香料植物互叶白千层的组织培养方法

摘要

本发明公开一种香料植物互叶白千层的组织培养方法，从母体上剪取腋芽作为外植体，先进行清洗、消毒；然后进行诱导培养，诱导培养基：7/10MS－MS、6－BA0.1－0.3mg/L、NAA0.1－0.3mg/L；再进行继代培养，继代培养基为：7/10 MS－MS、6－BA0.4－0.6mg/L、NAA0.05－0.15mg/L；最后进入生根培养阶段，生根培养基为：2/5MS－3/5MS、IBA0.5－0.7mg/L；以上诱导培养、继代培养、生根培养的条件均为：光照强度为2500－3000Lux，温度为26±1℃。此方法能实现工业化规模化快速繁育，30天增殖倍率达4.6倍，生根率接近100％，移栽成活率96％以上，为大面积推广种植互叶白千层解决了苗木需求问题。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体指香料植物互叶白千层的组织培养方法。

背景技术

互叶白千层(Melaleuca altennifolia)是桃金娘科白千层属植物，原产于澳大利亚，是一种常绿小乔木，适于在我国华南地区推广种植。其新鲜枝叶提取的茶树油，具有消毒剂性质，能有效地抑制许多普遍存在的致病细胞和霉菌，广泛应用于医药、食品、防腐、化妆、护眼及保健品等行业。但是由于种源缺乏、扦插难生根、繁育周期长以及遗传变异等诸多因素，用常规繁殖方法难以在短期内满足日益增长的市场需求。

植物组织培养(Tissue culture)是指利用植物细胞的全能性，从植物体内取出器官(部分)、组织和细胞，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定培养条件下，使之生存、生长，维持其正常结构和功能的方法。

本发明人经研究发现，若采用组织培养方法，既可以保持母体的优良性状，有效节约生产成本，又可以缓解目前互叶白千层苗木的供需矛盾。本案油然而生。

发明内容

本发明旨在提供一种香料植物互叶白千层的组织培养方法，从而实现商业化快速繁育。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案是：

香料植物互叶白千层的组织培养方法，从具有优良性状的互叶白千层母体上剪取腋芽作为外植体，先对外植体进行清洗、消毒，然后接入诱导培养基进行诱导培养，诱导培养基配比为：7/10MS-MS(Marashige & Sroog)常规基本培养基、6-BA(6-卞基嘌呤)0.1-0.3mg/L、NAA(萘乙酸)0.1-0.3mg/L；再接入继代培养基进行继代培养，继代培养基配比为：7/10MS-MS、6-BA0.4-0.6mg/L、NAA0.05-0.15mg/L；最后，进入生根培养阶段，生根培养基配比为：2/5MS-3/5MS、IBA(吲哚丁酸)0.5-0.7mg/L；以上诱导培养、继代培养、生根培养的条件均为：光照强度为2500-3000Lux，温度为26±1℃。

上述外植体进行清洗、消毒的具体步骤是：先用洗衣粉浸泡10分钟，置于清水下冲洗30分钟；用75％的酒精浸泡20秒，无菌水冲洗2次，再用0.1％HgCl₂消毒7分钟，无菌水冲洗5次。

上述外植体进行清洗、消毒后，吸干水分切为1±0.1cm的茎段，然后接入诱导培养基进行诱导培养。

采用上述方法后，本发明的组织培养方法解决了互叶白千层种子繁殖出圃周期长、成活率低、生产成本高等问题，实现商业化规模化快速繁育，30天增殖倍率达4.6倍，生根率接近100％，移栽成活率在96％以上，为大面积推广种植互叶白千层解决了苗木需求的根本问题。

具体实施方式

运用本发明进行香料植物互叶白千层的组织培养的具体实施例。

A、外植体处理及诱导培养

从具有优良性状的互叶白千层母体上剪取腋芽作为外植体，先对外植体进行清洗、消毒，具体步骤是用洗衣粉浸泡10分钟，置于清水下冲洗30分钟；用75％的酒精浸泡20秒，无菌水冲洗2次，再用0.1％HgCl₂消毒7分钟，无菌水冲洗5次，吸干水分切为1cm左右的茎段，然后在超净工作台上接种到诱导培养基上进行诱导分化培养，培养条件：光照强度为：2500-3000Lux，温度为26±1℃。诱导培养基配比是：7/10MS-MS、6-BA0.1-0.3mg/L、NAA0.1-0.3mg/L。

B、继代培养

在诱导培养大约30天左右，待腋芽高3-4cm时，即可进入继代培养，培养条件与诱导培养相同，增殖培养基配比是：7/10MS-MS、6-BA0.4-0.6mg/L、NAA0.05-0.15mg/L，增殖倍率达4.6倍。

C、生根培养

在继代培养25天左右，苗高在1.0CM以上时，就可以进行生根培养，培养条件与以上培养相同，生根培养基配比是：2/5MS-3/5MS、IBA(吲哚丁酸)0.5-0.7mg/L，生根培养大约20天左右，生根率接近100％，根长约1.5CM，苗高3-4CM，就可以出瓶移栽，移栽成活率在96％以上，完全适合于工业化生产的要求。