表没食子儿茶素没食子酸酯在制备防治胆石症的药物中的应用

摘要

本发明公开了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在制备防治胆石症的药物中的应用。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)应用于胆石症的防治中能降低胆色素结石及胆固醇结石的形成率。

说明书

技术领域

本发明涉及表没食子儿茶素没食子酸酯的新的医药用途。

技术背景

胆石症是一种严重危害人类健康的常见病，流行病学研究表明，近年来胆石症患者急剧增加，每十年增加约2倍。美国胆石症患者约占总人口的10％，德国约占总人口的10％-15％。随着我国人民生活水平的逐步提高，饮食结构发生了改变，胆石症的发病率正在迅速上升。

胆石症可发生于胆囊、肝内胆管和胆总管，其患病率因种族、遗传、地理、饮食等因素而异。胆结石临床可分为胆固醇结石、胆红素结石、胆固醇胆红素混合结石、碳酸盐结石、磷酸盐结石、脂肪酸结石、黑色色素结石等几大类，黑色色素结石也是胆色素结石的一种。其中以胆固醇结石和胆色素结石最为多见，占全部病例的95％。

胆石病往往引起胆道梗阻、感染甚至癌变等并发症，而梗阻、感染是急性胰腺炎、急性化脓性胆管炎、中毒性休克、胆砂性血栓和弥散性血管内凝血等严重并发症的病理基础。胆囊结石与胆囊癌的密切关系已成为共识。

胆结石可以通过动手术治疗去除，但大多数病人仍希望通过药物来治疗，仍以药物治疗为主。

治疗胆石病，无论是消炎利胆、解痉止痛、抗菌药物、胆囊切除、胆总管切开取石，还是胆肠内引流、肝脏部分切除，都只是针对胆石引起的并发症，只是“舍本求末’的对症治疗而已。惟有找到胆石病的病因，预防胆石形成、结石携带症状发作和胆石清除后复发，才是从根本上防治胆石病彻底有效的办法。

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是从中国绿茶中提取的一种成份，它是绿茶主要的活性和水溶性成份，是儿茶素中含量最高的组分，占绿茶毛重的9％-13％。因为具有特殊的立体化学结构，EGCG具有非常强的抗氧化功能和自由基捕获能力，在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色(朱发伟：茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯的研究进展，中草药，2005年8期)；同时，EGCG还具有抗菌消炎和降血脂的作用，能作为抗肿瘤药物的增效剂，用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性(李奕等：表没食子儿茶素没食子酸酯抗白血病的分子机制，国外医学：医学地理分册，2004年4期)。

现有技术中没有EGCG用于防治胆石症的文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于以降低体内结石形成为目的，寻找一种无毒性、安全可靠，能防治胆色素和胆结石形成的物质，从根本上彻底有效地防治胆石病。

本发明基于发明人发现表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)不仅能降低胆色素结石的形成率，亦能降低胆固醇结石形成的易感性，从而完成并实现了本发明。

本发明涉及的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有如下化学结构式：

本发明涉及的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的分子式为C₂₂H₁₈O₁₁，分子量为458.4。

本发明涉及的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的提取方法在现有技术中已经公开，譬如，高彦华等在“鲜茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯的高效提取技术研究”(植物研究，2006年26卷4期，P486-489)中公开的采用鲜磨匀浆提取、负压空化混悬组合技术对新鲜老龄茶叶中的没食子酸酯(EGCG)进行了高效提取。

本发明涉及的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在市场上能方便地购买获得，譬如：杭州禾田生物技术有限公司(Hangzhou Gosun Biotechnologies Co.，Ltd.)生产的纯度为90％、95％、98％和99％的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)；美国sigma公司生产的纯度为98％的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatecchin gallate，EGCG)，等等。

本发明涉及的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)用于制备防治胆石症的药物，可制成胶囊或片剂，直接口服，成人用药浓度范围为0.5-100mg/kg/天。

后续动物试验证明EGCG应用于胆石病防治中，可以降低胆色素和胆固醇结石的形成率，具有良好的应用前景。

附图说明

图1是EGCG对豚鼠胆色素结石形成的影响图。

图2是EGCG对C57BL/6小鼠胆固醇结石形成的影响图。

具体实施方式

本发明内容通过附图和以下实施例作进一步说明。

实施例1(EGCG对豚鼠体内胆色素结石形成的影响)

药品及试剂：

盐酸林可霉素(SPECTINOMYCIND ihydmchloride)，注射液，上海禾丰制药有限公司生产，使用前半小时以生理盐水新鲜配置成30mg/ml溶液。

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatecchin gallate，EGCG)：美国sigma公司产品，纯度98％，用双蒸水分别配制成2.5mg/ml浓度的药液，置于0-4℃冰箱中备用。

雄性豚鼠：购自上海市奉贤县泰日镇银根养兔室。

32只雄性豚鼠，体重450-500g，随机分为4组：正常对照组、胆色素结石模型组、EGCG高浓度组、EGCG低浓度组，每组8只。模型组、EGCG(高)组和EGCG(低)组用林可霉素60mg/kg/day剂量大腿根部皮下连续注射7天，同时，EGCG(高)组和EGCG(低)组用EGCG分别采用50mg/kg/天和25mg/kg/天剂量罐胃，治疗10天；期间正常组、模型组生理盐水灌胃。

EGCG治疗后的第11天(即最后一剂EGCG后24小时)，戊巴比妥麻醉下腹主动脉采血。术前动物禁食12小时。完整切下胆囊，观察成石情况，按照下述公式计算成石抑制率。

成石率＝患有胆结石的小鼠数(只)/每组小鼠数(只)×100％

结果如表1显示：在胆色素结石模型中，成石率分别为：对照组为12.5％，模型组为100％，EGCG高浓度组和EGCG低浓度组分别为37.5％和62.5％。

表1.EGCG对豚鼠胆色素结石形成率的影响

以上实施例说明，表没食子儿茶素没食子酸酯对于胆色素结石的形成具有良好的抑制效果，而且这种抑制效果还具有剂量依赖性，如图1所示。

实施例2(EGCG对C57BL/6小鼠体内胆固醇结石形成的影响)

药品及试剂：

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatecchin gallate，EGCG)：美国sigma公司产品，纯度98％，用双蒸水分别配制成2.5mg/ml浓度的药液，置于0-4℃冰箱中备用。

10周龄C57BL/6小鼠：购自上海市奉贤县泰日镇银根养兔室。

48只10周龄C57BL/6小鼠，体重20±2g，随机分为4组：正常对照组、胆固醇结石模型组、EGCG高浓度组、EGCG低浓度组，每组12只。

模型组、EGCG(高)组和EGCG(低)组喂以致石饲料，正常组喂以普通饲料。同时，EGCG(高)组和EGCG(低)组用EGCG分别采用80mg/kg/天和40mg/kg/天剂量罐胃；期间正常组、模型组生理盐水灌胃。实验期间，动物不限饮食。

造模第六周后脱颈椎处死动物。术前动物禁食12小时。完整切下胆囊，观察成石情况，计算成石抑制率。

致石饲料的配方：普通啮齿科动物饲料加入1.25％胆固醇、15％脂肪、0.5％胆酸(由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供)。

成石率＝患有胆结石的小鼠数(只)/每组小鼠数(只)×100％

结果如表2显示：在胆色素结石模型中，成石率分别为：对照组为0，模型组为83.3％，EGCG高浓度组和EGCG低浓度组分别为33.33％和41.67％。

表2.EGCG对C57BL/6小鼠胆固醇结石形成率的影响

以上实施例说明，表没食子儿茶素没食子酸酯对于胆固醇结石的形成具有良好的抑制效果，而且这种抑制效果还具有剂量依赖性，如图2所示。