诱导视网膜热休克蛋白表达的装置及其应用

摘要

提供一种可诱导视网膜神经细胞表达内源性热休克蛋白的装置。该装置主要为能发出近红外波长脉冲的激光机，通过裂隙灯显微镜转接，经瞳孔对眼底视网膜组织进行低能量、长时间物理学热刺激，达到阈下反应，以诱导热休克蛋白表达，而起到防治青光眼视神经病变的目的。

说明书

技术领域

本发明涉及一种诱导热休克蛋白表达的装置，具体涉及该装置可局部物理刺激眼视网膜组织，能安全有效诱导热休克蛋白表达，从而达到防治青光眼视神经病变的目的。

背景技术

青光眼(Glaucoma)是一组由于绝对性或相对性眼压升高所致的原发性或继发性视神经损伤性疾病。该类疾病现已成为亚洲乃至全球第一位的不可逆致盲性眼病。现代青光眼防治手段包括眼压依赖性因素控制和非眼压依赖性因素治疗两个方面。随着手术、激光及新型降眼压药物的更新和开发，眼压依赖性因素在较大程度上得到了解决。而对于非眼压依赖性青光眼视神经损害的防护现成为了国际眼科学界和神经科学学界研究的热点。大量研究证实青光眼视神经损害机制是视网膜神经节细胞(RGC)程序性死亡即凋亡，因此，如何抑制RGC凋亡是达到保护青光眼视神经功能目的的关键。热休克蛋白(heat shock protein，HSP)是生物体进化过程中最保守的一类蛋白，具有抗损伤、抗凋亡生物学功能。现已证实在多种神经系统损伤和变性性疾病中，HSP发挥着保护神经细胞免受二次损伤的重要功能，而其自身抗体通过中和HSP功能，则促进了神经细胞凋亡发生。现有研究者通过全身应用HSP诱导剂的方法而达到RGC保护的目的，但该方法对全身其它组织正常细胞具有潜在毒副作用，因此，如何能在不损伤正常机体细胞的同时通过局部刺激促进神经细胞表达内源性HSP，从而抑制视网膜神经节细胞的凋亡，成为视神经保护急待解决的问题。

发明内容

通过本发明所提供的装置可解决上述问题。

该装置为与裂隙灯显微镜装配和转接的近红外光波长激光机，其发出的激光脉冲通过眼接触透镜和散大的瞳孔对眼底视网膜组织进行物理学刺激，可安全诱导视网膜神经细胞表达内源性热休克蛋白。

该装置主要由如下部件组成：(1)可持续发出近红外光波长激光脉冲的激光机，其激光能量为50mw，脉冲宽度即照射时间为15-30秒；(2)1.2mm光斑激光裂隙灯适配器；(3)裂隙灯显微镜；(4)裂隙灯显微镜转接口；(5)角膜接触眼底透镜。用该装置照射视网膜时，照射的热刺激温度维持在40℃左右。而且所述的热刺激方式可重复性进行。

附图说明：

图1采用近红外光波长激光，经1.2mm光斑激光裂隙灯适配器，与裂隙灯显微镜转接后，通过散大瞳孔对BN大鼠眼底视网膜组织进行照射

图2采用近红外光波长激光能量50mw，照射时间30s，BN大鼠眼底视网膜照射处光斑呈浅灰色为阈值反应(箭所指)

图3采用近红外光波长激光能量50mw，照射时间20s，BN大鼠眼底视网膜照射处光斑呈阈下反应，未见明显形态学改变

图4近红外光波长激光，能量50mw，照射时间20s，照射后3天视网膜HSP70免疫组织化学染色，可见视网膜神经细胞胞浆HSP70强表达(棕色，DAB显色)，正常视网膜仅有弱阳性染色，阴性对照组无阳性染色，×40

图5近红外光波长激光，能量50mw，照射时间20s，照射后3天视网膜HSP27免疫组织化学染色，可见视网膜神经细胞胞浆HSP27强表达(棕色，DAB显色)，正常及阴性对照组均无阳性染色，×40

图6近红外光波长激光，能量50mw，照射时间20s，照射视网膜后3天，急性升高眼内压，采用TUNEL染色方法标记并计数RGC层凋亡细胞，近红外光波长激光干预后能减少急性高眼压状况下RGC的凋亡。(1)高眼压组，(2)TTT干预的高眼压组，(3)TTT组，(4)正常组(箭指凋亡细胞)，×40

具体操作方式

将本发明的装置通过接触眼底透镜和散大的瞳孔，将激光瞄准光聚焦于视网膜。启动激光对欲照射部位视网膜进行照射。其照射反应为阈下反应，我们实验证明可以诱导RGC凋亡最为相关热休克蛋白家族-HSP27和HSP70的表达，减少了BN色素大鼠急性高眼压状况下RGC的凋亡。