湖北小连翘在制备抗抑郁、抗焦虑或／和促智药物或食品中的应用

摘要

本发明涉及植物湖北小连翘或其提取物在制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智药物或食品中的应用。本发明经实验证明，湖北小连翘或其提取物可作为有效成分用于制备治疗抑郁症、睡眠障碍、老年痴呆，记忆力减退等病症的药物；亦可作为食品补充剂或食品添加剂制成抗衰老的食品，或制成可用作具有抑郁、睡眠障碍、健忘、神经功能紊乱等全部或部分症状的亚健康和普通人群的保健食品。

说明书

技术领域

本发明涉及湖北小连翘的应用，具体涉及湖北小连翘或其提取物在制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智药物或食品中的应用。

背景技术

湖北小连翘(Hypericum hubeiense L.H.Wu et D.P.Yang)为藤黄科金丝桃属(Hypericum L.)多年生草本植物，是由本申请发明人杨得坡等发现的新分类群[吴立宏，杨得坡等，国产金丝桃属(藤黄科)新植物，植物分类学报，2003]，别名大对叶草。由于湖北小连翘为新近发现的新资源(新分类群)，现有的技术和文献没有关于其抗抑郁、抗焦虑、改善记忆的报道，也没有其用于抑郁症、焦虑症、痴呆等疾病治疗的任何记载。

发明内容

本发明的目的在于提供湖北小连翘或其提取物在制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智的药物或食品中的应用。

本发明通过实验证明，湖北小连翘具有抗抑郁、抗焦虑和促进学习记忆的活性。因此可作为抗抑郁、抗焦虑和/或促智的药物及食品的原料，用于制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智药物或食品。

本发明的应用中所述的湖北小连翘是指该植物的花、叶片或有花有叶的地上部分或近顶端部分，或者是这些部分的提取物。其具体应用可包括如下：

1.用于制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智的药物。具体方法是将有效量的湖北小连翘或其提取物与医药上可接受的赋形剂或/和添加剂配合，制成适合于人体使用的不同剂型的药物。

所制备的药物，可用于治疗抑郁症、睡眠障碍、焦虑症或老年痴呆、记忆力减退等病症。

2.用于制备抗抑郁、抗焦虑或/和促智的食品或食品补充剂。具体方法是将有效量的湖北小连翘或其提取物与常规的赋形剂和/或食品添加剂配合，制成适合人体服用剂型的食品或食品补充剂，如：胶囊剂、片剂、茶剂等。

所制备的食品或食品补充剂，可作为抗衰老的保健食品，也可用作具有抑郁、焦虑、睡眠障碍、健忘、神经功能紊乱等全部或部分症状的亚健康和正常人群的食品补充剂。

本发明所述的湖北小连翘提取物，可通过以下方法制备：

原料为湖北小连翘(最好是7-9月采集的植株体)的花、叶片或有花有叶的地上部分或近顶端部分，采收后阴干，粉碎成粗粉，用有机溶剂在低于55℃(通常为室温至45℃)下浸提或超声提取1～3次，每次溶剂体积用量为药材重量的3～10倍，合并提取液，减压浓缩回收溶剂，得湖北小连翘提取物。所得提取物中金丝桃素类含量一般为0.2～2％，总黄酮含量一般为10～50％。

所用的有机溶剂通常为乙醇、甲醇或丙酮等；有机溶剂可以是浓度为40～95％(V/V)的水溶液。每次浸提的时间一般为6～24h；每次超声提取的时间一般为10～30min。 

所制备的湖北小连翘提取物适用于制备口服制剂，如：胶囊剂、片剂、茶剂等。

抑郁、记忆力减退等症状往往相伴产生，特别是对老年痴呆患者而言。本发明的实验表明，湖北小连翘或其提取物在具有抗抑郁活性的同时，还具有抗焦虑和提高学习记忆的作用，不仅对抑郁症的主要症状有治疗作用，而且对相关的睡眠障碍、记忆力减退等症状亦有疗效，能从多个环节上对抑郁症进行治疗。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。实施例5～13所述的提取物为实施例1中所制备的提取物，药材细粉为湖北小连翘药材经过球磨粉碎后通过100目筛的部分。动物实验数据以x±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行双尾t检验。

实施例1

取湖北小连翘粗粉500g，用90％的乙醇室温不时搅拌下浸提3次，每次提取24h，每次溶剂用量为3L，合并提取液，减压浓缩回收溶剂，冷冻干燥，得到湖北小连翘提取物，其中金丝桃素类含量为0.33％，总黄酮含量为38.60％。

实施例2

取湖北小连翘粗粉300g，加入甲醇，40℃以下超声提取3次，每次30min，每次用量均为1.5L。过滤，合并提取液，减压回收溶剂得提取物。其中金丝桃素类含量为0.61％，总黄酮类含量为26.9％。

实施例3

取湖北小连翘粗粉400g，加入丙酮，40℃以下超声提取3次，每次30min，每次用量均为2.4L。过滤，合并提取液，减压回收溶剂得提取物，其中金丝桃素类含量为0.54％，总黄酮类含量为31.5％。

实施例4

取湖北小连翘粗粉700g，加入丙酮室温并不断搅拌下浸提3次，每次1天，溶剂用量分别为4.2L、2.5L和2.5L。过滤，合并提取液，减压回收溶剂得提取物，其中金丝桃素含量为0.48％，总黄酮类含量为28.6％。

实施例5湖北小连翘提取物抗抑郁活性实验

实验动物为雄性NIH种小鼠18-22g(由广州中医药大学实验动物中心提供)，随机分为提取物组(250，500mg/kg)、空白对照组、阳性对照阿米替林组(20mg/kg)，每组10只。实验在室温下进行，同时保持自然昼夜节律。实验用药物为本发明实施例1所得湖北小连翘提取物，临用前用0.5％(W/V)的羧甲基纤维素水溶液超声混悬，阳性对照药为盐酸阿米替林(常州四洲制药)，临用前蒸馏水配制；空白对照组为等体积的0.5％(W/V)的羧甲基纤维素水溶液(以下实施例亦同)，根据Porsolt等(PorsoltR.D.，Le Pichon M.，Jalfre M.，Chatterjee S.S.Depression：a new animal model sensitive to antidepressanttreatments.Nature，266，730-732(1977))的方法，分别在实验前1h灌胃给药，进行小鼠的强迫游泳实验。在另一组动物中，分组及给药方法同上，根据Steru等(Steru L.R.，Chermat B.，Thierry P.，Simon.Thetail suspension test：a new method for screening antidepressant activity in mice.Psychopharmacology，85，367-370(1985))的方法，进行小鼠悬尾实验。实验结果如表1所示。

          表1湖北小连翘提取物对小鼠行为绝望实验结果

组别         剂量(mg/kg)    游泳不动时间(s)   悬尾不动时间(s)

空白对照组     -            105.9±19.2        107.9±10.7

提取物组       250          67.1±6.7*         74.2±8.5*

提取物组       500          63.0±9.3*         78.5±10.9

阿米替林组     20           69.4±8.5*         43.2±10.6**

*P＜0.05，**P＜0.01vs空白对照组

在小鼠游泳及小鼠悬尾实验结果中可见，湖北小连翘提取物均能显著缩短游泳不动时间及悬尾不动时间，说明湖北小连翘提取物在这两种抑郁动物模型上显示出抗抑郁的活性。

实施例6湖北小连翘提取物抗焦虑活性实验

采用高架十字迷路实验，根据Lister(Lister R.The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.Psychopharmacology，92，180-185(1987))的方法，分组与给药方式同上，对照药为地西冸(山东平原制药厂)，首先让小鼠在高架十字迷路中适应性训练3天，每次5分钟，然后进行药物实验，每只小鼠一次进行5分钟，观测记录小鼠进入开放通路、封闭通路后停留的时间。实验结果如表2所示。

         表2湖北小连翘提取物在高架十字迷路中对小鼠焦虑行为的影响

组别        剂量                停留时间(s)

           (mg/kg)     开放通路          封闭通路

空白对照组    -        27.2±15.6        233.5±25.8

提取物组      250      67.7±26.6^**     182.7±26.6^**

提取物组      500      40.3±28.9        177.9±31.5^**

地西冸组      3.0      62.5±23.0^**     202.1±30.0

**P＜0.01vs空白对照组

湖北小连翘提取物能显著增加小鼠进入开放通路后停留的时间，减少在封闭通路的停留时间，与抗焦虑剂地西冸作用类似，说明湖北小连翘提取物具有抗焦虑的活性。

实施例7湖北小连翘提取物抗衰老改善学习记忆的实验

选用12月龄昆明种小鼠，雌雄兼用，体重40-55g，随机分为老龄对照组，提取物组(100，50mg/kg.d)，阳性对照脑复康组(600mg/kg.d)，另选昆明种小鼠18-22g 10只，雌雄各半，作为青年对照组，连续灌胃7天，每日一次，末次给药后次日开始训练，进行跳台和避暗实验。

跳台实验：将小鼠放入反应箱内适应环境3min，然后立即通以36V连续直流电刺激5min，小鼠受到电击后的正常逃避反应是跳上橡皮垫。小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。如此训练5min，并记录每只小鼠5min受到的电击的次数，作为错误次数，以此评价学习成绩。24h后重复测验，记录动物第一次跳下平台的潜伏期(若超过3min，按3min计算)，同时记录3min内的错误总数。以此评价记忆保持成绩。

避暗实验：实验时将小鼠头部背向洞口放入明室，同时开始计时，小鼠穿过洞口进入暗室受到电击，立即停止计时，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期，以此评价学习成绩。24h后重做测验，记录潜伏期和5min内的电击次数，以此评价记忆保持成绩。实验结果如表3与表4所示。

    表3湖北小连翘提取物在跳台实验中对老龄小鼠学习记忆的影响

组别          剂量           错误次数(N)/减少率(％)              潜伏期

            (mg/kg)         学习                  记忆             (s)

老龄对照组    -      3.8±1.3     -       2.8±1.0      -       59.4±12.6

青年对照组    -      2.0±1.2**   47.4    1.2±0.8**    57.1    140.1±35.2**

提取物组      100    1.8±0.9**   52.6    0.9±0.8**    67.9    180±46.7**

提取物组      50     2.0±1.1**   47.4    1.1±0.6**    60.7    120±33.8**

脑复康组      600    2.6±1.0*    31.6    2.0±0.7*     28.6    99.2±20.1**

*P＜0.05，**P＜0.01vs老龄对照组

在跳台实验中可见，老龄组与青年组相比其遭受电击的潜伏期明显缩短，错误数显著增加。湖北小连翘提取物能提高老龄小鼠遭受电击的潜伏期，减少错误次数，说明其具有提高学习记忆成绩的活性。

         表4湖北小连翘提取物在避暗实验中对老龄小鼠学习记忆的影响

组别          剂量           潜伏期(s)/改善率(％)                 错误次数

            (mg/kg)                                                 (N)

                             学习                  记忆

老龄对照组    -      39.7±20.0     -      60.6±23.7      -      4.2±2.0

青年对照组    -      72.8±20.6*    83.4   132.5±34.7**   118.6  2.2±1.0**

提取物组      100    90.6±28.7**   128.2  148.5±47.2**   145.0  1.8±0.8**

提取物组      50     60.3±19.9*    51.9   99.7±22.2*     64.5   2.3±1.0**

脑复康组      600    59.9±18.8*    50.9   92.6±34.5*     52.8   2.5±1.0*

^*P＜0.05，^**P＜0.01vs老龄对照组

同样，从避暗实验结果可见，湖北小连翘提取物能显著提高老龄小鼠进入暗箱的潜伏期，减少电击次数。

由以上两个实验可以证明湖北小连翘提取物能够改善衰老引起的记忆力减退，表现出抗衰老、促进学习记忆的作用。

实施例8抗抑郁粉末胶囊

材料：湖北小连翘提取物150g，药材细粉150g，抗坏血酸0.3g，微粉硅胶6g。

制备：将提取物用乙醇溶解/混悬，加入药材细粉及抗坏血酸，混匀，回收溶剂至干，所得物料真空干燥，粉细，加入微粉硅胶，装胶囊，得1000粒抗抑郁粉末胶囊。

实施例9抗抑郁颗粒胶囊

材料：湖北小连翘提取物150g，药材细粉150g，糖粉40g，抗坏血酸0.35g，羧甲基淀粉钠8g，PVP 30g，乙醇200ml，硬脂酸镁4g。

将提取物与的药材细粉混和，加入糖粉，抗坏血酸和羧甲基淀粉钠，以PVP的乙醇液为粘合剂，制颗粒，40℃干燥后与硬脂酸镁混匀后装胶囊，得抗抑郁颗粒胶囊1000粒。

实施例10抗抑郁微丸胶囊

材料：丸芯120g，湖北小连翘提取物50g，抗坏血酸0.3g，淀粉60g，滑石粉60g，羟丙基甲基纤维素(HPMC)6g，丙酮200ml。

将提取物溶解在已加入HPMC的丙酮中，以此为粘合剂，以淀粉和滑石粉为包衣粉，在空白丸芯上进行包衣，制得的微丸用IV号丙烯酸树脂和羟丙基甲基纤维素进行包衣，所得包衣微丸装胶囊，得抗抑郁微丸胶囊1000粒。

实施例11抗抑郁软胶囊

材料：湖北小连翘提取物150g，抗坏血酸0.3g，植物油150g，吐温-80 3ml。

将各物料用胶体磨研磨均匀，软胶囊机压制，即得抗抑郁软胶囊1000粒。

实施例12促进学习记忆片

材料：湖北小连翘提取物150g，药材细粉100g，糖粉100g，抗坏血酸0.35g，羧甲基淀粉钠8g，HMPC 6g，乙醇200ml，硬脂酸镁2g，滑石粉2g。

将提取物与药材细粉混和，加入糖粉，抗坏血酸和羧甲基淀粉钠，以HPMC为粘合剂，制颗粒，干燥后与硬脂酸镁，滑石粉混和均匀，压片。

实施例13抗抑郁包衣片

材料：湖北小连翘提取物100g，药材细粉100g，糖粉20g，微粉硅胶20g，抗坏血酸0.25g，羧甲基淀粉钠3g，PVP 30g，乙醇200ml，硬脂酸镁2.5g，HPMC 3g。

将提取物药材细粉混和，加入糖粉，微粉硅胶，抗坏血酸和羧甲基淀粉钠，以PVP的乙醇液为粘合剂，制颗粒，干燥后与硬脂酸镁混匀，压片。所得素片用HPMC包衣，即得抗抑郁包衣片1000片。

实施例14抗抑郁茶剂

采集湖北小连翘植物的花、叶片或带叶片和花的小枝条，阴干或不超过60℃烘干，粉碎后直接装袋，或添加适量矫味剂后装袋，密封保存待用。