一种桑叶提取物及其在制备抗甲型流感病毒药物中的应用

摘要

本发明公开了一种桑叶提取物，其提取方法为：桑叶干燥粉碎后，用乙醇提取。本发明还公开了这种桑叶提取物在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。本发明的桑叶提取物具有明显的抗甲型流感病毒的作用，可用于制备各种形式的抗甲型流感病毒药物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种桑叶提取物及其在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。

背景技术

桑叶为桑科植物桑(Morus albal.)的叶。桑树的栽培已有五千多年的历史，它的叶可以以其丰富的营养和特有的成分养育家蚕，结出蚕茧，缫出丝，并进而促进了人类社会经济的发展。随着人类社会的进步，人们逐步发现，桑叶应用于人类，还可以治疗某些疾病，最近几年来更进一步发现，桑叶具有非凡的保健功效。特别是对亚健康的逆转，有着不可低估的作用。

桑叶品性寒、味甘苦，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功能，是常用的中药之一。《神农本草经》称桑叶为“神仙叶”，具有滋阴补血、益肝通气，降压利尿之功效。《本草纲目》记载：桑叶乃手足阳明之药，叶煎代茗，能止消渴，明目长发。《寿世保元》中以桑叶为主的护桑至宝丹“久服不以自登上寿”。现代药理研究证明桑叶具有很多化学成分和多种生物活性。

流感病毒有甲(A)、乙(B)、丙(C)三种型别组成，其中乙型与丙型流感病毒的宿主范围很窄，危害程度也很小。而甲型流感病毒的危害程度最大，宿主范围也很广泛，除可感染人会引起世界性流感大流行外，还会在动物中广泛存在而引起动物流感致死亡。目前已知甲型流感病毒可感染数十种禽类以及马、猪等动物。甲型病毒属于正黏病毒科(Oythomy Xoviridae)是一类对黏蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒，为此这种甲型流感病毒很容易侵入人体上呼吸道和肺部、肠道等对人类危害很大。

目前虽有一些合成药物也有一定疗效，但对人体伤害很大容易造成免疫力下降和带来其它疾病，由于这种病毒容易产生变异，给疫苗工作也会带来一定的困难，中医中药多数是原料药和部分冲剂，药效有一定的缓慢性，且不便服用。

因此从纯天然植物中筛选对人体无害并具有抗病毒活性的物质十分重要和必要，我们新文达研发中心对桑叶的研究已有二年多，特别是自从SARS病毒在我国发生后，更加引起了我们对筛选具有抗病毒天然产物的重视和责任感。我研发中心从桑叶中提取并分离出功效物质(简称WSHT)，经体外细胞试验检测有明显的抗甲型流感病毒和杀菌抑菌的作用。

发明内容

本发明的目的是公开一种桑叶提取物WSHT，及其在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。

本发明的桑叶提取物WSHT，其提取方法为：桑叶干燥、粉碎后，用乙醇提取。

本发明中，所述的桑叶较佳的为中国鲁桑叶。鲁桑在中国分布很广，如山东、江苏、浙江等地均有大量种植。

本发明中，所述的乙醇水溶液浓度较佳的为重量百分比40％～98％，桑叶/乙醇水溶液的重量比较佳的为1∶5～1∶20。

本发明中，所述的乙醇提取较佳的为提取2次，每次提取的时间较佳的为2小时，提取的温度较佳的为30℃～80℃。

本发明实例中，为提高提取物活性，在用乙醇提取之后，再将提取物上大孔树脂，用序列浓度的乙醇水溶液洗脱，分部收集。所述的序列浓度较佳的为重量百分比：20％、30％、50％、60％、70％、80％。

本发明中所用试剂均市售可得。

本发明的另一目的是公开本发明的桑叶提取物WSHT在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。所述的药物可为固体、液体、粉剂或胶囊等形式。

具体实施方式

实施例1

桑叶提取物WSHT，其提取步骤如下：

(1)中国鲁桑叶干燥、粉碎；

(2)以桑叶/乙醇水溶液重量比1∶15的比例，用40％的乙醇水溶液提取2次，每次2小时，提取温度为30℃；

(3)上大孔树脂，用20％、30％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液洗脱，分部收集。

实施例2

桑叶提取物WSHT，其提取步骤如下：

(1)中国鲁桑叶干燥、粉碎；

(2)以桑叶/乙醇水溶液重量比1∶10的比例，用80％的乙醇水溶液提取2次，每次2小时，提取温度为80℃；

(3)上大孔树脂，用20％、30％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液洗脱，分部收集。

实施例3

桑叶提取物WSHT，其提取步骤如下：

(1)中国鲁桑叶干燥、粉碎；

(2)以桑叶/乙醇水溶液重量比1∶20的比例，用98％的乙醇水溶液提取2次，每次2小时，提取温度为50℃；

(3)上大孔树脂，用20％、30％、50％、60％、70％、80％乙醇洗脱，分部收集。

实施例4

桑叶提取物WSHT，其提取步骤为：桑叶干燥粉碎后，以桑叶/乙醇水溶液重量比1∶5的比例，用50％的乙醇水溶液提取2次，每次2小时，温度为50℃。

效果实施例1桑叶提取物WSHT抗流感甲型病毒活性测试

测试原理：以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE)。

测试材料：

1.病毒株：流感甲型病毒(济防190-15)在鸡胚尿囊腔内培养传代(2002.10)，-80℃保存。

2.样品处理：样品溶于DMSO，再用培养液配成适宜初始浓度，用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。

3.阳性对照药：病毒唑(RBV)浙江康裕药业有限公司(批号960501)。

测试方法：MDCK细胞接种96孔培养板，置5％CO₂，37℃培养24小时。MDCK细胞分别加入流感甲型病毒10-4(100倍TCID50)，37℃吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度药物。设病毒对照和细胞对照，37℃培养36小时，观察结果，记录CPE，计算各样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC50)。

测试结果：

表1桑叶提取物WSHT抗甲型流感病毒活性测试结果

  样品浓度  TC5(ug/ml)  IC50(ug/ml)  SI  原液的1/30倍  1200  307.2  3.87

注：表中TC50为药物半数有毒浓度；IC50为药物对病毒半数抑制浓度，SI为选择指数，SI＝TC50/IC50。

测试结论：

由TC5药物半数有毒浓度和IC50病毒半数抑制浓度分别为1200ug/ml和307.2ug/ml，SI为3.87的数据可得：桑叶提取物WSHT具有明显的抗流感甲型病毒活性。