一种前列泰胶囊的质量控制方法

摘要

本发明提供了一种前列泰胶囊的质量控制方法，该方法包括原料药益母草、前列泰胶囊中间体和前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定。与现有技术相比，本发明的质量控制方法是合理的，测定结果是稳定的，采用本发明的质量控制方法可有效控制前列泰胶囊的质量，从而保证前列泰胶囊的临床疗效。

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗前列腺炎的中药制剂的质量控制方法，特别是涉及该中药制剂的胶囊剂的质量控制方法。

背景技术

随着社会经济的不断发展、人们生活水平的不断提高以及人口的老年化，前列腺炎的发病率不断提高，且有年轻化的趋势，治疗前列腺疾病的药物研究成为了新药研究的热点。前列腺炎是男性常见病，绝大多数发生在青壮年，临床上可分为急性和慢性两种。急性前列腺炎临床上较少见，慢性前列腺炎在成年人群中发病率较高，约占泌尿外科门诊病人的1/5左右，因慢性前列腺炎多伴有精囊炎，故又称为前列腺精囊炎。

病因急性前列腺炎：发病多在劳累、着凉、长时间骑车、酗酒、性生活过度、损伤、经尿道器械操作、全身或局部抵抗力减弱时，致病菌由身体其它部位的病灶经血运或经尿道进入前列腺，最主要的致病菌为大肠杆菌、葡萄球菌、变形杆菌和链球菌等。

慢性前列腺炎：病因较为复杂，少数由急性前列腺炎未能彻底治愈迁延而来，绝大多数病人则未曾经历过明确的急性阶段。引起慢性前列腺炎的致病微生物主要是细菌，其次有病毒、支原体、衣原体以及其它致敏原等。性欲过旺、前列腺充血、下尿路梗阻、会阴部压迫、损伤，邻近器官炎症病变波及前列腺以及全身抵抗力下降等等，都可能是造成慢性前列腺炎的原因之一，甚至病人的精神状态也是影响症状轻重的一个因素。总之，慢性前列腺炎病因复杂，很可能在不同时期存在着不同的病因，或在同一时期存在一个以上的致病因素。

治疗急性前列腺炎：卧床休息、多饮水以及通便等一般处理。膀胱刺激症状严重者可给镇痛解痉药物和热水坐浴以缓解症状。抗菌药物可选用青霉素、链霉素、氨苄青霉素、先锋霉素以及西力欣等。急性前列腺炎经一般对症处理及抗炎治疗后，症状常于1～2周内消退。如症状不见好转或反而加重，前列腺肛指检查触诊更为肿胀且有波动，B超检查可见脓肿形成，经会阴穿刺抽出脓液者，应经会阴部行脓肿切开引流。

慢性前列腺炎：慢性前列腺炎的治疗一般要结合一般治疗、前列腺按摩、药物灌注、尿道扩张、前列腺周围封闭和抗菌药物等手段治疗。但是，一般的抗菌药物不易进入前列腺组织，这也是临床上治疗较为困难的原因之一。

中医中药在预防和治疗上述疾病时进行辩证施治，尤其是以益母草为主要原料制成的中药复方制剂如：前列泰胶囊、前列泰片等均有着确切的疗效。

前列泰胶囊为本发明申请人于2005年8月获国家食品药品监督管理局药品注册批件的品种(药品标准编号：YBZ15942005)。前列泰胶囊由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、知母(盐炒)、黄柏(盐炒)等药材组成。本发明中所提到的前列泰胶囊中间体的制备方法为：油菜蜂花粉破壁后用高速粉碎机粉碎，过100目筛，细粉备用；将益母草、萹蓄、红花、知母(盐炒)和黄柏(盐炒)加水煎煮二次，每次2小时，第一次加12倍量水，第二次加10倍量水，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.33～1.37(50℃热测)的稠膏，减压干燥，粉碎，加入油菜蜂花粉和淀粉适量，混合均匀，用85％的乙醇(含3％的大豆油)制粒，50～60℃干燥，即制得前列泰胶囊中间体；将中间体装入胶囊，即制成前列泰胶囊成品。

中药大都是由多种原料药复方而成，其成分比较复杂，对于药品的质量控制也是一大难题。前列泰胶囊也是由多种原料药经复方制备而成，在临床应用中存在质量标准低，不易控制的缺陷，目前还没有较成熟的前列泰胶囊的质量控制方法，本发明申请人对该中药制剂的质量控制方法进行了探讨和研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种前列泰胶囊的质量控制方法，该方法包括原料药益母草、前列泰胶囊中间体和前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定方法，提高了质量控制标准。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种前列泰胶囊的质量控制方法，包括原料药益母草、前列泰胶囊中间体和前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定方法。

上述原料药益母草中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：Z0RBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：250～270nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取益母草药材，粉碎，过40目筛，精密称取1g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％的盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％的硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，沉淀用70％乙醇15ml分次洗涤，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

原料药益母草中盐酸水苏碱的含量不低于0.50％。

前述前列泰胶囊中间体中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取前列泰胶囊中间体，粉碎，过40目筛，精密称取1.5g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，弃去滤液，以冰水洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/l的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

前列泰胶囊中间体中盐酸水苏碱的含量不低于0.60％。

前述前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取前列泰胶囊20粒，倾取内容物，研细，精密称取2g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水分次洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％的硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取上述供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量不低于0.50％。

为了验证本发明质量控制方法的合理性，申请人对该方法进行了试验研究和筛选，具体如下：

1、对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，用0.01％的氢氧化钾溶液制成每1ml含盐酸水苏碱1mg的溶液，即得。

2、流动相的选择

参照文献资料色谱条件进行试验，选定流动相为体积比60：40的甲醇水。

3 检测波长的选择

取盐酸水苏碱对照品衍生物溶液10μl，注入液相色谱仪，于190～400范围内进行全波扫描，结果在260nm处有最大吸收，故选择260nm作为检测波长。

4 系统适用性试验

4.1 对照品、样品色谱峰的确认：

分别配制0.01％KOH溶液、0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液，按表1所列步骤操作，得到4种不同溶液a～d：

表14种不同溶液的配制过程

将按表1配制好的4种溶液，超声处理10分钟后，于80℃水浴中加热20分钟，取出后，冷却至室温，注入液相色谱仪检测。从检测结果可知，衍生化反应中加入的催化剂、衍生化试剂产生的色谱峰不干扰盐酸水苏碱衍生物的色谱峰，色谱图上的盐酸水苏碱衍生物很容易确认。

4.2 阴性样品干扰试验

取前列泰胶囊和不含益母草的阴性样品，按5.1项下方法四制备供试品，结果发现，在加2％硫氢酸铬铵溶液后，阴性样品无沉淀物产生，而前列泰胶囊样品有明显的沉淀。试验结果表明：阴性样品无干扰。

4.3 分离度及理论塔板数：

对供试品溶液和对照品溶液分别进样，在数据报告上显示：其分离度均大于1.5，完全能够与其他杂质峰分离开；且理论塔板数均大于4000，故本试验的理论塔板数以盐酸水苏碱衍生物色谱峰计应不低于4000。

5、供试品溶液的制备

5.1 提取方法的选择

方法一取前列泰胶囊内容物2g，置100ml具塞三角瓶中，用三氯甲烷(含1％的氨水)溶液50ml超声提取20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干，精密加入三氯甲烷甲醇(其体积比为7：3)混合溶液50ml，称定重量，超声处理15分钟，放冷，称定重量，用上述三氯甲烷甲醇混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取滤液25ml，水浴挥干，残渣用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至25ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液一，同法制成阴性样品溶液。

方法二取前列泰胶囊内容物2g，置100ml具塞圆底瓶中，用乙酸乙酯溶液50ml回流提取30分钟，滤过，弃去乙酸乙酯液，残渣挥干，精密加入无水乙醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用无水乙醇溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取滤液25ml，水浴挥干，残渣用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至25ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液二，同法制成阴性样品溶液。

方法三取前列泰胶囊内容物2g，置100ml索氏提取器中，用乙酸乙酯溶液约50ml，加热回流提取2小时，滤过，弃去乙酸乙酯液，残渣挥干，加入甲醇溶液约40ml，加热回流提取2小时，提取液用甲醇定容至50ml，摇匀，精密吸取提取液25ml，水浴挥干，残渣用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至25ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液三，同法制成阴性样品溶液。

分别精密吸取上述供试品溶液一、二、三及其阴性样品溶液各1ml，分别置于10ml具塞反应瓶中，精密加入含对溴基溴化苯乙酮0.5mg/ml和18-冠醚-60.05mg/ml的乙腈溶液3ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈定容至10ml，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别得到供试品溶液和相应的阴性对照溶液。

按照前述色谱条件(色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为60：40的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描)，将供试品溶液一、二、三及其阴性样品的衍生物溶液注入液相色谱仪，测定含量，结果见表2

表2 各种提取方法试验结果表

注：“+”表示在盐酸水苏碱衍生物色谱峰相应的保留时间处有吸收；“-”表示在盐酸水苏碱衍生物色谱峰相应的保留时间处无吸收。

由上表可知，按提取方法一、二、三所处理的样品，其阴性样品有干扰，因此，不选用这三种提取方法。

引起干扰的原因分析及解决方案：引起干扰的原因可能是由于阴性样品中含有能与衍生化试剂发生反应的物质，其分子结构与盐酸水苏碱相似，它与衍生化试剂发生反应后，所得反应产物的分子量较大，且与盐酸水苏碱衍生化反应产物的分子量接近，因此在色谱柱上不易把二者分离开，造成假阳性，从而干扰含量测定。我们曾通过调节流动相、改变前处理方法等手段进行调整，结果均没明显改善。

因此，根据盐酸水苏碱为两性生物碱这一性质，采用雷氏盐沉淀法进行除杂，其原理如下：

B⁺+NH₄[Cr(SCN)₄(NH3)₂]→B[Cr(SCN)₄(NH3)₂]↓+NH₄⁺

2B[Cr(SCN)₄(NH₃)₂]↓+Ag₂SO₄→2Ag[Cr(SCN)₄(NH₃)₂]↓+B₂SO₄

B₂SO₄+BaCl→2BCl+BaSO₄↓

其中，B＝季铵生物碱阳离子

按下述方法进行试验：

方法四取前列泰胶囊内容物3g，置100ml具塞三角瓶中，用三氯甲烷(含1％的氨水)溶液50ml超声提取20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干，精密加入三氯甲烷甲醇(其体积比为7：3)混合溶液50ml，称定重量，超声处理15分钟，放冷，称定重量，用上述三氯甲烷甲醇混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取滤液25ml，水浴挥干，残渣加1％的盐酸溶液20ml分次溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水分次洗涤容器和沉淀，弃去滤液，沉淀以15ml丙酮溶解，在丙酮溶液中滴加0.5％硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置水浴上浓缩至约2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液四，同法制成阴性样品溶液。

方法五取本品内容物3.5g，置100ml具塞圆底瓶中，用三氯甲烷(含1％的氨水)溶液50ml回流提取1.5小时，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干，精密加入三氯甲烷甲醇(其体积比为7：3)混合溶液50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用上述三氯甲烷甲醇混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，取滤液25ml，水浴挥干，残渣加1％的盐酸溶液20ml分次溶解，滤过，滤液加入新鲜配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水分次洗涤容器和沉淀，弃去滤液，沉淀以15ml丙酮溶解，在丙酮溶液中滴加0.5％硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，自然过滤，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置水浴上浓缩至约2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液五，同法制成阴性样品溶液。

方法六取本品内容物4g，置100ml索氏提取器中，用三氯甲烷(含1％的氨水)溶液适量加热回流提取2小时，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干，加入三氯甲烷甲醇(其体积比为7：3)混合溶液适量，加热回流提取2小时，提取液用上述三氯甲烷甲醇混合溶液定溶至50ml，摇匀，精密吸取提取液25ml，水浴挥干，残渣加1％的盐酸溶液20ml分次溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水分次洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液滴加0.5％硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，自然过滤，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置水浴上浓缩至约2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液六，同法制成阴性样品溶液。

分别精密吸取上述三种供试品溶液及其阴性样品溶液各4ml，按照处理供试品溶液一、二、三及其阴性样品溶液的方法处理供试品溶液四、五、六及相应的阴性样品溶液，得供试品溶液和相应的阴性对照溶液。

按照前述色谱条件(色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为60：40的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描)，将供试品溶液四、五、六及其阴性样品的衍生物溶液注入液相色谱仪，测定含量，结果见表3：

表3 各种提取方法试验结果表

注：“+”表示在盐酸水苏碱衍生物色谱峰相应的保留时间处有吸收；“-”表示在盐酸水苏碱衍生物色谱峰相应的保留时间处无吸收。

由上表可知，提取方法四、五、六所处理的样品，在与盐酸水苏碱衍生物色谱峰相应的保留时间处有色谱峰与之对应，且阴性无干扰，故提取方法四、五、六均可作为本品的提取方法。考虑到提取方法四较之方法五和方法六更为简便，提取效果相差不大，因此，最终确定提取方法四作为本品的提取方法。

5.2 提取次数考察

按5.1项下方法四，取前列泰胶囊内容物3份(批号：20040301)，每份3g，进行超声提取，分别提取1次、2次、3次，每次10分钟，结果见表4：

表4 提取次数考察结果表

由上表可知，提取1次便可完全提取出本品中的盐酸水苏碱。

5.3 提取时间考察

按5.1项下方法四，取前列泰胶囊内容物3份(批号：20040301)，每份3g，进行超声提取，提取时间分别为15分钟、20分钟、25分钟，结果见表5：

表5 提取时间考察结果表

由上表可知，提取20分钟即可完全提取出本品中盐酸水苏碱，故提取时间确定为20分钟。

6、衍生化反应条件的选择

6.1 反应原理

6.2 衍生化试剂的选择

对常用衍生化试剂溴化苯乙酮、对溴基溴化苯乙酮进行了考察，其方法如下：取3支10mL具塞反应瓶，编号A～C，各精密加入1mg/ml的盐酸水苏碱对照品溶液1mL(用0.01％的KOH溶液配制)，A瓶中加入乙腈3mL；B瓶中加入含溴化苯乙酮0.5mg/ml和18-冠醚-60.05mg/ml的乙腈溶液3mL；C瓶中加入含对溴基溴化苯乙酮0.5mg/ml和18-冠醚-60.05mg/ml的乙腈3mL。A为空白对照，B、C为实验液。将A、B、C溶液放入80℃水浴中加热，分别于10、20和30分钟时毛细管采样2μl，点样于同一硅胶G薄层板上展开，在与对照品对应位置上检查有无盐酸水苏碱斑点，以此判断反应程度，结果见表6：

表6 两种衍生化试剂衍生化反应结果比较(n＝3)

注：表中“+”表示检出盐酸水苏碱；“-”表示未检出盐酸水苏碱。

由表6可知，在相同条件下，使用对溴基溴化苯乙酮衍生化反应速度较快，20min即反应完全，故选择它为本方法的衍生化剂。

6.3 衍生化反应条件(pH值、温度)的选择

取10mL具塞反应瓶10支，编号1～10，各精密加入含盐酸水苏碱对照品1mg/ml的KOH溶液1mL，1～5号反应瓶中各精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml作为实验液；6～10号反应瓶中各加入乙腈3mL(不含衍生化试剂)作为对照液。于80℃水浴中加热反应20min后，冷却至室温，定时精密吸取实验液、对照液各2μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇：盐酸：乙酸乙酯(4：0.5：0.5)为展开剂，稀碘化铋钾试液为显色剂，按色谱法进行扫描(λs为510nm，λR为700nm)，测量实验液和对照液盐酸水苏碱斑点面积积分值，以实验液和对照液水苏碱斑点面积积分值比值R(％)作为衍生化反应完成的百分率，以此来判断衍生化反应进行的程度，则100％-R作为衍生化反应未完成的百分率，数据见表7：

表7 不同碱度条件下衍生化反应未完成的百分率(n＝5)

由表7并结合前面确定的加热时间，选择衍生化反应的条件是：0.01％的KOH溶液，80℃水浴，加热20min。

7、线性关系考察

精密量取对照品溶液1ml，置于5ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮乙腈溶液1.5ml和0.5mg/ml的18-冠醚-6乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至刻度，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，得到对照品衍生物溶液。

分别精密吸取上述对照品衍生物溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl注入高效液相色谱仪，按技术方案所述色谱条件测定峰面积，记录色谱图，测定结果见表8。

表8 盐酸水苏碱对照品衍生物溶液线性关系考察表

 

序号进样量(μg)面积值(mv.s)10.4195666.610720.83901339.709731.67802756.331042.51704193.087953.35605554.307664.19506937.2690

以峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，线性方程为：Y＝1666.4X-37.2，相关系数γ＝0.9999，经拟合过原点的方程为：y＝1654x，相关系数γ＝0.9999。将一样品的峰面积(A＝1339.7097)代入上两式，结果相对偏差为0.99％，可认为截距为零，可用外标一点法计算含量，结果表明，盐酸水苏碱对照品衍生物在0.4195～4.1950

μg范围内线性关系良好。

8.精密度试验

8.1 仪器精密度试验

取盐酸水苏碱对照品衍生物溶液5μl，注入液相色谱仪，重复6次，测定峰面积，记录色谱图，结果如下：

表9 精密度试验结果表

结果表明：盐酸水苏碱对照品衍生物的峰面积相对偏差小于2％，说明本试验精密度良好。

8.2重复性试验 分别精密称取本品内容物6份，按前法处理，制得供试品溶液，进样10μl进行试验，测定峰面积，记录色谱图，测定结果如下：

表10 重复性试验结果表

结果表明：盐酸水苏碱对照品衍生物的含量相对标准偏小于2％，说明本试验重现性良好。

8.3中间精密度实验 我们考察了不同日期、不同分析人员、不同设备的含量测定结果，结果见表11

表11 制剂中间精密度试验结果

上述结果表明，该含量测定方法的中间精密度良好。

9.准确度试验

采用加样回收试验测定，取已知含量的同一批样品(批号：20040301，盐酸水苏碱平均含量为0.546％)9份，各1g，精密称定，按样品中所含盐酸水苏碱折算，1～3份分别加入1：0.8的盐酸水苏碱对照品；4～6份分别加入1：1的盐酸水苏碱对照品；7～9份分别加入1：1.2的盐酸水苏碱对照品。按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，照上述色谱条件，进样、测定，记录色谱图，计算含量，求相对标准偏差，结果表明，此方法具有较好的加样回收率，准确度良好，结果见表12。

表12 制剂加样回收试验结果

10、耐用性试验

10.1被测溶液的稳定性考察 精密称取前列泰胶囊内容物适量，配制供试品溶液，将供试品溶液置室温下分别放置0、2、4、6、8、24小时后，吸取10ul进样，测定峰面积，记录色谱图，测定结果如下：

表13 溶液稳定性试验结果表

结果表明：盐酸水苏碱对照品衍生物的峰面积相对偏差小于2％，说明室温下24小时内本品具有良好的稳定性。

10.2不同色谱柱的比较 我们比较了四种不同型号的色谱柱，测定结果如下：

表14 不同色谱柱考察结果表

10.3不同柱温比较 我们比较了三种不同柱温对测定结果的影响，测定结果如下：

表15 不同柱温考察结果表

10.4不同流速比较 我们比较了三种不同流速对测定结果的影响，测定结果如下：

表16 不同流速考察结果表

 

流速分离度测定的平均含量(mg/粒)RSD(％)0.8ml/min>52.471.0ml/min>52.450.81.2ml/min>52.46

10.5流动相组成比例变化的比较 我们比较了三种不同流动相对测定结果的影响，测定结果如下：

表17 不同流动相考察结果表

 

流动相分离度测定的平均含量(mg/粒)RSD(％)甲醇水(70：30)>52.48甲醇水(65：35)>52.461.7甲醇水(60：40)>52.45

10.6不同检测波长的比较 我们比较了三种不同波长对测定结果的影响，测定结果如下：

表18 不同检测波长考察结果表

 

检测波长分离度测定的平均含量(mg/粒)RSD(％)255nm>52.46260nm>52.450.6265nm>52.46

与现有技术相比，本发明的质量控制方法是合理的，测定结果是稳定的，采用本发明的质量控制方法可有效控制前列泰胶囊的质量，从而保证前列泰胶囊的临床疗效。

具体实施方式

前列泰胶囊的质量控制方法包括原料药益母草、前列泰胶囊中间体和前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定方法，具体如下：

原料药益母草中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：250～270nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取益母草药材，粉碎，过40目筛，精密称取1g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％的盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％的硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，沉淀用70％乙醇15ml分次洗涤，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

原料药益母草中盐酸水苏碱的含量不低于0.50％。

前列泰胶囊中间体中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取前列泰胶囊中间体，粉碎，过40目筛，精密称取1.5g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷:甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，弃去滤液，以冰水洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/l的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

前列泰胶囊中间体中盐酸水苏碱的含量不低于0.60％。

前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量测定方法为：

色谱条件色谱柱：Z0RBAX SB-C₁₈柱，5μm，4.6×250mm；流动相：体积比为6：4的甲醇水；温度：25～35℃；检测波长：260nm；流速：1ml/min；检测器：DAD检测器，190～400全波扫描；

供试品溶液的制备取前列泰胶囊20粒，倾取内容物，研细，精密称取2g，置100ml具塞三角瓶中，用含1％氨水的三氯甲烷溶液50ml超声提取30分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，残渣挥干后精密加入三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷：甲醇的体积比为7：3的混合溶液补足损失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液35ml，置蒸发皿中，90℃水浴挥干，残渣加1％盐酸溶液20ml溶解，滤过，滤液加入新配制的2％硫氢酸铬铵溶液10ml，置冰浴中放置0.5小时，滤过，以冰水分次洗涤容器和沉淀，弃去滤液，以15ml丙酮溶解沉淀，在丙酮溶液中滴加0.5％的硫酸银溶液至不再有沉淀产生，放置，滤过，用70％乙醇15ml分次洗涤沉淀，合并洗液和滤液，置90℃水浴上浓缩至2ml，放冷，加入与硫酸银等当量的1％氯化钡溶液，用0.01％的氢氧化钾溶液定量转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；

测定法精密量取上述供试品溶液4ml，置于10ml具塞反应瓶中，精密加入0.5mg/ml的对溴基溴化苯乙酮的乙腈溶液1.5ml和0.05mg/ml的18-冠醚-6的乙腈溶液1.5ml，混匀，密塞，于80℃水浴中加热20分钟，取出，冷却至室温，加乙腈至10ml，摇匀，进样前用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液在上述色谱条件下进行HPLC分析，用外标一点法计算含量。

前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量不低于0.50％。