一种含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物及其用途

摘要

本发明涉及一种新的含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物及其用途。本发明的化合物具体是分子式为：1－甲氧基－2－甲氧基甲基－3－羟基－9，10－蒽醌－3－O－β－D－葡萄吡喃糖苷的物质，本发明的化合物可以从长尾粗叶木中提取，采用多种分离手段，包括大孔树脂柱层析，硅胶柱层析等，从中分离得到1种蒽醌单体成分，利用光谱分析和物理化学方法鉴定了它的结构，是自然界首次分离的新化合物。本发明的生物活性测试表明，具有较强的抗卵巢癌的作用。其对人卵巢癌OVCAR－2780细胞的抑制率为50.8％，IC50为1ug/ml，(P＜0.05)。

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物及其用途。

背景技术

本发明涉及的含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物，经CA检索查新，是自然界首次分离的新化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物及其用途。

该含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物具有较强的抗卵巢癌的作用。

本发明的技术方案为：

含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物，其分子式为：1-甲氧基-2-甲氧基甲基-9，10-蒽醌-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷，化学结构式如下(I)。

该化合物英文名为：1-methoxy-2-methoxymethy1-9，10-anthraquinone-3-O-β-D-glucopyranoside。该新化合物我们又将其名命为长尾粗叶木苷B(I，Lasianthuoside B)。

首先用长尾粗叶木(Lasianthus acuminatissimus Merr)药材重量5倍的乙醇将药材回流提取3次，每次1小时；然后将提取液离心或过滤，滤液在55℃减压浓缩至浓度为0.5g生药/ml，再过滤，取上清液；将上清液加入到处理好的大孔吸附树脂柱上，用水，50％的乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到蒽醌苷类化合物为主的提取物37.5克；取提取物用乙醇溶解，拌入3倍量的硅胶，干燥后用硅胶色谱柱分离，硅胶色谱柱分离的洗脱溶剂为体积比50∶50的氯仿：甲醇混合液，洗脱流速为500毫升/小时；再用凝胶柱色谱分离，凝胶柱色谱分离的洗脱溶剂为体积比60∶40的甲醇∶水混合液，洗脱流速为60毫升/小时；薄层层析检查，合并相同部分；再进行一次硅胶柱色谱分离，硅胶色谱柱分离的洗脱溶剂为体积比50∶50的氯仿∶甲醇混合液，洗脱流速为300毫升/小时；即制得名命为长尾粗叶木苷B的含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物。

本发明利用多种分离手段，包括大孔树脂柱层析，硅胶柱层析，反相硅胶柱层析，Sephadex柱层析和制备型高效液相柱层析等，深入研究了药材根茎中的化学成分，从中分离得到1种蒽醌单体成分，利用光谱分析和物理化学方法鉴定了它的结构，并经CA检索查新，证明是自然界首次分离的新化合物。

生物活性测试表明，长尾粗叶木苷B具有较强的抗卵巢癌的作用。其对人卵巢癌OVCAR-2780细胞的抑制率为50.8％，IC₅₀为1ug/ml，(P＜0.05)，显示了抗卵巢癌的生物活性。

本发明的优点在于：分离得到了新的具有抗卵巢癌的作用的新化合物。

它的理化性质及各种波谱特征如下：

该化合物为黄色针状结晶，熔点：224-226℃，易溶解于甲醇、二甲基亚砜、吡啶等有机溶剂。

UV max(MeOH)nm(logε)：207.2(3.96)，265.8(4.06)，331.6(3.06)，358.0(2.99).

IR max(KBr)cm^-1：3435(OH，br)，1674(C＝O)，1599，1539，(Ar)，1385，1282，1080，1043.

HRFAB-MS(m/z)(％)：461.1427[M+H]⁺(计算值为461.1447，分子式为C₂₃H₂₅O₁₀).

ESI-MS m/z(％)：483[M+Na]⁺(100)，469[M+Na-CH₂]⁺(4)，455[M+Na-2CH₂]⁺(1)，320[M+Na-1-glc]⁺(8).

¹HNMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：

8.14-8.19(2H，m，H-5，8)，7.87-7.94(2H，m，H-6，7)，7.75(1H，s，H-4)，5.07(1H，d，J＝5.5Hz，H-1’)，4.53，4.63(各1H，d，J＝10.0Hz，AB系统，H-11)，3.89(3H，s，MeO)，3.29(3H，s，MeO)，3.25-3.70(m，葡萄糖上质子).

¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)：

161.60(C-1)，128.48(C-2)，162.23(C-3)，109.34(C-4)，136.94(C-4a)，126.96(C-5)，134.41(C-6)，135.44(C-7)，127.46(C-8)，135.10(C-8a)，181.05(C-9)，120.35(C-9a)，182.79(C-10)，132.75(C-10a)，63.49(C-11)，62.66(OMe₁)，58.63(OMe₂)，101.38(C-1’)，73.96(C-2’)，77.01(C-3’)，70.07(C-4’)，78.08(C-5’)，61.13(C-6’).

DEPT、HMQC和HMBC结果如表1所示。

表1长尾粗叶木苷B(Lasianthuoside B)的核磁共振波谱数据(DMSO-d₆，)

    No.    ¹³C-NMR    DEPT    ¹H-NMR    HMBC    1    2    3     4    4a    5    6    7    8    8a    9    9a    10    10a    11     OMe₁    OMe₂    1’        2’        3’        4’        5’        6’    161.60    128.48    162.23     109.34    136.94    126.96    134.41    135.44    127.46    135.10    181.05    120.35    182.79    132.75    63.49     62.66    58.63    101.38    73.96    77.01    70.07    78.08    61.13    C    C    C     CH    C    CH    CH    CH    CH    C    C    C    C    C    CH₂     CH₃    CH₃    CH    CH    CH    CH    CH    CH₂        7.75(1H，s)     8.14(1H，m)    7.87(1H，m)    7.94(1H，m)    8.19(1H，m)         4.53，4.63(each 1H，d，J＝10.0    Hz)    3.89(3H，s)    3.29(3H，s)    5.07(1H，d，J＝5.5Hz)         4.53，4.63，3.89    4.53，4.63，7.75，    4.53，4.63，7.75，    5.07      7.94    8.19    8.14    7.87    7.94    8.19    7.75    7.75，8.14    7.87，8.19    3.29      4.53，4.63      

抗人卵巢癌活性测试：

采用MTT法，测定长尾粗叶木苷B(I)对人卵巢癌OVCAR-2780细胞的抑制率和IC₅₀值。取96孔平板，每孔加OVCAR-2780细胞悬液100ul，将平板置37℃CO₂(5％)温箱24小时，实验组加入受试蒽醌单体(以RPMI-1640稀释)，对照组加入等体积的RPMI-1640，平板置温箱中孵育48小时，每孔加入0.5％MTT液后再孵育4小时，吸出上清液，加入DMSO溶解，用平板摇床摇匀，用自动化分光光度平板读数计在550nm米处测定每个小孔的光密度OD。

细胞存活率＝(加药细胞OD/对照细胞OD)×100长尾粗叶木苷B(I)对人卵巢癌OVCAR-2780细胞的抑制率和IC₅₀值见表2。

表2长尾粗叶木苷的对OVCAR-2780的抑制率和IC₅₀值

 化合物  抑制率％    IC₅₀(ug/ml) I  50.8    1

具体实施方式

实施例1

首先用长尾粗叶木(Lasianthus acuminatissimus Merr)药材重量5倍的乙醇将药材回流提取3次，每次1小时；然后将提取液离心或过滤，滤液在55℃减压浓缩至浓度为0.5g生药/ml，再过滤，取上清液；将上清液加入到处理好的大孔吸附树脂柱上，用水，50％的乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得到蒽醌苷类化合物为主的提取物37.5克；取提取物用乙醇溶解，拌入3倍量的硅胶，干燥后用硅胶色谱柱分离，硅胶色谱柱分离的洗脱溶剂为体积比50∶50的氯仿∶甲醇混合液，洗脱流速为500毫升/小时；再用凝胶柱色谱分离，凝胶柱色谱分离的洗脱溶剂为体积比60∶40的甲醇∶水混合液，洗脱流速为60毫升/小时；薄层层析检查，合并相同部分；再进行一次硅胶柱色谱分离，硅胶色谱柱分离的洗脱溶剂为体积比50∶50的氯仿∶甲醇混合液，洗脱流速为300毫升/小时；即制得含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物。

该含葡萄吡喃糖苷基团的蒽醌苷类化合物化学结构式如下(I)。