(+)－2－1－(3－乙氧基－4－甲氧基苯基)－2－甲磺酰基乙基－4－乙酰氨基异吲哚啉－1,3－二酮、其合成方法及其组合物

摘要

本发明涉及立体异构体纯的(+)－2－[1－(3－乙氧基－4－甲氧基苯基)－2－甲磺酰基乙基]－4－乙酰氨基异吲哚啉－1，3－二酮(基本上不含其(－)异构体)及其前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物和笼形包合物。本发明也涉及2－[1－(3－乙氧基－4－甲氧基苯基)－2－甲磺酰基乙基]－4－乙酰氨基异吲哚啉－1，3－二酮的(+)对映异构体的使用方法和包含该化合物的药用组合物。所述方法包括治疗和/或预防可通过降低TNF－α水平或抑制PDE4而改善的病症的方法。

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日：2003年3月20日；申请号：03811093.8(PCT/US03/08738)；发明名称：“(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮：使用方法及其组合物”。

1.发明领域

本发明涉及2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体的使用方法和包含该化合物的组合物。

2.发明背景

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核噬菌细胞应答免疫刺激物时释放的细胞因子。TNF-α能够促进例如分化、募集、增殖和蛋白质降解等大多数细胞过程。在低水平下，TNF-α具有防止传染物、肿瘤和组织损伤的保护作用。但TNF-α还在许多疾病中起作用。当给予哺乳动物或人TNF-α时，TNF-α会引起或加重炎症、发烧、心血管作用、出血、凝固以及与急性感染和休克期出现的那些反应相类似的急性期反应。在许多疾病和病症都涉及到提高的或无调节的TNF-α生成，例如癌，如实体瘤和血液性肿瘤；心脏病，如充血性心力衰竭；以及病毒感染、遗传疾病、炎性疾病、变应性疾病和自身免疫疾病。

环腺苷酸(cAMP)也在许多疾病和病症中起作用，例如但不限于哮喘、炎症以及其它病症(Lowe和Cheng，Drugs of the Future，17(9)期：799-807页，1992年)。已表明，炎性白细胞中cAMP水平的提高抑制了它们的活化以及随后包括TNF-α和NF-κB的炎症介质的释放。cAMP水平提高也会导致呼吸道平滑肌的松弛。

认为cAMP失活的主要细胞机制是由于被称为环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的一族同功酶破坏了cAMP(Beavo和Reitsnyder，Trends inPharm.，11期：150-155页，1990年)。已知有11个PDE家族成员。现已证实，例如抑制PDE IV型对抑制炎症介质的释放和呼吸道平滑肌松弛都特别有效(Verghese等，Journal of Pharmacology andExperimental Therapeutics，272(3)期：1313-1320页，1995年)。因此，特异性抑制PDE4(PDE IV)的化合物，可抑制炎症，促进呼吸道平滑肌松弛，而且具有很少的不需要的例如心血管或抗血小板作用等副作用。在可接受的治疗剂量下，目前使用的PDE4抑制剂缺乏选择性。

癌是一种特别具有破坏性的疾病，并且血液中TNF-α水平的提高，预示存在患有癌症以及癌症扩散的危险。通常，癌细胞不能在健康主体的循环系统中存活，其中一个原因在于血管内壁充当了瘤细胞外渗的屏障。但是体外实验已表明，细胞因子水平提高可充分地促进癌细胞粘附在内皮上。一种解释是，例如TNF-α等细胞因子刺激被称为ELAM-1的细胞表面受体(内皮细胞-白细胞粘着分子)的生物合成和表达。ELAM-1是被称为LEC-CAMs(包括LECAM-1和GMP-140)的钙-依赖性细胞粘着受体家族中的一员。在炎症反应过程中，内皮细胞上的ELAM-1起白细胞“归巢受体”的作用。近来研究表明，内皮细胞上的ELAM-1能介导促进结肠癌细胞粘附在用细胞因子处理的内皮上(Rice.等，1989年，Science，246期：1303-1306页)。

例如关节炎、相关的关节炎病症(例如骨关节炎和类风湿性关节炎)、肠炎(例如节段性回肠炎和溃疡性结肠炎)、脓毒病、银屑病、特异性皮炎、接触性皮炎和慢性阻塞性肺病、慢性肺炎等炎性疾病也是普遍的疑难疾病。在炎症反应中，TNF-α起关键作用，将它们的拮抗剂给予炎性疾病动物模型，可阻断慢性和急性反应。

病毒感染、遗传性疾病、炎性疾病、变应性疾病以及自身免疫疾病都涉及到提高或无调节的TNF-α生成。这些疾病实例包括但不限于：HIV(人体免疫缺陷病毒)；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收病；慢性阻塞性肺病；慢性肺炎；哮喘，皮炎；囊样纤维化；败血症性休克；脓毒病；内毒素性休克；血液动力性休克；脓毒病综合征；局部缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维变性疾病；恶病质；移植排斥；自身免疫疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性回肠炎；溃疡性结肠炎；肠炎；多发性硬化；系统性红斑狼疮；麻风病的ENL；辐射损伤；哮喘；含氧量高的肺泡损伤。Tracey等，1987年，Nature，330期：662-664页和Hinshaw等，1990年，Circ.Shock，30期：279-292页(内毒素性休克)；Dezube等，1990年，Lancet，335期：662页(恶病质)；Millar等，1989年，Lancet，2期：712-714页和Ferrai-Baliviera等，1989年，Arch.Surg.，124期：1400-1405页(成人呼吸窘迫综合征)；Bertolini等，1986年，Nature，319期：516-518页，Johnson等，1989年，Endocrinology 124期：1424-1427页，Holler等，1990年，Blood，75期：1011-1016页，和Grau等，1989年，N.Engl.J.Med.，320期：1586-1591页(骨吸收病)；Pignet等，1990年，Nature，344期：245-247页，Bissonnette等，1989年，Inflammation，13期：329-339页和Baughman等，1990年，J.Lab.Clin.Med.，115期：36-42页(慢性肺炎)；Elliot等，1995年，Int.J.Pharmac.，17期：141-145页(类风湿性关节炎)；von Dullemen等，1995年，Gastroenterology，109期：129-135页(节段性回肠炎)；Duh等，1989年，Proc.Nat.Acad.Sci.，86期：5974-5978页，Poll等，1990年，Proc.Nat.Acad. Sci.，87期：782-785页，Monto等，1990年，Blood，79期：2670页，Clouse等，1989年，J.Immunol.，142期：431-438页，Poll等，1992年，AIDS Res.Hum.Retrovirus，191-197页，Poli等，1990年，Proc.Natl.Acad.Sci.，87期：782-784页，Folks等，1989年，PNAS，86期：2365-2368页(HIV和HIV引起的机会感染)。

可阻断包括TNF-α的某些细胞因子的活性或抑制其生成的药物，将是有用的治疗剂。已经证明，许多小分子抑制剂能够治疗或预防涉及TNF-α的炎性疾病(参见Lowe的综述，1998年，Exp.Opin.Ther.Patents，8期：1309-1332页)。这一类分子是美国专利6,020,358号描述的取代的苯乙基砜类化合物。

3.发明概述

本发明涉及使用取代的苯乙基砜化合物的对映异构体及其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、笼形包合物、前药和多晶型物治疗疾病和病症的方法，以及降低哺乳动物的细胞因子及其前体水平的方法。本发明也涉及包含2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的一种对映异构体和药学可接受的载体的药用组合物。本发明还涉及基本上不含其它对映异构体的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的一种对映异构体。

本发明特别涉及2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体。与其消旋体--2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮相比，认为该化合物具有提高的效能和其它优点。

本发明包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体在治疗或预防哺乳动物的可通过抑制TNF-α的生成而改善的疾病或病症中的用途。在某个实施方案中，所述治疗包括降低或消除副作用。这些病症包括但不限于癌，包括但不限于头部癌、甲状腺癌、颈癌、眼癌、皮肤癌、口腔癌、咽喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、血癌、骨髓癌、肺癌、结肠癌、乙状结肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肠癌、心脏癌、肾上腺癌、皮下组织癌、淋巴结癌、心脏癌，及其组合。可用所述方法治疗的具体癌有多发性骨髓瘤、恶性黑素瘤、恶性神经胶质瘤、白血病和实体瘤。

本发明也包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体治疗或预防以下心脏病的用途，所述心脏病包括但不限于充血性心力衰竭、心肌病、肺水肿、内毒素介导的脓毒性休克、急性病毒性心肌炎、心脏移值排斥和心肌梗塞。

本发明也包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体在治疗可通过抑制PDE4而改善的疾病或病症中的用途。例如，本发明的化合物和组合物可用于治疗或预防病毒感染、遗传疾病、炎性疾病、变应性疾病和自身免疫疾病。这些疾病实例包括但不限于：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收病；慢性阻塞性肺病；慢性肺炎；皮炎；炎性皮肤病，特异性皮炎，囊性纤维变性；败血症性休克；脓毒症；内毒素性休克；血液动力性休克；脓毒病综合征；局部缺血后的再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维变性疾病；恶病质；包括移植物抗宿主疾病的移值排斥；自身免疫病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性回肠炎；溃疡性结肠炎；肠炎；多发性硬化病；系统性红斑狼疮；麻风病中的麻风性结节性红斑(ENL)；辐射损伤；哮喘和含氧量高的肺泡损伤。

在另一个实施方案中，2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的立体异构体纯(+)对映异构体也可用于治疗或预防微生物感染或微生物感染综合征(包括但不限于细菌感染、真菌感染、疟疾、分支杆菌感染和HIV引起的机会感染)。

本发明还包括包含2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的一种对映异构体及其药学可接受的多晶型物、前药、盐、水合物、笼形包合物和溶剂合物的药用组合物和单位剂型。

在一单独的实施方案中，本发明包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体。

在一个进一步的实施方案中，本发明包括一种制备2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的立体异构体纯对映异构体的方法，所述方法包括以下步骤：将1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-乙胺与手性氨基酸反应，然后将第一步的反应产物与N-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异苯并呋喃-4-基)-乙酰胺反应。在一个相关的实施方案中，本发明包括1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-乙胺的手性盐。

3.1.附图简述

图1.举例说明2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映异构体的制备。

图2.举例说明本发明的对映异构体对在有知觉的白鼬的肺上LPS-诱导的中性白细胞增多症的效果。

3.2.定义

本文使用的术语“化合物A”是指当使用色谱柱为150mm×4.6mm Ultron Chiral ES-OVS手性HPLC柱(Agilent Technology)，洗脱液为15∶85的乙醇∶20mM KH₂PO₄(pH为3.5)，观测波长为240nm时，HPLC柱在约25.4分钟洗脱出的立体异构体纯的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮。化合物A的¹HNMR波谱数据基本如下：

                                                                δ(CDCl₃)：1.47(t，3H)，2.26(s，3H)，2.87(s，3H)，3.68-3.75(dd，1H)，3.85(s，3H)，4.07-4.15(q，2H)，4.51-4.61(dd，1H)，5.84-5.90(dd，1H)，6.82-8.77(m，6H)，9.46(s，1H).化合物A的¹³C NMR波谱数据基本如下：

                                  δ(DMSO-d₆)：14.66，24.92，41.61，48.53，54.46，55.91，64.51，111.44，112.40，115.10，118.20，120.28，124.94，129.22，131.02，136.09，137.60，148.62，149.74，167.46，169.14，169.48.溶于甲醇的化合物A也使平面偏振光向(+)方向偏转。

不受理论限制，认为化合物A为S-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮}，其结构如下：

本文使用的术语“患者”，是指哺乳动物，特别是指人。

本文使用的术语“药学可接受的盐”，是指由药学可接受的无毒的酸或碱(包括无机酸和碱以及有机酸和碱)制备的盐。适合的本发明的化合物的药学可接受的碱加成盐包括由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐或由以下有机碱制备的有机盐：赖氨酸、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡萄糖胺)和普鲁卡因。合适的无毒酸包括但不限于以下无机酸和有机酸：例如乙酸、藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。特别是盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸等无毒酸。因此，特别的盐的实例有盐酸盐和甲磺酸盐。

除非另外说明，否则本文使用的术语“前药”意指通过水解、氧化或生物环境(体内或体外)下的其它反应，能够提供该化合物的化合物衍生物。前药的实例包括但不限于化合物A的衍生物和代谢物，该物质包括可生物水解部分，例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。前药一般可通过例如1 Burger′sMedicinal Chemistry and Drug Discovery(Manfred E.Wolff编辑，第5版，1995年)第172-178页、949-982页中描述的那些熟知方法制备。

除非另外说明，否则本文使用的术语“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯”、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的酰脲”、“可生物水解的磷酸酯”各指某一化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲或磷酸酯，这些可生物水解部分：1)不影响所述化合物的生物活性，但可赋予化合物有利的体内特性，例如吸收、持续作用或发挥作用；或2)没有生物活性，但在体内可转化为生物活性。可生物水解的酯的实例包括但不限于，低级烷基酯、烷氧基酸酯、烷基酰氨基烷基酯和胆碱酯。可生物水解的酰胺的实例包括但不限于，低级烷基酰胺、α-氨基酸酰胺、烷氧基酰胺和烷氨基烷羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的实例包括但不限于：低级烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羟基烷基胺、杂环胺和杂芳胺以及聚醚胺。

除非另外说明，否则本文使用的术语“立体异构体纯”意指包含化合物的一种立体异构体并且基本上不含该化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构体纯的组合物基本上不含所述化合物的相反对映异构体。具有两个手性中心的化合物的立体异构体纯的组合物基本上不含所述化合物的其它非对映异构体。立体异构体纯的化合物一般包含约大于80％重量的所述化合物的一种立体异构体和约少于20％重量的所述化合物的其它立体异构体，更优选约大于90％重量的所述化合物的一种立体异构体和约少于10％重量的所述化合物的其它立体异构体，甚至更优选约大于95％重量的所述化合物的一种立体异构体和约少于5％重量的所述化合物的其它立体异构体，最优选约大于97％重量的所述化合物的一种立体异构体和约少于3％重量的所述化合物的其它立体异构体。

除非另外说明，否则本文使用的术语“对映异构体纯”意指具有一个手性中心的化合物的立体异构体纯组合物。

本文使用的术语“副作用”包括但不限于：胃肠、肾和肝毒性，白血球减少，由于例如血小板减少导致的出血时间延长，妊娠延长，恶心，呕吐，嗜睡，无力，头晕，致畸，锥体束外症状，静坐不能，包括心血管功能失调的心脏毒性，炎症，男性性功能障碍和血清肝酶水平的提高。术语“胃肠毒性”包括但不限于胃肠溃疡和糜烂。术语“肾毒性”包括但不限于例如乳头状坏死和慢性间质性肾炎的病症。

除非另外说明，否则本文使用的术语“减少或消除副反应”意指降低一种或多种本文中定义的副反应的严重性。

应该注意，如果描述的结构和给出该结构的名称之间存在偏差，描述的结构具有更大的权重。另外，如果没有用例如粗线或虚线说明结构或结构部分的立体化学特性，所述结构或结构部分被解释为包括其所有的立体异构体。

4.发明详述

本发明涉及立体异构体纯的化合物A，化合物A为2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的一种对映异构体，基本上不含其它的异构体，本发明还涉及立体异构体纯的化合物A的新使用方法和包含立体异构体纯的化合物A的组合物。例如，本发明包括化合物A在体内和体外的用途以及将化合物A加至用于治疗和预防多种疾病和病症的药用组合物和单位剂型中。通过降低TNF-α的水平或抑制PDE4而得以改善的疾病和病症，为本领域所熟知，并在本文中进行了描述。本发明的具体方法降低或消除与作为TNF-α抑制剂使用的化合物有关的副反应。本发明的其它具体方法降低或消除与外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的使用有关的副反应。

本发明的具体方法包括治疗或预防包括但不限于实体瘤癌、血液衍生的癌及炎性疾病等疾病和病症的方法。

本发明的包含化合物A或其药学可接受的多晶型物、前药、盐、笼形包合物、溶剂合物或水合物的药物和剂型可用于本发明的方法中。

不受理论限制，相信化合物A可抑制TNF-α生成。因此，本发明的第一个实施方案涉及一种抑制NF-α生成的方法，所述方法包括以下步骤：将有效量的立体异构体纯的化合物A或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物与表现出TNF-α生成反常的细胞接触。在一个特别的实施方案中，本发明涉及一种抑制TNF-α生成的方法，所述方法包括以下步骤：将有效量的立体异构体纯的化合物A或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物与表现出TNF-α生成反常的哺乳动物细胞接触。

本发明也涉及一种治疗或预防患者的可通过降低TNF-α水平而改善的病症的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物。

本发明的另一个实施方案涉及一种治疗或预防患者的癌(包括但不限于实体瘤、血液性肿瘤、白血病，特别是多发性骨髓瘤)的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物；特别是其中所述患者为哺乳动物。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种抑制PDE4的方法，所述方法包括以下步骤：将有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物与PDE4接触。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种控制细胞内cAMP水平的方法，所述方法包括以下步骤：将有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物与细胞接触。本文使用的术语“控制cAMP水平”包括防止或降低细胞内的环腺苷酸(cAMP)破坏率或提高细胞内的环腺苷酸水平，其中所述细胞优选为哺乳动物细胞，更优选人细胞。在一种特别的方法中，同没有与本发明的化合物接触的对照细胞的破坏率相比，cAMP破坏率降低约10、25、50、100、200或500％。

本发明的另一个实施方案涉及一种治疗或预防患者的可通过抑制PDE4而改善的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物。通过抑制PDE4而改善的病症包括但不限于哮喘、炎症(例如由于再灌注导致的炎症)、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或急性肺炎、肠炎、节段性回肠炎、白塞病(Bechet′s)或结肠炎。

本发明的再一个实施方案涉及一种治疗或预防患者的以下疾病或病症的方法：抑郁症、哮喘、炎症(例如接触性皮炎、特异性皮炎、银屑病、类风湿性关节炎、骨关节炎、炎性皮肤病、由于再灌注导致的炎症)、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或急性肺炎、肠炎、节段性回肠炎、白塞病或结肠炎，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物；特别是其中所述患者为哺乳动物。

本发明的一个单独的实施方案包括治疗或预防骨髓增生异常综合征(MDS)的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体、笼形包合物或前药。MDS意指不同种类的造血干细胞病症。MDS的特征在于由于无效的血细胞生成，导致形态和成熟缺陷(骨髓细胞生成障碍)的细胞骨髓、外周血液中血细胞减少和不确定的转化为急性白血病的危险。参见The Merck Manual，953页(17版，1999年)和List等，1990年，J.Clin.Oncol.，8期：1424页，MDS。

本发明的一个单独的实施方案包括治疗或预防骨髓增殖性疾病(MPD)的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体、笼形包合物或前药。骨髓增殖性疾病(MPD)是指以造血干细胞系异常为特征的一类病症。参见，例如CurrentMedical Diagnosis & Treatment，499页(37版，Tierney等编著，Appleton& Lange，1998年)。

本发明也包括一种治疗、预防或处理复合性区域性疼痛综合征的方法，所述方法包括给予需要这些治疗、预防或处理的患者治疗或预防有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、立体异构体、笼形包合物或前药。在一个具体的实施方案中，在可直接降低或消除患者的复合性区域性疼痛综合征的症状的手术或理疗前、期间或后给药。

在本发明的特别方法中，立体异构体纯的化合物A或其药学可接受的多晶型物、前药、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物与至少一种其它治疗剂联合给药。其它治疗剂实例包括但不限于抗癌药、抗炎药、抗组胺药和解充血药。

4.1.合成和制备

采用美国专利第6,020,358号描述的方法，可容易地制备外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮，该专利通过引用而结合至本文中。

通过本领域已有技术，可自其外消旋化合物中分离出化合物A。实例包括但不限于手性盐的形成、手性以及高效液相色谱“HPLC”的使用和手性盐的形成和结晶。参见，例如Jacques，J.等，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience，纽约，1981年)；Wilen，S.H.等，Tetrahedron，33期：2725页(1977年)；Eliel，E.L.，Stereochemistryof Carbon Compounds(McGraw-Hill，纽约，1962年)，和Wilen，S.H.，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions，268页(E.L.Eliel编著，Notre Dame大学出版社，Notre Dame，IN，1972年)。

在一个具体的方法中，化合物A可由3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐和(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺合成。(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺的手性氨基酸盐包括但不限于与以下氨基酸的L异构体成的盐：丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、鸟氨酸、4-氨基丁酸、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸，肌氨酸，瓜氨酸，磺基丙氨酸，叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸，苯基甘氨酸，环己基丙氨酸和N-乙酰基-亮氨酸。一种具体的手性氨基酸盐为(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺-N-乙酰基-L-亮氨酸盐，其在甲醇中分解为2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰)-乙-2-基胺和N-乙酰基-L-亮氨酸。

4.2.治疗方法

本发明包括治疗和预防患者的可通过降低TNF-α水平而改善的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物。

通过抑制TNF-α而改善的病症包括但不限于：心脏病，例如充血性心力衰竭，心肌病，肺水肿，内毒素-调节的败血症性休克，急性病毒性心肌炎，心脏移植排斥，和心肌梗塞；实体瘤，包括但不限于肉瘤，癌，纤维肉瘤，粘液肉瘤，脂肪瘤，软骨肉瘤，骨原性肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，内皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管内皮肉瘤，滑膜瘤，间皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，结肠癌，胰腺癌，乳癌，卵巢癌，前列腺癌，鳞状上皮细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳头状癌，乳头状腺癌，囊腺癌，髓样癌，支气管癌，肾细胞癌，肝细胞瘤，胆管癌，绒毛膜癌，精原细胞瘤，胚胎性癌，维尔姆斯瘤，宫颈癌，睾丸瘤，肺癌，小细胞肺癌，膀胱癌，上皮癌，神经胶质瘤，星形细胞瘤，成神经管细胞瘤，颅咽管瘤，室管膜瘤，卡波济肉瘤，松果体瘤，成血管细胞瘤，听神经瘤，少突神经胶质细胞瘤，menangioma，黑瘤，成神经细胞瘤和成视网膜细胞瘤；和血液性肿瘤，包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病“ALL”，B-细胞急性成淋巴细胞性白血病，T-细胞急性成淋巴细胞性白血病，急性髓细胞性白血病“AML”，急性早幼粒细胞性白血病“APL”，急性单核细胞性白血病，急性红白血病(erythroleukemic leukemia)，急性成巨核细胞性白血病，急性骨髓单核细胞性白血病，急性非淋巴细胞性白血病，急性未分化性白血病，慢性粒细胞性白血病“CML”，慢性淋巴细胞性白血病“CLL”，毛细胞白血病，多发性骨髓瘤以及急性和慢性白血病，例如成淋巴细胞性、骨髓性、淋巴细胞性和髓细胞性白血病。

本发明具体的方法还包括给予其它治疗剂(即除化合物A外的治疗剂)。其它治疗剂实例包括但不限于：抗癌药，例如但不限于烷基化剂、氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂和抗癌疫苗。

具体的其它治疗剂包括但不限于：阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林霉素；阿扎胞苷；阿扎替哌；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；甲磺酸双萘法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；锡铂；克拉屈滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎呱宁；甲磺酸地扎呱宁；地吖醌；多西他塞；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐伟霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨脂；依匹哌啶；盐酸表柔比星；尼布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸酯钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸依达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；白介素II(包括重组白介素II、或rIL2)，干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸依立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦生；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽酮；麦考酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽酮；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌罗霉素；盐酸嘌罗霉素；吡唑呋林；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；枸橼酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；三甲曲沙葡萄糖醛酸酯；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；乌拉莫司汀；乌瑞替哌；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗辛；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他汀；盐酸佐柔比星。其它抗癌药包括但不限于：20-表-1，25-二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；adecypenol；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；amidox；氨磷汀；氨基乙酰丙酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；antarelix；anti-dorsalizing形态发生蛋白质-1；抗雄激素药，前列腺癌药；抗雌激素药；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；脱嘌呤核酸；阿拉伯-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin3；阿扎司琼；阿扎霉素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；benzochlorins；benzoylstaurosporine；β-内酰胺衍生物；β-alethine；β-clamycin B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；二吖丙啶基精胺；双萘法德；bistratene A；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁基硫堇硫氧胺(buthioninesulfoximine)；卡泊三醇；钙磷酸蛋白C(calphostin C)；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2(canarypox IL-2)；卡培他滨；carboxamide-amino-triazole；carboxyamidotriazole；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生的抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；粟精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；chlorlns；氯代喹喔啉类磺胺药物；西卡前列素；顺式-卟啉；克拉曲滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他汀A4；combretastatin类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；克来普拓索8(cryptophycin 8)；克来普拓索A衍生物；curacin A；cyclopentanthraquinones；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷昔萘酸酯；溶细胞因子；cytostatin；达昔单抗；地西他滨；dehydrodidemnin B；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺(dexifosfamide)；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；didemnin B；didox；diethylnorspermine；二氢-5-氮杂胞嘧啶核苷；二氢紫松醇注射液，9-；dioxamycin；联苯螺莫司汀；多西他赛；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；duocarmycin SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；flavopiridol；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；钆替沙林；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；heregulin；环六亚甲基二乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑吖啶酮(imidazoacridones)；咪喹莫特；免疫刺激肽；胰岛素样生长激素-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘代阿霉素；依波米醇，4-；伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrinB；依他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；lamellarin-N triacetate；兰瑞肽；leinamycin；米格司亭；硫酸香菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线形聚胺类似物；亲脂性双糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；蚯蚓磷脂；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立宾；勒托替康；lutetium texapliyrin；lysofylline；溶菌肽；美坦新；mannostatin A；马立马司他；马索罗酚；maspin；基质裂解蛋白抑制剂；间质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；麦尔巴隆(merbarone)；美替瑞林；蛋氨酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；错配的双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-saporin；米托蒽酮；莫法罗汀；莫法司亭；单克隆抗体，人绒促性素；单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；多发性抗药基因抑制剂；基于多发性肿瘤抑制剂1的治疗剂；芥子抗癌药；印度洋海绵B；分枝杆菌细胞壁提取液；myriaporone；N-乙酰基地那林；N-取代的苯甲酰胺；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；萘达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性肽链内切酶；尼鲁米特；nisamycin；氧化氮调节剂；氧化氮抗氧剂；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；低聚核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米膦酸；人参炔三醇；帕诺米芬；parabactin；帕折普汀；培门冬酶；培得星；戊聚糖多硫酸钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；phenazinomycin；乙酸苯脂；磷酸酶抑制剂；picibanil；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基二吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白质A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂，microalgal；蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；红紫素；吡唑啉吖啶；吡啶氧化的(pyridoxylated)血红蛋白聚氧化乙烯轭合物；raf原癌基因拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras原癌基因法呢基蛋白质转移酶抑制剂；ras原癌基因抑制剂；ras原癌基因-GAP抑制剂；脱甲基瑞替普汀；铼Re186依替膦酸；根霉素；核酶；RII维胺酯(retinamide)；罗谷亚胺；rohitukine；罗莫肽；罗喹美克；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭；Sdi 1类似物；司莫司汀；衰老衍生的抑制剂1；有意义低聚核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白质；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白质；索纳明；膦门冬酸；spicamycin D；螺莫司汀；splenopentin；海绵素1(spongistatin)；角沙胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；基质裂解素抑制剂；sulfinosine；超活性的血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；八氢吲嗪三醇；合成的糖胺聚糖；他莫司汀；甲碘化他莫昔芬；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒末端转移酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；thaliblastine；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素类似物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；tin ethyl etiopurpurin；替拉扎明；二氯二茂钛；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维A酸；三乙酰基尿嘧啶核苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；tyrphostins；UBC抑制剂；乌苯美司；尿生殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；载体系统，红细胞基因治疗药；维拉雷琐；veramine；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；vitaxin；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他汀斯酯。

本发明进一步包括一种治疗或预防患者的可通过抑制PDE4而改善的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要这些治疗或预防的患者治疗有效量的立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物。通过抑制PDE4而改善的病症包括但不限于：哮喘，炎症，慢性或急性阻塞性肺病，慢性或急性阻塞性肺炎，肠炎，节段性回肠炎，白塞病，结肠炎，溃疡性结肠炎和关节炎或由于再灌注引起的炎症。在一个优选的实施方案中，待治疗或预防的疾病或病症为慢性阻塞性肺病。

本发明的具体方法可包括给予一种例如但不限于抗炎药、抗组胺药和解充血药的其它治疗剂。这些其它治疗剂的实例包括但不限于：抗组胺药，包括但不限于氨基乙醇、乙二胺、哌嗪和吩噻嗪；抗炎药；非甾体抗炎药(NSAIDS)，包括但不限于阿司匹林、水杨酸盐(酯)、乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、fenamates、托美丁、酮咯酸、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、丙嗪、吡罗昔康、美洛昔康、吡唑啉酮衍生物；和甾体化合物，包括但不限于皮质类固醇和肾上腺皮质类固醇。

本发明的具体方法消除或降低药物-药物相互作用和其它与用于治疗这些病症的治疗剂(包括外消旋的取代苯乙基砜)有关的副作用。不受任何理论的限制，相比外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮，立体异构体纯的化合物A可进一步提供全面提高的治疗有效性或治疗指数。例如在某些情况下，给予较少量的所述药物可获得相同的治疗效果。

如上所述，本发明的活性化合物(即化合物A)可用于治疗或预防宽范围的疾病和病症。但是，在对疾病或病症进行急性或长期治疗时，根据所述疾病或病症的性质和严重性，以及活性组分的给药途径，本发明的特定活性组分的治疗或预防剂量大小将发生变化。根据年龄、体重和个体患者反应的不同，剂量、或许给药次数也将变化。对这些因素进行充分的考虑后，本领域的技术人员可容易地选择合适的给药方法。对于本文描述的病症，一般推荐每日剂量范围约为1mg-1000mg，单剂量给药，每天1次，优选每日分次给药。更具体地讲，将每日剂量平均分开，分两次给药。具体地讲，每日剂量范围应约为5mg-500mg，更具体地讲，每天约为10mg-200mg。具体地讲，每日剂量可给予5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg或100mg的剂型。在治疗患者时，应从较低的剂量开始治疗，或许每天约1mg-25mg，如果需要，可增加至每天约达200mg-1000mg，根据患者的全身反应，可以单剂量给药也可分次给药。同样，每日剂量可为0.01mg/kg-100mg/kg。

在某些病例中，可能需要使用超出本文公开的剂量范围的活性组分，这对本领域普通技术人员来讲，是显而易见的。此外应注意，在结合个体患者的反应后，临床医师或主治医师将知道如何和何时中止、调节或终止治疗。

本文使用的术语“治疗有效量”、“预防有效量”和“治疗或预防有效量”包括上述剂量和给药次数安排。本领域的普通技术人员将容易得知，不同的治疗有效量可适用于不同的疾病和病症。同样，上述剂量和给药次数安排也包括足够治疗或预防这些病症，但不足以引起或足以降低与外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮有关的副反应的剂量。

4.3.药用组合物

本发明包括包含化合物A或其药学可接受的多晶型物、前药、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物的药用组合物和单位剂型。本发明的单个剂型可适用于经口服、粘膜(包括直肠、鼻或阴道)、胃肠外(包括皮下、肌肉、一次性大剂量注射、动脉或静脉)、舌下、经皮、口颊或局部给药。

本发明的药用组合物和剂型包含立体异构体纯的化合物A或其药学可接受的前药、代谢物、多晶型物、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物。本发明的药用组合物和剂型一般也包含一种或多种药学可接受的赋形剂。

该实施方案包括的一种特殊药用组合物包含立体异构体纯的化合物A，或其药学可接受的多晶型物、前药、盐、溶剂合物、水合物或笼形包合物，和至少一种其它治疗剂。其它治疗剂的实例包括但不限于上述4.2.部分列出的那些抗癌药物和抗炎药物。

本发明的单位剂型适用于经口、粘膜(例如鼻、舌下、阴道、口颊或直肠)、胃肠外(例如皮下、静脉、一次性大剂量注射、肌肉或动脉)或经皮给予患者。剂型的实例包括但不限于：片剂；胶囊形片剂；胶囊剂，例如软的弹性明胶胶囊剂；扁囊剂；锭剂(troches)；锭剂(lozenges)；分散剂；栓剂；软膏剂；糊剂(泥敷剂)；泥膏剂；散剂；敷料；乳膏剂；膏药；溶液剂；贴剂；气雾剂(例如鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶剂；适用于经口或经粘膜给予患者的液体剂型，包括混悬剂(例如水性或非水性混悬剂、水包油型乳剂或油包水型液体乳剂)，溶液剂，和酏剂；适用于经胃肠外给予患者的液体剂型；和可重新构建以提供适用于经胃肠外给予患者的液体剂型的无菌固体剂型(例如结晶或无定形固体)。

本发明的剂型的组成、形状和类型一般将根据它们的用途而变化。例如，用于炎症或相关病症的治疗时，相比长期治疗的剂型，急性治疗的剂型可包含更多的一种或多种所述活性组分。类似的，用于治疗同样的疾病或病症时，经胃肠外给药的剂型比口服剂型包含的一种或多种所述活性组分的量少。本发明包括的具体剂型的各个方面均不相同，这对本领域的技术人员来说是显而易见的。参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，18版，Mack出版，Easton PA(1990年)。

药用组合物和剂型一般包括一种或多种赋形剂。药剂学领域技术人员熟知合适的赋形剂，本文所提供的合适的赋形剂的实例并不限于此。一种特殊的赋形剂是否适合加至药用组合物或剂型中，将根据本领域熟知的多种因素，包括但不限于将所述剂型给予患者的途径等确定。例如，口服剂型如片剂可包含不适用于胃肠外给药剂型的赋形剂。特殊赋形剂的适用性也可根据所述剂型中的具体活性组分确定。

本发明的不含乳糖的组合物可包含本领域熟知的各种赋形剂，以及列在例如美国药典(USP)SP(XXI)/NF(XVI)中的赋形剂。不含乳糖的组合物一般包括活性组分、药学相容并且药学可接受量的粘合剂/填充剂和润滑剂。优选的不含乳糖的剂型包含活性组分、微晶纤维素、预胶化淀粉和硬脂酸镁。

本发明进一步包括包含活性组分的无水药用组合物和剂型，因为水可使一些化合物容易分解。例如，为了确定例如有效期或制剂的长期稳定性的性质，在药学领域广泛接受加入水(例如5％)作为模拟长期储存的方法。参见，例如Jens T.Carstensen，Drug Stability：Principles &Practice，2版，Marcel Dekker，纽约，纽约，1995年，379-80页。实际上，水和热可加速一些化合物的分解。由于在制剂生产、处理、包装、储存、运输以及使用的过程中，经常遇到水分和/或湿度问题，因此，水分对于制剂的影响非常显著。

使用无水或含水量低的组分并在低水分或低湿度的环境中，可制备本发明的无水药用组合物和剂型。如果在生产、包装和/或储存过程需要经常接触水分和/或湿度，则优选包含乳糖和至少一种活性组分(包括伯胺或仲胺)的药用组合物和剂型是无水的。

无水药用组合物的制备和储存应该保持其无水性质。相应地，优选无水组合物使用已知可防水的材料包装，以便它们可用合适的规定的药剂盒包装。合适的包装实例包括但不限于密封箔、塑料、单剂量容器(例如管瓶)、泡罩包装和对开包装。

本发明进一步包括含有一种或多种可降低活性组分分解速率的化合物的药用组合物和剂型。本文中称为“稳定剂”的这些化合物包括但不限于抗氧化剂，如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

同赋形剂的量和种类一样，剂型中活性组分的量和具体种类可根据例如但不限于给予患者的途径等因素的不同而变化。但是本发明的代表性剂型包含化合物A，或其药学可接受的盐、溶剂合物、笼形包合物、水合物、多晶型物或前药，每日剂量范围约为1mg-1000mg，在早晨单剂量给药，每天一次，但优选每天分次给药，与食物一起给药。更具体地讲，将每日剂量平均分开，每天两分次给药。具体地讲，每日剂量范围应约为5mg-500mg；更具体地讲，每天约为10mg-200mg。在治疗患者时，应自每天约1mg-25mg的较低剂量开始治疗，并且如果需要，可将每日剂量增加至最高约200mg-1000mg，根据患者的全身反应，可单剂量给药，也可以分次给药。

4.3.1.口服剂型

适用于口服给药的本发明的药用组合物可以为离散的剂型，例如但不限于片剂(例如咀嚼片)、胶囊形片剂、胶囊剂和液体制剂(例如调味的糖浆剂)。这些剂型包含预先确定量的活性组分，并且可以通过本领域技术人员熟知的药剂学方法制备。主要参见Remington′sPharmaceutical Sciences，18版，Mack出版，Easton PA(1990年)。

按照常规药学配混技术，将活性组分与至少一种赋形剂充分混匀，制备本发明的代表性口服剂型。根据给药需要的制剂形式，赋形剂可为各种各样的形式。例如，适用于液体口服剂型或气雾剂的赋形剂包括但不限于水、二元醇、油、醇、矫味剂、防腐剂和着色剂。适用于固体口服剂型(例如散剂、片剂、胶囊剂和胶囊形片剂)的赋形剂实例包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

由于给药方便，片剂和胶囊剂为最常用的其中使用固体赋形剂的口服剂型。如果需要，可通过标准的水或非水技术对片剂包衣。可通过任何药剂学方法制备这些剂型。药用组合物和剂型一般按以下方法制备：将活性组分与液体载体、细粒固体载体或两者充分混匀，然后在需要时可将产品制成所需要的形状。

例如，可通过压缩和模压制备片剂。压缩片可通过将自由流动形式(如粉末或颗粒形式)的活性组分(任选与赋形剂混合)在合适的机器中压缩制备。模压片可通过将惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物在合适的机器中模压制备。

可用于本发明的口服剂型的赋形剂的实例包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药用组合物和剂型的粘合剂包括但不限于：玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉，明胶，天然和合成的树胶(如阿拉伯胶)，藻酸钠、藻酸、其他藻酸盐，粉状黄芪胶，瓜尔胶，纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)，聚乙烯吡咯烷酮，甲基纤维素，预胶化淀粉，羟丙基甲基纤维素(例如2208号、2906号、2910号)，微晶纤维素，及其混合物。

适用于本文公开的药用组合物和剂型的填充剂的实例包括但不限于：滑石粉，碳酸钙(例如颗粒或粉末)，微晶纤维素，粉状纤维素，葡萄糖结合剂，高岭土，甘露醇，硅酸，山梨醇，淀粉，预胶化淀粉，及其混合物。本发明的药用组合物中的粘合剂或填充剂一般占所述药用组合物或剂型的约50％-99％重量。

适合形式的微晶纤维素包括但不限于：以AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(来自FMCCorporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA)出售的商品，及其混合物。具体的粘合剂为以AVICEL RC-581出售的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低含水量的赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^Tm和Starch 1500LM。

当暴露在含水环境中时，用于本发明的组合物的崩解剂可使片剂崩解。含有太多崩解剂的片会在储存时崩解，而含有太少崩解剂的那些片则不能以需要的速率崩解或不能在需要的条件下崩解。因此，应该使用足量(既不太多也不太少，不会改变所述活性组分的释放)的崩解剂制备本发明的固体口服剂型。崩解剂的用量根据剂型不同而变化，对本领域的普通技术人员来说，这很容易理解。药用组合物一般包含约0.5-15％重量、具体为约1％-5％重量的崩解剂。

可用于本发明的药用组合物和剂型的崩解剂包括但不限于：琼脂，藻酸，碳酸钙，微晶纤维素，交联羧甲基纤维素钠，交聚维酮，聚克立林钾，淀粉羟乙酸纳，马铃薯或木薯淀粉、预胶化淀粉，其他淀粉，粘土，其它藻胶，其他纤维素，树胶，及其混合物。

可用于本发明的药用组合物和剂型的润滑剂包括但不限于：硬脂酸钙，硬脂酸镁，矿物油，轻质矿物油，甘油，山梨醇，甘露醇，聚乙二醇，其它二元醇，硬脂酸，十二烷基硫酸钠，滑石粉，氢化植物油(例如花生油、棉仔油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)，硬脂酸锌，油酸乙酯，月桂酸乙酯，琼脂，及其混合物。另外的润滑剂包括：例如硅酸盐硅胶(AEROSIL 200，W.R.Grace Co.ofBaltimore，MD生产)，合成二氧化硅的凝固气溶胶(Plano，TX的DegussaCo.销售)，CAB-O-SIL(Cabot Co.of Boston MA出售的一种热性二氧化硅产品)，及其混合物。如果使用，润滑剂的量一般约少于它们所加入的药用组合物或剂型的1％重量。

4.3.2.缓释剂型

本发明的活性组分可按照本领域普通技术人员熟知的控释方法或释放装置给药。实例包括但不限于以下美国专利描述的那些方法或装置：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；和4,008,719，5,674,533，5,059,595，5,591,767，5,120,548，5,073,543，5,639,476，5,354,556以及5,733,566，这些专利通过引用而结合至本文中。这些剂型可用以使一种或多种活性组分缓慢或受控地释放，其中采用例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物骨架、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微丸、脂质体、微球或其组合来提供符合需要的可变比例的释放曲线。对于本发明的活性组分，可容易地选择使用合适的本领域普通技术人员熟知的控释制剂(包括本文所描述的那些制剂)。因此，本发明包括适用于口服给药的单位剂型，例如但不限于适用于控释的片剂、胶囊剂、软胶囊和胶囊形片剂。

所有控释药物的一个共同目的是相对其非控释制剂具有更好的治疗效果。最佳设计的控释制剂在治疗中的应用应达到的理想效果是，在最短的时间内，使用最少量的药物治愈或控制病症。控释制剂的优点有延长药物活性、减少给药次数以及提高患者的依从性。另外，控释制剂可用来影响起效时间或例如血药浓度等其他性质，并因此影响副(不良)作用的发生。

大多数的控释制剂被设计成为具有如下的释放特征：开始释放能迅速产生所希望的治疗效果的药量(活性组分)，然后在延长的时间内，逐渐并连续释放其它药量来维持预防或治疗作用。为维持体内的药物浓度稳定，药物必须以一定的速率从剂型中释放出来，以弥补被代谢并从机体排泄出的药量。活性组分的控释可受到包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物等各种条件的刺激。

4.3.3.胃肠外剂型

可经包括但不限于皮下、静脉(包括一次性大剂量注射)、肌肉和动脉的各种途径，将胃肠外剂型给予患者。由于它们的给药一般避开了患者对污染物的自然防御，因此优选胃肠外剂型为无菌或给予患者前可进行灭菌。胃肠外剂型的实例包括但不限于注射液、溶于或悬浮在药学可接受的载体中的注射用干品、注射混悬剂和乳剂。

本领域技术人员熟知可适用于本发明的胃肠外剂型的合适的载体。实例包括但不限于：注射用水(USP)；水载体，例如但不限于氯化钠注射液，林格氏注射液，葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸林格氏注射液；水可混溶的载体，例如但不限于乙醇，聚乙二醇和聚丙二醇；和非水载体，例如但不限于玉米油，棉籽油，花生油，芝麻油，油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，和苯甲酸苄酯。

也可将能提高本文公开的一种或多种活性组分的溶解度的化合物加至本发明的胃肠外剂型中。

4.3.4经皮、局部和粘膜剂型

本发明的经皮、局部和粘膜剂型，包括但不限于眼用溶液剂、喷雾剂、气雾剂、乳膏剂、洗剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或本领域技术人员熟知的其它剂型。参见，例如Remington′sPharmaceutical Sciences，16版和18版，Mack出版，Easton PA(1980年&1990年)；和Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，4版，Lea& Febiger，费城(1985年)。适用于治疗口腔粘膜组织的剂型可配制成漱口剂或口凝胶剂。此外，经皮剂型包括“贮藏库型”或“骨架型”贴剂，可施用于皮肤并可使用一段具体时间，以便使需要量的活性组分渗入皮肤。

可用于提供本发明所包括的经皮、局部和粘膜剂型的合适的赋形剂(例如载体和稀释剂)和其他材料为药学领域技术人员所熟知，并依据给定药用组合物或剂型将要施用的特定组织而定。考虑到该因素，使用无毒并且药学可接受的代表性赋形剂(包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物)制备洗剂、酊剂、乳膏剂、乳剂、凝胶剂或软膏剂。如果需要，也可将增湿剂或保湿剂加至药用组合物和剂型中。这些加助组分的实例在本领域是熟知的。参见，例如Remington′sPharmaceutical Sciences，16版和18版，Mack出版，Easton PA(1980年和1990年)。

根据待治疗的具体组织，辅加组分可在使用本发明的活性组分治疗前、后或联合使用。例如，渗透增强剂可用于帮助将活性组分释放至组织中。合适的渗透增强剂包括但不限于：丙酮；各种醇，例如乙醇，油醇和四氢糠醇；烷基亚砜，例如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon级(聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvidone))；尿素；和各种水溶性或水不溶性糖酯，例如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(脱水山梨醇单硬脂酸酯)。

调节药用组合物、剂型或药用组合物或剂型施用的组织的pH，可提高一种或多种活性组分的释放度。类似的，调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力，可以提高释放度。也可将如硬脂酸酯(盐)的化合物加至药用组合物或剂型中，改善一种或多种活性组分的亲水性或亲脂性，从而提高释放度。在这方面，硬脂酸盐可用作所述制剂的类脂载体、乳化剂或表面活性剂，并用作释放增强剂或渗透增强剂。所述活性组分的各种盐、水合物或溶剂合物可用于进一步调节最终组合物的性质。

4.3.5.药剂盒

通常优选本发明的活性组分不同时或不通过相同的途径给予患者。因此，本发明包括药剂盒，当临床医师使用时，所述药剂盒可使适当量的活性组分对患者的给药简单化。

本发明的代表性药剂盒包含化合物A，或其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、笼形包合物、多晶型物或前药的单位剂型，以及第二种活性组分的单位剂型。第二种活性组分的实例包括但不限于上述4.2部分列举的那些组分。

本发明的药剂盒可进一步包含用于活性组分给药的装置。这些装置的实例包括但不限于注射器、点滴袋、眼罩和吸入器。

本发明的药剂盒可进一步包含可用于给予一种或多种活性组分的药学可接受的载体。例如，如果活性组分为固体形式，需必须重新构建以便经胃肠外给药，则所述药剂盒可包括适当载体的密封容器，其中所述活性组分可溶解形成适用于经胃肠外给药的无颗粒的无菌溶液。药学可接受载体的实例包括但不限于：注射用水(USP)；水载体，例如但不限于氯化钠注射液，林格氏注射液，葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化钠注射液，和乳酸林格氏注射液；水可混溶的载体，例如但不限于乙醇，聚乙二醇和聚丙二醇；和非水载体，例如但不限于玉米油，棉籽油，花生油，芝麻油，油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

5.实施例

5.1实施例1：2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的合成

将搅拌下的1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙胺(1.0g，3.7毫摩尔)和3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐(751mg，3.66毫摩尔)的乙酸(20ml)溶液加热回流15小时。真空下除去溶剂，得到油状物。通过色谱法分离得到的油，得到产物(1.0g，收率59％)，呈黄色固体，mp：144℃。

                                      ¹H NMR(CDCl₃)δ1.47(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)，2.26(s，3H，CH₃)，2.88(s，3H，CH₃)，3.75(dd，J＝4.4，14.3Hz，1H，CHH)，3.85(s，3H，CH₃)，4.11(q，J＝7Hz，2H，CH2)，5.87(dd，J＝4.3，10.5Hz，1H，NCH)，6.82-6.86(m，1H，Ar)，7.09-7.11(m，2H，Ar)，7.47(d，J＝7Hz，1H.，Ar)，7.64(t，J＝8Hz，1H，Ar)，8.74(d，J＝8Hz，1H，Ar)，9.49(br s，1H，NH)；¹³C NMR(CDCl₃)δ14.61，24.85，41.54，48.44，54.34，55.85，64.43，111.37，112.34，115.04，118.11，120.21，124.85，129.17，130.96，136.01，137.52，148.54，149.65，167.38，169.09，169.40；

C₂₂H₂₄NO₇S计算值：C，57.38；H，5.25；N，6.08。实测值：C，57.31；H，5.34；N，5.83。

5.2实施例2：(+)2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的合成

3-氨基邻苯二甲酸的制备

在氮气氛下，将披钯碳(10％，2.5g)、3-硝基邻苯二甲酸(75.0g，355毫摩尔)和乙醇(1.5L)加至2.5L的帕尔氢化器中。将氢气通入反应容器内，至压力达到55psi。振荡该混合物13小时，并维持氢气压力在50-55psi之间。排除氢气，并用氮气清洗混合物3次。通过Celite硅藻土床过滤悬浮液，并用甲醇洗涤。真空下浓缩滤液。将得到的固体再用乙醚打浆，并通过真空过滤进行分离。将固体真空干燥至恒重，得到54g(收率84％)的3-氨基邻苯二甲酸，呈黄色固体。

¹H-NMR(DMSO-d6)δ：3.17(s，2H)，6.67(d，1H)，6.82(d，1H)，7.17(t，1H)，8-10(brs，2H)。

¹³C-NMR(DMSO-d6)δ：112.00，115.32，118.20，131.28，135.86，148.82，169.15，170.09。

3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐的制备

向装有机械搅拌器、温度计和冷凝器的1L三颈圆底烧瓶中加入3-氨基邻苯二甲酸(108g，596毫摩尔)和乙酸酐(550mL)。将反应混合物加热回流3小时，然后冷却至环境温度，再于0-5℃下冷却1小时。真空过滤收集结晶固体，并用乙醚洗涤。在环境温度下将固体真空干燥至恒重，得到75g(收率61％)的3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐，呈白色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.21(s，3H)，7.76(d，1H)，7.94(t，1H)，8.42(d，1H)，9.84(s，1H)。

2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺的拆分

向装有机械搅拌器、温度计和冷凝器的3L三颈圆底烧瓶中加入2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺(137.0g，500毫摩尔)、N-乙酰基-L-亮氨酸(52g，300毫摩尔)和甲醇(1.0L)。搅拌下将浆状物加热回流1小时。然后在搅拌下，将浆状物冷却至环境温度，并在环境温度下继续搅拌3小时。过滤浆状物并用甲醇(250mL)洗涤。将固体晾干，然后在环境温度下真空干燥至恒重，得到109.5g粗品(85.8％ee(对映异构体过量)，收率98％)。将粗品固体(55.0g)和甲醇(440mL)一起回流1小时，然后冷却至室温，并在环境温度下再搅拌3小时。过滤浆状物，用甲醇(200mL)洗涤滤饼。将固体晾干，然后在30℃下真空干燥至恒重，得到49.6g(回收率90％)的(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺-N-乙酰基-L-亮氨酸盐(98.4％ee)。

手性HPLC(乙醇∶20mMKH₂PO₄＝1∶99，pH为7.0，安捷伦公司的Ultron ES-OVS手性柱，150mm×4.6mm，流速为0.5mL/min.，检测波长为240nm)：18.4分钟(S型异构体，99.2％)，25.5分钟(R型异构体，0.8％)。

化合物A的制备

向装有机械搅拌器、温度计和冷凝器的500ml三颈圆底烧瓶中加入(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲磺酰基)-乙-2-基胺-N-乙酰基-L-亮氨酸盐(25g，56毫摩尔，98％ee)、3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐(12.1g，58.8毫摩尔)和冰醋酸(250ml)。将反应混合物回流过夜，然后冷却至50℃以下。真空下除去溶剂，然后将残余物溶于乙酸乙酯。用水(250ml×2)、饱和碳酸氢钠水溶液(250ml×2)、盐水(250ml×2)洗涤得到的溶液，并用硫酸钠干燥。真空下蒸发除去溶剂，残余物用含有乙醇(150ml)和丙酮(75ml)的二元溶剂重结晶。真空过滤分离出固体，并用乙醇(100ml×2)洗涤。60℃下将产品真空干燥至恒重，得到19.4g(收率75％)的S-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-氨基异吲哚啉-1，3-二酮(98％ee)。

手性HPLC(乙醇∶20mM KH₂PO₄＝15∶85，pH为3.5，安捷伦公司的Ultron ES-OVS手性柱，150mm×4.6mm，流速为0.4mL/min.，检测波长为240nm)：25.4分钟(S型异构体，98.7％)，29.5分钟(R型异构体，1.2％)。

                                                                             ¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.47(t，3H)，2.26(s，3H)，2.87(s，3H)，3.68-3.75(dd，1H)，3.85(s，3H)，4.07-4.15(q，2H)，4.51-4.61(dd，1H)，5.84-5.90(dd，1H)，6.82-8.77(m，6H)，9.46(s，1H).¹³C-NMR(DMSO-d6)δ：14.66，24.92，41.61，48.53，54.46，55.91，64.51，111.44，112.40，115.10，118.20，120.28，124.94，129.22，131.02，136.09，137.60，148.62，149.74，167.46，169.14，169.48.

5.3.实施例3：TNF-α抑制

人全血LPS-诱导TNF-α的测定

化合物抑制LPS-诱导人全血TNF-α生成的能力主要通过下述测定人PBMC中脂多糖(LPS)-诱导肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的方法进行评价，但使用新鲜提取的全血代替PBMC(George Muller等，1999年，Bioorganic & Medicinal Clemistry Letters，9期：1625-1630页)。人全血LPS-诱导TNF-α的IC₅₀为294nM。

小鼠LPS-诱导血清TNF-α的抑制

按照以前描述的方法(Corral等，1996年，Mol.Med，2期：506-515页)，用所述动物模型测试化合物。小鼠LPS-诱导血清TNF-α的抑制(ED₅₀，mg/kg，p.o.)＝0.05。

LPS-诱导TNF-α的生成

脂多糖(LPS)是一种由如大肠杆菌(E.coli)的格兰氏阴性菌产生的内毒素，LPS可诱导产生包括TNF-α在内的多种促炎细胞因子。在外周血单核细胞(PBMC)中，应答LPS产生的TNF-α起源于单核细胞，约占总PBMC的5-20％。按照前述方法(Muller等，1996年，J.MedChem.，39期：3238页)，测定化合物抑制LPS-诱导人PBMC的TNF-α生成的能力。通过Ficoll Hypaque(Pharmacia，Piscataway，NJ，USA)密度离心法，从正常供血者获得PBMC。将细胞置于RPMI(LifeTechnologies，Grand Island，美国纽约)中培养，补加10％AB±型人血清(Gemini Bio-products，Woodland，CA，USA)、2mM L-谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Life Technologies)。

PBMC(2×10⁵细胞)平铺于96-孔平底Costar组织培养板(Corning，纽约，USA)，一式三份。用加或不加化合物的100ng/ml的LPS(Sigma，St.Louis，MO，USA)刺激细胞。将化合物(Celgene Corp.，Warren，NJ，USA)溶于DMSO(Sigma)中，临用前，在培养基中立即进行进一步的稀释。在全部样品中，DMSO终浓度均为0.25％。在LPS刺激1小时前，将化合物加至细胞中。在37℃、5％的二氧化碳条件下培养细胞18-20小时，然后收集上清液，用培养基稀释，并通过ELISA(Endogen，Boston，MA，USA)测定TNF-α浓度。LPS-诱导TNF-α的IC₅₀＝77nM。

IL-1β-诱导TNF-α的生成

在炎性疾病的过程中，通常是细胞因子IL-1β而不是细菌衍生的LPS刺激TNF-α生成。按照上述LPS-诱导TNF-α生成的方法，测定化合物抑制IL-1β-诱导人PBMC TNF-α的生成的能力，但PBMC是通过Ficoll-Paque Plus(Amersham Pharmacia，Piscataway，NJ，USA)离心，从源白细胞单位(Source leukocyte unit)(Sera-Tec Biologicals，NorthBrunswick，NJ，USA)中分离得到，以3×10⁵细胞/孔的密度，将PBMC平铺于96-孔组织培养板中的包含10％的热灭活的胎牛血清(Hyclone)、2mM L-谷酰胺、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素(完全培养基)的RPMI-1640培养基(BioWhittaker，Walkersville，美国马里兰州)中，在37℃、5％的二氧化碳条件下，在湿润的培养箱中，分别用浓度为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM的化合物(DMSO终浓度为0.1％)，一式两份预处理1小时，然后用50ng/ml的重组人IL-1β(Endogen)刺激18小时。IL-1β-诱导TNF-α的IC₅₀＝83nM。

5.4.实施例4：PDE选择性

PDE1、2、3、5和6酶的测定

通过测定单一浓度(10μM)的化合物抗牛PDE1、来自人血小板的人PDE2、PDE3和PDE5(Hidaka和Asano，1976年，Biochem.Biophys.Acta，429期：485页，和Nicholsen等，1991年，Trends Pharmaco.Sci.，12期：19页)以及来自牛视杆外节的PDE6(Baehr等，1979年，J.Biol.Chem.，254期：11669页，和Gillespie等，1989年，Mol.Pharm.，36期：773页)的活性，来评价化合物对PDE4的选择特异性。结果列在表1中。

PDE7酶的测定

PDE7是一种主要在T细胞表达并存在于骨骼肌中的cAMP-选择性PDE。通过PDE7抑制，可调节T细胞衍生的例如IL-2和IFN-γ的细胞因子。采用先前描述的阴离子交换色谱法(Bloom和Beavo，1996年，Proc.Natl.Acad Sci.USA，93期：14188-14192页)，将Hut78人T细胞纯化得到PDE7，同下表1中对PDE4的描述，在10nM的cAMP存在下，测试化合物抗PDE7制备的活性。

表1.

  外消旋化合物  化合物A  化合物B^*  PDE抑制  PDE4 IC₅₀(来自U937细胞)(nM)  81.8  73.5  611  PDE1(％抑制，10μM)  9％  23％  27％  PDE2(％抑制，10μM)  19％  6％  10％  PDE3(％抑制，10μM)  21％  20％  31％  PDE5(％抑制，10μM)  3％  3％  -9％  PDE6(％抑制，10μM)  ND  -6％  10％  PDE7 IC₅₀(nM)  22110  20500  ND  外消旋化合物  化合物A  化合物B^*  根据以上数据的PDE特异性比值(^*倍数)  PDE4/PDE1  ＞2700  ＞500  ＞50  PDE4/PDE2  ＞800  ＞10000  ＞260  PDE4/PDE3  ＞670  ＞1200  ＞45  PDE4/PDE5  ＞12000  ＞30000  ＞39000  PDE4/PDE6  ND  ＞40000  ＞250  PDE7 IC₅₀/PDE4 IC₅₀  270  279  ND

^*化合物B为化合物A的对映异构体。

5.5.实施例5：PDE4抑制

PDE4(由U937细胞衍生)酶的测定

按照前述凝胶过滤层析法(Muller等，1998年，Bioorg.&Med ChemLett，8期：2669-2674页)，将U937人单核细胞纯化得到PDE4酶。30℃下在的50mM Tris-HCl(pH为7.5)、5mM MgCl₂、1μM cAMP、10nM[³H]-cAMP中，进行磷酸二酯酶反应30分钟，然后通过煮沸终止，用1mg/ml的蛇毒处理，并按照前述方法(Muller等，1998年，Bioorg.&MedChem Lett，8期：2669-2674页)，用AG-1XS离子交换树脂(BioRad)分离。

反应消耗的有效底物在15％以下。结果列在表1中。

5.6.实施例6：人T细胞的测定

SEB诱导IL-2和IFN-γ的生成

葡萄球菌肠毒素B(SEB)是革兰氏阳性菌-金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)衍生的超级抗原。SEB提供了一种对T细胞表达的特殊T细胞受体Vβ链具有特异性的方便的生理刺激。按照上述方法，将人PBMC(由约50％的T细胞组成)从源白细胞单位分离，并以3×10⁵细胞/孔的浓度，平铺在96孔组织培养板的完全培养基中，在37℃、5％的二氧化碳条件下，在湿润的培养箱中，分别用浓度为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM的化合物(DMSO终浓度为0.1％)，一式两份预处理1小时，然后用100ng/ml的SEB(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO，USA)刺激18小时。通过ELISA(R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)测定IL-2和IFN-γ的浓度。IL-2的IC₅₀＝291nM，IFN-γ的IC₅₀＝46nM。

5.7.实施例6：cAMP升高的测定

PGE2-诱导cAMP升高

将前列腺素E₂(PGE₂)结合至单核细胞、T细胞和其他白细胞上的前列腺素受体上，随后提高了细胞内cAMP的水平，导致抑制了细胞应答。PGE₂和PDE4抑制剂的结合协同升高了这些类型的细胞内的cAMP水平，而且在PGE₂存在下，PDE4抑制剂引起的PBMC内的cAMP水平升高与这些PDE4抑制剂的抑制活性成正比。通过以下方法测定人PBMC的细胞内的cAMP：按上述方法分离PBMC，并以1×10⁶细胞/孔的浓度平铺在96孔培养板的RPMI-1640培养基中。在37℃、5％的二氧化碳条件下，在湿润的培养箱中，分别用浓度为100、10、1、0.1、0.01和0μM的化合物(DMSO终浓度为2％)，一式两份预处理细胞1小时。然后用PGE₂(10μM)(Sigma)刺激1小时。用HCl(终浓度为0.1N)溶解细胞，以便抑制磷酸二酯酶的活性，然后将培养板置于-20℃下冷冻。使用cAMP(低pH)免疫测定试剂盒(R & DSystems)测定生成的cAMP。消旋体的PBMC cAMP EC₅₀为3.09μM，化合物A的PBMC cAMP EC₅₀为1.58μM。

按以下方法测定人嗜中性粒细胞内的cAMP的升高：通过Ficoll-Paque Plus(Amersham Pharmacia)离心，将PBMC从源白细胞(Sera-TecBiologicals)中分离。将得到的红细胞/多形核细胞(PMN)粒状沉淀物再悬浮在Hank′s平衡盐溶液(BioWhittaker)中，并与相同体积的溶于0.9％生理盐水的3％的右旋糖酐T-500(Amersham Pharmacia)混合。

将红细胞沉降20分钟，然后分离PMN，并在4℃下以120rpm的转速离心8分钟。将剩余的红细胞溶解在冷的0.2％的生理盐水中30秒，并加入相同体积的1.6％的生理盐水，将这些细胞复原至等渗。在4℃下以1200rpm的转速离心PMN8分钟，然后再悬浮在RPMI-1640中，并按照上述PBMC测定方法，测定cAMP的升高。使用FACSCalibur(Becton Dickinson，San Jose，CA，USA)的流式细胞计测定，结果表明PMN约为74％CD18/CD11b⁺、71％CD16⁺CD9⁺的嗜中性粒细胞。结果列入表2中。

fMLF-诱导LTB4的生成

N-甲酰基-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLF)是一种细菌衍生肽，其激活嗜中性粒细胞迅速地脱粒、迁移、粘附至内皮细胞上，并释放白三烯LTB4(一种花生四烯酸的代谢产物并且其自身为一种嗜中性粒细胞化学诱引剂)。按照前述方法(Hatzelmann和Schudt，2001年，J.Pharm.Exp.ther.，297期：267-279页)和下面的改进方法，测试化合物阻断fMLF-诱导的嗜中性LTB4的生成的能力。按照上述方法分离嗜中性粒细胞，并再悬浮在无钙或镁的含有10mM HEPES(pH为7.2)的磷酸盐缓冲盐水(BioWhittaker)中，然后以1.7×10⁶细胞/孔的浓度，平铺在96孔培养板中。在37℃、5％的二氧化碳条件下，用50μm的硫柳汞(Sigma)/1mM CaCl₂/1mM MgCl₂处理细胞15分钟，然后分别用浓度为1000、200、40、8、1.6、0.32、0.064和0nM的化合物(DMSO终浓度为0.01％)一式两份处理10分钟。用1μm的fMLF刺激嗜中性粒细胞30分钟，然后加入甲醇(终浓度为20％)溶解，并在干冰/异丙醇浴中冷冻10分钟。在-70℃保存溶胞产物，直至通过竞争性LTB4 ELISA(R& D Systems)测定LTB4的含量。结果如表2所示。

酵母聚糖-诱导IL-8的生成

将酵母聚糖A或热灭活的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)结合至嗜中性粒细胞表面的Mac-1粘着分子上，并引发吞噬、细胞活化和IL-8生成。按照前述方法(Au等，1998年，Brit.J.Pharm.123期：1260-1266页)和下面的改进方法测定酵母聚糖诱导的IL-8生成。按上述方法纯化人嗜中性粒细胞，以3×10⁵细胞/孔的浓度，平铺在96孔组织培养板的完全培养基中，在37℃、5％的二氧化碳条件下，用浓度分别为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM的化合物(DMSO终浓度为0.1％)，一式两份处理1小时。然后用未调理的、煮沸过的酵母聚糖A(Sigma)以2.5×10⁵颗粒/孔的浓度刺激嗜中性粒细胞18小时。收获上清液，并通过ELISA(R & D Systems)测试IL-8。结果如表2所示。

fMLF-诱导CD18/CD11b的表达

按照前述方法(Derian等，1995年，J.Immunol.，154期：308-317页)并作如下改动，测定在嗜中性粒细胞上表达的CD18/CD11b(Mac-1)。按上述方法分离嗜中性粒细胞，然后以1×10⁶细胞/ml的浓度重悬浮在完全培养基中，并在37℃、5％的二氧化碳条件下，用浓度分别为10、1、0.1、0.01和0μM的化合物(DMSO终浓度为0.1％)，一式两份预处理10分钟。然后用30nM fMLF刺激细胞30分钟，并冷却至4℃。用兔IgG(Jackson ImmunoResearch Labs，West Grove，PA，USA)(10μg/1×10⁶细胞)处理细胞以阻断Fc受体，用CD18-FITC和CD11b-PE(Becton Dickinson)染色，并通过FACSCalibur上的流式细胞计进行分析。从全部样品中扣除无刺激存在时的CD18/CD11b表达(平均荧光)，得到抑制曲线，并计算IC₅₀值。结果如表2所示。

fMLF-诱导在HUVEC上的粘着

按照前述方法(Derian等，1995年，J.Immunol.，154期：308-317页)并作如下改动，将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用作嗜中性粒细胞粘着的底物。HUVEC细胞来自Anthrogenesis(Cedar Knolls，NJ，USA)，并且嗜中性粒细胞不经过细胞分裂抑素B处理。用浓度分别为10、1、0.1、0.01、0.001和0μM的化合物(DMSO终浓度为0.1％)，一式两份处理细胞10分钟，然后用500nM fMLF刺激30分钟，并在用FLX800板式阅读器(Bio-Tek Instruments，Winooski，VT，USA)测定荧光前，用PBS洗涤两次。结果如表2所示。

表2

   人嗜中性粒细胞测定(全部数值均以nM计)  外消旋化合物  化合物A   PGE₂-诱导cAMP的EC₅₀  12589  4570   fMLF-诱导LTB4的IC₅₀  20.1  2.48  酵母聚糖-诱导的IL-8的IC₅₀  ND  94  fMLF-诱导CD18表达的IC₅₀  ND  390  fMLF-诱导CD11b表达的IC₅₀  ND  74  fMLF-诱导粘着在HUVEC上的IC₅₀  ND  150

5.8.实施例8：水溶解性

在pH为7.4的缓冲水溶液中测定平衡溶解度。pH为7.4的缓冲溶液通过用10N的NaOH将0.07M的NaH₂PO4溶液的pH调节至7.4制备。该溶液的离子强度为0.15。将至少1mg的粉末与1ml的缓冲液混合，制备浓度大于1mg/ml的混合物。将这些样品摇荡超过2小时，并在室温下放置过夜。然后通过先用样品饱和的0.45μm的尼龙注射器过滤器过滤样品。从滤液中连续取样两次。以在50％甲醇中制备的标准溶液作参比，通过HPLC测定滤液。化合物A的水溶解度比外消旋混合物大3.5倍。测定的溶解度结果为：化合物A＝0.012mg/ml；外消旋混合物＝0.0034mg/ml。

5.9.实施例8：LPS诱导的肺中性白细胞增多症的白鼬模型

当通过口服途径给药时，有意识的白鼬模型用于研究PDE4抑制剂的抗炎、催吐和行为作用。根据这些实验，可确定各PDE4抑制剂的治疗指数(TI)。TI值通过引起催吐发作和行为改变的阈剂量除以抗炎剂量(抑制LPS-诱导的中性白细胞增多症50％的剂量)计算。

动物饲养

雄白鼬(Mustela Pulorius Euro，体重1-2kg)。白鼬由Bury GreenFarm或Misay Consultancy提供。白鼬运来后，先在饲养室适应环境至少7天时间。食物包括可随意喂的粒状SDS饲料C，以及每周喂3次的Whiskers猫食物。水为用巴氏法灭菌的动物级饮用水，并且每天更换。

PDE4抑制剂给药

PDE4抑制剂经口服给药，初始剂量为1-10mg/kg，但以后增加至30mg/kg，以便确定TI是否为10或更高，和/或以较低的剂量确定抑制中性白细胞增多症50％的最小剂量。晚上禁止喂白鼬，但允许自由饮水。通过经喉的后面进入食管的15cm的定量针筒，将PDE4抑制剂或载体经口途径给予该动物。给药后，将白鼬送回配有Perspex有机玻璃门的饲养笼中，以便观察，并且白鼬可自由饮水。给药后，连续观察白鼬，并记录任何呕吐或行为的改变。口服给药60-90分钟后，允许白鼬进食。

暴露在LPS中

口服化合物或对照载体30分钟后，将白鼬置于密封的Perspex有机玻璃容器中，并暴露在LPS(100μm/ml)气雾中10分钟。通过喷雾器(DeVilbiss，USA)产生LPS气雾，并直接喷入所述Perspex有机玻璃暴露室中。暴露10分钟后，将白鼬送回饲养笼，并允许自由进水，并在稍后阶段，允许进食。口服给药后，连续观察至少2.5小时，并记录催吐发作和行为改变。

支气管肺泡灌洗

暴露在LPS中6小时后，经腹腔给予过量的戊巴比妥钠，将白鼬处死。然后在气管插聚丙烯管，并用20ml肝素化(10单位/ml)的磷酸盐缓冲溶液(PBS)灌洗肺两次。

血样/组织切除

经胸心脏穿刺，将末端血样(10ml)切除。以2500rpm的转速将血样离心15分钟，除去血浆并置于-20℃下保存。为分析化合物含量，也将脑切除，并置于-20℃下冷冻。

细胞计数

以1500rpm的转速，将支气管肺泡灌洗(BAL)的样品离心15分钟。然后除去上清液，并将得到的细胞颗粒状物重悬浮在1ml的PBS中。制备重悬浮液的细胞涂片，并用Leishmans着色剂染色，以便细胞分类计数。通过余下的重悬浮样品确定细胞总数。基于此，可确定BAL中嗜中性粒细胞的总数。

参数测定

1.LPS诱导的肺中性白细胞增多症的抑制％。

2.催吐发作-记录的呕吐和干呕次数。

3.行为改变-记录以下行为结果：流诞，气促，抓嘴，体位变平，协调不能，拱背和倒行。通过应用严重度级别(轻度、中度和严重)对其中任一行为改变进行半数定量。

4.用发现的未引起催吐发作的最大剂量，除以抑制肺中性白细胞增多症50％或以上的最低剂量计算TI。

化合物A对LPS-在有意识的白鼬的肺中诱导的中性白细胞增多症的作用，如图1所示。

呕吐和行为改变

白鼬经口服给予PDE4后，观察至少2小时，并记录催吐发作(呕吐和干呕)和行为变化。

预先口服给予相应载体(丙酮/cremophor/蒸馏水)的白鼬，没有观察到催吐发作(呕吐和干呕)。发现有少数对照处理的白鼬(7/22)出现轻度的行为改变(舔唇和倒行)。

化合物A(0.1-3mg/kg，口服)没有引起催吐发作(呕吐和干呕)。只观察到一些分级为轻度的行为改变(体位变平、舔唇和倒行)。当剂量为10mg/kg时，发现有2/6的白鼬出现干呕(不是直接呕吐)，同时观察到流诞和行为改变(记分为轻度或中度)。在实验的最高剂量(30mg/kg)时，观察到3/4的白鼬有中度到显著的呕吐，并有显著的行为改变。表III中总结了这些数据。

表III.有意识的白鼬：口服给予化合物A后的催吐发作和行为改变。

  处理/剂量(mg/kg)  呕吐  干呕  流诞 气促  抓嘴   体位变平  协调不能  舔唇  倒行  载体(丙酮/cremophor/蒸馏水)  无  无  无 无  无   无  无  轻度(6/22)  轻度(7/22)  化合物A(0.1mg/kg)  无  无  无 无  无   轻度(2/5)  无  轻度(4/5)  轻度(3/5)  化合物A(0.3mg/kg)  无  无  无 无  无   轻度(2/6)  无  轻度(3/6)  轻度(4/6)  化合物A(1.0mg/kg)  无  无  无 无  无   轻度(2/6)  无  轻度(6/6)  轻度(4/6)  化合物A(3.0mg/kg)  无  无  无 无  轻度(1/8)   显著(7/8)  无  轻度(2/8)  中度(5/8)  化合物A(10mg/kg)  无  轻度(2/6)  轻度(1/6) 无  轻度(1/6)   显著(6/6)  无  中度(5/6)  显著(6/6)  化合物A(30mg/kg)  中度(3/4)  显著(3/4)  中度(3/4) 轻度(1/4)  显著(4/4)   显著(4/4)  轻度(3/4)  中度(4/4)  轻度(2/4)

给药后，观察白鼬长达3小时。括号内的数字是指出现反应的白鼬数目。每组的白鼬数目为4-22。

治疗指数计算

根据这些实验，用诱导催吐发作的阈剂量除以抑制肺中性白细胞增多症的ED₅₀，可确定每种化合物的治疗指数(TI)。TI计算结果总结在表IV中。化合物A的TI为12，在1mg/kg的抗炎剂量下，不会引起催吐发作。

表IV.抑制LPS-诱导的肺中性白细胞增多症的有效剂量(ED₅₀)、诱导呕吐以及根据这些数据计算的治疗指数的总结。

化合物 LPS诱导的中性白细胞增多症的抑制(ED₅₀mg/kg)  催吐阈剂量(mg/kg) 治疗指数化合物A 0.8  10 12

5.10.实施例9：200mg剂量的胶囊

表V举例说明了200mg化合物A的单位剂量的批处方和单剂量处方，即约40％重量，0号胶囊填充。

表V.200mg胶囊处方

   原料   ％重量  数量(mg/片)   数量(kg/批)   化合物A   40.0％  200mg   16.80kg   预胶化玉米淀粉，NF5   9.5％  297.5mg   24.99kg   硬脂酸镁   0.5％  2.5mg   0.21kg   总共   100.0％  500mg   42.00kg

将预胶化淀粉(SPRESS B-820)和化合物A组分过710μm筛，然后放于带有插入挡板的扩散式混合器中，混合15分钟。将硬脂酸镁过210μm筛，并加至所述扩散式混合器中。使用Dosator型胶囊填充机，用0号胶囊充填混合物，每粒胶囊为500mg(每批8400粒胶囊)。

5.11.实施例10：100mg口服剂型

表VI举例说明了包含100mg化合物A的批处方和单位剂量处方。

表VI.100mg片处方

 原料   ％重量    数量(mg/片)    数量(kg/批) 化合物A   40％    100.00    20.00 微晶纤维素，NF   53.5％    133.75    26.75 Pluronic F-68表面活性剂   4.0％    10.00    2.00 A型交联羧甲纤维素钠，NF   2.0％    5.00    1.00 硬脂酸镁，NF   0.5％    1.25    0.25 总共   100.0％    250.00mg    50.00kg

将微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠和化合物A组分过30目筛(约430μ-655μ)。将Pluronic F-68^(KS.Lenexa的RH Biosciences，Inc.生产)表面活性剂过20目筛(约457μ-1041μ)。将Pluronic F-68^表面活性剂和0.5kg交联羧甲纤维素钠加至16夸脱的双锥滚动式混合机中，并混合约5分钟。将混合物转移到3立方英尺的双锥滚动式混合机中，加入微晶纤维素，并混合约5分钟。加入沙利度胺，再混合25分钟。该预混物经在出料口挂接锤式粉碎机的干式压辊造粒机制粒，然后再返回所述摇摆式混合机中。将剩余的交联羧甲纤维素钠和硬脂酸镁加至滚动式混合机中，并混合约3分钟。最终混合物用旋转式压片机压片，片重为250mg/片(每批200,000片)。

5.12.实施例11：气雾剂剂型

将化合物A和12.6kg的三氯一氟甲烷在配备高剪切混合机的密封不锈钢容器中混合，制备浓缩液。混合进行约20分钟。将所述浓缩液与平衡量的抛射剂，在温度控制在21℃-27℃、压力控制在2.8-4.0bar的批量生产罐中，混合制备批量悬浮液。使用具有一计量阀的17ml气雾剂容器，其被设计为可提供100次本发明的组合物的吸入量。每只容器含有以下组分：

化合物A                 0.0120g

三氯一氟甲烷            1.6939g

二氯二氟甲烷            3.7175g

二氯四氟乙烷            1.5766g

总共                    7.0000g

虽然已采用具体的实施方案对本发明作出描述，但是对于本领域技术人员来说，各种可能的变更和修改是显而易见的，没有偏离本发明权利要求书所限定的的宗旨和范围。这些修改也将落入附加的权利要求书的范围。