基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法

摘要

本发明公开了一种生物农药的生产方法，具体为基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法。基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于包括以下步骤：1)固体或者液体培养CL和/或AA菌种的种子菌；2)沼渣培养基的配制及发酵培养；3)将上述步骤2)所得的沼渣发酵培养好的培养物，包括培养基质、真菌体，加入辅助剂充分混均、干燥，用机械粉碎制成作物异源真菌蛋白农药。所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，制备出药肥兼备，能促进作物生长、提高作物抗逆免疫力的广谱真菌蛋白农药。

说明书

                             技术领域

本发明涉及一种生物农药的生产方法，具体为基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法。

                             背景技术

21世纪对农作物所用制剂的要求是：效果好、用量少、价廉；安全无毒无害；功能多、用途广；不引起害物产生抗性并诱导作物增强对逆境和有害生物的抵抗力；能改善植株和土壤的微生态系统的绿色产品。以沼肥为基质的微生物蛋白及其制剂无疑是符合这一要求的新型生物农药，必将受到越来越多的关注。沼气是我国解决农村能源、改善农村卫生环境，提高农民生活质量和收入的一项富民工程。据统计，全国现有1亿多处简陋的农家旱厕，畜禽养殖业每年产生20多亿吨粪便。沼肥(包括沼渣和沼液)是对人、畜禽粪便、生活垃圾等进行厌氧发酵，产生沼气后的残余物。目前我国拥有户用小型沼气池(平均体积8m³)左右1000多万个，全国有3万多个大型沼气池(罐)，总容量超过150万m³。近年国家及各省(区、市)十分重视农村沼气建设，中央连续几年每年安排10亿元国债资金用于农村沼气工程，项目涉及24个省(市、区)540个县的6000多个村，惠及103万农户。预计到2005年全国农村新型沼气池总量将超过2000万户，2010年将达到5000万户。一个普通家用沼气池每年可产沼肥20吨左右，估计目前全国年产出沼肥2.5～3.0亿吨左右。

人、畜禽粪便经沼气池(罐)发酵后产生的沼肥，除碳素损失较大外，仍保留90％以上原料营养成分。氮素较同质同量的堆沤肥高40％～60％，其结构得到优化；磷素和钾素的回收率高达80％～90％。沼肥除了含有常量营养元素、有机质外，还含有多种微量营养元素、氨基酸、激素和维生素等物质，是速、缓兼备，复合性、多效性的有机肥，利用得当可变废为宝；如果处理不好则会再次成为农村环境污染、卫生条件恶化的根源之一。表1列出了各种有机肥成分含量。

                  表1  不同肥料有机质中氮、磷、钾含量

肥料  有机质(g/kg)  全氮(g/kg)  全磷(g/kg)  全钾(g/kg)  速效氮(g/kg)  速效磷(mg/kg)  速效钾(mg/kg)  沼渣沼液人粪尿新鲜猪粪  392/72150  12.170.816.705.60  7.310.043.404.00  11.802.532.604.40  2.140.26//  2.800.04//  1.450.47//

沼肥是一种营养成分丰富的优质有机肥，目前我国每年产生的2～3亿多吨沼肥，主要用于各种作物浸种、做基肥、叶面肥，部分沼渣用于养鱼、养猪、食用菌种植，一部分被抛弃成为环境污染源。而用沼渣作为培养基培养相关真菌体，研制能促进作物生长，提高作物抗逆免疫力的真菌蛋白农药国内外尚未见报道。

                             发明内容

本发明旨在充分利用沼气发酵残余物沼渣，提供一种能够促进作物生长，提高作物抗逆免疫力的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于包括以下步骤：

1.基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于包括以下步骤：

1)采用固体培养或液体培养CL和/或AA种子菌；

2)培养基的配制：按下列各组分的干物质重量比例混合，优质沼渣∶稗草＝4∶1～1∶1，添加总重量2.0％～4.0％的蔗糖，5.0％～6.0％的米糠，0.3％～0.8％的尿素，最后将含水量调节到40％～45％；

3)将上述培养基的初始pH值调节为6.0～7.0，在121℃～125℃、0.105～0.108MPa的高温高压下，灭菌20～30分钟，冷却后备用；

4)发酵培养：将步骤1)所得的CL和/或AA种子菌接种在步骤3)得到的固体发酵培养基中，在温度26℃～29℃，有足够的通气量，连续黑暗培养或光照/黑暗各12小时交替进行培养，每天搅动一次，进行大规模发酵培养7～10天，获得含有大量CL和/或AA菌体的培养基质，包括孢子和菌丝；

5)将上述步骤4)所得的培养物，包括培养基质、真菌体，加入常规辅助剂充分混均、干燥，用机械粉碎制成作物促生诱抗异源真菌蛋白农药。根据该蛋白农药所使用的不同作物对象，采用现有公知的常规辅助剂，可以是促生长剂，如赤霉素等；也可以是促健壮剂，如多效唑、烯效唑等。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于，所述固体培养种子菌的方法包括以下步骤：

1)CL和/或AA菌种的制备：保存在PDA斜面上的CL和/或AA原始菌种在PDA平板上扩大繁殖获得一级种子菌；

2)将一级种子菌块接种到稗草为基质的培养基上，培养得到二级种子菌，包括培养基质和菌体。其具体的培养方法在专利号为“02102975.X”、名称为“用稗草基质生产稗草生防菌孢子的方法”的发明专利中已有公开记载，在此不再赘述。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于，所述液体培养种子菌的方法包括以下步骤：

1)以沼液为基本培养液，按沼液∶水＝4∶1～2∶1的体积比配制，用NaOH或HCl调pH值至6.8～7.2，添加总重量2.0％～4.0％的蔗糖或葡萄糖，0.3％～0.6％的尿素，混合均匀后按250毫升容器体积装入100毫升发酵液标准装入三角瓶中，，在121℃～125℃和0.105～0.108MPa的高温、高压条件下灭菌20分钟，冷却后备用；

2)上述三角瓶中接入3～4块，直径为6～9mm，菌龄为5～7天的CL和/或AA菌块，在150～200rpm，26～28℃恒温摇床上振荡发酵培养7～10天，待形成大量菌丝团后终止发酵；

3)滤干发酵液获得菌丝团，粉碎菌丝团作为二级种子菌。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于步骤2)中：优质沼渣∶稗草＝3∶1，蔗糖3.0％，米糠5.5％，尿素5.5％；

步骤3)中：灭菌时间为25分钟；步骤4)中：培养温度为28℃，大规模发酵培养时间为9天。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于步骤5)中机械粉碎后的颗粒直径为10～25μm。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，其特征在于：液体培养种子菌的方法中的步骤1)中沼液与水的配制比例为3∶1，添加3.0％的蔗糖或葡萄糖、0.45％的尿素；步骤2)中三角瓶接入菌龄为7天的CL和/或AA菌块，液体发酵培养条件为170rpm、28℃的恒温摇床上振荡发酵培养8天。

所述的基于沼渣的作物促生诱抗异源真菌蛋白农药的生产方法，以沼气发酵残余物沼渣为主要原料，配以诱导真菌快速生长的特殊物质，添加少量无机盐元素，形成廉价、快速、高效固体发酵培养基，大规模生产弯孢菌(Curvularia lunata，CL)和交链孢菌(Alternaria altrnata，AA)真菌体，采用机械粉碎技术粉碎发酵混合培养物(培养基质和真菌体，下同)，研制成药肥兼备，能促进作物生长、提高作物抗逆免疫力的广谱真菌蛋白农药。用真菌激活蛋白农药粉剂拌种、浸根、浇灌、喷雾等方式处理各种单、双子叶植物，如水稻(籼稻、粳稻、杂交稻)、小麦、玉米、番茄、辣椒、西瓜、草莓、黄豆、蚕豆、豆角、小白菜等，结果表明真菌激活蛋白农药可促进单、双子叶作物生长、提高产量和品质、诱导作物产生对多种病害的抗性，达到防病效果，减少化肥、农药用量。试验结果表明，用CL、AA真菌蛋白处理水稻(稻瘟病、纹枯病、恶苗病、白叶枯病)、小白菜(软腐病、叶斑病)、草莓(白粉病、霜霉病)等，已诱导了这些作物对主要真菌、细菌病害的抗性。

本申请文件中涉及的比例及百分含量除特别说明外，均为重量比和重量百分含量。

                           具体实施方式

现根据具体实施例及其试验例对本发明作进一步详细说明。

实施例1：

1)固体培养CL和/或AA菌种的种子菌：(1)CL、AA菌种的制备，保存在PDA斜面上的CL和/或AA原始菌种在PDA平板上扩大繁殖获得一级种子菌；(2)将一级种子菌块接种到稗草为基质的培养基上，培养二级种子菌。

2)沼渣培养基的配制及发酵培养，包括以下步骤：(1)培养基的配制，按下列各组分的干物质重量比例混合，优质沼渣∶稗草＝4∶1，蔗糖2.0％，米糠5.0％，尿素0.3％，最后将含水量调节到40％；(2)将上述培养基的初始pH值调节为7.0，在121℃、0.107MPa的高温高压下，灭菌30分钟，冷却后备用；(3)将上述固体培养的二级种子菌，包括培养基质和菌体，接种在以沼渣为主要基质的固体发酵培养基中，在温度29℃，有足够的通气量，连续黑暗培养或光照/黑暗各12小时交替进行，每天搅动一次，进行大规模发酵培养10天，获得含有大量CL和/或AA菌的培养基质。

3)将上述步骤2)所得的沼渣发酵培养好的培养物，包括培养基质、真菌体，加入辅助剂充分混均、干燥，用机械粉碎制成作物异源真菌激活蛋白农药。

实施例2：

1)液体培养CL和/或AA菌种的种子菌：(1)以沼液为基本培养液，按沼液∶水＝4∶1的比例配制，用NaOH或HCl调pH值，添加2.0％的蔗糖或葡萄糖，0.3％的尿素，按250毫升体积容器装入100毫升发酵液的标准装三角瓶，在121℃和0.106MPa的高温、高压条件下灭菌20分钟，冷却后备用；(2)上述三角瓶接入3块菌龄为5天的CL或AA菌块，在液体发酵培养条件为150rpm，28℃的恒温摇床上振荡发酵培养7天，待形成大量菌丝团后终止发酵；(3)滤干发酵液获得菌丝团，粉碎菌丝团作为二级种子菌用于下述步骤2)的沼渣发酵培养；

2)沼渣培养基的配制及发酵培养，包括以下步骤：(1)培养基的配制，按下列各组分的干物质重量比例混合，优质沼渣∶稗草＝1∶1，蔗糖4.0％，米糠6.0％，尿素0.8％，最后将含水量调节到45％；(2)将上述培养基的初始pH值调节为7.0，在121℃、0.106MPa的高温高压下，灭菌30分钟，冷却后备用；(3)将上述液体发酵培养的菌丝团粉碎体接种在以沼渣为主要基质的固体发酵培养基中，在温度26℃，有足够的通气量，连续黑暗培养或光照/黑暗各12小时交替进行，每天搅动一次，进行大规模发酵培养7天，获得含有大量CL和/或AA菌的培养基质。

3)将上述步骤2)所得的沼渣发酵培养好的培养物，包括培养基质、真菌体，加入辅助剂充分混均、干燥，用机械粉碎制成作物异源真菌激活蛋白农药。

实施例3：

1)液体培养CL和/或AA菌种的种子菌：(1)以沼液为基本培养液，按沼液∶水＝3∶1的比例配制，用NaOH或HCl调pH值，添加3.0％的蔗糖或葡萄糖，0.45％的尿素，按250毫升容器体积装入100毫升发酵液的标准装三角瓶，在121℃和0.107MPa的高温、高压条件下灭菌25分钟，冷却后备用；(2)上述三角瓶接入3块菌龄为7天的CL或AA菌块，在液体发酵培养条件为170rpm，28℃的恒温摇床上振荡发酵培养8天，待形成大量菌丝团后终止发酵；(3)滤干发酵液获得菌丝团，粉碎菌丝团作为二级种子菌用于下述步骤2)的沼渣发酵培养；

2)沼渣培养基的配制及发酵培养，包括以下步骤：(1)培养基的配制，按下列各组分的干物质重量比例混合，优质沼渣∶稗草＝3∶1，蔗糖3.0％，米糠5.5％，尿素5.5％，最后将含水量调节到45％；(2)将上述培养基的初始pH值调节为6.0，在121℃、0.106MPa的高温高压下，灭菌25分钟，冷却后备用；(3)将上述液体发酵培养的菌丝团粉碎体接种在以沼渣为主要基质的固体发酵培养基中，在温度28℃，有足够的通气量，连续黑暗培养或光照/黑暗各12小时交替进行，每天搅动一次，进行大规模发酵培养9天，获得含有大量CL和/或AA菌的培养基质。

3)将上述步骤2)所得的沼渣发酵培养好的培养物，包括培养基质、真菌体，加入辅助剂充分混均、干燥，用机械粉碎制成作物异源真菌激活蛋白农药。

试验1：异源真菌蛋白CL对水稻生长的影响

1.1异源真菌蛋白CL拌种或浸种处理水稻种子对水稻发芽势和秧苗素质的影响

异源真菌蛋白拌种或浸种处理水稻种子，对种子的发芽势和秧苗素质的影响见表1。在发芽萌动初期，异源真菌蛋白处理水稻种子与清水对照相比，提高发芽率，诱导芽和根的伸长。至水稻3叶期时，处理秧苗增高1～2cm；至5叶期时，异源真菌蛋白处理的杂交稻、籼稻的秧苗鲜重分别比清水对照提高16％～38％和54％～70％；至6叶期时，苗高比对照增高4～6cm，杂交稻、籼稻处理的秧苗鲜重分别比清水对照提高34％～72％和12％～31％。说明异源真菌蛋白浸种或者拌种处理水稻种子，能够促进种子的发芽势，秧苗素质提高。

另外，我们在盘栽试验中发现，CL真菌蛋白处理的水稻植株生长速度比清水对照较快，当清水对照尚处在6叶期时，处理的秧苗多数接近6叶1心，说明异源真菌蛋白处理过的秧苗生长速度加快。

                 表1  异源真菌蛋白CL拌种或浸种处理水稻种子对水稻发芽势和秧苗素质的影响

  品种  处理  生长势  3叶期  5叶期  6叶期  发芽率(％)  芽长(cm)  根长(cm)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  杂交稻  拌种  CL  100  5.58  5.14  31.85  0.32  0.04  40.5  0.9^*  0.13^*  50.3^*  2.5^*  0.49^*  CK  97.8  5.32  5.01  30.96  0.26  0.03  40.1  0.77  0.10  44.7  1.86  0.34  浸种  CL  100  5.07  5.27  30.47  0.20  0.04  40.6^*  0.76^*  0.10^*  55.4^*  2.62^*  0.48^*  CK  94.8  4.66  4.57  28.65  0.16  0.03  33.2  0.54  0.07  48.8  1.75  0.31籼稻  拌种  CL  100  3.28  5.94  29.13  0.24  0.03  38.7  0.68^*  0.09^*  52.2^*  1.54  0.28  CK  98  2.48  5.27  27.02  0.24  0.02  37.0  0.44  0.06  45.6  1.37  0.25  浸种  CL  98.7  3.65  5.69  31.19  0.30  0.04  47.3^*  0.83^*  0.13^*  52.52^*  1.90^*  0.37  CK  98.4  3.45  5.26  30.46  0.29  0.03  42.0  0.74  0.11  47.03  1.54  0.32

^*表示在0.05水平有显著差异

1.2异源真菌蛋白CL叶面喷施或浇根处理水稻种子对水稻发芽势和秧苗素质的影响

在秧苗3叶期时用5％真菌蛋白进行叶面喷施和浇根，结果见表2。至6叶期时，无论喷施叶片还是浇根处理秧苗基部，杂交稻处理秧苗鲜重增加45％～68％，籼稻处理秧苗比清水对照增加11％～18％，鲜重增加18％～40％；至7叶期时处理的水稻植株苗比清水对照提高9％～15％，鲜重增加15％～30％，干重亦增加15％～45％。

表2  异源真菌蛋白CL叶面喷施或浇根处理水稻秧苗对水稻秧苗素质的影响

品种生长势  6时期  7叶期  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  杂交稻  叶面喷施  CL  58.77  1.97^*  0.25  71.33^*  3.92^*  0.52^*  CK  58.45  1.52  0.23  63.5  2.78  0.37^*浇根  CL  54.57  0.95^*  0.18  66.2^*  3.13^*  0.45  CK  52.21  0.68  0.15  57.44  2.23  0.31  籼稻  叶面喷施  CL  56.61^*  1.37  0.18  64.09^*  2.54^*  0.37^*  CK  50.91  0.91  0.15  54.8  1.76  0.27浇根  CL  55.52^*  0.95^*  0.14^*  58.84^*  1.96^*  0.28  CK  47.03  0.68  0.10  53.98  1.5  0.24

^*表示在0.05水平有显著差异。

将表1与表2中的数据比较分析可以看出，在水稻6叶期时，使用不同的方法对水稻的秧苗素质影响不同。采用浸种或拌种处理，与时面喷施或浇根处理相比，更能促进干物质的积累，鲜重和干重增加；叶面喷施或浇根处理，能增加植株高度。

试验2：异源真菌蛋白CL对蔬菜生长的影响

用异源真菌蛋白预处理蔬菜种子，然后用异源真菌蛋白喷施叶片或浇根处理蔬菜小苗基部，结果见表3。浸种预处理过的蔬菜种子发芽率提高，黄豆、番茄、辣椒和白菜的发芽率各自提高20％、8％、17％以及8％。在第一次小苗处理5天后，黄豆、番茄、辣椒和白菜处理的小苗高度比清水对照分别提高了24％～32％、11％～12％、25％～26％和12％～23％。在第二次处理10天后，黄豆、番茄、辣椒和白菜处理的小苗比清水对照分别提高了23％～26％、12％～19％、23％～28％和9％～30％、根系伸长增加了30％～34％、21％～33％、16％～31％和5％～13％，鲜重增加21％～37％、26％～34％、28％～63％和17％～21％，干重增加5％～22.5％、17％～23％、20％～60％和40％。

                     表3  异源真菌蛋白CL对蔬菜生长的影响

蔬菜种类处理发芽率  播后20天  播后35天  苗高(cm)  根长(cm)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  黄豆 浸种+喷施  60  26.80  7.33  33.40^*  2.31^*  0.42 浸种+浇根  28.70^*  7.56  34.10^*  2.61^*  0.49 CK  50  21.60  5.62  27.00  1.90  0.40  番茄 浸种+喷施  81  19.80^*  4.55  25.49^*  2.21  0.20^* 浸种+浇根  19.9^*  5.00  27.00^*  236  0.21^* CK  75  17.70  3.75  22.67  1.75  0.17  辣椒 浸种+喷施  81  10.74^*  3.15  17.07^*  0.59^*  0.06 浸种+浇根  10.84^*  3.55  17.71^*  0.75^*  0.08^* CK  69  8.57  2.70  13.81  0.46  0.05  白菜 浸种+喷施  93  14.85^*  5.10  18.19^*  0.97  0.07 浸种+浇根  16.20^*  5.52  21.86^*  0.94  0.07^* CK  86  13.16  4.85  16.70  0.80  0.05

^*表示在0.05水平有显著差异，表中数值统一均保留2位小数。

从结果可以看出，无论是叶面喷施，还是浇根处理，都能促进蔬菜小苗的生长，异源真菌蛋白处理后，与清水对照相比，处理后蔬菜小苗的高度平均增高了9％～32％，根系伸长了5％～33％，鲜重增重了17％～63％。同时可以看到浇根处理比喷洒处理更有利于蔬菜的生长。

同时我们还观察到一个有趣的现象，无论是喷施处理还是浇根处理，都能加深蔬菜叶片的颜色，提高了叶片的光合作用，有利于物质能量的积累。且能观察到处理过的番茄叶片颜色明显比清水对照加深。

试验3：不同的生物农药(药肥)拌种处理水稻种子，对水稻生长的影响

从表4的试验结果可以看出，不同的异源真菌蛋白处理和植力升拌种处理水稻种子，对种子的发芽没有抑制作用，可促进根和芽的伸长；但激活蛋白拌种处理种子，会抑制种子的萌发率，降低种子的生活力，对水稻后期生长不利。异源真菌蛋白拌种处理后的秧苗在5叶期时与对照稍有差异，在6叶期时效果较为明显。对杂交稻，6叶期时使苗高比清水对照增高12％～13％，鲜重分别提高34％～74％。对籼稻，6叶期时使苗高比清水对照增高12％～14％，鲜重分别提高12％～31％。不同的促生物质处理粳稻种子，对株高的没有明显影响，但对增加干物质有一定的促进作用。如异源真菌蛋白拌种处理后，能增加鲜重增加50％左右。

             表4  不同的促生物质拌种处理水稻种子对水稻生长的影响

  品种  处理  发芽势  3叶期  5叶期  6叶期  芽长(cm)  根长(cm)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)干重(g)  杂交稻  CL  5.58  5.14  31.85  0.32  0.04  40.5b  0.9b  0.13b  50.3a  2.5bc  0.49b  AA  5.34  5.16  32.02  0.33  0.04  41.4ab  1.07a  0.17a  50.9a  3.24ab  0.51b  CL+AA  5.06  5.07  31.10  0.30  0.04  42.3a  1.04a  0.13b  52.3a  3.87a  0.64a  植力升  5.2  5.13  32.9  0.24  0.03  37.7c  0.58c  0.09d  46.0b  1.78cd  0.32b  激活蛋白  3.56  2.41  30.96  0.24  0.03  37.2c  0.57c  0.09d  43.2b  1.40d  0.25b  清水对照  5.32  5.01  30.96  0.26  0.03  40.5ab  0.77bc  0.10cd  44.7b  1.86cd  0.34b籼稻  CL  3.28  5.94  29.13  0.24  0.03  38.7b  0.68bc  0.09a  52.2a  1.54ab  0.28ab  AA  3.45  5.93  28.51  0.24  0.04  40.2a  0.75a  0.09a  51.1a  1.80a  0.33a  CL+AA  2.77  5.02  27.17  0.21  0.03  39.8b  0.59b  0.10a  49.7a  1.52ab  0.28ab  植力升  2.74  5.52  28.75  0.26  0.03  35.6d  0.47d  0.08a  45.9b  1.72ab  0.32ab  激活蛋白  -  -  26.85  0.21  0.03  24.2e  0.28e  0.06b  39.2c  1.17c  0.19c  清水对照  2.48  5.27  27.02  0.24  0.02  37.0cd  0.44cd  0.06b  45.6b  1.37bc  0.25bc  粳稻  CL  -  -  27.52  0.29  0.03  37.6  1.19a  0.17a  43.11  2.79a  0.33abc  AA  -  -  27.51  0.29  0.03  35.9  1.17a  0.16a  45.16  2.76a  0.36abc  CL+AA  -  -  27.36  0.30  0.04  34.9  0.96b  0.15ab  41.88  2.85a  0.42a  植力升  -  -  27.21  0.27  0.02  34.5  0.77c  0.12c  39.25  1.65b  0.22c  激活蛋白  -  -  27.65  0.27  0.03  33.5  0.86bc  0.13bc  43.85  2.48ab  0.39ab  清水对照  -  -  26.65  0.28  0.03  35.2  0.76c  0.11c  40.92  1.85b  0.25bc

试验4：不同的生物农药(药肥)浸种处理水稻种子，对水稻生长的影响

从表5中可以看出，不同的生物农药(药肥)使用浸种方式处理种子，在种子发芽萌动初期和秧苗3叶期之前，都没有显著差异。至水稻生长到5叶期时，不同的处理之间差异明显。异源真菌蛋白处理的秧苗素质均好于其它处理。异源真菌蛋白处理的秧苗株高增加。单个异源真菌蛋白处理杂交稻促进株高增加17％～22％，鲜重增加59％～72％，使籼稻株高增加9.2％～12％，鲜重增加13％～18％。至6叶期时效果亦显著。而植力升和激活蛋白浸种处理种子后，对水稻秧苗的生长没有影响。

                         表5  不同的促生物质浸种处理水稻种子对水稻生长的影响

  品种  处理  发芽势  3叶期  5叶期  6叶期  芽长(cm)  根长(cm)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)干重(g)杂交稻  CL  5.07  5.27  30.47  0.20  0.04  40.6a  0.76a  0.10^*  55.4a  2.62a  0.48a  AA  5.02  4.92  30.87  0.18  0.04  38.9a  0.70a  0.10a  52.3b  2.48a  0.46a  CL+AA  4.83  4.85  29.65  0.19  0.04  40.7a  0.76a  0.10a  53.3ab  2.79a  0.37ab  植力升  3.93  3.62  27.07  0.14  0.04  33.0b  0.46b  0.07a  47.9d  1.78b  0.29c  激活蛋白  4.75  4.36  28.51  0.14  0.03  33.9b  0.44b  0.06b  47.2d  1.81b  0.29c  清水对照  4.66  4.57  28.65  0.16  0.03  33.2b  0.44b  0.07b  48.8cd  1.75b  0.31bc籼稻  CL  3.65  5.69  31.19  0.30  0.04  473a  0.83a  0.13a  52.5b  1.90b  0.37bc  AA  3.68  5.96  32.42  0.32  0.03  47.2a  0.84a  0.13a  53.1ab  2.29a  0.41ab  CL+AA  3.15  6.18  32.44  0.36  0.03  45.9a  0.88a  0.12a  55.7a  2.48a  0.45a  植力升  3.54  4.86  30.2  0.28  0.03  37.0c  0.62c  0.09b  49.2c  1.24c  0.23e  激活蛋白  3.06  5.02  30.1  0.24  0.02  39.2bc  0.66bc  0.07b  49.7c  1.29c  0.26de  清水对照  3.45  5.26  30.46  0.29  0.03  42.0b  0.74b  0.07b  47.1c  1.54c  0.32cd

试验5：不同的生物农药(药肥)叶面喷施水稻叶片对水稻生长的影响

将不同的促生物质在水稻3叶期时，进行叶面喷施，对杂交稻在6叶期时表现不是很明显，但至7叶期时，与清水对照相比，单个异源真菌蛋白处理的秧苗株高增加了8～9cm，株高增加了12％～13％，鲜重提高了32％～41％；对籼稻，在6叶期时，单个异源真菌蛋白处理的秧苗株高与鲜重均与清水对照有显著差异，分别增加了6.6％～11％和35％～50％，至7叶期时，亦比对照增加了12％～16％和30％～44％。此外，可以看到用激活蛋白处理杂交稻，对秧苗的生长有促进作用，特别是增加干物质的积累效果明显，与清水对照相比，能够增加干重达到51％。

              表6  不同的促生物质叶面喷施水稻叶片对水稻生长的影响

品种处理  6叶期  7叶期  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)杂交稻  CL  58.77  1.97a  0.25  71.30a  3.92a  0.52a  AA  58.51  1.65bc  0.22  72.20a  3.67ab  0.54a  CL+AA  57.11  1.71abc  0.26  58.40c  3.20bc  0.46b  植力升  57.97  1.87ab  0.24  57.37c  2.17c  0.46b  激活蛋白  59.2  1.87ab  0.25  67.33b  3.65ab  0.56a  清水对照  58.45  1.52c  0.23  63.50b  2.78c  0.37c籼稻  CL  56.61a  1.37a  0.18a  64.09a  2.54a  0.37a  AA  54.31ab  1.23ab  0.19a  61.91a  2.30ab  0.36ab  CL+AA  51.40c  1.03bc  0.17ab  5327b  2.00bc  031bc  植力升  53.57bc  1.02bc  0.17ab  56.61b  1.76c  0.27c  激活蛋白  -  -  -  -  -  -  清水对照  50.91c  0.91c  0.15b  54.80b  1.76c  0.27c

试验6：不同的生物农药(药肥)浇根处理水稻秧苗对水稻生长的影响

在3叶期时，将不同的促生物质稀释液浇入水稻基部，至6叶期后观察调查秧苗素质。可以看到与植力升、激活蛋白和清水对照相比，不同组合的异源真菌蛋白处理对水稻秧苗株高的增加和干物质的积累都有一定的促进作用。与清水对照相比，在6叶期时，异源真菌蛋白处理的秧苗株高增加4～5cm，提高了4.5％～11％，鲜重增加了22％～31％，至7叶期时，异源真菌蛋白处理与其它处理部分达到极显著差异，株高增加了7.3％～15％，鲜重增重了7.3％～40％。同时可以看到至7叶期时，植力升和激活蛋白处理的秧苗鲜重下降，另外混合的异源真菌蛋白处理的秧苗鲜重也下降了，说明这三个不同的处理在不利于水稻后期秧苗干物质的积累。

               表7  不同的促生物质浇根处理水稻秧苗对水稻生长的影响

品种处理   6叶期  7叶期  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)  苗高(cm)  鲜重(g)  干重(g)杂交稻  CL  54.57abc  1.33ab  0.181a  66.20a  3.13a  0.45a  AA  56.16a  1.43a  0.17a  64.01ab  2.81a  0.42a  CL+AA  55.8ab  1.16bc  0.16ab  62.64ab  1.74c  0.32b  植力升  53.7abc  1.15bc  0.14b  61.14bc  1.50c  0.28b  激活蛋白  53.25bc  1.13bc  0.14b  63.48ab  1.50c  0.37b  CK  52.21c  1.09c  0.15ab  57.44c  2.23b  0.31b籼稻  CL  52.52a  0.95a  0.14a  58.84a  1.96a  0.28a  AA  51.1ab  0.75bc  0.11b  57.84a  1.61b  0.23ab  CL+AA  50.36b  0.83b  0.11b  57.96a  1.38b  0.24ab  植力升  49.11bc  0.74bc  0.10bc  53.84b  1.06c  0.20b  激活蛋白  50.82ab  0.77bc  0.10bc  52.78b  1.02c  0.20b  清水对照  47.03c  0.68c  0.10bc  53.98b  1.50c  0.24ab

试验结论：

1.采用不同的生物农药(药肥)处理水稻进行对比试验，可以看出，单个异源真菌蛋白试剂对水稻秧苗的生长有一定的促进作用，主要表现在几个方面：a.用异源真菌蛋白处理水稻的种子(含拌种或浸种)，在秧苗生长初期效果尚不明显，至5叶期后促生效果逐渐显现。说明用异源真菌蛋白处理水稻种子，可能会改善植株根系后期生长的土壤环境，促进植株对土壤养分的吸收与利用。b.用异源真菌蛋白处理3时期水稻秧苗(含叶面喷施和浇根)，至6叶期时效果效果不是很突出，随着生育期的延长，至7叶期时，对稻苗的株高增加和干物质的积累效果都非常明显。且从整体效果来看，异源真菌蛋白CL处理的效果要好于AA处理效果。

2.混合的异源蛋白浸种或拌种处理种子对水稻秧苗的生长有一定的促进作用，但叶片喷施和浇根效果不明显。

3.激活蛋白拌种处理水稻种子，不利于种子的萌发，甚至对种子的发芽有抑制作用。激活蛋白浇根处理水稻秧苗反而抑制了水稻干物质的积累。

4.植力升喷施叶片或浇根处理水稻，均不利于水稻秧苗的生长，用以处理水稻种子，早期有一定的效果，后期渐弱。

5.异源真菌蛋白处理不同类型的水稻品种(杂交稻、籼稻和粳稻)，效果不同。对于杂交稻，相对于籼稻而言，异源真菌蛋白处理后至秧苗表现效果出来的时间较长，且效果不尽相同。异源真菌蛋白处理杂交稻能促进秧苗株高增加11％～22％，鲜重提高25％～74％；异源真菌蛋白处理籼稻能促进秧苗株高增加9％～14％，鲜重提高7％～44％；异源真菌蛋白处理粳稻对株高的没有影响，但能提高鲜重达50％。说明，异源真菌蛋白更能促进杂交稻和粳稻植株的干物质的积累。

6.试验结果表明，使用不同的方法对水稻的秧苗素质影响不同。采用浸种或拌种处理，与叶面喷施或浇根处理相比，更能促进干物质的积累，植株的鲜重和干重增加；而叶面喷施或浇根处理，能增加植株高度。将异源真菌蛋白浸种与拌种相比，可以发现浸种处理对水稻的促生诱导作用效果较快，将喷施叶片与浇根处理的效果相比，浇根处理效果比喷施效果快。说明，不同的处理方式对水稻的促生作用不完全一样。

7.为了增强异源真菌蛋白的促生效果，可以在种子萌动初期浸种或者拌种处理种子，然后至秧苗期，再进行浇根或者喷施叶片处理，进一步促进水稻秧苗的生长发育。