法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2014-05-07
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):G01N21/25 授权公告日:20101110 终止日期:20130312 申请日:20070312
专利权的终止
2012-07-18
专利实施许可合同备案的生效 IPC(主分类):G01N21/25 合同备案号:2012130000085 让与人:张文臣 受让人:承德燕峰药业有限责任公司 发明名称:一种山楂精降脂胶囊含量测定方法 公开日:20080917 授权公告日:20101110 许可种类:独占许可 备案日期:20120521 申请日:20070312
专利实施许可合同备案的生效、变更及注销
2010-11-10
授权
授权
2008-11-05
实质审查的生效
实质审查的生效
2008-09-17
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种山楂精降脂胶囊含量测定方法。
背景技术
山楂精降脂胶囊为山楂精降脂片的改剂型品种,原山楂精降脂片为中华人民共和国卫生部部颁标准第9册收载的品种,由山楂水解提取物组成,具降血脂作用。原标准项下收载的含量测定方法是:以槲皮素为对照,通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色后,采用分光光度法,在510nm处测定总黄酮含量。但在实际测定中发现,原测定方法,测定依据不合理,无法准确测定供试品的含量。其理由有3点,(1)槲皮素对照品溶液显色后,在510nm处无吸收,而供试品溶液有吸收,但吸收峰在480nm处。以无吸收峰的做对照,测定有吸收峰的含量,测定的结果是没有任何参考价值的(见图1、2、3、4)。(2)510nm是紫红色的吸收区,样品和对照品加碱后,样品为紫红色的,对照品为黄色的,在可见光区,以黄色做对照,测定紫红色,从另一方面又说明了方法的欠科学性。(3)原含量测定方法样品是以乙醇为提取溶剂,取2.0ml置10ml量瓶中,加水及水系显色试剂至刻度,脂溶性成分析出,溶液变浑浊,影响吸收度。所以说原测定方法,无法准确测定供试品的含量。
发明内容
通过对提取溶剂、显色条件、测定波长的探讨研究,提供一种以槲皮素为指标,316nm为检测波长,低浓度乙醇为样品提取溶剂,测定总黄酮的科学、准确、重现性好、灵敏度高的含量测定方法。解决了原测定方法,槲皮素对照品吸收度不随浓度成比例增长,只能达到0.56的弊端,使其吸收度落在方法学规定的范围之内;线性相关系数由原方法γ=0.9723,提高到γ=0.9997;加样回收实验结果表明:回收率为99.75%(见附表1)。方法的灵敏度是原方法的5倍以上。
准确测定方法提供了正确的含量限度,由原方法规定的毫无根据的每片或粒不得低于4.5mg,修订为不得低于0.90mg。真正起到了科学、准确控制制剂质量的作用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为:
1.对照品溶液的制备精密称取在干燥器中干燥24小时的槲皮素适量,加乙醇配置成原液,再取一定量原液,加30~60%的乙醇稀释成每ml含槲皮素0.03~0.07mg的溶液;
2.标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1.0,2.0,3.0ml分别置25ml量瓶中,依次加30~60%乙醇使总量为5ml,摇匀,依次加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6分钟,再分别加10%的硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,分别加入氢氧化钠试液10ml,加30~60%乙醇至刻度,摇匀,避光放置15分钟,以相应的溶剂和试剂为随行空白,照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB),迅速在316±2nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程;
3.测定法取样品10粒,倾出内容物,精密称定,研细,取0.03~0.5g,置具塞锥形瓶中,精密加30~60%乙醇25~50ml,密塞,称定重量,回流10~30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,再用0.45μm微孔滤膜滤过,精密量取续滤液1~5.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自加“加30~60%乙醇使总量为5ml”起,依法测定吸收度,用回归方程,计算供试品中槲皮素的含量。
本发明的原理如下:
以槲皮素为对照,通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色后,槲皮素对照品与供试品溶液在316±2nm处都有吸收峰,而且其含量与吸收强度符合比尔定律。
本发明的创新点及有益效果如下:
(1)首次发现与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色的槲皮素与总黄酮其共有吸收峰在316±2nm处,并非文献报道的510nm处。
(2)以低浓度乙醇取代乙醇作为样品的提取溶剂,解决了原方法样品溶液加水及水系显色试剂后,溶液变浑浊,影响吸收度,使原方法失去准确性的弊端。
(3)检测波长和提取溶剂的改进,有效提高了方法的准确性、灵敏度、重现性和线性范围。彻底解决了原测定方法,槲皮素对照品含量不随浓度成比例增长的弊端(其吸收度在0.196~0.56),使其吸收度落在方法学规定的范围之内;线性相关系数由γ=0.9723(见附表2、图5),提高到γ=0.9997(见附表3、图6);方法的灵敏度是原方法的5倍以上。
(4)提取方式由原方法的索氏提取3小时,改为回流10分钟,缩短了时间,节约了试剂,提高了效率。
(5)本发明不仅为山楂精降脂胶囊中的总黄酮含量提供了准确、重现、灵敏的测定方法。纠正了由于原测定方法的不正确性,而导致制剂的含量限度不正确性。还为其他制剂中以槲皮素为指标的总黄酮含量测定提供了新的参考依据。
(6)根据测定结果,以正确的含量限度取代了原标准无根据的限度规定。真正起到了科学、准确控制制剂质量,确保人民用药安全、有效的的作用。
附图说明
图1槲皮素对照品光谱扫描图
图2山楂精降脂胶囊光谱扫描图
图3山楂精降脂片光谱扫描图
图4空白样品光谱扫描图
图5原测定方法槲皮素对照品的线性关系图
图6本发明方法槲皮素对照品的线性关系图
本发明具体实施方式如下:
1.对照品溶液的制备精密称取在干燥器中干燥24小时的槲皮素适量,加乙醇配置成原液,再取一定量原液,加30~60%的乙醇稀释成每ml含槲皮素0.03~0.07mg的溶液;
2.标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1.0,2.0,3.0ml分别置25ml量瓶中,依次加30~60%乙醇使总量为5ml,摇匀,依次加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6分钟,再分别加10%的硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,分别加入氢氧化钠试液10ml,加30~60%乙醇至刻度,摇匀,避光放置15分钟,以相应的溶剂和试剂为随行空白,照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB),迅速在316±2nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程;
3.测定法取样品10粒,倾出内容物,精密称定,研细,取0.03~0.5g,置具塞锥形瓶中,精密加30~60%乙醇25~50ml,密塞,称定重量,回流10~30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,再用0.45μm微孔滤膜滤过,精密量取续滤液1~5.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自加“加30~60%乙醇使总量为5ml”起,依法测定吸收度,用回归方程,计算供试品中槲皮素的含量。
本品每粒含总黄酮以槲皮素(C15H10O7)计,不得少于0.90mg。十批山楂精制剂中总黄酮含量测定结果见附表4。
附表1槲皮素的回收率试验结果
附表2原方法槲皮素浓度与吸收度
附表3本发明方法槲皮素浓度与吸收度
附表4山楂精制剂中总黄酮含量测定结果
机译: 一种山楂片提取物的制造方法以及使用山楂片提取物的山楂酒类饮料
机译: 精米的米糠含量测定方法
机译: 一种有机组合物,包括藜麦稀松或洗涤废料的提取物,桉树精,印za属精和其他植物精;获得和用作农业和园艺农药的方法。