黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法

摘要

本发明公开了一种黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。该方法色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂，流动相采用磷酸氢二钾－乙腈体系；进样前待测样品先调节pH至2～6，再调节pH至10～13，然后以萃取用有机溶剂萃取3～8次进行提取分离。该方法灵敏度高、专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量，并能保证较高的准确度，利用该方法还可以测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量均匀度。

说明书

技术领域

本发明涉及黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度测定法，特别是涉及黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。

背景技术

以黄杨生物碱总碱(有效部位)为原料生产的制剂黄杨宁片，其《中国药典》2000年版一部所载的方法是酸性染料比色法，该方法虽然简便、灵敏度高，但专属性差，所以测得的是生物碱总碱，不能测定其中环维黄杨星D的含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、专属性强的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。

本发明的目的可以通过下列措施来实现：

一种黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法，其色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂；流动相采用磷酸氢二钾—乙腈体系。

本发明的目的还可以通过下列措施来实现：

所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法，进样前待测样品先调节pH至2～6，再调节pH至10～13，然后以萃取用有机溶剂萃取3～8次进行提取分离。

所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法中萃取用有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、叔丁基甲醚、苯、环己烷、醋酸乙酯。

本发明的优点：

本发明采用高效液相色谱技术，测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量，不但灵敏度高，对毫克数量级所测误差不大于5％，而且专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量，利用该方法还可以测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量均匀度，很好地满足药典含量及含量均匀度测定的要求。该方法利用氨基柱、特定的流动相和检测波长是其关键。本方法中提取分离方法能将零点几毫克的检测成分提取分离出来，这就保证了方法的准确度。

附图说明：

图1为黄杨宁高效液相色谱法210nm波长测定的色谱图；

图2为黄杨宁高效液相色谱法200nm波长测定的色谱图；

图3为黄杨宁高效液相色谱法220nm波长测定的色谱图。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步说明。

黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法，以黄杨宁规格为0.5mg/片测定举例，色谱柱采用江苏汉邦科技有限公司产品(Lichrospher NH₂，4.6×250mm，5μm)。

实施例1

含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。

色谱条件与系统适应性  固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为30∶70)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为210nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。

对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品(对照品标准：对照品中环维黄杨星D在含量测定项下记录的色谱图中，其峰面积应大于总峰面积的98％，下同)7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取黄杨宁片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，  超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用20、10、10、10ml氯仿萃取四次，合并氯仿层，置50ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。

测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的73.5480％。

含量均匀度取黄杨宁片10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、5、5、5ml氯仿萃取四次，合并氯仿层，置25ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。

实施例2

含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。

色谱条件与系统适应性  固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为25∶75)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为200nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。

对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用20、20、10ml二氯甲烷萃取三次，合并二氯甲烷层，置50ml量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。

测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的62.4219％。

含量均匀度取本品10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、10、5ml醋酸乙酯萃取三次，合并醋酸乙酯层，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。

实施例3

含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。

色谱条件与系统适应性  固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为20∶80)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为220nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。

对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，  超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、10、5、5、5、5、5、5ml叔丁基甲醚萃取八次，合并叔丁基甲醚层，置50ml量瓶中，加叔丁基甲醚至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。

测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图3，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的80.7239％。

含量均匀度取本品10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用5、5、3、3、3、2、2、2ml环己烷萃取八次，合并环己烷层，置25ml量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。