，然后用饱和氯化钠水溶液(x2)洗涤，经无 水硫酸镁干燥，并浓缩得到粗油状物(1.27g)。粗固体通过自动快速硅胶柱色 谱(Biotage SP4)，0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到所需产 物(即1-乙基-3-(苯基甲基)-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(0.561 g))，其用于下一步骤，以及未反应的起始物料和二烷基化产物，1-乙基-3，3- 二(苯基甲基)-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(0.053g)。

(iii)1-乙基-3-(苯基甲基)-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(0.561 g，1.1mmol)于室温在乙腈(21ml)和甲酸(3ml)的混合物中搅拌24小时。这 时反应没有完全，因此蒸发溶剂并用甲酸(10ml)更换，且继续搅拌3小时。 反应仍没有完全，因此在真空中浓缩混合物(用甲醇共沸移除所有甲酸)，然 后溶于甲醇(20ml)。然后将Amberlyst 加入到混合物中，并于室温继续 搅拌过夜。滤出树脂，再用甲醇洗涤，浓缩滤液得到胶状物(0.625g)。该胶 状物通过自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用0-100％梯度乙酸乙酯的己 烷溶液洗脱纯化，得到1-乙基-5-(羟基甲基)-3-(苯基甲基)-2-吡咯烷酮(0.170 g)，其用于下一步骤。

(iv)将1-乙基-5-(羟基甲基)-3-(苯基甲基)-2-吡咯烷酮(0.748g，3.21 mmol)溶于乙腈(5ml)和1M磷酸二氢钠缓冲水溶液(3.69ml，3.69mmol)中， 加入少量晶态的TEMPO(2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基)和亚氯酸钠 (0.580g，6.41mmol)，并将混合物温热至40℃。然后将约1滴漂白剂(次氯酸 钠溶液，可用氯>12％)加入至混合物中，并于40℃继续搅拌3小时。然后 将混合物倒入含1％w/w亚硫酸钠的冰-水上，且用5N盐酸水溶液将所得 混合物调节至pH2，然后用乙酸乙酯(x3)萃取。合并的有机萃取液用饱和氯 化钠水溶液洗涤，然后经硫酸镁干燥，并浓缩得到1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲 基)脯氨酸(0.807g)，为固体，其没有进一步纯化即使用。

实施例38 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-氧代脯氨 酰胺(E38)

将粗1-(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-氧代脯氨酸(～0.075g，～0.41mmol，如下 制备)溶于二氯甲烷(5ml)中，并向其中加入1-羟基苯并三唑(0.061g，0.45 mmol)、[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.068g，0.43mmol)和N-(3-二甲基氨基丙 基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.087g，0.45mmol)。然后混合物于室温搅拌 24小时。混合物再用二氯甲烷稀释，然后依次用2M盐酸水溶液和饱和碳 酸氢钠水溶液洗涤。有机层通过分相器过滤，并蒸发得到褐色残余物，其通 过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-(2-甲基-2- 丙烯-1-基)-5-氧代脯氨酰胺(0.018g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝325.1， 保留时间＝2.40分钟。

上述方法使用的1-(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)将甲醇(55ml)冷却至-10℃(使用cardice/四氯化碳浴)，同时搅拌，然 后经45分钟滴加亚硫酰氯。然后分3份经～5分钟加入(D)-谷氨酸(10g，67.96 mmol)，然后搅拌反应3小时，同时温热至21℃。真空蒸发溶剂得到澄清油 状物(15g)，将其溶于水(150ml)和二噁烷(150ml)的混合物中。然后向其中缓 慢加入碳酸钠(46g，340mmol)，并搅拌。然后加入氯甲酸苄基酯(9.64ml，68 mmol)，并继续搅拌过夜。混合物小心用2N盐酸水溶液(250ml)处理，然后 用乙酸乙酯(2 x 250ml)萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，然后干燥并蒸发 得到澄清油状物(18.7g)。将其溶于二氯甲烷(400ml)中，并用浓硫酸(1ml)处 理。然后将大量过量的异丁烯浓缩到混合物中，并于21℃搅拌过夜。然后 将饱和碳酸氢钠水溶液(～400ml)小心加入到混合物中，然后分离有机相，用 盐水洗涤，干燥并真空蒸发得到澄清油状物(21.9g)。其通过硅胶柱色谱，用 3:1环己烷和乙酸乙酯的混合物洗脱纯化得到纯1-(1，1-二甲基乙基)5-甲基 N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}谷氨酸酯(4.87g).

(ii)于-70℃经～5分钟向六甲基二硅烷基胺钾(potassoim hexamethyldisilazide)(10ml，0.6M的甲苯溶液，6mmol)的四氢呋喃(25ml) 溶液中滴加1-(1，1-二甲基乙基)5-甲基N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}谷氨酸酯 (1.05g，3mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液。混合物于-70℃搅拌1小时，然后 用甲代烯丙基碘化物(2.18g，12mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液处理。于-78℃ 继续搅拌2小时，然后温热至21℃。再搅拌1小时后，将混合物倒入1N盐 酸水溶液中，并用乙酸乙酯(2 x 50ml)萃取。合并的有机物用盐水洗涤，干 燥，并真空蒸发得到黄色油状物(1.03g)。其通过硅胶柱色谱，用4∶1环己烷 和乙酸乙酯的混合物洗脱纯化得到纯1-(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-氧代脯氨酸 1，1-二甲基乙基酯，为澄清油状物(0.322g)。

(iii)将1-(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(0.099g， 0.41mmol)溶于二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)的混合物中，并于室温搅拌 过夜。蒸发溶剂(用甲苯共沸移除痕量的三氟乙酸)得到粗1-(2-甲基-2-丙烯 -1-基)-5-氧代脯氨酸，为褐色油状物，其没有进一步纯化即使用。

实施例39 1-环丙基-N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-5-氧代脯氨酰胺(E39)

向(2，4-二氯苯基)甲基异氰化物(0.047g，0.25mmol)和4-氧代丁酸(15％ 水溶液，0.26ml，0.4mmol)的甲醇(1.75ml)溶液中加入环丙基胺(0.042ml，0.6 mmol)。混合物在微波反应器中加热至100℃，保持30分钟。真空移除溶剂， 且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到1-环丙基-N-[(2，4-二氯苯基) 甲基]-5-氧代脯氨酰胺(0.072g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝326/328，保 留时间＝2.29分钟。

实施例40 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-环丙基-5-氧代脯氨酰 胺(E40)

向[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基异氰化物(0.088g，0.4mmol)和琥珀酸半 醛(15％水溶液，0.26ml，0.4mmol)的甲醇(1.75ml)溶液中加入环丙基胺 (0.042ml，0.6mmol)。混合物在微波反应器中加热至100℃，保持30分钟。 真空移除溶剂，且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到N-{[2-氯-3-(三 氟甲基)苯基]甲基}-1-环丙基-5-氧代脯氨酰胺(0.076g)，为白色固体。LC/MS [M+H]⁺＝361/363，保留时间＝2.39分钟。

上述方法中使用的[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基异氰化物如下制备：

(i)将{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(1.05g，5mmol)的无水四氢呋喃 (10ml)溶液滴加到N-甲酰基苯并三唑(0.772g，5.25mmol)的无水四氢呋喃 (10ml)溶液中。反应于22℃搅拌18小时，然后真空浓缩，且残余物分配 于二氯甲烷(75ml)和2N氢氧化钠水溶液(40ml)之间。分离有机层，并用2N 氢氧化钠水溶液(40ml)萃取。有机层通过疏水性玻璃料，并真空浓缩得到白 色固体。粗产物通过自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用梯度0-10％乙 酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱纯化得到{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}甲酰胺， 为白色固体。

(ii)氩气下将{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}甲酰胺(0.67g，2.82mmol) 的无水二氯甲烷(20ml)溶液在冰水浴中冷却，然后加入二异丙基胺(1.78ml， 12.7mmol)，然后加入三氯氧化磷(0.393ml，4.23mmol)。反应于2-5℃搅拌 2小时。然后混合物在真空浓缩，且残余物用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)处 理，并用二氯甲烷(20ml)萃取。有机层通过疏水性玻璃料，并真空浓缩得到 黄色固体。进一步真空干燥得到[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基异氰化物，为 橙色胶状物(0.66g)，其没有进一步纯化即使用。

实施例41 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-环丙基-5-氧代脯氨酰胺(E41)

向[2-氯-4-氟-苯基]甲基异氰化物(0.068g，0.4mmol)和琥珀酸半醛(15％ 水溶液，0.26ml，0.4mmol)在甲醇(1.75ml)中的溶液中加入环丙基胺(0.042 ml，0.6mmol)。混合物在微波反应器中加热至100℃，保持30分钟。真空移 除溶剂，且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到无色胶状物，其用乙 醚研磨得到N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-环丙基-5-氧代脯氨酰胺，为浅米色固 体(0.058g)。LC/MS[M+H]⁺＝310，保留时间＝2.16分钟。

用作起始物质的[2-氯-4-氟-苯基]甲基异氰化物以与实施例40中制备[2- 氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基异氰化物所述相似的方法制备，除了使用2-氯-4- 氟苯基]甲基}胺代替2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺。

实施例42 N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E42)

将(2，4-二氯苯基)甲基异氰化物(0.075g，0.4mmol)和粗2，2-二甲基-4-氧 代丁酸(0.115g，0.6mmol)溶于甲醇(2ml)中。加入乙胺溶液(2M水溶液，0.3 ml，0.6mmol)，且混合物在微波反应器中在密封管中于100℃加热30分钟。 将混合物放置过周末，然后真空移除溶剂，且所得橙色油状物通过质谱检测 的自动HPLC纯化得到澄清油状胶状物，其用乙醚研磨得到N-[(2，4-二氯苯 基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酰胺，为白色固体(0.024g)。LC/MS [M+H]⁺＝343，保留时间＝2.57分钟。

上述方法中用作起始物质的2，2-二甲基-4-氧代丁酸如下制备：

(i)在CO₂/丙酮浴中将2，2-二甲基-4-戊烯酸溶于二氯甲烷(25ml)，并冷 却至-78℃，并向混合物中鼓入氧气，保持5分钟。打开臭氧发生器，向混 合物中鼓入臭氧，保持15分钟。然后停止臭氧流，且混合物用氧气吹扫5 分钟，然后用氩气吹扫2分钟。TLC表明反应没有明显进行，因此再向混合 物中鼓入臭氧15分钟，之后保持淡蓝色并形成混悬液。关掉臭氧流，且混 合物用氧气吹扫5分钟，然后用氩气吹扫10分钟(直到废气对于湿淀粉/碘试 纸成阴性)。然后将二甲基硫化物(1.72ml，23.41mmol)加入到混合物中，然 后将混合物温热至室温。于室温搅拌2小时后，浓缩混合物得到无色油状物 (1.5g)。1.4g该物质通过快速硅胶柱色谱，用梯度0-50％乙酸乙酯的二氯 甲烷溶液洗脱来纯化，得到2，2-二甲基-4-氧代丁酸，为无色油状物(0.649g)。

实施例43 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-5-氧代脯 氨酰胺(E43)

将1-(1-甲基乙基)-5-氧代脯氨酸(0.100g，0.58mmol)溶于二氯甲烷(20 ml)中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.111 g，0.58mmol)、1-羟基苯并三唑(0.078g，0.58mmol)和N-乙基吗啉(0.223ml， 1.75mmol)。最终将{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺加入至混合物，并继续 搅拌～48小时。然后混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)处理，并剧烈搅拌。 水层使用分相器移除，然后使用氩气吹扫元件从有机层移除溶剂。所得残余 物用水和乙酸乙酯(25ml，1:1)处理，且随后弃去水层。有机层通过分相器过 滤，并蒸发得到油状物。其用乙醚研磨得到固体，且随后其用质谱检测的自 动HPLC纯化得到N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-5-氧代 脯氨酰胺(0.097g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝363，保留时间＝2.48分 钟。

上述方法中使用的1-(1-甲基乙基)-5-氧代脯氨酸以与合成1-乙基-5-氧 代-脯氨酸甲酯(见实施例3)中所述相似的方法制备，除了使用丙酮代替乙醛， 并随后加入酯进行脱保护步骤(使用标准条件，即氢氧化钠的甲醇溶液)(与实 施例3中所述的联合的脱保护和酰胺偶联相反)。

实施例44-49

用与实施例43所述的类似方法，通过用合适的胺(或其盐)代替上述方法 中使用的{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺制备表(表3)中的化合物。除另有 说明，制备表3中所示的化合物所用的所有胺来自市售或可使用化学文献中 所述的方法制备。

表3

合成N-[(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-5-氧代-L-脯氨酰胺(实 施例48)所需的[(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基]胺盐酸盐用下述方法制备：

(i)于-5℃将亚硝酸钠(0.172g，2.5mmol)加入至搅拌的2-氯-6-氟-3-甲 基-苯基胺(0.400g，2.5mmol)的水(20ml)溶液和37％盐酸水溶液(5ml)中。 混合物于-5℃搅拌5分钟，然后一次加入到氯化亚铜(I)(0.742g，7.5mmol) 在37％盐酸水溶液(5ml)中的溶液中，同时保持温度为-5至0℃。将反应混 合物加热至38℃并搅拌1小时，然后将混合物冷却，并加入乙醚(20ml)。 分离有机相，并用1N盐酸水溶液洗涤，然后用水洗涤。然后有机层经硫酸 钠干燥，并真空浓缩。粗残余物通过快速硅胶柱色谱，用石油醚洗脱纯化， 得到2，3-二氯-1-氟-4-甲基苯(0.090g，0.5mmol)，为白色固体。

(ii)将2，3-二氯-1-氟-4-甲基苯(0.090g，0.5mmol)加入至搅拌的重铬酸 钾(0.284g，1mmol)在乙酸(1ml)中的混合物中。然后将97％硫酸(0.5ml)缓 慢加入至混合物，随后于100℃加热2小时。冷却至室温后，加入水和冰， 滤出所得绿色固体，并用冷水洗涤，得到2，3-二氯-4-氟苯甲酸(0.056g，0.27 mmol)，为白色固体。

(iii)于氩气室温下，将2，3-二氯-4-氟苯甲酸(0.200g，0.92mmol)的二氯 甲烷(～4ml)溶液用1-羟基苯并三唑(0.162g，1.2mmol)、N-(3-二甲基氨基丙 基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.230g，1.2mmol)和三乙胺(0.56ml，4.0mmol) 处理。混合物于室温搅拌40分钟，然后用32％氢氧化铵水溶液(0.088ml) 处理，并于室温搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，并依次用水和饱和碳酸 氢钠水溶液洗涤。分离有机层并经硫酸钠干燥，然后浓缩得到2，3-二氯-4- 氟苯甲酰胺(0.156g)，为白色固体，其没有进一步纯化即使用。

(iv)将2，3-二氯-4-氟苯甲酰胺(0.750g，3.62mmol)在无水四氢呋喃(2 ml)中的溶液在氮气下加热至90℃。将10M硼氢化物二甲基硫化物复合物的 四氢呋喃(1.05ml，5.43mmol)溶液加入至热溶液中，并继续搅拌4小时。然 后混合物用6N盐酸水溶液处理，并继续加热30分钟。蒸发溶剂，且粗残 余物通过SCX柱(cartridge)纯化，然后通过快速硅胶柱色谱，用5％甲醇的 二氯甲烷溶液洗脱纯化。所得胺用氯化氢的醚溶液处理得到[(2，3-二氯-4-氟 苯基)甲基]胺盐酸盐(0.360g)，为白色固体。

实施例50 N-[(2，3-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(E50)

将1-乙基-5-氧代脯氨酸(0.080g，0.51mmol，以实施例12方法A所述相 似的方法制备)溶于二氯甲烷(5ml)中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙 基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.117g，0.61mmol)、N-乙基吗啉(0.195ml， 1.53mmol)和2，3-二甲基苄基胺(0.082g，0.61mmol)。搅拌混合物～17小时， 然后放置过周末。然后混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(～3ml)处理，并剧烈搅 拌～10分钟。使用疏水性玻璃料分离有机层，且水层再用二氯甲烷(～2ml)萃 取。浓缩合并的有机层得到黄色油状物(～0.2g)。进一步通过质谱检测的自动 HPLC纯化得到纯N-[(2，3-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(0.072 g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝275，保留时间＝2.12分钟。

实施例51 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E51)

将1-甲基-5-氧代脯氨酸(2.27g，15.88mmol，如下制备)溶于二氯甲烷 (150ml)中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐 (3.35g，17.47mmol)和1-羟基苯并三唑(2.36g，17.47mmol)。搅拌混合物～10 分钟，然后加入三乙胺(2.21ml，15.88mmol)和{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基} 胺(3.66ml，17.47mmol)，且混合物于室温搅拌过夜(～17小时)。这期间形成 白色沉淀。然后混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(～100ml)处理，并搅拌10分 钟。使用疏水性玻璃料分离有机层，然后加入2N盐酸水溶液，并混合和再 次分离。浓缩有机层得到白色固体(～2.5g)。将该固体溶于乙酸乙酯(～200ml) 并用水(4 x 50ml)洗涤，然后用盐水(50ml)洗涤。然后有机层通过分相器干 燥，并浓缩得到纯N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代-L-脯氨酰 胺，为细白色固体(2.48g)。

LC/MS[M+H]⁺＝335，保留时间＝2.24分钟。

¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ 2.02(m，1H)，2.35(m，1H)，2.39(m，1H)， 2.47(m，1H)，2.81(s，3H)，4.00(dd，1H，J＝8.9，4.2Hz)，4.60(dd，1H，J＝15.1， 6.2Hz)，4.65(dd，1H，J＝15.1，6.2Hz)，6.56(宽t，1H，J＝5.8Hz)，7.38(t，1H， J＝7.7Hz)，7.60(dd，1H，J＝7.6，1.0Hz)，7.68(dd，1H，J＝7.9，1.2Hz)；¹³C NMR δ 176.0，171.5，137.5，133.9，131.7，129.3，127.4，127.0，122.8，63.8，41.8， 29.4，29.2，23.4.

用作起始物质的1-甲基-5-氧代脯氨酸如下方法制备：

(i)将N-甲基-L-谷氨酸(9.81g，60.87mmol)分成2等份，且每份混悬于 水(15ml)中，并在微波反应器中在密封管中于140℃加热30分钟，得到澄 清溶液。然后合并两份，蒸发水并真空干燥得到白色固体。该固体用醚研磨 然后过滤并再用醚洗涤，干燥后得到1-甲基-5-氧代-脯氨酸(7.47g)，为白色 固体。

N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺也可如下制 备：

将1-甲基-5-氧代脯氨酸(49.0g，0.342mol，如上制备)混悬于DCM (600ml)(内部温度从20℃降至13.7℃)。一次性加入EEDQ(2-乙氧基-1-乙氧 基羰基-1，2-二氢喹啉，75.26g，0.359mol，1.05当量)，且混合物于室温搅拌15 分钟。然后经20分钟将1-[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲胺(88.77g，0.359mol， 1.05当量)的DCM(250ml)溶液滴加至混合物(轻微放热至19℃)，并再用 DCM(150ml)将任何残余固体洗入混合物中。然后混合物于室温搅拌过夜。

加入饱和碳酸氢钠水溶液(300ml)，并于室温搅拌混合物5分钟。分离 有机层，并依次用水(300ml)，2N盐酸水溶液(3 x 300ml)，水(300ml)和饱 和氯化钠水溶液(300ml)洗涤。有机溶液经无水硫酸钠干燥，过滤，并真空 蒸发。然后所得固体用醚(～500ml)研磨，并收集固体，用醚洗涤并干燥(30℃， 真空烘箱过周末)得到无色固体(91.1g，80％)。该物质与用类似方法制备的相 似批次合并，并将合并的物质(共178g)溶于乙酸乙酯(2.75l)，同时加热(轻 微回流，上部搅拌)。轻微搅拌所得热澄清溶液并冷却至室温过夜。收集固 体，用冷乙酸乙酯(500ml)洗涤，并干燥(50℃真空烘箱中，～3天)得到N-{[2- 氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺，为无色针状(148.4g)。

LC/MS[M+H]⁺＝335/337，保留时间＝2.26分钟。

¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ 1.86(m，1H)，2.21(m，1H)，2.24(m，1H)， 2.28(m，1H)，2.64(s，3H)，4.12(dd，1H，J＝8.3，3.5Hz)，4.47(d，2H，J＝5.8 Hz)，，7.58(t，1H，J＝7.8Hz)，7.65(dd，1H，J＝7.8，1.0Hz)，7.80(dd，1H，J＝ 7.8，1.2Hz)，8.81(宽t，1H，J＝5.7Hz)；¹³C NMR δ 174.4，171.4，138.8，133.1， 129.8，127.5，127.1，126.6，122.9，61.6，40.2，29.1，28.0，22.5.

对映异构体过量＝99.1％，通过手性色谱法A检测，表明为N-{[2-氯 -3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代-L-脯氨酰胺

保留时间＝6.99分钟

[α]_D＝-0.8°(c＝1，MeOH)，温度＝29.3℃，波长＝589nm

熔点＝173℃

实施例52 N-[(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺(E52)

1-甲基-5-氧代脯氨酸(0.060g，0.42mmol，如上实施例51制备)溶于二氯 甲烷(5ml)，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐 (0.096g，0.5mmol)、1-羟基苯并三唑(0.068g，0.5mmol)和N-乙基吗啉(0.160 ml，1.26mmol)。搅拌混合物～10分钟，然后加入[(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基] 胺盐酸盐(0.081g，0.42mmol，如上述实施例48制备)，并搅拌混合物过夜 (～17小时)，然后使其过周末。然后混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(～3ml)处 理，并剧烈搅拌10分钟。使用疏水性玻璃料分离有机层，再用二氯甲烷(～2 ml)洗涤水层。浓缩合并的有机级分，得到米色固体。该固体分配在乙酸乙 酯(～20ml)和水(～10ml)之间，然后通过分相器分离有机层，并浓缩得到纯 -[(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺，为灰白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝319，保留时间＝2.2分钟。

实施例53-64

以与实施例52类似的方法，用合适的胺(或其盐)代替上述方法中使用的 [(2，3-二氯-4-氟苯基)甲基]胺盐酸盐制备下表(表4)中的化合物。制备表4中所 示化合物所用的所有胺来自市售或可使用化学文献中所述的途径制备或使 用类似的方法制备。

表4

合成实施例62-64所需的胺分别根据下述方法制备：

1){[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐(用于制备实施例62的胺)

将硼烷四氢呋喃(1M，39.4ml，39.4mmol)加入至2-甲基-3-三氟甲基苯甲 酰胺(2g，9.85mmol)的四氢呋喃(75ml)溶液中，并于70℃搅拌5小时。 LCMS表明反应未完全，因此继续于70℃氩气下加热过夜，然后再继续5 小时。反应混合物用2N盐酸水溶液处理，并于100℃搅拌4小时，然后冷 却过周末。真空浓缩混合物至干，然后分配于二氯甲烷和2N氢氧化钠水溶 液之间。使用疏水性玻璃料分离有机层，并浓缩得到残余物，其通过快速硅 胶柱色谱(用0-5％ 2N氨/甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化。蒸发溶剂，且残 余物溶于乙醚，并用1M氯化氢的醚溶液处理。过滤收集沉淀的固体，然后 用二氯甲烷研磨，过滤后得到2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐(1.4 g)，为白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝173，保留时间＝1.30分钟。

2)[(2-溴-4-氟苯基)甲基]胺盐酸盐(制备实施例63所用的胺)

(i)将2-溴-4-氟苄基溴(5g18.8mmol)和酞酰亚胺钾(4g，21.6mmol)合 并于二甲基甲酰胺(200ml)中，并于80℃搅拌18小时过夜。真空浓缩混合 物，且残余物分配于乙醚和水之间。滤出固体，且水层再用醚(2x50ml) 洗涤。合并醚层，并通过硫酸钠干燥，然后过滤并蒸发得到灰白色固体(3.36 g)。固体用甲醇研磨，并过滤得到2-[(2-溴-4-氟苯基)甲基]-1H-异吲哚 -1，3(2H)-二酮，为固体(2.06g)，其没有进一步纯化即用于下一步骤。

LC/MS[M+H]⁺＝334，保留时间＝3.30分钟。

(ii)将水合肼(0.655ml，21mmol)加入至2-[(2-溴-4-氟苯基)甲基]-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮(2g，6mmol)在乙醇(60ml)中的混悬液中，并于室温搅拌 过夜。这时反应没有完全，因此混合物于100℃加热总共2小时(该期间混 合物变成白色并浑浊)。过滤混合物移除固体，然后冷却并再次过滤。固体 用冷乙醇洗涤，然后真空蒸发合并的乙醇级分至干。所得残余物分配至2N 盐酸水溶液和二氯甲烷之间。使用疏水性玻璃料分离有机相。水层再用二氯 甲烷洗涤，并再次分离。然后真空浓缩水层产生淡黄色固体(0.876g)。将该 固体溶于饱和碳酸氢钠水溶液，并用二氯甲烷萃取。通过疏水性玻璃料分离 并蒸发得到残余物，将其溶于乙醚并用氯化氢的醚溶液处理。从混合物中沉 淀出淡黄色固体。蒸发并干燥得到[(2-溴-4-氟苯基)甲基]胺盐酸盐(0.789g)。

LC/MS[M+H]⁺＝203，保留时间＝1.08分钟。

3){[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐(制备实施例64所用的胺)

于氩气室温下，将硼烷四氢呋喃(1M，19.2ml，19.2mmol)滴加至3-氟 -2-(三氟甲基)苯甲酰胺(1g，4.8mmol)的四氢呋喃(40ml)溶液中。混合物于 70℃加热，然后再加入另一等份的硼烷四氢呋喃(10ml，10mmol)，并于70℃ 继续加热过周末。将反应混合物冷却至室温，然后用2M盐酸水溶液(15ml) 处理，于室温搅拌15分钟。加入氢氧化钠水溶液直到混合物的pH为8-9， 然后混合物用乙酸乙酯(3 x 30ml)萃取。通过疏水性玻璃料过滤合并的有机 层，然后真空蒸发。将残余物再溶于二氯甲烷中，通过疏水性玻璃料过滤， 并蒸发得到黄色油状物。将该油状物溶于2M盐酸水溶液。形成白色沉淀， 且通过真空过滤收集，然后将其等量负载到4 x 10g SCX柱上。该柱用甲醇 和水冲洗，然后使用氨水洗出产物。将后面的级分真空浓缩得到黄色油状物 (0.4g)。将该油状物溶于乙醚中，并用1M氯化氢的醚溶液处理直到再没有 沉淀生成。将混合物真空浓缩得到{[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐 为白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝193，保留时间＝1.15分钟。

实施例65-69

以与实施例12相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替实施例12中 所述方法使用的[(2，3，4-三氟苯基)甲基]胺制备下表(表5)中的实施例。除另有 说明，制备表5中所示化合物所用的所有胺来自市售或可使用化学文献中所 述的途径制备。制备这些实施例(实施例65除外)所用的1-乙基-5-氧代-脯氨 酸使用实施例12中所述的方法C，而实施例65使用方法A。

表5

实施例70 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(E70)

将1-乙基-5-氧代脯氨酸(0.100g，0.64mmol)溶于二氯甲烷(3ml)和二甲 基甲酰胺(0.5ml)的混合物中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基 碳化二亚胺盐酸盐(0.147g，0.77mmol)、1-羟基苯并三唑(0.104g，0.77mmol) 和N-乙基吗啉(0.244ml，1.92mmol)。搅拌混合物10分钟，然后将2-氯-4- 氟苄基胺加入至混合物，并于室温继续搅拌过夜(～16小时)。然后混合物用 饱和碳酸氢钠水溶液(～2ml)处理，并剧烈搅拌～10分钟。使用分相器移除水 层，并再用二氯甲烷(2 x 1ml)萃取。浓缩合并的有机层得到黄色油状物，且 其随后用质谱检测的自动HPLC纯化得到N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5- 氧代-D-脯氨酰胺(0.065g)，为白色固体。LC/MS[M+H]⁺＝299，保留时间＝ 2.16分钟。

对映异构体过量＝80.9％，通过手性色谱法B检测，表明为N-[(2-氯-4- 氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-D-脯氨酰胺

保留时间＝5.91分钟

上述方法使用的1-乙基-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)将D-焦谷氨酸乙酯(4.17g，26.53mmol)溶于四氢呋喃(30ml)，并加 入碘乙烷(2.23ml，27.86mmol)得到淡黄色溶液。将其冷却至0℃，并滴加氢 化钠(60％在油中，1.11g，27.86mmol)。加入所有氢化钠后，混合物于0℃再 搅拌20分钟，直到几乎不再产生气泡。然后将混合物温热至室温并在氩气 下搅拌过夜。然后混合物用饱和氯化铵水溶液(～5ml)处理。分离有机层，且 水层再用二氯甲烷(3 x 20ml)萃取。合并的有机层通过分相器干燥，然后浓 缩得到绿色/褐色油状物(3.2g)。其通过自动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)， 用0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到1-乙基-5-氧代脯氨酸乙 酯，为黄色油状物(1.33g)，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(ii)将1-乙基-5-氧代脯氨酸乙酯(1.33g，7.18mmol)溶于乙醇(10ml) 中，并在冰浴中冷却至0℃。向其中加入12.5M氢氧化钠水溶液(1.72ml， 21.53mmol)，并于0℃搅拌混合物～4小时。真空蒸发乙醇，且含水残余物 用2N盐酸水溶液酸化至pH1。真空浓缩水相的体积至～3ml，然后用3:1氯 仿和异丙醇的混合物，使用分相器萃取。浓缩合并的有机层得到淡黄色油状 物，将其真空干燥结晶得到1-乙基-5-氧代脯氨酸，为白色固体(1.12g)。

实施例71-82

以与实施例70相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替上述方法中使 用的2-氯-4-氟苄基胺制备下表(表6)中化合物。除另有说明，制备表5中所示 化合物所用的所有胺来自市售或可使用化学文献中所述的途径制备。检测时 (通过手性HPLC)，也列出了所示异构体的对映异构体过量(e.e.)，连同其立体 特异性名称，所用的手性分离方法和该方法中相应的保留时间(r.t.)。

表6

实施例83 N-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E83)

N-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺以与上述合成 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(实施例70)类似的方法合 成，除了用1-甲基-5-氧代脯氨酸(如下制备)代替1-乙基-5-氧代脯氨酸，且用 {[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}胺代替2-氯-4-氟苄基胺。

LC/MS[M+H]⁺＝319，保留时间＝2.14分钟。

上述方法使用的1-甲基-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)将D-焦谷氨酸乙酯(4.0g，25.5mmol)溶于四氢呋喃(25ml)，并冷却 至0℃。加入碘甲烷(1.66ml，26.7mmol)，并于氩气0℃下继续搅拌10分钟。 然后分份加入氢化钠(60％在油中，1.6g，26.7mmol)(使每份反应)。加入所有 的氢化钠后，在氩气下使混合物温热至室温并搅拌过夜。然后混合物用饱和 氯化铵水溶液(～15ml)处理，并搅拌4小时。分离有机层，且水层再用二氯 甲烷萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，然后浓缩得到深色油状物。将其通 过快速硅胶柱色谱，用0-75％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到1- 甲基-5-氧代脯氨酸乙酯，为无色油状物(0.27g)，其没有进一步纯化就用于 下一步骤。

(ii)将1-甲基-5-氧代脯氨酸乙酯(0.27g，1.58mmol)溶于乙醇(5ml)，并 在冰浴中冷却至0℃。向其中加入2M氢氧化钠水溶液(3ml)，且于0℃搅 拌混合物～4小时。真空蒸发乙醇，且含水残余物用2N盐酸水溶液酸化至 pH1。真空下将水相的体积浓缩至～3ml，然后用3:1氯仿和异丙醇的混合物 使用分相器萃取。浓缩合并的有机层得到1-甲基-5-氧代脯氨酸，其没有进一 步纯化即使用。

实施例84-90

而且，如上述实施例70所述相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替 实施例70中所用的2-氯-4-氟苄基胺制备下表(表7)的化合物。除另有说明，制 备表7中所示化合物所用的所有胺来自市售或可使用化学文献中所述的途径 制备。用1-甲基-5-氧代脯氨酸(如上述实施例81制备)代替实施例70中所用的 1-乙基-5-氧代脯氨酸。当检测时(通过手性HPLC)，列出了所示异构体的对映 异构体过量(e.e.)，以及其立体特异性名称，所用的手性分离方法和该方法 中相应的保留时间(r.t.)。

表7

实施例91 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-苯基-脯氨酰胺(E91)

将5-氧代-1-苯基-脯氨酸(0.072g，0.35mmol，如下制备)溶于二氯甲烷 (～2ml)和二甲基甲酰胺(0.5ml)中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’- 乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.081g，0.42mmol)、1-羟基苯并三唑(0.057g，0.42 mmol)和N-乙基吗啉(0.134ml，1.05mmol)。混合物于室温搅拌30分钟，然 后加入[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.067g，0.42mmol)。于室温继续搅拌，然后 混合物再用二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液稀释。分离水层，并再用二氯甲 烷(3等份)萃取。然后合并的有机层用盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。然后 蒸发溶剂得到黄色油状物，其通过质谱检测的自动HPLC纯化。最后将由此 得到的物质用1:1二氯甲烷和乙醚的混合物研磨，过滤并干燥后得到纯N-[(2- 氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-苯基-脯氨酰胺(0.031g)，为白色固体。LC/MS [M+H]⁺＝347，保留时间＝2.46分钟。

上述方法中使用的5-氧代-1-苯基-脯氨酸如下制备：

(i)将D-焦谷氨酸乙酯(0.200g，1.27mmol)溶于二噁烷(5ml)中，并用 三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(0.058g，0.06mmol)、溴苯(0.351ml，1.53mmol)、 碳酸铯(0.621g，1.91mmol)和Xantphos^TM(0.110g，0.19mmol)处理。所得混 合物于回流加热过夜，然后冷却至室温。混合物用甲醇稀释，并过滤。真空 蒸发滤液，然后分配于二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间。水层再用二氯 甲烷(3等份)萃取，然后合并的有机层用盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。蒸 发溶剂得到亮黄色残余物，其通过快速硅胶柱色谱，用0-50％梯度乙酸乙酯 的己烷溶液洗脱纯化，得到5-氧代-1-苯基脯氨酸甲酯(0.078g)，为黄色油状 物。其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(ii)于0℃将5-氧代-1-苯基脯氨酸甲酯(0.078g，0.36mmol)与2N氢氧 化钠水溶液(2ml)在乙醇(2ml)中合并。于-10℃至0℃搅拌混合物5小时。 然后真空蒸发溶剂，残余物通过加入2M盐酸水溶液酸化至pH1。向其中加 入二氯甲烷，且使混合物通过分相器。水层再用二氯甲烷洗涤，然后蒸发合 并的二氯甲烷层得到5-氧代-1-苯基-脯氨酸(0.072g)，为黄色胶状物，其没有 进一步纯化即用于下一步骤。

实施例92 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲基)-脯 氨酰胺(E92)

将5-氧代-1-(苯基甲基)脯氨酸(0.100g，0.46mmol，如下制备)溶于二氯 甲烷(2.5ml)和二甲基甲酰胺(0.5ml)的混合物中，并向其中加入N-(3-二甲基 氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.105g，0.55mmol)、1-羟基苯并三唑 (0.074g，0.55mmol)和N-乙基吗啉(0.143ml，1.37mmol)。将混合物搅拌10 分钟，然后加入{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(0.115g，0.55mmol)，并搅 拌混合物1小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，并剧烈搅拌混合物15 分钟。有机相用分相器分离，且水相再用几等份的二氯甲烷(3 x 10ml)洗涤。 合并有机级分，并经硫酸镁干燥。然后蒸发溶剂，且残余物通过质谱检测的 自动HPLC纯化得到纯N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲 基)-D-脯氨酰胺。

LC/MS[M+H]⁺＝411，保留时间＝2.77分钟。

对映异构体过量＝100.0％，通过手性色谱法D检测，表明为N-{[2-氯 -3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲基)-D-脯氨酰胺。

保留时间＝10.58分钟

上述方法中使用的5-氧代-1-(苯基甲基)脯氨酸如下制备：

将D-谷氨酸(1.47g，10mmol)溶于2N氢氧化钠水溶液(10ml，20mmol) 中，并搅拌15分钟。然后混合物用苯甲醛(1.1ml，10mmol)的乙醇(3ml)溶 液处理，并于室温搅拌30分钟。将混合物冷却至0℃，并用硼氢化钠(0.030 g)处理。经4小时使混合物温热至室温同时搅拌，然后用乙醚(3次)洗涤， 然后用浓盐酸酸化至pH2。滤出所得沉淀，并用乙醚洗涤，然后在乙醇中浆 化，并再用乙醇共沸3次。最后使残余物质在乙醇(50ml)中浆化，并回流加 热16小时。然后将混合物冷却至室温，并真空蒸发。干燥得到纯5-氧代-1-(苯 基甲基)脯氨酸。

实施例93 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-(苯基甲基)脯氨酰胺 (E93)

以与上述合成N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲基)脯 氨酰胺(实施例92)相似的方法制备N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-5-氧代-1-(苯基 甲基)脯氨酰胺，除了使用[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺代替{[2-氯-3-(三氟甲基) 苯基]甲基}胺。

LC/MS[M+H]⁺＝361，保留时间＝2.54分钟。

实施例94 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-环戊基-5-氧代脯氨酰胺(E94)

将1-环戊基-5-氧代脯氨酸(0.100g，0.51mmol，如下制备)溶于二氯甲烷 (2.5ml)和二甲基甲酰胺(0.5ml)的混合物中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基 丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.117g，0.61mmol)、1-羟基苯并三唑(0.082 g，0.61mmol)和N-乙基吗啉(0.2ml，1.52mmol)。搅拌混合物10分钟，然后 加入[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.097g，0.61mmol)，并搅拌混合物过夜。加入 饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，并剧烈搅拌混合物15分钟。有机相用分相器 分离，且水相再用几等份的二氯甲烷(3 x 10ml)洗涤。合并有机级分，并经 硫酸镁干燥。然后蒸发溶剂，且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到 纯N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-环戊基-5-氧代脯氨酰胺。

LC/MS[M+H]⁺＝339，保留时间＝2.4分钟。

上述方法中使用的1-环戊基-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)将D-谷氨酸二甲酯盐酸盐(2.1g，10.00mmol)溶于甲醇(7.5ml)和四 氢呋喃(15ml)中，且氩气下混合物用粉碎的氢氧化钠(0.402g，10.05mmol) 处理20分钟。这时，将乙酸(0.575ml，10.05mmol)和环戊酮(0.889ml，10.05 mmol)加入至混合物中。搅拌10-15分钟后，将混合物在冰浴中冷却至0℃， 并用硼氢化钠片(0.380g，10.05mmol)处理。氩气下搅拌混合物3小时，并 温热至室温。当混合物达到室温时，蒸发出甲醇，且残余物用二氯甲烷(20ml) 稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(～25ml)洗涤。分离有机层，且水层再用二 氯甲烷(2 x 20ml)反萃取。真空中浓缩合并的有机层得到油状物。将油状物 溶于甲苯(10ml)中，并回流加热过夜。然后蒸发溶剂，且所得残余物通过快 速硅胶柱色谱法，用0-10％梯度甲醇的二氯甲烷溶液洗脱纯化得到粗1-环戊 基-5-氧代脯氨酸甲酯，其没有进一步纯化即用于下一步骤。

(ii)将1-环戊基-5-氧代脯氨酸甲酯(0.560g，2.65mmol)溶于乙醇(10ml) 中，并在冰浴中冷却至0℃。加入2M氢氧化钠水溶液(5ml)，且于冰温度 搅拌混合物4小时。然后真空蒸发乙醇，且含水残余物通过加入2N盐酸水 溶液酸化至pH1。真空浓缩所得含水混合物的体积至～3ml，然后用3∶1氯仿 和异丙醇的混合物使用分相器萃取。水层再用二氯甲烷洗涤，然后蒸发合并 的有机级分，得到粗1-环戊基-5-氧代脯氨酸，其没有进一步纯化就用于随后 的反应。

实施例95-99

以与实施例94中所述相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替上述方 法中使用的[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺和/或用合适的醛或酮代替上述方法中使 用的环戊酮，制备下表(表8)中的化合物。除另有说明，制备表8中所示化合 物的使用的所有胺来自市售或可使用化学文献所述的途径制备。

表8

实施例100 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧 代脯氨酰胺(E100)

将1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸(0.100g，0.5mmol，如下制备)溶于 二氯甲烷(5ml)中，并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺 盐酸盐(0.191g，1mmol)和1-羟基苯并三唑(0.135g，1mmol)。于室温搅拌混 合物30分钟，然后加入{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(0.209g，1mmol)， 且混合物在室温下搅拌过夜。然后混合物依次用水，3N柠檬酸水溶液洗涤， 且再用水洗涤3次，然后通过hydromatrix柱(Varian5g)过滤干燥。然后蒸 发溶剂，且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-{[2-氯-3-(三氟 甲基)苯基]甲基}-1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酰胺。

LC/MS[M+H]⁺＝391/393，保留时间＝2.78分钟。

上述方法中使用的1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸如下制备：

将L-谷氨酸(1.47g，10mmol)溶于2N氢氧化钠水溶液(10ml，20mmol) 中，并用三甲基乙醛(1.09ml，10mmol)的乙醇(5ml)溶液处理，然后于室温 搅拌30分钟。将混合物冷却至0℃，并用硼氢化钠(0.130g)处理。经4小时 将混合物温热至室温，同时搅拌，然后酸化至中性pH。真空浓缩后在乙醇 中浆化，且再用乙醇共沸3次。最后，将残余物质混悬于乙醇(50ml)中，并 于回流加热48小时。然后将混合物冷却至室温，滤出盐，并真空蒸发溶剂 得到胶状物。用乙醚研磨，然后干燥得到纯的固体1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧 代脯氨酸(1.1g)。

实施例101 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲基)-脯 氨酰胺(E101)

以上述合成N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧 代脯氨酰胺(实施例100)相似的方法制备N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲 基}-5-氧代-1-(苯基甲基)-D-脯氨酰胺，除了使用5-氧代-1-(苯基甲基)脯氨酸 代替1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸。

LC/MS[M+H]⁺＝411/413，保留时间＝2.77分钟。

对映异构体过量＝100.0％，通过手性色谱法D检测，表明为N-{[2-氯 -3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(苯基甲基)-D-脯氨酰胺。

保留时间＝8.09分钟。

以上述合成1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸(实施例100)所述类似的 方法制备5-氧代-1-(苯基甲基)脯氨酸，除了使用苯甲醛代替三甲基乙醛。

实施例102 N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺(E102)

以上述合成N-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺 (实施例83)所述相似的方法制备N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代脯氨 酰胺，除了用[(2，4-二氯苯基)甲基]胺代替{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基}胺。

LC/MS[M+H]⁺＝300.9，保留时间＝2.13分钟。

对映异构体过量＝97.8％，通过手性色谱法A检测，表明为N-[(2，4-二 氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-D-脯氨酰胺。

保留时间＝6.25分钟。

实施例103 1-乙基-N-{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代脯氨酰胺 (E103)

与上述合成N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-D-脯氨酰胺(见实施 例70)所述相似的方法制备1-乙基-N-{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代 脯氨酰胺，除了使用2-氟-3-三氟甲基苄基胺代替2-氯-4-氟苄基胺。

LC/MS[M+H]⁺＝333，保留时间＝2.24分钟。

实施例104-109

以与实施例12所述类似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替上述实 施例12中所用的[(2，3，4-三氟苯基)甲基]胺，制备下表(表9)的实施例。除另 有说明，制备表9中所示化合物使用的所有胺来自市售或可使用化学文献中 所述的途径制备。制备这些实施例所用的1-乙基-5-氧代-脯氨酸使用例如12 中所述的方法C制备。

表9

合成实施例105需要的2-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)苯甲腈三氟乙酸盐如 下制备：

(i)将{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(1.93g，10mmol)溶于二氯甲烷 (40ml)，并用二(1，1-二甲基乙基)二碳酸酯(2.18g，10mmol)的二氯甲烷(10 ml)溶液处理。于室温搅拌2小时后，蒸发溶剂得到淡黄色固体，其通过硅 胶柱色谱，用1:10-1:5梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到纯{[2-氟-3-(三 氟甲基)苯基]甲基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(2g)。

(ii)将{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.17 g，4mmol)溶于二甲亚砜(5ml)中，并用氰化钾(0.260g，4mmol)处理。然后 混合物于80℃氩气下加热1.5小时，然后于120℃加热过夜(16小时)。然后 再加入氰化钾(0.260g，4mmol)，并于120℃再继续加热24小时。然后将混 合物冷却至室温，用水淬灭，并用乙酸乙酯稀释。分离有机萃取液，并用水 洗涤3次，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤。干燥并蒸发得到褐色胶状物，其 通过硅胶柱色谱，用1:10-1:5梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到部分 纯的{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯，为深色固 体/半固体，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

LC/MS[M-BOC+H]⁺＝201，保留时间＝1.19分钟。

(iii)将{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯 (0.190g，0.63mmol)溶于二氯甲烷(4ml)，并用三氟乙酸(4ml)处理。混合物 于室温搅拌1小时，然后蒸发。残余物溶于二氯甲烷2次，并再次蒸发得到 粗2-(氨基甲基)-6-(三氟甲基)苯甲腈三氟乙酸盐，其没有进一步纯化即使用。

实施例110 1-甲基-N-(1-萘基甲基)-5-氧代脯氨酰胺(E110)

将1-甲基-5-氧代脯氨酸(0.050g，0.35mmol，以上述实施例51所述类似 的方法制备)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.081g，0.42 mmol)、1-羟基苯并三唑(0.057g，0.42mmol)、N-乙基吗啉(0.166ml，1.05 mmol)和(1-萘基甲基)胺合并于二氯甲烷(～8ml)中，且混合物于室温搅拌～20 小时。然后混合物用2M盐酸水溶液(5ml)洗涤，并使用分相器分离有机层。 有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，如前分离，然后蒸发。残余物通过质谱 检测的自动HPLC纯化得到纯1-甲基-N-(1-萘基甲基)-5-氧代脯氨酰胺，为 白色固体(0.062g)。

LC/MS[M+H]⁺＝283，保留时间＝2.1分钟。

实施例111 N-{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E111)

将1-甲基-5-氧代脯氨酸(0.057g，0.4mmol，以上述实施例51所述类似 的方法制备)溶于二氯甲烷(4ml)中，并用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹 啉(0.104g，0.42mmol)处理。然后加入{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基} 胺盐酸盐(0.105g，0.4mmol，如下制备)，且混合物于室温搅拌4小时。混合 物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)处理，并搅拌5分钟。使用疏水性玻璃料分 离有机相，然后用2N盐酸水溶液(2 x 10ml)洗涤。然后蒸发有机相得到纯 N-{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺(0.106g)。

LC/MS[M+H]⁺＝353，保留时间＝2.49分钟。

上述方法使用的{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐如下制 备：

(i)将1-氯-3-氟-2-(三氟甲基)苯(10g，50mmol)溶于四氢呋喃(100ml) 中，氩气下冷却至-70℃，并用1.4M仲丁基锂的环己烷(37.5ml，52.5mmol) 溶液处理。继续搅拌2小时，然后加入三甲基甲硅烷基氯化物(6.7ml，52.5 mmol)，并仍于-70℃再继续搅拌1小时。将混合物温热至室温，然后真空 移除四氢呋喃。将残余物分配于乙醚和水之间，然后分离有机层，并用2N盐 酸水溶液洗涤。分离有机相，并浓缩得到粗产物，其通过快速硅胶柱色谱， 用己烷洗脱纯化得到纯[4-氯-2-氟-3-(三氟甲基)苯基](三甲基)硅烷，为澄清 油状物(10.35g)。

(ii)于-75℃氩气下，将2，2，6，6-四甲基哌啶(3.3ml，19.44mmol)缓慢 加入至正丁基锂(2.5M在甲苯中，7.7ml，19.44mmol)的四氢呋喃(75ml)溶液 中，并搅拌15分钟。然后将[4-氯-2-氟-3-(三氟甲基)苯基](三甲基)硅烷(5g， 18.5mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液滴加至混合物中，确保混合物温度保持低 于-65℃，并继续搅拌2小时。加入块状过量固体二氧化碳(预先于-65℃用 四氢呋喃洗涤)，且混合物经2小时温热至室温。混合物于真空浓缩得到淡 黄色固体。将该物质分配于水(其被酸化至pH1(200ml))和乙醚(200ml) 之间。分离有机层，并经无水硫酸钠干燥。蒸发得到淡褐色固体，其由甲苯 重结晶得到纯2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)-5-(三甲基甲硅烷基)苯甲酸(3.85g，分3 批)，为白色针状。

LC/MS[M-H]^-＝312，保留时间＝3.29分钟。

(iii)将氟化钾(0.367g，9.55mmol)的水(15ml)溶液加入至2-氯-4-氟 -3-(三氟甲基)-5-(三甲基甲硅烷基)苯甲酸(1g，3.18mmol)的四氢呋喃(50ml) 溶液中，且混合物于100℃搅拌过夜。加入另一份水(15ml)和氟化钾(0.370g， 9.62mmol)，并于100℃继续加热4小时。真空蒸发四氢呋喃，并用足量二 甲基甲酰胺替换以溶解所有固体。混合物于100℃加热过夜，但仍存在起始 物料，因此再加入氟化钾(0.367g，9.55mmol)，并于100℃继续加热7天。 这时，几乎所有起始物质消失，真空下蒸发反应至干，并溶于2N盐酸水溶 液(75ml)和乙醚(50ml)中。分离水层，并再用乙醚(2x50ml)萃取，然后 将合并的有机级分经硫酸钠干燥，并蒸发得到粗产物，为白色固体。其通过 由甲苯中重结晶纯化得到纯2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸(0.566g)，为白色 固体。

(iv)将2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸(0.560g，2.31mmol)、1H-1，2，3-苯 并三唑-1-酸铵(ammonium1H-1，2，3-benzotriazol-1-olate)(0.534g，3.47mmol， 如下制备)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.643g，3.47 mmol)和N-乙基吗啉(0.594ml，4.62mmol)在二氯甲烷(30ml)中一起搅拌共 3小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)，并搅拌混合物15分钟。使用疏水 性玻璃料分离有机层，然后用2N盐酸水溶液(2x50ml)洗涤。再次使用疏 水性玻璃料分离有机层，并真空蒸发得到2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺 (0.493g)，为灰白色固体，其没有进一步纯化即用于下一步骤。

上述步骤中使用的1H-1，2，3-苯并三唑-1-酸铵如下制备：

于0℃(冰浴)，将氢氧化铵(4.15ml，75mmol)缓慢加入至1-羟基苯并三 唑(10g，74mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液中，并搅拌2小时。过滤并用四氢 呋喃洗涤得到1H-1，2，3-苯并三唑-1-酸铵(10.57g)，为白色固体。

(v)2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.490g，2.03mmol)用1M硼烷 的四氢呋喃(20.33ml，20.33mmol)溶液处理，并于60℃搅拌过夜。然后混合 物用2N盐酸水溶液处理直到气体产生停止，然后于100℃搅拌2小时。真 空浓缩混合物，并将残余物溶于少量水中，并用二氯甲烷洗涤(30ml)。通 过加入2N氢氧化钠水溶液调节水层的pH至pH11，然后用二氯甲烷(2 x 25 ml)萃取。使用疏水性玻璃料分离二氯甲烷层，合并并真空蒸发得到淡黄色 油状物。加入1M氯化氢的乙醚(3ml，3mmol)溶液，并滤出所得白色固体 得到纯{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺盐酸盐(0.210g)，其没有进一步 纯化即使用。

实施例112 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-环丁基-5-氧代脯氨酰 胺(E112)

将1-环丁基-5-氧代脯氨酸(0.238g，0.82mmol)混悬于二氯甲烷(3ml)中， 并向其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.188g， 0.98mmol)、1-羟基苯并三唑(0.132g，0.98mmol)和N-乙基吗啉(0.313ml， 2.46mmol)。混合物于室温搅拌30分钟，然后将{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基] 甲基}胺(0.205g，0.98mmol)加入至混合物中，并于室温继续搅拌～20小时。 然后混合物再用二氯甲烷稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液处理。分离二氯甲 烷层，且水层再用3等份二氯甲烷萃取。合并的有机萃取液用水洗涤，然后 用盐水洗涤，经无水硫酸镁干燥，并真空蒸发得到粗产物。其进一步通过质 谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-环丁基 -5-氧代脯氨酰胺(0.105g)，为白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝375，保留时间＝2.53分钟。

上述方法中使用的1-环丁基-5-氧代脯氨酸以与合成1-乙基-5-氧代-脯 氨酸甲酯(参见实施例3)所述相似的方法制备，除了使用环丁酮代替乙醛， 并进行随后的酯脱保护步骤(使用标准条件，即氢氧化钠的甲醇溶液)(与实施 例3中所述的合并的脱保护和酰胺偶联相反)。

实施例113-117

以与上述实施例112中所述相似的方法，通过用合适的胺(或其盐)代替 上述方法中所用的{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺制备下表(表10)中的化 合物。除另有说明，制备表10中所示化合物所用的所有胺来自市售或可使用 化学文献中所述的途径制备。

表10

合成N-[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]-1-环丁基-5-氧代脯氨酰胺(实施例115) 所需的[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]胺盐酸盐如上实施例36制备。

实施例118 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧 代脯氨酰胺(E118)

以与实施例100中所述相似的方法制备N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲 基}-1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酰胺，除了使用1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧 代脯氨酸(如下制备)。

LC/MS[M+H]⁺＝391/393，保留时间＝2.76分钟。

上述方法使用的1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸如下制备：

将D-谷氨酸(2.21g，15mmol)溶于2N氢氧化钠水溶液(15ml，30mmol) 中，冷却至0℃，并用三甲基乙醛(1.63ml，15mmol)的乙醇(3ml)溶液处理， 然后于室温搅拌45分钟。混合物再次冷却至0℃，并分批用硼氢化钠(0.189 g，5mmol)处理。经4小时使混合物温热至室温，同时搅拌，然后用乙醚洗 涤后，使用浓盐酸酸化至～pH4。通过过滤收集所得沉淀，用乙醚洗涤，然后 在真空烘箱中干燥过夜。然后将固体混悬于乙醇(50ml)中，且混合物于回流 下加热24小时。浓缩然后用己烷研磨得到1-(2，2-二甲基丙基)-5-氧代脯氨酸 (1.51g)，为固体，其没有进一步纯化即使用。

实施例119 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(2-吡啶基甲基) 脯氨酰胺(E119)

于室温，将5-氧代-1-(2-吡啶基甲基)脯氨酸(0.220g，1mmol，如下制备)、 N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.384g，2mmol)和1-羟 基苯并三唑(0.308g，2mmol)一起在二氯甲烷(10ml)中搅拌30分钟。然后混 合物用{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(0.314g，1.5mmol)处理，且混合物在 室温下搅拌过夜。浓缩混合物，并分配于乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之 间。分离水层，并用乙酸乙酯萃取，然后合并的乙酸乙酯级分用3份水洗涤， 然后用饱和氯化钠水溶液洗涤。经硫酸钠干燥，并浓缩得到固体残余物，其 通过质谱检测的自动HPLC纯化得到N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧 代-1-(2-吡啶基甲基)脯氨酰胺(0.263g)，为米色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝412/414，保留时间＝2.15分钟。

上述方法中使用的5-氧代-1-(2-吡啶基甲基)脯氨酸如下制备：

于0℃将D-谷氨酸(2.21g，15mmol)溶于2N氢氧化钠水溶液(15ml，30 mmol)中，然后用吡啶-2-甲醛(1.43ml，15mmol)处理。混合物于室温搅拌45 分钟，然后冷却至0℃，并用硼氢化钠(0.189g，5mmol)处理。经4小时使混 合物温热至室温，同时搅拌，然后使用乙醚洗涤2次后，酸化至pH5-6。浓 缩水层，然后用甲苯共沸3次，然后用1:1乙醇:甲苯混合物共沸，最后用 乙醇共沸。然后残余物溶于乙醇(50ml)，并回流8小时。浓缩得到油状物， 然后真空干燥得到5-氧代-1-(2-吡啶基甲基)脯氨酸(2.60g)，为泡沫状，其没 有任何进一步的纯化即使用。

实施例120 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(3-吡啶基甲基) 脯氨酰胺(E120)

于室温将5-氧代-1-(3-吡啶基甲基)脯氨酸(0.210g，1mmol，如下制备)、 N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.383g，2mmol)和1-羟基 苯并三唑(0.306g，2mmol)一起在二氯甲烷(10ml)中搅拌30分钟。然后混合 物用{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺(0.314g，1.5mmol)处理，且混合物在室 温下搅拌过夜。浓缩混合物，并分配于乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间。 分离水层，并再用乙酸乙酯萃取，然后合并的乙酸乙酯级分按依次用3份水 然后用饱和氯化钠水溶液洗涤。经硫酸镁干燥，并浓缩得到固体残余物，其 通过质谱检测的自动HPLC纯化得到纯N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5- 氧代-1-(3-吡啶基甲基)脯氨酰胺(0.031g)。

LC/MS[M+H]⁺＝412/414，保留时间＝1.83分钟。

上述方法中使用的5-氧代-1-(3-吡啶基甲基)脯氨酸如下制备：

于0℃将D-谷氨酸(2.21g，15mmol)溶于2N氢氧化钠水溶液(15ml，30 mmol)中，然后用吡啶-3-甲醛(1.41ml，15mmol)的乙醇(3ml)溶液处理。混合 物于室温搅拌30分钟，然后冷却至0℃，并用硼氢化钠(0.189g，5mmol)分 批处理。经4小时使混合物温热至室温，同时搅拌，然后用乙醚洗涤后，使 用浓盐酸酸化至pH5-6。通过过滤收集所得沉淀，用乙醚洗涤，并真空干燥。 然后将所得物质溶于乙醇(50ml)，并回流过夜。通过过滤移除细粒固体，然 后浓缩得到5-氧代-1-(3-吡啶基甲基)脯氨酸(2.04g)，为白色固体，其没有任 何进一步的纯化即使用。

实施例121 N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-5-氧代-1-(3-吡啶基甲基)脯氨酰胺 (E121)

以与上述合成N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-氧代-1-(3-吡啶基甲 基)脯氨酰胺(E120)所述相似的方法制备N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-5-氧代-1-(3- 吡啶基甲基)脯氨酰胺，除了使用[(2，4-二氯苯基)甲基]胺代替{[2-氯-3-(三氟 甲基)苯基]甲基}胺。

LC/MS[M+H]⁺＝378/380/382，保留时间＝1.70分钟。

实施例122 1-环丙基-N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-2-甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E122)

向(2，4-二氯苯基)甲基异氰化物(0.047g，0.25mmol)和乙酰丙酸(0.041ml， 0.4mmol)的甲醇(2ml)溶液中加入环丙基胺(0.042ml，0.6mmol)。混合物在微 波反应器中加热至100℃，保持30分钟。真空移除溶剂，且残余物通过质 谱检测的自动HPLC纯化得到1-环丙基-N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-2-甲基-5-氧 代脯氨酰胺(0.054g)，为白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝341/343，保留时间＝2.57分钟。

实施例123-126

以与上述实施例122所述相似的方法，通过用合适的胺代替上述方法中 使用的环丙基胺制备下表(表11)中的化合物。制备表11所示的化合物所用的 所有胺来自市售或可使用化学文献中所述的途径制备。

表11

实施例127 N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1，3，3-三甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E127)

向(2，4-二氯苯基)甲基异氰化物(0.094g，0.5mmol)和3，3-二甲基-4-氧代 丁酸(0.065mg，0.5mmol，如下制备)的甲醇(2ml)溶液中加入甲基胺(0.080 ml，33％乙醇溶液)。混合物在微波反应器中加热至100℃，保持30分钟。 真空移除溶剂，且残余物通过质谱检测的自动HPLC纯化得到无色胶状物， 其用乙醚研磨得到N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1，3，3-三甲基-5-氧代脯氨酰胺 (0.043g)，为粘稠白色固体。

LC/MS[M+H]⁺＝329/331，保留时间＝2.42分钟。

上述方法中所用的3，3-二甲基-4-氧代丁酸如下制备：

将3，3-二甲基-4-戊烯酸(1.3g，10.14mmol)溶于二氯甲烷(25ml)，并在 CO₂/丙酮浴中冷却至-78℃。鼓入氧气通过混合物5分钟，然后鼓入臭氧25 分钟(得到蓝色溶液)。再鼓入氧气通过混合物5分钟，然后鼓入氩气10分 钟。然后将二甲基亚砜(2.23ml，30.4mmol)加入至混合物中，且从冷却浴中 移出混合物，并搅拌2.5小时。真空浓缩所得无色溶液得到3，3-二甲基-4-氧 代丁酸，为无色油状物，其没有进一步纯化即使用。

实施例128 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1，3，3-三甲基-5-氧代脯 氨酰胺(E128)

以与上述合成N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1，3，3-三甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E127)相似的方法制备N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1，3，3-三甲基-5-氧 代脯氨酰胺，除了使用[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基异氰化物(如实施例40中 所述)代替(2，4-二氯苯基)甲基异氰化物。

LC/MS[M+H]⁺＝363/365，保留时间＝2.49分钟。

实施例129 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1，3-二甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E129)

将1，3-二甲基-5-氧代脯氨酸(0.620g，3.6mmol，如下制备)、N-(3-二甲基 氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.822g，4.3mmol)、1-羟基苯并三唑 (0.581g，4.3mmol)、N-乙基吗啉(1.4ml，10.8mmol)和{[2-氯-3-(三氟甲基) 苯基]甲基}胺(0.828g，3.96mmol)合并到二氯甲烷(10ml)和二甲基甲酰胺(5 ml)的混合物中，并在氩气下搅拌过夜。然后混合物按依次用水(50ml)、0.5N 盐酸水溶液(50ml)、水(50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和水(50ml)洗涤。 使二氯甲烷层通过疏水性玻璃料，并真空蒸发得到粗产物。其进一步通过质 谱检测的自动HPLC(10 x 0.100g注射)纯化得到纯N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯 基]甲基}-1，3-二甲基-5-氧代脯氨酰胺(0.613g)。

LC/MS[M+H]⁺＝349，保留时间＝2.31，2.38分钟(两种非对映异构 体)。

上述方法中使用的1，3-二甲基-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)(R，R，R)-2-羟基蒎烯-3-酮(10.9g，64.8mmol)和甘氨酸叔丁基酯(13 g，97.2mmol)的无水甲苯(200ml)溶液用三氟化硼-乙醚合物(0.460g，3.24 mmol)处理，然后氩气下加热回流6小时。然后将混合物冷却至室温并搅拌 过夜。通过烧结物(sinter)过滤，然后蒸发得到黄色胶状物，其通过自动快速 硅胶柱色谱(使用Biotage SP4)，用25％乙酸乙酯在己烷中的混合物洗脱纯 化，得到一些纯的N-[(1R，2R，5R)-2-羟基-2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚-3-亚基] 甘氨酸1，1-二甲基乙基酯(3.68g)和一些混合的级分。不纯的物质再次使用自 动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)纯化，但是使用0-25％梯度乙酸乙酯的己烷 溶液(0-15％，超过10倍柱体积，和15-25％，超过5倍柱体积)洗脱，得到另 一批纯N-[(1R，2R，5R)-2-羟基-2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚-3-亚基]甘氨酸1，1-二 甲基乙基酯(1.73g)。合并两批纯N-[(1R，2R，5R)-2-羟基-2，6，6-三甲基双环[3.1.1] 庚-3-亚基]甘氨酸1，1-二甲基乙基酯(5.41g)，该物质用于下一步骤。

(注：上述使用的甘氨酸叔丁酯也可用甘氨酸叔丁酯盐酸盐和摩尔当量 的碳酸钾代替)

(ii)将N-[(1R，2R，5R)-2-羟基-2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚-3-亚基]甘氨酸 1，1-二甲基乙基酯(11.05g，39.3mmol)的无水四氢呋喃(100ml)溶液冷却至 -30℃，并用3M甲基溴化镁的乙醚(17.1ml，51.1mmol)溶液处理。然后加 入1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(7.78g，51.1mmol)，且混合物再于 -30℃搅拌20分钟。然后混合物用巴豆酸乙酯处理，并继续搅拌1小时。通 过加入饱和氯化铵水溶液(35ml)淬灭混合物，然后用乙酸乙酯(3 x 100ml)萃 取。合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到黄色油状物。该物质 通过自动快速硅胶柱色谱(使用Biotage SP4)，用梯度0-20％(超过5倍柱体 积)然后20-35％(超过14倍柱体积)乙酸乙酯的己烷洗脱纯化得到 N-[(1R，2R，5R)-2-羟基-2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚-3-亚基]-3-甲基谷氨酸 1-(1，1-二甲基乙基)5-乙基酯(4.2g)，其用于下一步骤。

(iii)将10％柠檬酸(11ml，5.6mmol)水溶液加入至N-[(1R，2R，5R)-2-羟基 -2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚-3-亚基]-3-甲基谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)5-乙基 酯(2g)的四氢呋喃(10ml)溶液中，且混合物于室温搅拌4天。蒸发混合物， 且将残余物混悬于水(50ml)中，并用乙醚(100ml)洗涤。然后使用碳酸氢钠 水溶液调节水相至pH～7，然后用乙醚(3 x 100ml)萃取。合并有机级分，经 硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到3-甲基谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)5-乙基酯 (1.1g)，为黄色油状物，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(iv)将3-甲基谷氨酸1-(1，1-二甲基乙基)5-乙基酯(1.1g，4.5mmol)置 于高真空中过夜，然后过周末。这时起始物质仍然很明显，因此加入甲苯(30 ml)，且将所得混合物于110℃加热过夜。蒸发得到3-甲基-5-氧代脯氨酸1，1- 二甲基乙基酯(0.79g)，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(v)将3-甲基-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(0.79g，3.96mmol)溶于四 氢呋喃(8ml)中，并用碘甲烷(0.27ml，4.36mmol)处理。然后将混合物冷却至 0℃，并用氢化钠(60％在油中，0.170g，4.36mmol)分批处理。于0℃ 30分钟 后混合物停止产生气泡，然后温热至室温并搅拌过夜。通过加入饱和氯化铵 水溶液(10ml)淬灭混合物，且分离有机层并置于一边。水层用二氯甲烷(3x 20ml)萃取，且合并的萃取液使用疏水性玻璃料干燥。合并所有有机级分(包 括先前置于一边的那份)，并蒸发得到粗1，3-二甲基-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基 乙基酯(0.770g)，为黄色胶状物，其没有进一步纯化即使用。

(vi)将1，3-二甲基-5-氧代脯氨酸1，1-二甲基乙基酯(0.770g，3.62mmol) 混悬于二氯甲烷(5ml)，并用三氟乙酸(0.4ml，5.4mmol)处理。搅拌混合物5 小时，然后蒸发。将所得残余物与甲苯共沸，然后得到未反应的起始物质 (0.600g)。其再次溶于二氯甲烷(2ml)中，并再次用三氟乙酸(2ml)处理。搅 拌2小时后，蒸发混合物，且残余物再次与甲苯(10ml)共沸得到粗1，3-二甲 基-5-氧代脯氨酸(0.760g)，其没有任何进一步纯化即使用。

实施例130 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酰 胺(E130)

于室温将1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酸(0.130g，0.702mmol，如下制 备)、1-羟基苯并三唑(0.161g，1.053mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基 碳化二亚胺盐酸盐(0.202g，1.053mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，并搅拌15 分钟。然后将[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺(0.134g，0.842mmol)和二异丙基乙胺 (0.184ml，1.053mmol)加入至混合物中，并于室温继续搅拌过夜。然后真空 浓缩混合物，并将残余物分配于乙酸乙酯和水之间，并用乙酸乙酯萃取。合 并的有机层依次用3N柠檬酸、水、饱和碳酸钠水溶液、水(x3)和盐水洗涤， 然后经无水硫酸钠干燥。浓缩得到粗固体，其随后通过质谱检测的自动HPLC 纯化，得到N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酰胺(0.146 g)，为固体。LC/MS[M+H]⁺＝327/329，保留时间＝2.35分钟。

上述方法中使用的1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酸如下制备：

(i)于0℃将(S)-(+)-L-5-三苯甲基氧基甲基-2-吡咯烷酮(7.51g，20mmol) 溶于二甲基甲酰胺(25ml)中，并用氢化钠(60％在油中的混悬液，0.880g，22 mmol)分批处理。混合物于0℃搅拌1小时，然后用碘乙烷(1.78ml，22mmol) 处理。将混合物温热至室温，然后搅拌过夜。然后将混合物倾倒至冰上，并 用乙酸乙酯(x3)萃取。合并的有机萃取液依次用水、50％氯化钠水溶液(3x)， 和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后经硫酸钠干燥。浓缩得到粗固体，其通过自 动快速硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱 纯化，得到纯1-乙基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(7.09g)。

(ii)于-78℃向2M二异丙基氨基化锂的四氢呋喃(1.912ml，3.82mmol) 溶液中滴加1-乙基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(1.34g，3.48 mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液，且所得混合物于-78℃搅拌1小时。然后加入 碘甲烷(0.239ml，3.82mmol)，且于-78℃再搅拌1小时后，经3小时将混合 物温热至室温。然后将混合物再冷却至-78℃，并滴加另一份2M二异丙基氨 基化锂的四氢呋喃(1.912ml，3.82mmol)溶液处理。于-78℃再搅拌1小时后， 混合物再次用碘甲烷(0.239ml，3.82mmol)处理，然后将混合物温热至室温并 搅拌过夜。混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用乙酸乙酯(2x)萃取。然 后合并的有机萃取液用水(3x)洗涤，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤，经无水 硫酸钠干燥，并浓缩得到粗油状固体(1.7g)。该粗固体通过自动快速硅胶柱 色谱(Biotage SP4)，用0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，得到纯 产物级分(即，1-乙基-3，3-二甲基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮 (0.468g))，以及纯单烷基化的物质(即，1-乙基-3-甲基-5-{[(三苯基甲基)氧基] 甲基}-2-吡咯烷酮(0.524g))和二者的混合物(0.240g)。将所需产物置于一边， 并合并1-乙基-3-甲基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮和混合的物 质，且溶于四氢呋喃(20ml)中。然后于-78℃将该溶液滴加至2M二异丙基 氨基化锂的四氢呋喃(1.912ml，3.82mmol)溶液中，并在该温度继续搅拌1小 时。然后将碘甲烷(0.239ml，3.82mmol)加入至混合物中，且经4小时使混合 物温热至室温。如上述后处理得到另一批1-乙基-3，3-二甲基-5-{[(三苯基甲 基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(0.846g)，为油状物，将其与先前置于一边的物质 合并(总质量＝1.08g)，其没有进一步纯化就用于下一步骤。

(iii)将(5.56g，26.1mmol)用甲醇洗涤3次，然后加入1- 乙基-3，3-二甲基-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮(1.08g，2.61mmol) 的甲醇(50ml)溶液。将混合物于室温放置4天，然后通过过滤移除树脂(用 甲醇洗涤)。浓缩合并的甲醇级分，得到粗油状物(1.62g)，其通过自动快速 硅胶柱色谱(Biotage SP4)，用0-100％梯度乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化， 得到纯1-乙基-5-(羟基甲基)-3，3-二甲基-2-吡咯烷酮(0.376g)，为油状物，放 置固化。

(iv)将1-乙基-5-(羟基甲基)-3，3-二甲基-2-吡咯烷酮(0.366g，2.1mmol)， 亚氯酸钠(0.387g，4.3mmol)，和1M磷酸二氢钠缓冲水溶液(2.46ml，2.46 mmol)合并于乙腈(3ml)中，并加热至40℃。然后将一些晶态的TEMPO (2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基)和大约1滴漂白剂(次氯酸钠溶液，可 用氯>12％)加入至混合物，并于40℃继续搅拌4小时。然后将混合物倾倒 至含有1％w/w亚硫酸钠的冰上，且所得混合物用乙酸乙酯(x3)萃取。合并 的有机萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤，然后经硫酸镁干燥，并浓缩得到1- 乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酸(0.392g)，为白色固体，其没有进一步纯化即 使用。LC/MS[M+H]⁺＝186。

实施例131 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧 代脯氨酰胺(E131)

以与上述合成N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E130)相似的方法制备N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-乙基-4，4-二 甲基-5-氧代脯氨酰胺，除了使用{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺代替[(2-氯 -4-氟苯基)甲基]胺。

LC/MS[M+H]⁺＝377/379，保留时间＝2.63分钟。

实施例132 N-[(2-氯-34-二氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯 氨酰胺(E132)

以与合成上述N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E130)相似的方式制备N-[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基 -5-氧代脯氨酰胺，除了使用[(2-氯-3，4-二氟苯基)甲基]胺盐酸盐(如上实施例 36制备)代替[(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺。

LC/MS[M+H]⁺＝345/347，保留时间＝2.43分钟。

实施例133 N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-4，4-二(苯基甲基) 脯氨酰胺(E133)

以与上述合成N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E130)相似的方法制备N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-4，4-双 (苯基甲基)脯氨酰胺，除了使用1-乙基-5-氧代-4，4-二(苯基甲基)脯氨酸代替 1-乙基-4，4-二甲基-5-氧代脯氨酸。以与上述合成实施例130中1-乙基-4，4-二 甲基-5-氧代脯氨酸相似的方法制备1-乙基-5-氧代-4，4-二(苯基甲基)脯氨酸， 除了使用1-乙基-3，3-二(苯基甲基)-5-{[(三苯基甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮 (作为方法B中的副产物分离，实施例37)代替1-乙基-3，3-二甲基-5-{[(三苯基 甲基)氧基]甲基}-2-吡咯烷酮。

LC/MS[M+H]⁺＝479/481，保留时间＝3.32分钟。

实施例134 N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-乙基-5-氧代-4-(苯基 甲基)脯氨酰胺(E134)

以与上述合成N-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代-4-(苯基甲基)-脯 氨酰胺(E37)相似的方法制备N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-乙基-5-氧 代-4-(苯基甲基)脯氨酰胺，除了使用{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}胺代替 [(2-氯-4-氟苯基)甲基]胺。使用方法B(如实施例37中所述)制备1-乙基-5- 氧代-4-(苯基甲基)-脯氨酸。

LC/MS[M+H]⁺＝439/441，保留时间＝2.99分钟。

实施例135 N-{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨 酰胺(E135)

以与上述合成N-{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-乙基-5-氧代脯氨 酰胺(E105)相似的方法制备N-{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧 代脯氨酰胺，除了使用1-甲基-5-氧代-脯氨酸代替1-乙基-5-氧代-脯氨酸。

LC/MS[M+H]⁺＝326，保留时间＝2.02分钟。

实施例136 N-(2-联苯基甲基)-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(E136)

以与上述合成N-[(2，3-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺(E50) 相似的方法制备N-(2-联苯基甲基)-1-乙基-5-氧代脯氨酰胺，除了使用(2-联苯 基甲基)胺代替2，3-二甲基苄基胺。

LC/MS[M+H]⁺＝323，保留时间＝2.38分钟。

微波反应器

当上述实施例中有所表明时，所用的微波反应器为Biotage Initiator^TM。 除另有说明，使用正常功率输出进行反应。

质谱检测的自动HPLC

当上述实施例中有所表明时，通过质谱检测的自动HPLC的纯化使用 下述设备和条件进行：

硬件

Waters 2525 Binary Gradient Module

Waters 515 Makeup Pump

Waters Pump Control Module

Waters 2767 Inject Collect

Waters Column Fluidics Manager

Waters 2996 Photodiode Array Detector

Waters ZQ Mass Spectrometer

Gilson 202 fraction collector

Gilson Aspec waste collector

软件

Waters MassLynx version 4 SP2

柱子

所用的柱子为Waters Atlantis，其尺寸为19mm x 100mm(小规模)和 30mm x 100mm(大规模)。固定相粒径为5μm。

溶剂

A：水性溶剂＝水+0.1％甲酸

B：有机溶剂＝乙腈+0.1％甲酸

后处理(make up)溶剂＝甲醇:水80:20

针洗涤溶剂＝甲醇

方法

根据所关注化合物的分析保留时间，使用5种方法。它们具有13.5-分 钟运行时间，包括10-分钟梯度，然后3.5分钟柱冲洗和再平衡的步骤。

大/小规模1.0-1.5＝5-30％ B

大/小规模1.5-2.2＝15-55％ B

大/小规模2.2-2.9＝30-85％ B

大/小规模2.9-3.6＝50-99％ B

大/小规模3.6-5.0＝80-99％ B(6分钟，然后7.5分钟冲洗和再平衡)

流速

所有上述方法的流速为20mls/分钟(小规模)或40mls/分钟(大规模)。

手性HPLC

用于表征所选样品的对映异构体纯度的设备和条件如下所示：

方法(A)

仪器：Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram

柱子：Chiralpak AD(250mm x 4.6mm；10um粒径)

流动相：庚烷:无水乙醇(70:30)v/v泵混合

流速：1ml/分钟

温度：环境温度

U.V.波长：215nm

方法(B)

仪器：Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram

柱子：Chiralpak AD(250mm x 4.6mm；10um粒径)

流动相：庚烷:无水乙醇(50:50)v/v泵混合

流速：1ml/分钟

温度：环境温度

U.V.波长：215nm

方法(C)

仪器：Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram

柱子：Chiralpak AD(250mm x 4.6mm；10um粒径)

流动相：庚烷:无水乙醇(80:20)v/v泵混合

流速：1ml/分钟

温度：环境温度

U.V.波长：215nm

方法(D)

仪器：Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram

柱子：Chiralpak AS(250mm x 4.6mm；10um粒径)

流动相：庚烷:无水乙醇(80:20)v/v泵混合

流速：1ml/min

温度：环境温度

U.V.波长：215nm

液相色谱/质谱

上述通过液相色谱/质谱(LC/MS)分析的实施例使用下述设备和条件进 行：

硬件

Agilent 1100 Gradient泵

Agilent 1100自动进样器

Agilent 1100 DAD检测器

Agilent 1100脱气器

Agilent 1100烘箱

Agilent 1100控制器

Waters ZQ质谱仪

Sedere Sedex 85

软件

Waters MassLynx version 4.0 SP2

柱子

所用的柱子为Waters Atlantis，其尺寸为4.6mm x 50mm。固定相粒径为 3μm。

溶剂

A：含水溶剂＝水+0.05％甲酸

B：有机溶剂＝乙腈+0.05％甲酸

方法

所用的一般方法具有5分钟运行时间。

 

时间/分钟％B030.134974.8974.935.03

上述方法的流速为3ml/分钟。

一般方法的进样体积为5ul。

柱温为30度。

UV检测范围为220至330nm。

药理学数据

可根据下述研究检测本发明化合物对P2X7受体的体外生物活性：

乙啡啶累积实验

使用下述组成(单位mM)的NaCl实验缓冲液进行研究：140mM NaCl， HEPES 10，N-甲基-D-葡萄糖胺5，KCl 5.6，D-葡萄糖10，CaCl₂ 0.5(pH7.4)。 使表达人重组P2X7受体的HEK293细胞在预先用聚-L-赖氨酸处理的96孔 板中生长18-24小时。(人P2X7受体的克隆描述于US 6,133,434中)。该细 胞用350μl实验缓冲液洗涤2次，然后加入50μl待测化合物。然后细胞于室 温(19-21℃)孵育30分钟，然后加入ATP和乙啡啶(100μM的最终实验浓度)。 选择ATP浓度接近这种受体类型的EC₈₀，且对于所研究的人P2X7受体为 1mM。继续孵育8或16分钟，并通过加入25μl的1.3M蔗糖(含5mM的P2X7 受体拮抗剂，活性黑(reactive black)5(Aldrich))终止。通过使用Canberra Packard Fluorocount(Pangbourne，UK)或Flexstation.II(Molecular Devices)检 测来自板底的荧光测定乙啡啶的细胞累积(激发波长：530nm，且发射波长： 620nm)。使用迭代曲线拟合技术，检测对于阻断ATP响应的拮抗剂pIC₅₀值。

荧光成像板读取(FLIPR)Ca实验

使用下述组成(单位mM)的NaCl实验缓冲液对人P2X7进行研究：137 NaCl；20 HEPES；5.37 KCl；4.17 NaHCO₃；1 CaCl₂；0.5 MgSO₄；和 1g/L的D-葡萄糖(pH7.4)。

将表达人重组P2X7受体的HEK293细胞在用聚-L-赖氨酸预先处理的 384孔板中生长42-48小时。(人P2X7受体的克隆描述于US 6,133,434中)。 该细胞用80μl实验缓冲液洗涤3次，于37℃加入2μM Fluo4(Teflabs)保持 1小时，再次洗涤3次，并保留30μl缓冲液，然后加入10μl的4x浓度的待 测化合物。然后将细胞于室温孵育30分钟，然后加入Benzoylbenzoyl-ATP (BzATP)(在线，通过FLIPR384或FLIPR3仪器(分子器件))60μM最终实验浓 度。选择BzATP浓度以接近对于该受体类型的EC₈₀。继续孵育并读数90秒， 通过使用FLIPR CCD照相机检测来自板底的荧光(激发波长：488nm，和发 射波长：516nm)测定细胞内钙的增加。使用迭代曲线拟合技术，检测对于阻 断BzATP响应的拮抗剂pIC₅₀值。

在FLIPR Ca实验和/或乙啡啶累积实验中检测实施例1-136的化合物对 人P2X7受体的拮抗活性，且发现在FLIPR Ca实验中的pIC50值>4.7，和 /或在乙啡啶累积实验中的pIC50值>5.5。

体内实验

神经性疼痛的大鼠模型

通过在坐骨总神经周围松散狭窄的结扎，产生周围单一神经病变，由此 产生神经性疼痛的大鼠模型，Bennet等人，Pain，Vol.33，pp87-107(1988)。来自 Charles River，UK的成年雄性Random Hooded大鼠(180-200g)用异氟烷(3％) 麻醉。在左腿的大腿中部暴露坐骨神经，且如Bennet等人，Pain，Vol.33， pp87-107(1988)中所述用4根松散结扎线Chromic 4.0肠线结扎神经。缝合伤 口并用线系紧。假手术组的大鼠经历相同的过程，除了不使用松散的结扎线。 使用Von Frey毛发单纤丝的手册应用评价机械(触觉)异常性疼痛的产生。上 行方向使用单纤丝至后腿的足底区域(范围：1.4g-26g)。每根毛发使用约3-5 秒直到观察到爪子退缩反应。再次使用更低和/或更高的毛发确认后，记录产 生爪子缩回的最低的毛发作为阈值响应(g)。当建立稳定的异常性疼痛时，手 术后的26-33天向大鼠给药化合物每天2次共8天，给药期间记录异常性疼 痛检测至少3次。与溶媒响应相比N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯 氨酰胺(E10)和N-{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺 (E51)明显反转了CCI-诱导的机械异常性疼痛。

关节疼痛的大鼠模型

通过检测将FCA关节内注射到膝盖后的超敏反应，可以在慢性炎性疼 痛的关节疼痛模型中评价在反转FCA-诱导的超敏反应中潜在的止痛作用。 将来自Charles River，UK的成年雄性Random Hooded大鼠(150-180g)简单地 用异氟烷(3％)麻醉。然后向大鼠注射150μl的弗罗因德完全佐剂(FCA)到左 膝关节(关节内i.art)。在使用Dual Channel Weight Averager(Linton Instruments) 手术之前和之后测量每个后肢的负荷重量的能力(重量负荷，g)。当在注射的 和对侧爪之间建立重量负荷的稳定差异时，一般向大鼠口服给药化合物(通 常为手术后13-17天)每天2次，共5天，每天记录重量负荷测量结果。与溶 媒响应相比N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(E10)和N-{[2- 氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺(E51)明显反转FCA (i.art)-诱导的重量负荷差异，并产生从曲线下面积(AUC)计算得到的ED50’s <20mg/kg。

急性炎性疼痛的大鼠模型

用于急性炎性疼痛的有用的动物模型为弗罗因德完全佐剂(FCA)-诱导 的炎症模型。使用角叉藻聚糖而不是FCA的相似模型描述于Clayton等人.Br. J.Pharmacol.1997；120，219P中。来自Charles River，UK的成年雄性Random Hooded大鼠(180-220g)接受足垫(i.pl)注射100μl的FCA到左侧后爪的足底 表面。在FCA注射之前和注射24小时后使用Dual Channel Weight Averager (Linton Instruments)测量对每个后肢的负荷重量的能力。FCA后读数后，一 般向大鼠口服给药化合物，之后记录重量负荷测量结果。与溶媒响应相比， N-[(2，4-二氯苯基)甲基]-1-甲基-5-氧代-脯氨酰胺(E10)和N-{[2-氯-3-(三氟甲 基)苯基]甲基}-1-甲基-5-氧代脯氨酰胺(E51)明显反转FCA(i.pl)-诱导的重量 负荷差异，且产生从剂量响应曲线计算得到的ED50’s<20mg/kg。