从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法

摘要

本发明涉及一种从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法。本发明采用逆流萃取的方法在酸性条件下用氯仿脱脂除杂，然后在碱性条件下用正丁醇逆流萃取得到总生物碱粗品。将所得总生物碱粗品经硅胶柱层析分离得到苦马豆素粗品，然后重结晶获得苦马豆素纯品。本发明的提纯工艺分四步完成，提取成本低，工艺简单，产品纯度高，整个提取工艺适合于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然产物提取、分离方法，特别涉及一种从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法。

背景技术

甘肃棘豆(O xy trop is kansuensis)为豆科棘豆属多年生草本植物，主要分布于我国青海、甘肃、宁夏、四川、云南等地，其根系发达，枝多叶茂，抗逆性强，生物产量巨大，每年在其密集生长的牧区都有大批的家畜中毒死亡，对当地牧民造成的损失相当严重，是我国西北和西南牧区危害最严重的毒草之一。对甘肃棘豆有毒成分的研究认为苦马豆素(swainsonine)是其主要有毒成分。苦马豆素是一种大极性的吲哚里西啶类生物碱，对α-甘露糖苷酶具有特殊的抑制作用。近年来苦马豆素作为一种崭新的抗癌药物得到了国内外研究人员的关注，其特点在于既具有直接杀伤肿瘤细胞的作用，又具有免疫调节的双向作用。

当前分离提取苦马豆素的主要来源有两种，一是从植物中提取；另一种是从豆类丝核菌(Rhizoctonia leguminicola)中提纯。人工合成其成本很高。国外分离提纯苦马豆素的主要技术工艺是先将植物样品或者菌丝体在有机溶剂中浸提，将浸提物浓缩后进过阳离子交换树脂柱和琼脂糖凝胶柱分离，最后重结晶得到苦马豆素，其不足是提取工艺复杂，成本高，不能工业化大量生产。国内苦马豆素主要来源于从植物中提取，同样存在上述问题。本发明的优点在于提取路线工艺简单，成本低廉，适合于工业化生产。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种从甘肃棘豆中分离提纯苦马豆素的工艺方法。

本发明以我国西北草原上丰富的植物资源-甘肃棘豆为原料，根据苦马豆素的基本理化性质，采用逆流萃取的方法在酸性条件下用氯仿脱脂除杂，然后在碱性条件下用正丁醇逆流萃取得到总生物碱粗品。将所得总生物碱粗品经硅胶柱层析分离得到苦马豆素粗品，然后重结晶获得苦马豆素纯品。

本发明采用有机溶剂浸提，逆流萃取、硅胶柱色谱分离、重结晶等技术，最后得到苦马豆素。

本发明的提纯工艺分四步完成，提取成本低，工艺简单，产品纯度高，整个提取工艺适合于工业化生产。

一种从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法，其特征在于该方法依次包括如下步骤：

A、将甘肃棘豆粉碎，用工业乙醇热提2-5次，过滤后弃去料渣，将提取液减压浓缩得甘肃棘豆总浸膏；

B、将得到的总浸膏，加入1～3倍量的水溶解，用酸溶液调pH值至3-5，在酸性条件下用氯仿逆流萃取除去其中的脂溶性杂质，然后用氢氧化钠溶液调pH值至8-10，用正丁醇逆流萃取，收集正丁醇萃取液，减压回收正丁醇得总生物碱粗品；

C、将总生物碱粗品用硅胶柱色谱分离，干法上样，氯仿-甲醇-氨水梯度洗脱，薄层色谱检测，合并苦马豆素部分，自然挥发溶剂得到白色粉末状苦马豆素；

D、将得到的白色粉末状苦马豆素，采用甲醇溶解，再向其中加入氯仿重结晶获得白色针状结晶的苦马豆素纯品。

在A步骤中，工业乙醇与甘肃棘豆的质量比为1-3∶1。

本发明苦马豆素的提取率为20～30μg/g，与已有技术相比减少了苦马豆素提取的中间环节，降低了生产成本，适合工业生产应用，进一步促进苦马豆素作为抗肿瘤药物及免疫增强剂等产品开发的产业化。

具体实施方式

实施例1：

取甘肃棘豆干草1kg，用10升75％工业乙醇热提三次，每次两小时，过滤后弃去料渣，将提取液减压浓缩得甘肃棘豆总浸膏180g，出膏率18％。在浸膏中加入200mL水反复搅拌溶解，用浓盐酸调节pH至4，用氯仿逆流萃取除去浸膏中的叶绿素等脂溶性杂质。弃去氯仿，水相用NaOH溶液调整pH至9，用正丁醇逆流萃取提取其中的总生物碱。减压回收正丁醇得到11.5g总生物碱粗品，出碱率1.15％。将生物碱粗品用甲醇溶解，100～200目的硅胶拌样，用200～300目的硅胶干法上柱，氯仿-甲醇-氨水梯度洗脱，薄层色谱检测，合并苦马豆素部分，自然挥发溶剂得到白色粉末状苦马豆素0.15g。将其溶于1mL甲醇中，待甲醇挥发至0.5ml后向其中加入5mL氯仿重结晶，得到白色针状结晶23.1mg，即为苦马豆素，提取率0.0023％。