复方四维女贞子制剂的质量控制方法

摘要

本发明是一种复方四维女贞子制剂的质量控制方法，它包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中的鉴别包括对维生素B1、维生素B6、维生素E的鉴别；检查：应符合胶囊剂、片剂、颗粒剂项下有关的各项规定；含量测定包括以维生素B1、维生素B6、维生素E为对照品的含量测定方法；与现有技术采用的紫外分光光度法相比，本发明对含量的测定更加有效，质量检测标准的准确性和先进性更高，可有效的控制药物的质量，使药物的质量可靠、稳定，保证了药物的治疗效果和用药安全。

说明书

技术领域：本发明涉及一种复方四维女贞子制剂的质量控制方法，属于药品的技术领域。

背景技术：在复方四维女贞子制剂的原有质量标准中，由于检测参数少、质量控制标准低，无法有效控制药物的质量，因此生产的产品质量可靠性不高、质量不稳定，严重影响了药品的治疗效果且无法保证用药的安全。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种复方四维女贞子制剂的质量控制方法，本质量控制方法可有效的控制药物的质量，使药物的质量可靠、稳定，保证药物的治疗效果和用药安全。

本发明所述复方四维女贞子制剂由下列重量的药物制成包括胶囊剂、片剂、颗粒剂在内的所有可能的复方剂型：谷维素10～20g、维生素B₁5～15g、维生素B₆5～15g、维生素E5～15g、维生素H1500～2005μg、牛磺酸10～50g、淫羊藿浸膏50～100g、女贞子浸膏80～150g、熟地浸膏40～80g、刺蒺藜浸膏40～80g。

本发明是这样实现的：本发明所述质量控制方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中性状包括：对于胶囊剂，产品内容物为浅棕色至棕褐色颗粒或粉末；对于片剂，药物显浅棕色至棕褐色；对于颗粒剂，产品为浅棕色至棕褐色的颗粒；鉴别包括对维生素B₁、维生素B₆、维生素E的鉴别；检查：应符合胶囊剂、片剂、颗粒剂项下有关的各项规定；含量测定包括以维生素B₁、维生素B₆、维生素E为对照品的含量测定方法。

所述鉴别为：(1)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂适量，除去包装，研细，加水5～20ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯10～30ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2～10ml使溶解，取乙醇液1～3ml加盐酸1～3ml、镁粉约0.1～0.3g，溶液渐渐显橙色或棕红色；(2)取上述剩余的乙醇液，浓缩至约0.5～2ml，滴在滤纸上，置波长为365nm的紫外光灯下检视，显棕色斑点；喷以0.5～2％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强；(3)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1～2份，研细，加氯仿10～30ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2～8ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液0.5～2ml，在波长为365nm的紫外光灯下检视，显黄绿色荧光；(4)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1～2份，研细，加水10～30ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液2～8ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应；(5)取上述剩余的滤液1～3ml，加水稀释至5～15ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。(6)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂2～6份，研细，加水10～30ml，搅拌使溶解，取滤液1～3ml，加氢氧化钠0.1～0.5g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2～4小时，放冷，残渣加水3～8ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

维生素B₁、维生素B₆的含量测定方法包括以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，0.01～0.05mol/L乙腈∶磷酸二氢钾为1～10∶99～90为流动相的高效液相色谱法；维生素E的含量测定方法包括以硅酮OV-17为固定相的气相色谱法。

具体的说，所述维生素B₁、维生素B₆的含量测定方法包括：

(1)色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.01～0.05mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝1～10∶99～90为流动相；检测波长为276nm，理论板数按维生素B₁峰计算应不低于10～3000。

(2)对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.05～0.3mg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备：精密称取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂适量，相当于维生素B₁5～20mg，维生素B₆5～20mg，置50～100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E的含量测定包括：

(1)色谱条件与系统适用性实验：以OV-17的硅酮为固定相，涂布浓度为1～5％；柱温为200～300℃，理论板数按维生素E峰计算应不低于300～1000，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于1.5以上。

(2)校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.25～1mg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取维生素E对照品10～30mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

(3)测定法：取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂的内容物，混匀，精密称取适量，相当于维生素E10～30mg，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5～20ml，密塞，振摇使溶解，取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

更准确的说：

所述鉴别为：

(1)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂适量，除去包装，研细，加水10ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯15ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，取乙醇液2ml加盐酸2ml、镁粉约0.2g，溶液渐渐显橙色或棕红色；(2)取上述剩余的乙醇液，浓缩至约1ml，滴在滤纸上，置波长为365nm的紫外光灯下检视，显棕色斑点；喷以1％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强；(3)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1份，研细，加氯仿20ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液1ml，在波长为365nm的紫外光灯下检视，显黄绿色荧光；(4)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1份，研细，加水20ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液5ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应；(5)取上述剩余的滤液2ml，加水稀释至10ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。(6)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂4份，研细，加水20ml，搅拌使溶解，取滤液2ml，加氢氧化钠0.3g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水5ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

所述维生素B₁、维生素B₆的含量测定方法包括：

(1)色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝3∶97为流动相；检测波长为276nm，理论板数按维生素B₁峰计算应不低于1500。

(2)对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.1mg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备：精密称取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂适量，相当于维生素B₁ 10mg，维生素B₆10mg，置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E的含量测定包括：

(1)色谱条件与系统适用性实验：以OV-17的硅酮为固定相，涂布浓度为2％；柱温为265℃，理论板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2以上

(2)校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取维生素E对照品20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

(3)测定法：取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂的内容物，混匀，精密称取适量，相当于维生素E 20mg，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

总的来说，本发明的复方四维女贞子制剂的质量控制方法包括性状、鉴别、检查、含量测定，其中：

所述性状包括：对于胶囊剂，产品内容物为浅棕色至棕褐色颗粒或粉末；对于片剂，药物显浅棕色至棕褐色；对于颗粒剂，产品为浅棕色至棕褐色的颗粒；

所述鉴别包括：(1)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂适量，除去包装，研细，加水10ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯15ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，取乙醇液2ml加盐酸2ml、镁粉约0.2g，溶液渐渐显橙色或棕红色；(2)取上述剩余的乙醇液，浓缩至约1ml，滴在滤纸上，置波长为365nm的紫外光灯下检视，显棕色斑点；喷以1％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强；(3)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1份，研细，加氯仿20ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液1ml，在波长为365nm的紫外光灯下检视，显黄绿色荧光；(4)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂1份，研细，加水20ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液5ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应；(5)取上述剩余的滤液2ml，加水稀释至10ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。(6)取复方四维女贞子胶囊、片剂或颗粒剂4份，研细，加水20ml，搅拌使溶解，取滤液2ml，加氢氧化钠0.3g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水5ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色；

所述检查：应符合胶囊剂、片剂、颗粒剂项下有关的各项规定；

所述含量测定方法包括：

维生素B₁、维生素B₆的含量测定：(1)色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝3∶97为流动相；检测波长为276nm，理论板数按维生素B₁峰计算应不低于1500；(2)对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.1mg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备：精密称取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂适量，相当于维生素B₁10mg，维生素B₆10mg，置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

维生素E的含量测定包括：(1)色谱条件与系统适用性实验：以OV-17的硅酮为固定相，涂布浓度为2％；柱温为265℃，理论板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2以上；(2)校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液，另取维生素E对照品20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子；(3)测定法：取复方四维女贞子胶囊剂、片剂或颗粒剂的内容物，混匀，精密称取适量，相当于维生素E 20mg，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

为对上述质量控制方法进行验证，申请人进行了一系列的试验、研究，其结果如下：

【含量测定】

(一)维生素B₁和维生素B₆：

1.仪器与试药：

仪器：岛津LC-10Avp高效液相色谱仪；SPD-10AM二极管阵列检测器；CLASS-VP色谱工作站；色谱柱：大连依利特ODS色谱柱(柱号E1423925)

试剂与试药：维生素B₆对照品(中国药品生物制品检定所提供含量测定用对照品，批号：0116-9801)；维生素B₁对照品(用原料纯化得百分浓度为99.64％)；磷酸二氢钾(分析纯)；乙腈(分析纯)；盐酸(分析纯)；水为重蒸馏水。

2.色谱条件的选择：采用ODS(C₁₈)250×4.6mm色谱柱，经过实验，以0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾为3∶97(pH＝3)为流动相的分离效果最佳。检测波长为276nm，流速为0.8ml/min，柱温30℃，理论塔板数以维生素B₁记，不得少于1500。

3.系统适应性试验：在标准操作条件下，分别制备本处方中除维生素B1和维生素B6外其余各原料制成的制剂，用二级管阵列检测器检测。阴性对照未见维生素B1、维生素B6的吸收峰，样品中维生素B1和维生素B6的吸收峰及光谱纯度与对照品完全一致。经过多次实验，理论塔板数以维生素B₁记不得少于1500。

4.线性关系的考察：(1)维生素B₁：精密称取维生素B₁对照品0.0502g于50ml容量瓶中，用水或甲醇定容。精密量取10ml于100ml容量瓶中，用水定容。得到浓度为0.1004mg/ml的对照品溶液。分别吸取4、8、12、16、20μl进样，记录色谱。以峰面积(mAU.s)对进样量(μg)回归计算，得到的直线方程，回归方程为C＝9.123×10^-7A-0.01456，相关系数r＝0.99959。说明进样量在0.40μg～2.0μg范围内线性关系良好。结果见表1。

                         表1维生素B₁标准曲线

  体积(μl)  4  8  12  16  20  面积(mAU.s)  进样量(μg)  446023  0.4016  890751  0.8032  1356977  1.2048  1797034  1.6064  2192120  2.008

以精密度试验测得平均峰面积值按一点法计算校正因子，得一点法方程为C＝8.57253×10^-7A。将线性段低浓度点的峰面积测得值446023分别代入回归方程C＝9.123×10^-7A-0.01456与原点方程C＝8.57253×10^-7A计算，分别得0.3923和0.3824μg，其平均相对偏差为1.3％，说明回归方程的截距较小，可以忽略，可用一点校正法计算含量。

(2)维生素B₆：精密称取维生素B₆对照品0.0501g于50ml容量瓶中，用水或甲醇定容。精密量取10ml至100ml容量瓶中，用水定容，得到浓度为0.1002mg/ml的对照品溶液。分别吸取4、8、12、16、20μl进样，记录色谱。以峰面积(mAU.s)对进样量(μg)回归计算，得到直线方程，回归方程为C＝5.89324×10^-7A-0.03438，相关系数r＝0.9996。说明进样量在0.40μg～2.0μg范围内线性关系良好。结果见表2。

                          表2维生素B₆标准曲线

  体积(μl)  4  8  12  16  20  面积(mAU.s)  进样量(μg)  711271  0.4008  1428382  0.8016  2126499  1.2024  2808132  1.6032  3418909  2.004

以精密度试验测得平均峰面积值按一点法计算校正因子，得一点法方程为C＝5.49001×10^-7A。将线性段低浓度点的峰面积测得值711271分别代入回归方程C＝5.89324×10^-7A-0.03438与原点方程C＝5.49001×10^-7A计算，分别得0.3848和0.3905μg，其平均相对偏差为0.73％，说明回归方程的截距较小，可以忽略，可用一点校正法计算含量。

5.精密度试验：取维生素B₁，维生素B6混合对照品溶液10μl，各进样5次，记录色谱，相对标准偏差(RSD)分别为0.35％、0.47％，可看出精密度良好，结果见表3、表4。

                   表3维生素B₁精密度试验

 试验次数 1 2 3 4 5  平均值 RSD(％) 峰面积(A) 1174495 1173873 1164517 1170017 1173011  1171182.6 0.35

                          表4维生素B₆精密度试验

 试验次数 1 2 3 4 5  平均值 RSD(％) 峰面积(A) 1838483 1824407 1814253 1823904 1824616  1825132.6 0.47

6.重复性试验：(1)维生素B₁重复性：取同一批号样品5份，(相当于维生素B₁ 10mg)，依法处理，进样，记录色谱图，计算得到维生素B₁平均值为29.06mg/g，RSD％为1.23％，表明重复性良好。结果见表5。

                          表5维生素B₁重复性试验

  试验次数  1  2  3  4  5  平均值 RSD％  含量(mg/g)  29.59  28.62  29.12  28.87  29.09  29.06 1.23

(2)维生素B₆重复性：取同一批号样品5份，(相当于维生素B₆10mg)，依法处理，进样，记录色谱图，计算得到维生素B₆平均值为29.20mg/g，RSD％为2.27％，表明重复性良好。结果见表6。

                       表6维生素B₆重复性试验

  试验次数  1  2  3  4  5  平均值 RSD％  含量(mg/g)  29.63  29.97  28.23  29.00  29.16  29.20 2.27

7.回收率试验：

(1)维生素B₁取与重复性试验同一批号的样品，精密称定，分别加入一定量的对照品(取浓度为2.011mg/ml维生素B₁对照品溶液2.5ml、4ml、5ml)，依法处理，进样，记录色谱，计算测得回收率。平均回收率为99.34％，RSD为0.54％，说明回收良好，结果见表7。

                               表7维生素B₁加样回收试验

  试  验  组  取样  量(g)  取样相当  于维生素  B1(mg)  添加维生  素B₁对照品  (mg)  测得维生  素B₁的量  (mg)  回收率  (％)  平均  回收率  (％)  RSD  (％)  1  0.1592  0.1711  4.626  4.972  5.027  9.582  9.880  99.27  98.81  99.34  0.54  2  0.2797  0.2526  8.128  7.341  8.044  16.091  15.416  99.50  100.2  3  0.3779  0.3950  10.982  11.479  10.055  20.928  21.265  99.48  98.75

(2)维生素B₆取与重现性试验同一批号的样品，精密称定，分别加入一定量的对照品(取浓度为2.153mg/ml维生素B6对照品溶液2.5ml、4ml、5ml)，依法处理，进样，记录色谱，计算得回收率。平均回收率为100.88，RSD％为0.60％，说明回收良好，结果见表8。

                           表8 维生素B₆加样回收试验

  试  验  组  取样量  (g)  取样相当  于维生素  B₆(mg)  添加维生  素B₆对照  品(mg)  测得维生  素B₆的量  (mg)  回收率  (％)  平均  回收率  (％)  RSD  (％)  1  0.1592  0.1711  4.649  4.996  5.382  10.106  10.392  100.75  100.14  00.88  0.60  2  0.2797  0.2526  8.167  7.376  8.612  17.016  16.055  101.41  100.42  3  0.3779  0.3950  11.035  11.534  10.765  22.158  22.562  101.64  101.18

8.样品含量测定计算法：本测定法采用外标法(《中国药典》2005年版二部附录VI D)计算含量，其公式如下：

(1)含量(Mr)＝Ax×Mr/Ar，当对照品溶液以mg/ml表示时，Mr即表示对照品为mg/ml的浓度单位，同时测得样品的浓度也为mg/ml。拟定每粒含维生素B₁，维生素B₆以mg单位表示，即mg/粒，代入下式计算即为样品的含量(mg/粒)：

(2)含量(mg/粒)＝Mx×P/(Wx/V)

式中Wx为样品的称量(mg)，V为提取样品的溶剂量(ml)P为平均粒重(mg)。合并(1)、(2)式，得到含量计算公式：

含量(mg/粒)＝Ax×Mr×V×P/(Ar×Wx)

             表9维生素B₁、维生素B₂ 10批样品含量测定

  批号               维生素B₁              维生素B₂       含量(mg/          粒)  均值(mg/粒)     含量(mg/粒)  均值(mg/粒)  20030911  20030913  20030915  20030917  20030919  20030921  20030923  20030925  20030927  20030929  9.87  10.05  9.98  9.95  9.93  10.12  9.88  9.91  9.89  9.96  9.90  9.98  9.86  9.84  9.82  9.95  9.95  9.96  9.81  10.08  9.88  10.02  9.92  9.90  9.88  10.04  9.92  9.94  9.85  10.02  9.68  9.87  9.82  9.90  9.75  9.83  9.92  9.79  9.85  9.81  9.79  9.81  9.89  9.82  9.88  9.69  9.83  9.85  9.88  9.75  9.74  9.84  9.86  9.86  9.82  9.76  9.88  9.82  9.86  9.78  总平均值              9.94              9.82

根据10批样品含量测定结果的平均值：维生素B₁为9.94mg/粒，为标示量的99.4％，维生素B₆为9.82mg/粒，为标示量的98.2％。各次结果均在标示量90.0％～110.0％的限度内。

(二)维生素E：

1.仪器与试药：

仪器：日本岛津GC-8A气相色谱仪。

试剂与试药：维生素E对照品(中国药品生物制品检定所提供含量测定用对照品，批号：10062-0007)，正三十二烷(分析纯)；正己烷(分析纯)。

2.色谱条件的选择：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％，柱温265，检测器为氢火焰离子化检测器，温度290℃；理论塔板数以维生素E峰记不得少于500。

3.线性关系的考察：精密称取正三十二烷50.50mg于100ml容量瓶中，加正己烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。精密量取维生素E对照品的正己烷溶液(6.114mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分置容量瓶中，加内标溶液10ml，摇匀，分别吸取2μl注入气相色谱仪，记录色谱。以进样量(μg)纵为坐标，对照品与内标峰面积积分比为横坐标，绘制标准曲线，并得到直线方程为C＝5.351A+0.02901，相关系数r＝0.99930。说明进样量在6.114μg～30.570μg范围内线性良好。

                           表10维生素E标准曲线

  进样量(μg)  6.114  12.228  18.342  24.456  30.570  对照品峰面积  内标峰面积  125845  110324  238378  104905  382145  113096  460703  98533  644704  114230  峰面积比值  1.141  2.272  3.379  4.676  5.644

拟合成过原点的线性方程为C＝5.358A。将线性段低浓度点测得的峰面积比值1.141分别代入回归方程C＝5.351A+0.02901与原点方程C＝5.358A计算，分别得6.1345和6.1135μg，其平均相对偏差为0.17％，说明回归方程的截距较小，可以忽略，可用一点校正法计算含量。

4.精密度试验：取维生素E对照品溶液2μl，重复进样5次，记录色谱。以峰面积比值计算RSD％为0.88％，可看出精密度良好。

                                   表11维生素E精密度试验

  试验次数  1  2  3  4  5  平均值  RSD％  对照品峰面积  内标峰面积  238655  105135  239246  105216  235689  104790  235477  103421  240016  106607  2.264  0.58  峰面积比值  2.270  2.274  2.249  2.277  2.251

5.重复性试验：取同一批号样品5份，(相当于维生素E 20mg)，按含量测定方法处理，进样，记录色谱图，计算得到维生素E平均值为32.15mg/g，RSD％为2.12％，表明重复性良好。结果表12。

                            表12重复性试验

  试验次数  1  2  3  4  5  平均值 RSD％  含量(mg/g)  32.43  31.82  33.21  31.79  31.50  32.15 2.12

6.回收率试验：取与重现性试验同一批号的样品，精密称定，分别加入一定量的对照品(取浓度为6.114mg/ml维生素E对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml)，按含量测定方法处理，进样，记录色谱，计算测得回收率。平均回收率为99.03％，RSD为2.64％，说明回收良好，结果见表13。

                            表13维生素E加样回收试验

  试  验  组取样量(g)取样相当于维生素E(mg)添加维生素E对照品(mg)测得维生素E1的量(mg)回收率(％)  平均  回收率  (％)  RSD  (％)  10.21270.20986.8406.7456.11412.72612.65096.6796.90100.07   99.03   2.64  20.2982 0.30029.586 9.6519.17118.764 18.707100.07 98.81  30.37230.372611.97011.98012.22823.96324.65398.04103.97

7.样品含量测定计算法：本测定法采用外标法(《中国药典》2005年版二部附录VI D)计算含量，其公式如下：

含量(Mr)＝Ax×Mr/Ar，当对照品溶液以mg/ml表示时，Mr即表示对照品为mg/ml的浓度单位，同时测得样品的浓度也为mg/ml。拟定每粒含维生素E以mg单位表示，即mg/粒，代入下式计算即为样品的含量(mg/粒)：

含量(mg/粒)＝Mx×P/(Wx/V)，

式中Wx为样品的称量(mg)，V为提取样品的溶剂量(ml)P为平均粒重(mg)。合并(1)、(2)式，得到含量计算公式：含量(mg/粒)＝Ax×Mr×V×P/(Ar×Wx)

                       表14维生素E 10批样品含量测定

  批号       含量(mg/粒) 均值(mg/粒)  总平均值(mg/粒)  20030911  9.92  9.98  9.95  10.03  20030913  10.33  10.15  10.24  20030915  9.90  10.03  9.96  20030917  9.84  9.92  9.88  20030919  10.28  9.99  10.14  20030921  9.96  9.74  9.85  20030923  9.97  10.36  10.16  20030925  9.79  9.95  9.87  20030927  10.16  10.05  10.10  20030929  10.09  10.28  10.18

根据10批样品含量测定结果的平均值：维生素E为10.03mg/粒，为标示量的100.3％。各次结果均在标示量90.0％～110.0％的限度内。

本发明利用维生素B₁、B₆具有的特征性吸收光谱，采用高效液相色谱法控制维生素B₁、B₆的含量，用气相色谱法控制维生素E的含量，与现有技术采用的紫外分光光度法相比，对含量的测定更加有效，质量检测标准的准确性和先进性更高，可有效的控制药物的质量，使生产出的药物的质量可靠、稳定，保证了药物的治疗效果和用药安全。

具体实施方式：

本发明的实施例1：复方四维女贞子胶囊剂的质量控制方法

【性状】内容物为棕褐色粉末。

【鉴别】(1)取复方四维女贞子胶囊剂2粒，除去胶囊，研细，加水10ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯15ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，取乙醇液2ml加盐酸2ml、镁粉约0.2g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约1ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以1％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子胶囊剂1粒，除去胶囊，研细，加氯仿20ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约1ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子胶囊剂1粒，除去胶囊，研细，加水20ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液5ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液2ml，加水稀释至10ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子胶囊剂4粒，除去胶囊，研细，加水20ml，搅拌使溶解，取滤液2ml，加氢氧化钠0.3g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水5ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝3∶97为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁10mg，维生素B₆10mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VE)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％；柱温为265℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E20mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例2：复方四维女贞子胶囊剂的质量控制方法

性状：内容物为棕褐色粉末。

鉴别：(1)取复方四维女贞子胶囊剂1粒，除去胶囊，研细，加水5ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯10ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，取乙醇液1ml加盐酸1ml、镁粉约0.1g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约0.5ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以0.5％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子胶囊剂1粒，除去胶囊，研细，加氯仿10ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约0.5ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子胶囊剂1粒，除去胶囊，研细，加水10ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液2ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液1ml，加水稀释至5ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子胶囊剂2粒，除去胶囊，研细，加水10ml，搅拌使溶解，取滤液1ml，加氢氧化钠0.1g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水3ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.01mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝1∶99为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于10。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁5mg，维生素B₆5mg)置50ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V E)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为1％；柱温为200℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于300，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于1.5。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.25mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约10mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 10mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5ml，密塞，振摇使溶解，取1μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例3：复方四维女贞子胶囊剂的质量控制方法

性状：内容物为棕褐色粉末。

鉴别：(1)取复方四维女贞子胶囊剂2粒，除去胶囊，研细，加水20ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯30ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，取乙醇液3ml加盐酸3ml、镁粉约0.3g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约2ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以2％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子胶囊剂2粒，除去胶囊，研细，加氯仿30ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇8ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约2ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子胶囊剂2粒，除去胶囊，研细，加水30ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液8ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液3ml，加水稀释至15ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子胶囊剂6粒，除去胶囊，研细，加水30ml，搅拌使溶解，取滤液3ml，加氢氧化钠0.5g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼4小时，放冷，残渣加水8ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.05mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝10∶90为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁20mg，维生素B₆20mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VE)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为5％；柱温为300℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于1000，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于3。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约30mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 30mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20ml，密塞，振摇使溶解，取3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例4：复方四维女贞子片剂的质量控制方法

性状：为浅棕色至棕褐色片状物。

鉴别：(1)取复方四维女贞子片剂2片，研细，加水10ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯15ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，取乙醇液2ml加盐酸2ml、镁粉约0.2g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约1ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以1％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子片剂1片，研细，加氯仿20ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约1ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子片剂1片，研细，加水20ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液5ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液2ml，加水稀释至10ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子片剂4片，研细，加水20ml，搅拌使溶解，取滤液2ml，加氢氧化钠0.3g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水5ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合片剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝3∶97为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取复方四维女贞子片剂适量(约相当于维生素B₁10mg，维生素B₆10mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V E)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％；柱温为265℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E20mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例5：复方四维女贞子片剂的质量控制方法

性状：为浅棕色至棕褐色片状物。

鉴别：(1)取复方四维女贞子片剂1片，研细，加水5ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯10ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，取乙醇液1ml加盐酸1ml、镁粉约0.1g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约0.5ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以0.5％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子片剂1片，研细，加氯仿10ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约0.5ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子片剂1片，研细，加水10ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液2ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液1ml，加水稀释至5ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子片剂2片，研细，加水10ml，搅拌使溶解，取滤液1ml，加氢氧化钠0.1g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水3ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合片剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.01mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝1∶99为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于10。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁5mg，维生素B₆5mg)置50ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VE)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为1％；柱温为200℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于300，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于1.5。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.25mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约10mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 10mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5ml，密塞，振摇使溶解，取1μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例6：复方四维女贞子片剂的质量控制方法

性状：为浅棕色至棕褐色片状物。

鉴别：(1)取复方四维女贞子片剂2片，研细，加水20ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯30ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，取乙醇液3ml加盐酸3ml、镁粉约0.3g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约2ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以2％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子片剂2片，研细，加氯仿30ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇8ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约2ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子片剂2片，研细，加水30ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液8ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液3ml，加水稀释至15ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子片剂6片，研细，加水30ml，搅拌使溶解，取滤液3ml，加氢氧化钠0.5g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼4小时，放冷，残渣加水8ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合片剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录I E)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.05mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝10∶90为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁ 20mg，维生素B₆ 20mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VE)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为5％；柱温为300℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于1000，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于3。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约30mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 30mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20ml，密塞，振摇使溶解，取3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例7：复方四维女贞子颗粒剂的质量控制方法

性状：内容物为棕褐色粉末。

鉴别：(1)取复方四维女贞子颗粒剂2袋，除去包装，研细，加水10ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯15ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，取乙醇液2ml加盐酸2ml、镁粉约0.2g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约1ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以1％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子颗粒剂1袋，除去包装，研细，加氯仿20ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约1ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子颗粒剂1袋，除去包装，研细，加水20ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液5ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液2ml，加水稀释至10ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子颗粒剂4袋，除去包装，研细，加水20ml，搅拌使溶解，取滤液2ml，加氢氧化钠0.3g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水5ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.025mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝3∶97为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取复方四维女贞子颗粒剂适量(约相当于维生素B₁ 10mg，维生素B₆10mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V E)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％；柱温为265℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E20mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例8：复方四维女贞子颗粒剂的质量控制方法

性状：内容物为棕褐色粉末。

鉴别：(1)取复方四维女贞子颗粒剂1袋，除去包装，研细，加水5ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯10ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，取乙醇液1ml加盐酸1ml、镁粉约0.1g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约0.5ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以0.5％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子颗粒剂1袋，除去包装，研细，加氯仿10ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约0.5ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子颗粒剂1袋，除去包装，研细，加水10ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液2ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液1ml，加水稀释至5ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子颗粒剂2袋，除去包装，研细，加水10ml，搅拌使溶解，取滤液1ml，加氢氧化钠0.1g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼2小时，放冷，残渣加水3ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.01mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝1∶99为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于10。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁5mg，维生素B₆5mg)置50ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V E)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为1％；柱温为200℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于300，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于1.5。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含0.25mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约10mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 10mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液5ml，密塞，振摇使溶解，取1μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明的实施例9：复方四维女贞子颗粒剂的质量控制方法

性状：内容物为棕褐色粉末。

鉴别：(1)取复方四维女贞子颗粒剂2袋，除去包装，研细，加水20ml，温热使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用醋酸乙酯30ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇10ml使溶解，取乙醇液3ml加盐酸3ml、镁粉约0.3g，溶液渐渐显橙色或棕红色。

(2)取鉴别(1)项下剩余的乙醇液，浓缩至约2ml，滴在滤纸上，置紫外光灯(365nm)下检视，显棕色斑点；喷以2％三氯化铝的乙醇溶液或熏以氨气则显棕黄色斑点，荧光加强。

(3)取复方四维女贞子颗粒剂2袋，除去包装，研细，加氯仿30ml，振摇10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇8ml使溶解，滤液加氢氧化钠试液2滴，即显亮黄色，继续滴加氢氧化钠试液约2ml，在紫外光灯(365nm)下检视，显黄绿色荧光。

(4)取复方四维女贞子颗粒剂2袋，除去包装，研细，加水30ml，搅拌使溶解，滤过，取滤液8ml，照维生素B₁项下的鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部784页)自“加氢氧化钠试液2.5ml”起试验，显相同的反应。

(5)取鉴别(4)项剩余的滤液3ml，加水稀释至15ml，照维生素B₆项下鉴别法(1)项(《中国药典》2005年版二部788页)自“各取1ml”起依法试验，显相同的反应。

(6)取复方四维女贞子颗粒剂6袋，除去包装，研细，加水30ml，搅拌使溶解，取滤液3ml，加氢氧化钠0.5g，使溶解后，加热蒸干，小火炭化后，于500℃炽灼4小时，放冷，残渣加水8ml，搅匀，滤过，滤液加亚硝基铁氰化钠试液1滴，即显黄色。

检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版二部附录IE)。

含量测定：维生素B₁、维生素B₆：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.05mol/L乙腈∶磷酸二氢钾＝10∶90为流动相(pH＝3)；检测波长为276nm。理论板数按维生素B₁峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取维生素B₁、维生素B₆对照品适量，加水或甲醇制成每1ml含维生素B₁和维生素B₆分别为0.3mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取本品适量(约相当于维生素B₁20mg，维生素B₆20mg)置100ml量瓶中，加水适量，超声使溶，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

维生素E：照气相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V E)测定。

色谱条件与系统适用性实验：以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为5％；柱温为300℃。理论板数按维生素E峰计算应不低于1000，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于3。

校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约30mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法：取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取适量(约相当于维生素E 30mg)，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20ml，密塞，振摇使溶解，取3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。