二(7－羟基－2,3－二氢－1－1H－茚基)醚类及其类似物、合成方法及应用

摘要

本发明属药物合成领域，具体涉及式I及式II结构的二(7－羟基－2，3－二氢－1－1H－茚基)醚类(di(7－hydroxy－2，3－dihydro－1H－inden－1－yl)ether)及其类似物、合成方法及在药学上的应用。通过抗病毒活性测定表明，二(7－羟基－2，3－二氢－1－1H－茚基)醚类及其类似物具有显著的抗HCV活性和较好的抗HIV活性，是一类全新结构类型的HCV和HIV抑制剂，可以作为原创性的抗HCV和HIV创新药物的先导化合物进行深入研究和开发，具有显著的科学意义及应用前景。

说明书

技术领域

本发明属药物合成领域，具体涉及二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚类(英文名：di(7-hydroxy-2，3-dihydro-1H-inden-1-yl)ether)及其类似物、合成方法及在药学上的应用。

背景技术

20世纪70年代，丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)被临床发现，到20世纪80年代通过分子克隆技术被确认。HCV是丙型肝炎的病原体，是导致输血后肝炎和急慢性非甲非乙型肝炎的主要致病因子。具有关统计，约55％～85％的HCV急性感染发展成慢性感染，而慢性感染是导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌死亡的主要原因。在美国，HCV感染是一种最常导致肝脏移植的疾病。HCV的传播途径有被污染的血液制品、共用注射器材静脉注射毒品、不洁性行为、重复使用未严格消毒的医疗器材等。总之，在大多数情况下，HCV通过血液与血液的接触传播，是一种最常见的血源性病毒感染。HCV的感染是世界范围的。据世界卫生组织(WHO)估计，约有1.7亿人感染过HCV，在全世界不同人群中总的抗HCV血清阳性率约为3％。而在发展中国家，HCV的感染率一般高于全球3％的平均率，在有些地区甚至高达20％。

目前对HCV的治疗主要使用干扰素。干扰素用于治疗慢性病毒性肝炎已有10多年的历史，具有免疫调节、降低病人的传染性、减轻肝细胞的炎症反应、抗病毒和清除慢性病毒性肝炎病毒、延缓或降低发生肝硬化和原发性肝癌的作用。虽然效果远没有达到令人满意的程度，但它却是目前唯一得到国内外绝大多数医学专家认可的对慢性病毒性肝炎有效的抗病毒药物，也是目前公认的治疗慢性丙型肝炎有效的药物。但干扰素有较严重的副作用，病人首次接受干扰素治疗时可产生短暂的发热、寒战、全身不适、肌肉疼痛、头痛等，称为流感样综合征；大剂量应用时，可产生明显的神经精神症状，如嗜睡、昏睡等；干扰素对造血系统的影响比较常见，用药后可出现白细胞减少，一般是粒细胞先降低，2～3日内淋巴细胞也开始降低，停药后或间歇5天以上，白细胞数可迅速恢复；消化系统的反应主要包括食欲不振、味觉异常、恶心、呕吐、腹泻等；大剂量使用干扰素时常可出现谷丙转氨酶和谷草转氨酶的一过性升高，一般认为属良性的过程。干扰素还可诱导自身抗体产生，加重原有的自身免疫病，个别病例会出现精神压抑或激动、甲状腺功能亢进或低下等不良反应。故，有上述病史者不宜采用干扰素治疗。

虽然干扰素为目前治疗慢性丙型肝炎的有效药物，但其疗程(3～6个月)结束时近期完全应答(血清HCV rNA阴转及ALT复常)率为40％～50％，停药半年～1年的持久完全应答率为20％～25％，疗效并不理想。加大剂量只能有限提高疗效，而延长疗程则能更多地提高疗效，减少复发。临床上的标准疗法是将干扰素与病毒唑联合使用治疗慢性丙肝，能提高有效率达47％，并可用于治疗顽固性和单药治疗后复发的患者。这种二联法使40％的慢性丙型肝炎患者达到持续性病毒清除的效果。

可见，干扰素治疗丙肝的效果远没有达到令人满意的程度，并且具有明显的副作用、疗程较长、生产成本高等缺点。因此，寻找高效低毒、具有新结构类型和新作用机制的抗HCV药物成为当今治疗病毒性肝炎的重要研究课题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗病毒(HCV和HIV)新型药物，具体涉及二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚类(英文名：di(7-hydroxy-2，3-dihydro-1H-inden-1-yl)ether)及其类似物。

本发明的另一目的是提供上述化合物的合成方法。

本发明的进一步目的是提供上述化合物的抗病毒用途。

本发明提供的二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚类及其类似物具有式I及II的结构，式I为二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚类衍生物，式II为二(8-羟基-1，2，3，4-四氢-1-萘基)醚(英文名：di(8-hydroxy-1，2，3，4-tetrahydronaphthalen-1-yl)ether)类衍生物，式II为式I的类似物。

其中：R¹是氢、烃基、卤素、杂原子取代烃基、烷氧基、酰基、酯基或酰胺基；

R²是氢、烃基或酰基；

X是氧、硫等杂原子或碳原子。

本发明的优选化合物是具有下述结构的化合物：

所述化合物1的化学名为：二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚(英文名：di(7-hydroxy-2，3-dihydro-1H-inden-1-yl)ether)或3-(2，3-二氢-4-羟基-1H-3-茚氧基)-2，3-二氢-1H-4-茚醇(英文名：3-(2，3-dihydro-4-hydroxy-1H-inden-3-yloxy)-2，3-dihydro-1H-inden-4-ol)；化合物2的化学名为：二(4-氯-7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚(英文名：di(4-chloro-7-hydroxy-2，3-dihydro-1H-inden-1-yl)ether)或3-(7-氯-2，3-二氢-4-羟基-1H-3-茚氧基)-7-氯-2，3-二氢-1H-4-茚醇(英文名：3-(7-chloro-2，3-dihydro-4-hydroxy-1H-inden-3-yloxy)-7-chloro-2，3-dihydro-1H-inden-4-ol)。

本发明提供了上述二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚类化合物(I)的合成方法，采用反应流程1表示。

流程1：

所述的二(8-羟基-1，2，3，4-四氢-1-萘基)醚类似物(II)的合成方法采用反应流程2表示。

流程2：

本发明对上述化合物进行了抗HCV活性测定，其抑制病毒半数有效浓度EC50值和细胞毒性CC50值表明，所述化合物具有显著的抗HCV活性。其中优选化合物1的EC50＝1.6μM，CC50(TOX-MT4)＞32μM，CC50(TOX-HUH7)＞32μM，治疗指数SI-MT4和SI-Huh7均大于20(阳性对照物Replicon reference的EC50＝0.66μM，CC50(TOX-MT4)＞32μM，CC50(TOX-HUH7)＞32μM，SI-MT4和SI-Huh7均大于48.5)，说明了所述的化合物是一类全新结构类型的HCV抑制剂，可作为一类原创性的抗HCV创新药物的先导化合物进行深入研究和开发，具有显著的科学意义及应用前景。

本发明对上述化合物进行了抗HIV活性测定，活性化合物的细胞毒性IC₅₀数据和抑制病毒EC₅₀数据结果表明，所述化合物具有较好的抗HIV活性。

具体实施方式

通过下述各实施例将有助于进一步理解本发明，但并不限制本发明的内容。

本发明的制备方法可以进一步用代表性的化合物制备过程体现如下：

实施例1：从苯酚出发合成自身醚化产物1(Scheme 1).

Scheme 1.Synthesis of 1：(i)acryloyl chloride，Et₃N，CH₂Cl₂，rt，2h；(ii)AlCl₃，150-160℃，6h，15％(total yield of step i and ii)；(iii)NaBH₄/CH₃OH，75％；(iv)CH₂Cl₂，rt，one week，35％.

本发明实施例2-5详细描述了Scheme 1中各化合物的制备方法。

实施例2：苯酚丙烯酸酯(3)的合成

苯酚(1g，10.6mmol)溶于5mL无水CH₂Cl₂中，冰水浴冷却至0℃，注射加入三乙胺(1.72mL，11.7mmol)后，缓缓滴加丙烯酰氯(0.95mL，11.7mmol)的2mL无水CH₂Cl₂溶液，滴入时有大量白烟产生，滴完后用3ml的无水CH₂Cl₂冲洗滴定管。室温反应2h，TLC显示原料基本消失，加入饱和食盐水10mL，搅拌半小时后，CH₂Cl₂萃取四次，有机相用无水MgSO₄干燥。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，得黄色粘稠油状物(3)，抽干待用。

实施例3：7-羟基-2，3-二氢茚-1-酮(4)的合成

在气球保护的密闭系统中加入化合物3和11g无水AlCl₃，油浴加热至150-160℃，反应物剧烈冒烟。反应6h后冷却至室温，在冰水浴冷却下，缓慢滴加2M盐酸淬灭反应，此过程放热剧烈，直至固形物基本溶解，呈黑色溶液。乙酸乙酯萃取四遍，直至萃取液TLC显示无产物点为止。合并有机相，无水MgSO₄干燥。TLC显示原料(R_f＝0.83，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝10∶1)已全部消失，有两个新点(R_f＝0.41和R_f＝0.22)生成。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物进行硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝1∶1，收集对应于R_f＝0.41新点的洗脱液，得到0.24g黄色固体(4)，上述两步的总收率为15％：mp 111-112℃.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ2.69-2.73(m，2H，3-H)，3.09-3.13(m，2H，2-H)，6.75(d，J＝8.1Hz，1H，6-H)，6.94(d，J＝8.1Hz，1H，4-H)，7.47(t，J＝6.0Hz，1H，5-H)，9.07(s，1H，OH).

实施例4：1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚(5)的合成

在烧瓶中加入化合物4(240mg，1.62mmol)和6mL甲醇，室温搅拌下分批加入NaBH₄(130mg，3.36mmol)，有大量气泡产生，3小时后TLC显示原料(R_f＝0.68，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝10∶1)仍未消失，有一个新点(R_f＝0.10)生成，该新点在紫外灯下几乎看不出，但浸磷钼酸后能烤出蓝黑色。补加130mg NaBH₄与4mL甲醇。反应九个小时后TLC显示原料基本消失。蒸除甲醇，加入少量水后，用乙酸乙酯萃取六次，合并有机相，无水MgSO₄干燥。过滤干燥剂，减压抽干溶剂后得到180mg浅黄色固体(5)，收率75％：mp 76-78℃.¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ1.78-1.87(m，1H，2-H)，2.08-2.20(m，1H，2-H)，2.59-2.68(m，1H，3-H)，2.92-3.03(m，1H，3-H)，4.72-4.75(m，1H，1-OH)，5.12-5.17(m，1H，1-H)，6.56(d，J＝8.1Hz，1H，6-H)，6.65(d，J＝7.2Hz，1H，4-H)，7.01(t，J＝7.5Hz，1H，5-H)，9.11(s，1H，7-OH).¹³C NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ154.19，145.68，129.18，115.15，112.99，71.73，71.61，35.07，29.99.MS(EI)m/z(％)：150(M⁺，17.14)，133(16.99)，132(100.00)，131(40.09)，104(52.95)，103(27.38)，78(15.92)，77(20.29).HRMS(MALDI-DHB)calcd mass for C₉H₁₀O₂[M⁺+Na]173.0573，found 173.0569.

实施例5：自身醚化产物二(7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚(1)的合成

化合物5(160mg，1.07mmol)溶于少量CH₂Cl₂后，室温搅拌放置一周后，反应近乎达到平衡，快速硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝10∶1，得到白色细针状晶体1(52mg)，收率35％：mp 144-148℃.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ2.13-2.19(m，2H，2-H，2’-H)，2.54-2.67(m，2H，2-H，2’-H)，2.80-2.88(m，2H，3-H，3’-H)，3.02-3.09(m，2H，3-H，3’-H)，5.44-5.50(m，2H，1-H，1’-H)，6.67-6.69(m，2H，6-H，6’-H)，6.78-6.82(m，2H，4-H，4’-H)，7.07-7.18(m，2H，5-H，5’-H)，7.98(s，2H，7-OH，7’-OH).¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ153.69，153.17，144.92，144.27，130.42，130.12，128.28，126.72，116.93，116.80，113.68，113.35，84.14，80.51，34.06，33.14，30.40，30.04.MS(EI)m/z(％)：282(M⁺，1.18)，280(40.55)，252(67.80)，192(24.24)，167(12.58)，166(100.00)，151(82.93)，133(65.83)，132(86.29)，131(53.81)，107(15.38)，105(23.70)，104(28.94)，103(35.65)，91(20.62)，78(26.70)，77(34.79)，65(16.36)，57(12.10)，55(13.37)，51(24.87)，44(14.05)，41(13.94).MS(MALDI-TOF)：[M⁺-H]，281.1；[M⁺]，282.0.HRMS(MALDI-DHB)calcd mass forC₁₈H₁₈O₃[M⁺+Na]305.1148，found 305.1152.

实施例6：从4-氯苯酚出发合成自身醚化产物2(Scheme 2).

Scheme 2.Synthesis of 2：(i)acryloyl chloride，Et₃N，CH₂Cl₂，rt，2h；(ii)AlCl₃，150-160℃，4h，66％(total yield of step i and ii)；(iii)LiAlH₄/THF，56％；(iv)CH₂Cl₂，rt，one week，31％.

本发明实施例7-10详细描述了Scheme 2中各化合物的制备方法。

实施例7：4-氯苯酚丙烯酸酯(6)的合成

对氯苯酚(10mL，0.10mol)溶于50mL无水CH₂Cl₂中，冰水浴冷却至0℃，Ar气保护下，注射加入三乙胺(24mL，0.17mol)后，缓缓滴加丙烯酰氯(9mL，0.11mol)的20mL无水CH₂Cl₂溶液，加完后室温反应过夜。加入饱和食盐水100mL，搅拌1h后，CH₂Cl₂萃取三次，有机相用无水MgSO₄干燥。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，得16g浅黄色粘稠油状物(6)，抽干待用。

实施例8：4-氯-7-羟基-2，3-二氢茚-1-酮(7)的合成

上步粗产品6减压抽干，在Ar气保护下，加入100g无水AlCl₃，油浴加热至150-160℃，反应4h。冷却至室温后，在冰水浴冷却下，缓慢加入2M HCl溶液淬灭反应，直至固形物基本溶解。CH₂Cl₂萃取三次，有机相用无水MgSO₄干燥。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物进行硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(己烷)∶V(CH₂Cl₂)＝3∶1～1∶1，收集对应于新点的洗脱液，蒸除溶剂得到粗产品。甲苯重结晶，得12g浅黄色固体(7)，上述两步总收率为66％：mp 123-125℃.¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ2.74-2.78(m，2H，3-H)，3.08-3.12(m，2H，2-H)，6.76(d，J＝9.0Hz，1H，6-H)，7.43(d，J＝9.0Hz，1H，5-H)，8.97(s，1H，7-OH).

实施例9：4-氯-1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚(8)的合成

在无水无氧处理过的Schlenk试管中加入LiAlH₄(190mg，mmol)和15mL无水处理的THF，在室温搅拌下缓慢滴加化合物7(913mg，5mmol)的THF(10mL)溶液，反应放出氢气。TLC跟踪显示，原料全部消失，只有一个产物点(R_f＝0.15，展开剂：己烷/乙酸乙酯＝5∶1)。缓慢加水淬灭反应直至不冒气泡为止，加入1MHCl溶液使呈弱酸性，乙酸乙酯萃取三遍，有机相用无水Na₂SO₄干燥。过滤干燥剂，减压除去溶剂得到淡黄色粘稠固体，用己烷/乙酸乙酯重结晶，析出520mg乳白色固体(8)，收率56％：mp 83-85℃.¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ1.91-1.96(m，1H，2-H)，2.34(s，1H，1-OH)，2.59-2.67(m，1H，2-H)，2.71-2.79(m，1H，3-H)，2.98-3.03(m，1H，3-H)，5.52(t，J＝6.9Hz，1H，1-H)，6.65(d，J＝8.7Hz，1H，6-H)，6.62(s，1H，7-OH)，7.11(d，J＝8.7Hz，1H，5-H).¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ152.34，141.62，130.17，129.80，121.73，115.39，76.67，35.50，29.24.MS(EI)m/z(％)：184(M⁺，38.31)，166(100.00)，138(26.53)，131(100.00)，103(100.00).HRMS calcdmass for C₉H₉ClO₂184.0291，found 184.0279.

实施例10：自身醚化产物二(4-氯-7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚(2)的合成

自身醚化产物2可以由化合物8制备，与自身醚化产物1的制备方法相似；也可由化合物7同时制备化合物8和2，方法如下：

在50mL烧瓶中加入化合物7(0.92g，5mmol)和5mL甲醇，反应物不能完全溶解，室温搅拌下分批加入NaBH₄(190mg，5mmol)，反应剧烈放热，TLC跟踪原料仍不消失。补加NaBH₄直至原料基本消失。加入饱和NaHCO₃水溶液淬灭反应。乙醚萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥。过滤干燥剂，减压除去溶剂，得到黄色油状液体。TLC显示，有一个主点(R_f＝0.15，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)、一个次要新点(R_f＝0.55)和少量未反应完的原料点(R_f＝0.70)。经过放置一周后，次要新点增大很多。硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝5∶1～2∶1，收集对应于R_f＝0.55的洗脱液，蒸除溶剂得到白色细针状晶体(2)，收率31％：mp 185-187℃.¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ2.02-2.10(m，2H，2-H，2’-H)，2.25-2.32(m，2H，2-H，2’-H)，2.66-2.76(m，2H，3-H，3’-H)，2.86-2.94(m，2H，3-H，3’-H)，5.27-5.30(m，2H，1-H，1’-H)，6.63(d，J＝8.4Hz，2H，6-H，6’-H)，7.10(d，J＝8.4Hz，2H，5-H，5’-H)，9.40(s，2H，7-OH，7’-OH).¹³C NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ153.20，143.05，130.67，129.17，119.25，115.21，80.76，32.16，29.72.MS(EI)m/z(％)：350(M⁺，1.31)，332(70.78)，184(13.32)，166(100.00)，131(100.00)，103(85.58).Anal.calcd for C₁₈H₁₆C_l2O₃：C61.55，H 4.59，Cl 20.19；found C 60.95，H 4.57，Cl 20.40.收集对应于R_f＝0.15的洗脱液，蒸除溶剂得到浅黄色粘稠油状液体，用己烷/乙酸乙酯重结晶，析出0.38g乳白色固体(8)，收率41％。

关于上述自身醚化产物1和2形成的可能机理，以化合物2为例，示于Scheme3。化合物8的苄位醇羟基不仅受到芳环的活化作用，而且邻位还有呈弱酸性的酚羟基，通过分子内六元环氢键作用，对此醇羟基的离去起到自催化作用，较易形成碳正离子中间体b；由于酚羟基的酸性，化合物8与其负离子a之间存在平衡，苄位氧原子的亲核性较强，从而优先与碳正离子中间体b结合成自身醚化产物2。可见，1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚类化合物是通过自催化机理发生醚化反应的，而且在溶液中醚化产物与1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚类化合物之间存在平衡，即醚化反应是可逆的。因此，不论是制备1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚类化合物、还是其自身醚化产物，在反应结束后，宜尽快处理反应，获得产物纯品后要蒸干溶剂，避免长时间在溶液中放置和加热。

Scheme 3  1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚类化合物自身醚化反应的可能机理.

实施例11：从4-甲基苯酚出发合成自身醚化产物9和10(Scheme 4).

Scheme 4.Synthesis of 9and 10：(i)acryloyl chloride，Et₃N，CH₂Cl₂，rt，2h；(ii)AlCi₃，160-170℃，4h，64％(total yield of step i and ii)；(iii)NaBH₄/CH₃OH，97％；(iv)CH₂Cl₂，rt，one week.

本发明实施例12-15详细描述了Scheme 4中各化合物的制备方法。

实施例12：4-甲基苯酚丙烯酸酯(11)的合成

对甲基苯酚(10.80g，99.9mmol)溶于15mL无水CH₂Cl₂中，冰水浴冷却至0℃，加入无水三乙胺(24mL，170.1mmol)后，缓缓滴加丙烯酰氯(9mL，10.02g，110.7mmol)的5mL CH₂Cl₂溶液，滴加时反应瓶冒烟，有黄色固体生成，室温反应过夜。TLC显示原料(R_f＝0.10，展开剂：石油醚/CH₂Cl₂＝3∶1)已全部消失，有一新点(R_f＝0.35)生成。加入饱和食盐水20mL，搅拌1小时后，CH₂Cl₂萃取五次，无水MgSO₄干燥。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，得黄色粘稠油状物11，抽干待用。

实施例13：4-甲基-7-羟基-2，3-二氢茚-1-酮(12)的合成

上步粗产品11减压抽干，在Ar气保护下，加入105g无水AlCl₃，油浴加热至160-170℃，反应物剧烈冒烟，呈粘稠的棕红色液体。反应4h后，冷却至室温，在冰水浴冷却下，缓慢滴加2M盐酸淬灭反应，此过程放热剧烈，直至固形物基本溶解，呈黑色溶液。CH₂Cl₂萃取多遍，直至有机相TLC显示基本无产物点为止。合并有机相，无水MgSO₄干燥。TLC显示原料(R_f＝0.22，展开剂：石油醚/CH₂Cl₂＝1∶1)已全部消失，有两个新点(R_f＝0.35和R_f＝0.12)生成。过滤干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物进行硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶1，收集对应于R_f＝0.35新点的洗脱液，得到10.34g黄色固体(12)，在石油醚/CH₂Cl₂中重结晶得到黄色针状晶体，上述两步总收率为64％：mp 106-107℃.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ2.23(s，3H，4-CH₃)，2.68-2.72(m，2H，3-H)，2.96-2.99(m，2H，2-H)，6.68(d，J＝8.1Hz，1H，6-H)，7.26(d，J＝8.4Hz，1H，5-H)，8.92(s，1H，7-OH).¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ210.33，155.40，153.36，138.05，126.12，122.22，113.33，35.84，24.88，16.70.

实施例14：4-甲基-1，7-二羟基-2，3-二氢-1H-茚(13)的合成

在50mL烧瓶中加入化合物12(324mg，2.0mmol)和5mL甲醇，室温搅拌下分批加入NaBH₄(100mg，2.6mmol)，反应剧烈放热，有气体产生，反应液呈黄色混浊液，TLC显示原料(R_f＝0.66，展开剂：石油醚/CH₂Cl₂＝1∶3)仍未消失，有一新点(R_f＝0.10)生成，该新点在紫外灯下几乎看不出，但浸磷钼酸后能烤出蓝黑色。补加等量NaBH₄，反应液放热，有气体产生，并且逐渐由混浊变为澄清液。搅拌半小时后TLC显示原料基本消失。为了防止自身醚化反应的发生，不用酸或碱淬灭，直接拌粗硅胶蒸干溶剂，快速柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶2，CH₂Cl₂，收集对应于R_f＝0.10的洗脱液，蒸除溶剂得到320mg无色粘稠固体(13)，收率97％：mp 89-91℃.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.84-1.94(m，1H，2-H)，2.16(s，3H，4-CH₃)，2.50-2.70(m，3H，2-H，3-H，1-OH)，2.85-2.90(m，1H，3-H)，5.46(t，J＝6.9Hz，1H，1-H)，6.60(d，J＝8.1Hz，2H，6-H，7-OH)，6.94(d，J＝7.8Hz，1H，5-H).¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ151.56，142.70，130.62，128.54，125.70，113.51，76.27，35.59，28.75，17.73.MS(EI)m/z(％)：164(M⁺，21.86)，146(100.00)，131(40.87)，117(50.69)，115(16.53)，103(13.82)，91(15.03)，77(10.04).HRMS(MALDI-DHB)calcd mass for C₁₀H₁₂O₂[M⁺+Na]187.0730，found 187.0742.

实施例15：自身醚化产物二(4-甲基-7-羟基-2，3-二氢-1-1H-茚基)醚(9)和二(4-甲基-1-羟基-2，3-二氢-7-1H-茚基)醚(10)的合成

化合物13的自身醚化反应比化合物5和8的醚化反应复杂。将化合物13(R_f＝0.30，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)溶于CH₂Cl₂中，在室温下放置数小时后，TLC显示出现一个新点(R_f＝0.65)，在紫外灯下不明显，但浸磷钼酸后能烤出蓝黑色，并且放置时间越长新点越显著，但原料始终没有消失。放置一周后，似乎达到平衡。快速硅胶柱层析分离，洗脱剂：V(石油醚)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶1，CH₂Cl₂，得到对应于新点的白色细针状晶体(9)：mp 144-146℃.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ2.08-2.18(m，2H，2-H，2’-H)，2.20(s，6H，4-CH₃，4’CH₃)，2.69-2.80(m，4H，2-H，2’-H，3-H，3’-H)，2.97-3.05(m，2H，3-H，3’-H)，5.51(t，J＝6.9Hz，2H，1-H，1’-H)，6.36(br，2H，7-OH，7’-OH)，6.64(d，J＝8.1Hz，2H，6-H，6’-H)，6.99(d，J＝8.1Hz，2H，5-H，5’-H).¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ151.78，142.20，130.87，126.15，125.64，113.83，81.19，32.59，28.77，17.77.MS(EI)m/z(％)：292([M⁺-H₂O]，29.51)，147(100.00)，131(15.66)，117(13.13)..HRMS(MALDI-DHB)calcd massfor C₂₀H₂₂O₃[M⁺Na]333.1461，found 333.1465.得到的纯化合物9在溶液中经放置一段时间后，TLC显示又有13生成，说明两者之间存在一个平衡，在溶液中可以缓慢相互转化。所以，柱层析分离时间不可过长，否则各物质在硅胶柱中进一步反应，导致产物复杂，难以分离。正是这个原因，各醚化产物的收率难以准确确定，除了得到部分纯净的化合物9供分析鉴定外，其余均为混合物，难以分离。另外，该混合物的溶液经过进一步放置，又有新的白色固体析出，该固体在CH₂Cl₂、CHCl₃和乙酸乙酯中的溶解度更加不好，以这些溶剂与石油醚配伍作为展开剂其TLC均拖尾严重(而化合物9不拖尾)，该白色固体在丙酮中溶解度稍好，以石油醚/丙酮(3∶1)作为展开剂，其R_f＝0.45与化合物9完全相同。后经¹H NMR、¹³C NMR、MS和HRMS确证其结构为对称的酚醚10，形成机理尚不清楚。化合物(10)：mp 193-195℃.¹H NMR(300MHz，Acetone-d₆)δ2.04-2.11(m，2H，2-H，2’-H)，2.12(s，6H，4-CH₃，4’CH₃)，2.53-2.73(m，4H，2-H，2’-H，3-H，3’-H)，2.86-2.96(m，4H，3-H，3’-H，1-OH，1’-OH)，5.42(t，J＝6.6Hz，2H，1-H，1’-H)，6.56(d，J＝8.4Hz，2H，6-H，6’-H)，6.89(d，J＝8.1Hz，2H，5-H，5’-H).¹³C NMR(75MHz，Acetone-d₆)δ：153.03，143.80，130.78，128.84，125.04，113.73，84.46，34.19，28.86，17.65.MS(MALDI-TOF)：[M⁺+Na]，333.2；[M⁺-H]，309.1.HRMS(MALDI-DHB)calcd mass for C₂₀H₂₂O₃[M⁺+Na]333.1461，found 333.1467.

实施例16：本发明化合物抗HCV活性测定实验

HCV细胞培养试验：

HCV细胞培养系统是以可选择次基因组的HCV-RNAs(复制子)的自主复制为基础的。简单地说，HCV基因组的结构基因被异源序列(新霉素磷酸转移酶(NPT)，脑炎心肌炎病毒和萤火素酶报告基因的内核糖体进入位点(IRES))所代替。

合成的RNA植入人类肝瘤细胞系Huh-7，用抗生素G418进行筛选。用这种方法筛选出来的细胞，其萤火素酶报告基因与复制子的状态相关。将Huh-7细胞放置在不同浓度(32μM-8μM-2μM-0.5μM-0.125μM-0.031μM-0.0078μM-0.00050μM(各重复4次))的被测样品中，3天以后加入该酶的底物，根据发光测定复制子的情况。

基于计算的抑制百分率可以画出剂量响应曲线，并计算出EC50和CC50值。毒性分别用MT4LTRLUC细胞和HUH7CMVLUC细胞进行测定。

本发明化合物进行了上述抗HCV活性测定，其抑制病毒半数有效浓度EC50值和细胞毒性CC50值表明，所述化合物具有显著的抗HCV活性，其中，优选化合物1的EC50＝1.6μM，CC50(TOX-MT4)＞32μM，CC50(TOX-HUH7)＞32μM，治疗指数SI-MT4和SI-Huh7均大于20(阳性对照物Replicon reference的EC50＝0.66μM，CC50(TOX-MT4)＞32μM，CC50(TOX-HUH7)＞32μM，SI-MT4和SI-Huh7均大于48.5)，表明本发明化合物可制备全新结构类型的HCV抑制剂。

实施例17：本发明化合物2的抗HIV活性测定试验

活性测定方法：H9淋巴细胞在37℃，5％CO₂条件下连续培养，培养基为RPMI 1640、10％的FCS(胎牛血清，Fetal Calf Serum)和L-谷氨酸。分为两部分平行实验，一部分为HIV-1感染，用于测试样品的EC₅₀值，另一部分不被感染，用于测试样品的IC₅₀值。测试样品溶于DMSO中，依次测试100、20、4和0.8μg/mL浓度与H9淋巴细胞在37℃、5％CO₂条件下孵化6天后的活性情况，在第一天和第四天更换新鲜的培养基。齐多夫定(AZT)为阳性对照。需要时，测试样品继续稀释以获得准确的EC₅₀值。数据结果表明，所述化合物具有较好的抗HIV活性，可制备全新结构类型的HIV抑制剂。

表1是本发明化合物2在抗HIV测试中的细胞毒性IC₅₀数据、抑制病毒EC₅₀数据和治疗指数TI值。

表1

   Compound   IC₅₀   μg/mL(μM)  EC₅₀   μg/mL(μM)  TI   (IC₅₀/EC₅₀)  2  15.24(43.39)  2.126(6.053)  7.2  AZT  500(1871)  0.0137(0.0513)  36520