公开/公告号CN1507436A
专利类型发明专利
公开/公告日2004-06-23
原文格式PDF
申请/专利权人 艾科斯有限公司;
申请/专利号CN02809321.6
申请日2002-03-01
分类号C07D241/20;C07D401/12;C07D403/12;C07D241/54;A61K31/4965;A61K31/498;A61P35/00;C07D405/12;C07D251/22;C07D231/40;C07D239/46;C07D253/06;C07D239/42;C07D257/06;C07D213/75;C07D277/48;
代理机构中国专利代理(香港)有限公司;
代理人温宏艳
地址 美国华盛顿州
入库时间 2023-12-17 15:22:13
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-04-13
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07D241/20 授权公告日:20080312 终止日期:20150301 申请日:20020301
专利权的终止
2008-03-12
授权
授权
2004-09-01
实质审查的生效
实质审查的生效
2004-06-23
公开
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相关申请的交叉参考
本申请要求在2001年3月2日提交的第60/273,124号U.S.临时申请的优先权。
发明领域
本发明涉及用于抑制保持和修复基因材料完整性的酶的化合物。更具体来说，本发明涉及一系列芳基和杂芳基取代的脲化合物，制备所述化合物的方法，以及所述化合物作为治疗剂的应用，例如在治疗癌症和特征是脱氧核糖核酸(DNA)复制、染色体分离或细胞分裂中的缺陷的其它疾病中的应用。
发明背景
医疗保健中一个重要且显著的目标是发现和获得用于治疗癌症的更安全且更有效的药物。大多数化疗剂是通过破坏DNA代谢、DNA合成、DNA转录或微管纺锤体功能，或通过引入DNA损伤而影响染色体结构完整性来起作用。这些过程既影响正常细胞，也影响肿瘤细胞。在正常细胞中，保持DNA完整性对于细胞生存来说是必不可少的，因此，在所有药物种类中，抗癌药物具有最低的治疗指数。
个体细胞产生其染色体的精确拷贝，然后通过称为有丝分裂的过程将每个拷贝分离成两个细胞。有丝分裂周期可分成3个主要事件：DNA复制、染色体分离和细胞分裂。细胞具有感觉机制来维持这些步骤彼此之间的顺序，以确保每一步骤以高度保真性实施。L.H.Hartwell等人在Science，Nov.3，1989，246(4930)：629-34中将这些过程的感觉机制称为“关卡”。
据报道，细胞周期关卡包括至少3类不同的多肽。每一类多肽作为对细胞周期信号或染色体机制中缺陷的反应而顺序地起作用(Carr，(1996)Science，271：314-315)。一族蛋白探测或感觉DNA损伤或细胞周期中的异常。这些传感蛋白包括共济失调-毛细血管扩张Mutated (Atm)和共济失调-毛细血管扩张Rad-related(Atr)(Keegan等人，(1996)Genes Dev.，10：2423-2437)。另一类多肽放大和传递由检测蛋白检测到的信号，其实例是Rad53(Allen等人，(1994)Genes Dev.，8：2416-2488)Chk1。此外，细胞周期效应子例如p53介导细胞反应，包括例如阻止有丝分裂和/或减数分裂以及细胞程序死亡。
DNA损伤可由药物、放射引起，或者可以在正常代谢期间自发产生。DNA损伤关卡保证了具有未修复的DNA损伤的细胞不进入到DNA合成期或有丝分裂直至染色体损伤已经消除。细胞周期停滞可提高DNA修复的机会和增加细胞分裂的保真性。DNA损伤可在整个细胞周期期间被识别。关卡保证细胞的生长在多个细胞周期阶段被停滞。结果在细胞感觉DNA损伤剂期间可产生多个细胞周期信号传导途径。
目前对于细胞周期关卡功能的很多理解都是来自源于肿瘤的细胞系的研究。在许多情况下，肿瘤细胞已经失去了关键的细胞周期关卡(Hartwell等人，Science，Dec.16，1994；266(5192)：1821-8)。据报道，在细胞发展成肿瘤状态的过程中的关键步骤是获得突变，这些突变使细胞周期关卡途径例如p53失去活性(Weinberg，R.A.(1995)Cell 81：323-330；Levine，A.J.(1997)Cell 88：3234-331)。失去这些细胞周期关卡导致肿瘤细胞的不适当周期循环，以作为对DNA损伤剂的反应。当面对细胞应激例如DNA损伤和具有降低的保真性的细胞周期事件时，肿瘤细胞就难以改变细胞周期进程的动力学。因此，抑制和破坏另外的DNA损伤关卡途径可进一步增加肿瘤细胞对抗癌治疗例如放疗和化疗的敏感性。
具有完整细胞周期关卡的非癌组织一般与个别关卡途径的暂时破坏隔离开。然而，肿瘤细胞在控制细胞周期进程的途径中有很多缺陷，这样另外的关卡例如DNA损伤关卡的扰乱使得它们对DNA损伤剂特别敏感。例如，含有突变体p53的肿瘤细胞在G1 DNA损伤关卡和保持G2 DNA损伤关卡的能力方面都有缺陷(Bunz等人，Science，Nov.20，1998；282(5393)：1497-501；Levine)。预计，以G2关卡或S期关卡的开始为靶目标的关卡抑制剂能进一步削弱这些肿瘤细胞修复DNA损伤的能力，因此相对于正常细胞能选择性地杀死它们。所以预计关卡抑制剂能提高治疗指数，治疗指数是放疗和全身化疗的相对于正常组织毒性概率的肿瘤控制概率的度量标准。
关卡抑制剂提高治疗指数的能力可取决于肿瘤类型。具有与DNA损伤关卡途径互补的细胞周期缺陷的肿瘤可能对抑制剂药物治疗最敏感。与之不同，预计DNA-PK抑制剂—另一类不同的可能治疗剂能以独立于细胞类型的方式增加肿瘤敏感性。施用关卡抑制剂和DNA-PK抑制剂的全身方法还能有效地治疗其中放疗不能将其作为靶目标的转移性疾病。
据假定，在DNA损伤存在下，关卡蛋白Atm和Atr开始导致细胞周期停滞或任何阻断DNA复制的信号传导途径。据表明，Atm在DNA损伤关卡中起作用以对电离放射(IR)有反应。缺乏功能性Atm的患者会发展成疾病共济失调-毛细血管扩张(A-T)。A-T的症状包括对电离放射(IR)极度敏感、脑退化、眼睛毛细血管扩张、生殖腺不足、免疫缺陷和癌症的危险性增加(Shiloh，Eur.J.Hum.Genet 1995；3(2)：116-38)。据信源自这些患者的成纤维细胞在G1、S和G2关卡中有缺陷，并且在其对IR的反应中有缺陷(Kastan等人，Cell，Nov.13，1992；71(4)：587-97；Scott等人，Int.J.Radiat.Biol.，Dec，1994；66(6 Suppl)：S157-63；和Beamish等人，J.Biol.Chem.Aug.26，1993；271(34)：20486-93)。因此，Atm可以感觉由IR和类放射药物引起的双链DNA损伤，并且给细胞周期传导信号以阻滞进行，这样损伤就可以被修复。
Atr是由引起双链DNA断裂、单链DNA断裂的物质和阻断DNA放射的物质刺激的关卡蛋白。在肌肉细胞中Atr在等位染色体3q上的过度表达导致分化停滞、异常中心体数目、染色体不稳定和消除对作为IR的反应的G1停滞(Smith等人，Nat.Genet.，May 1998；19(1)：39-46)。Atr的激酶失活性显性失活突变体的过度表达使得细胞对IR、紫外线(UV)、MMS和顺铂敏感(Cliby等人，EMBO J.Jan.2，1998，17(1)：159-69和Wright等人，Proc.Nat′1 Acad.Sci.U.S.A.，June 23，1998；95(13)：7445-50)。含有过度表达的Atr突变体的细胞还不能导致作为对IR反应的G2停滞。此外，在其中DNA断裂和异常DNA结构作为减数分裂重组过程的结果而持续存在的减数分裂细胞中，Atr与染色体结合(Keegan等人，Genes Dev.October 1，1996；10(19)：433-37)。象Atm一样，Atr也感觉DNA损伤和阻滞DNA复制的物质，并在G2和S开始细胞周期停滞以进行DNA修复。
据假定，在DNA损伤关卡信号传导途径中，Chk1位于蛋白激酶Atm和/活Atr的下游(参见Sanchez等人，Science，1997；277：1497-1501；U.S.专利6,218,109)。在哺乳动物细胞中，Chk1被磷酸化，这是对引起DNA损伤的物质，包括IR、UV和羟基脲的反应(Sanchez等人，1997；Lui等人，Genies Dev.2000；14：1448-1459)。在哺乳动物细胞中，Chk1的磷酸化和激活依赖于Atm(Chen等人，1999)和Atr(Lui等人，2000)。在酵母S.Pombe中，Chk1似乎还涉及对IR的反应和对复制的阻断(Boddy等人，1998；Walworth等人，1993)。此外，据表明，Chk1磷酸化已知对细胞周期控制很重要的weel(O′Connell等人，EMBO J.1997；16：545-554)和Pdsl(Sanchez等人，Science 1999；286：1166-1171)基因产物。这些研究表明，哺乳动物Chk1在导致S期停滞的依赖于Atm的DNA损伤关卡中起作用。然而，Chk1在哺乳动物细胞的S期复制关卡中的作用尚未被阐明。有趣的是，剔除Chk1的小鼠是胚胎致死的，这表明除了其在DNA损伤关卡中的作用以外，Chk1还在生物体发育中起作用。
Chk1可通过磷酸化和灭活Cdc25C-通常在细胞进入有丝分裂时将细胞周期蛋白B/cdc2去磷酸化的双重特异性磷酸酶来引起G2停滞(Fernery等人，Science，Sep.5，1997；277(5331)：1495-7；Sanchez等人；Matsuoka等人；和Blasina等人，Curr.Biol.，Jan.14，1999；9(1)：1-10)。这种调节Cdc2活性的机制刺激细胞周期停滞以在DNA损伤或未复制的DNA存在下阻止细胞进入有丝分裂。
发明概述
本发明涉及用于治疗涉及DNA损伤或DNA复制损伤的疾病和病症的强效选择性化疗增敏剂。本发明化合物是关卡激酶Chk1的抑制剂。特别是，已经证实了芳基和杂芳基取代的脲化合物具有抑制Chk1的显著活性。
在一个方面，本发明涉及抑制关卡激酶Chk1的方法，包括给个体施用式(I)化合物或含有式(I)化合物的组合物的步骤。式(I)化合物具有下述结构式：
其中：
X1不存在(null)，或者是-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；
X2是-O-、-S-或-N(R1)-；
Y是O或S；或者＝Y代表连接在同一碳原子上的两个氢原子；
W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-3烷基；且
Z选自氢(hydro)、芳基和杂芳基；
其中所述W和Z的芳基可任选被1-4个由R2代表的取代基取代，所述W和Z的杂芳基可任选被1-4个由R5代表的取代基取代，并且所述W的杂环烷基和环烷基可任选被1-2个由R6代表的取代基取代；
R1选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
R2选自卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R3)C(O)OR3、N(R3)C(O)-C1-3亚烷基-C(O)R3、N(R3)C(O)-C1-3亚烷基-C(O)OR3、N(R3)C(O)-C1-3亚烷基-OR3、N(R3)C(O)-C1-3亚烷基-NHC(O)OR3、N(R3)C(O)-C1-3亚烷基-SO2NR3、C1-3亚烷基-OR3和SR3；R3选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R4，被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R4)2和SO2R4取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基-N(R4)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R4)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R4)2)2，或者两个R3一起形成任选取代的3-6元脂族环；
R4选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-3亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R4一起形成任选取代的3-6元环；
R5选自C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、卤素、N3、CN、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R3)2、C(O)R3和
C1-3亚烷基
R6选自卤素和C1-6烷基，
及其可药用盐或溶剂化物。
在另一个方面，本发明涉及具有结构式(II)的芳基和杂芳基二取代的脲化合物及其可药用盐或溶剂化物
其中
Y′是O或S；
W′选自
和
所述基团可任选被1-4个选自下列的取代基取代：C1-6烷基、芳基、N(R7)2、OR7、N3、CN、C(O)R7、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)2、
C1-3亚烷基
Z′选自：
和
其中
Q′选自氢、OR7、SR7和N(R7)2；
J′选自C-R8、N-R8、O和S；
K′选自C-R9、N-R9、O和S；
L′选自C-R10、N-R10、O和S；
M′选自C-R11、N-R11、O和S；
其中：
R7独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R12，被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R12)2和SO2R12取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基-N(R12)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R12)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R12)2)2，或者两个R7一起形成任选取代的3-6元脂族环；R8、R9和R10分别独立地不存在，或独立地选自氢、卤素、任选取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R7)2、OR7、CO2R7、C(O)N(R7)2、C(O)R7、N(R13)COR7、N(R13)C(O)OR7、N(R7)C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)R7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基SO2NR7、CF3、C1-3亚烷基N(R12)SO2芳基、C1-3亚烷基N(R12)SO2杂芳基、C1-3亚烷基OC1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)R7、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基OR2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基N(R12)2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)-杂芳基、C1-3亚烷基OR7和SR7，其中R7如上所定义；R11不存在，或选自氢、C1-6烷基和卤素；
R12选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R12一起形成3-6元环；且
R13选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
条件是：当Q′是氢或OCH3时，R8、R9和R10当中至少有一个不选自氢、CH3、OCH3或卤素。
本发明的另一个方面涉及具有结构式(III)的脲基取代的杂芳基化合物：
其中W′″选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-3烷基；
其中所述芳基可任选被1-4个由R14代表的取代基取代，所述杂芳基可任选被1-4个由R18代表的取代基取代，并且所述杂环烷基和环烷基可任选被1-2个由R19代表的取代基取代；
R14选自卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R16)2、OR16、CO2R16、C(O)N(R16)2、C(O)R16、N(R15)COR16、N(R15)C(O)OR16、N(R16)C(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基C(O)R16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基SO2NR16、C1-3亚烷基OR16和SR16；
R15选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；R16选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R17，被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R17)2和SO2R17取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基-N(R17)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R17)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R17)2)2；或者两个R16一起形成任选取代的3-6元脂族环；
R17选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R17一起形成任选取代的3-6元环；
R18选自C1-6烷基、芳基、N(R15)2、OR15和卤素，且R19选自卤素和C1-6烷基。
本发明还涉及含有一种或多种结构式(II)化合物的药物组合物，所述化合物和含有这些化合物的组合物在治疗疾病或病症中的应用，以及制备所述化合物和在结构式(II)化合物的合成中所涉及的中间体的方法。
优选实施方案的详细描述
放疗和大部分化疗剂是有治疗益处的，因为它们利用了不适当的肿瘤细胞增殖。细胞过程例如DNA损伤修复和细胞周期关卡保护肿瘤细胞不受物理和化学治疗剂的毒性影响。调节细胞周期进程和抗DNA损伤的分子机制的治疗可增强肿瘤细胞杀死以及提高现有治疗的治疗指数。
大部分化疗剂是通过破坏DNA代谢来起作用。因为这些过程是正常细胞和肿瘤细胞所共享的，并且因为保持DNA完整性对于细胞生存来说是必不可少的，因此，在所有药物种类中，抗癌药物具有最低的治疗指数。通过鉴别和抑制肿瘤细胞所依赖的细胞过程，放射和化疗治疗方案的效果可以增强。
DNA损伤关卡蛋白功能的阻断提供了相对于正常细胞杀死肿瘤细胞的新手段。例如，Chk1保证具有由一些药物或放射引起的未修复的DNA损伤的细胞不进入DNA合成期或有丝分裂直至染色体损伤被除去。因此，与仅用DNA破坏剂治疗的肿瘤细胞相比，用Chk1抑制剂与DNA破坏剂联合治疗的肿瘤细胞可用较低量的DNA破坏剂来杀死。
正常细胞中的细胞周期关卡不足使得个体容易患有或直接引起多种病症状态例如癌症、共济失调毛细血管扩张、胚胎异常和与异常B和T细胞发育有关的各种免疫缺陷。后者与狼疮、关节炎和自身免疫性疾病的病理状态有关。因此，人们在鉴定细胞周期关卡以及细胞周期关卡功能所必需的蛋白方面作了大量研究。
具有完整细胞周期关卡的非癌组织一般与个别关卡途径例如Chk1途径的暂时破坏隔离开。然而，肿瘤细胞在控制细胞周期进程的途径中有很多缺陷，这样DNA损伤关卡的扰乱可使得细胞对DNA损伤剂特别敏感。因此，预计关卡抑制剂能提高治疗指数，治疗指数是放疗和全身化疗的相对于正常组织毒性概率的肿瘤控制概率的度量标准。相反，其它类别的抑制剂也许不能与化疗联合使用，因为正常组织和肿瘤组织可能都被类似地增敏。
本发明的一个方面涉及抑制Chk1的方法，包括给个体施用治疗有效量的式(I)化合物或含有式(I)化合物的组合物的步骤。式(I)化合物具有下述结构式：
其中：
X1不存在，或者是-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；
X2是-O-、-S-或-N(R1)-；
Y是O或S；或者＝Y代表连接在同一碳原子上的两个氢原子；
W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-3烷基；且
Z选自氢、芳基和杂芳基；
其中所述W和Z的芳基可任选被1-4个由R2代表的取代基取代，所述W和Z的杂芳基可任选被1-4个由R5代表的取代基取代，并且所述W的杂环烷基和环烷基可任选被1-2个由R6代表的取代基取代；R1选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；R2选自卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R3)C(O)OR3、N(R3)C(O)C1-3亚烷基C(O)R3、N(R3)C(O)C1-3亚烷基-C(O)OR3、N(R3)C(O)C1-3亚烷基OR3、N(R3)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR3、N(R3)C(O)C1-3亚烷基-SO2NR3、C1-3亚烷基-OR3和SR3；R3选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R4，被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R4)2和SO2R4取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基-N(R4)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R4)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R4)2)2，或者两个R3一起形成任选取代的3-6元脂族环；
R4选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-3亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R4一起形成任选取代的3-6元环；
R5选自C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、卤素、N3、CN、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R3)2、C(O)R3和
C1-3亚烷基
R6选自卤素和C1-6烷基，及其可药用盐或溶剂化物。
优选用于该方法的化合物是定义如下的那些，其中X1和X2是-N(H)-；
Y是O或S；
W是含有至少两个选自N、O和S的杂原子的杂芳基，所述环可任选被1-4个选自下列的取代基取代：C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3和卤素，其中R3如上所定义；
Z选自：
和
其中：
Q选自氢、OR3、SR3和N(R3)2；
J选自CR20、NR20、O和S；
K选自CR21、NR21、O和S；
L选自CR22、NR22、O和S；
M选自CR23、NR23、O和S；
其中：
R20、R21和R22分别独立地不存在，或独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R25)2、OR25、CO2R25、C(O)N(R25)2、C(O)R25、N(R24)COR25、N(R24)C(O)OR25、N(R25)C(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基C(O)R25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基SO2NR25、CF3、C1-3亚烷基N(R25)SO2芳基、C1-3亚烷基N(R25)SO2杂芳基、C1-3亚烷基OC1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R25)C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R25)C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基N(R25)C(O)R7、C1-3亚烷基N(R25)C(O)C1-3亚烷基OR2、C1-3亚烷基N(R25)C(O)芳基、C1-3亚烷基N(R25)C(O)C1-3亚烷基-N(R25)2、C1-3亚烷基N(R25)C(O)杂芳基、C1-3亚烷基OR25和SR25；
R23不存在，或选自氢、C1-6烷基和卤素；
R24选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
R25选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R26，和被卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R26)2或SO2R26取代的C1-6烷基；且
R26选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R26一起形成任选取代的3-6元环。
该方法的更优选化合物是定义如下的结构式(I)化合物，其中W选自哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基，所述基团可任选被1-4个选自下列的取代基取代：C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、N3、CN、C(O)R7、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R4)、
C1-3亚烷基
和卤素，其中R3、X1、X2、Y和Z如式(I)中所定义。
其它优选的式(I)化合物是定义如下的那些，其中W选自哒嗪、嘧啶、吡嗪和三嗪，所述杂环可任选被1-4个选自下列的取代基取代：任选被取代的C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基N(R4)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R4)3+、C3-8杂环烷基、CH(C1-3亚烷基N(R4)2)2和卤素；X1和X2是-N(H)-；Y是O或S；且Z
选自：
和
其中R3、Q、J、K、L和M如上所定义。
优选用于该方法的化合物还包括定义如下的式(I)化合物，其中J
选自CR20和NR20，其中R20不存在，或者是氢、C1-6烷基和卤素；
K选自CR21和NR21；
L选自CR22和NR22；且R21和R22当中有一个是氢，另一个是选自下列的取代基：CO2R25、C(O)N(R25)2、C(O)R25、N(R24)COR25、N(R24)C(O)OR25、N(R25)C(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基C(O)R25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR25、N(R25)C(O)C1-3亚烷基SO2NR25、C1-3亚烷基OR25和SR25，其中R24、R25、W、X1、X2、Y和M如上所定义。
可用于该方法的化合物还包括定义如下的式(I)结构的化合物，其中X1不存在，X2是-N(H)-，Y是O，Z是氢，且W如上所定义。
抑制Chk1的方法还可用于增加肿瘤细胞对化疗剂的敏感性。因此，本发明还涉及增加肿瘤细胞对化疗剂的敏感性的方法，包括给个体施用式(I)化合物或其盐、溶剂化物或衍生物或含有它们的组合物。
在另一个方面，本发明涉及具有结构式(II)的芳基和杂芳基二取代的脲化合物及其可药用盐或溶剂化物
其中
Y′是O或S；
W′选自
和
所述基团可任选被1-4个选自下列的取代基取代：C1-6烷基、芳基、N(R7)2、OR7、N3、CN、C(O)R7、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)2、
C1-3亚烷基
Z′选自：
和
其中
Q′选自氢、OR7、SR7和N(R7)2；
J′选自C-R8、N-R8、O和S；
K′选自C-R9、N-R9、O和S；
L′选自C-R10、N-R10、O和S；
M′选自C-R11、N-R11、O和S；
其中：
R7独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R12，被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R12)2和SO2R12取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基-N(R12)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R12)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R12)2)2，或者两个R7一起形成任选取代的3-6元脂族环；R8、R9和R10分别独立地不存在，或独立地选自氢、卤素、任选取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R7)2、OR7、CO2R7、C(O)N(R7)2、C(O)R7、N(R13)COR7、N(R13)C(O)OR7、N(R7)C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)R7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基SO2NR7、CF3、C1-3亚烷基N(R12)SO2芳基、C1-3亚烷基N(R12)SO2杂芳基、C1-3亚烷基OC1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)R7、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基OR2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基N(R12)2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)-杂芳基、C1-3亚烷基OR7和SR7，其中R7如上所定义；R11不存在，或选自氢、任选取代的C1-6烷基和卤素；R12选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-3亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R12一起形成任选取代的3-6元环；且
R13选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；条件是：当Q′是氢或OCH3，时，R8、R9和R10当中至少有一个不选自氢、CH3、OCH3和卤素。
优选的结构式(II)化合物是定义如下的那些，其中W′选自
和
所述基团可任选被1-4个选自下列的取代基取代：C1-6烷基、任选取代的芳基、N(R7)2、CF3、C(O)R7、N3、CN、C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)2、OR7、卤素、
C1-3亚烷基
其中R7、Y和Z如上所定义。
更优选的式(II)化合物是定义如下的那些，其中J′选自CR8和NR8，其中R8不存在，或者是氢、C1-6烷基和卤素；
K′选自CR9和NR9；
L′选自CR10和NR10；且R9和R10当中有一个是氢，另一个是选自下列的取代基：CO2R7、C(O)N(R7)2、C(O)R7、N(R13)COR7、N(R13)C(O)OR7、N(R7)C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)R7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR7、N(R7)C(O)C1-3亚烷基SO2NR7、C1-3亚烷基OR7、CF3、C1-3亚烷基N(R12)SO2芳基、C1-3亚烷基N(R12)SO2杂芳基、C1-3亚烷基OC1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基N(R12)C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)R7、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基OR2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)芳基、C1-3亚烷基N(R12)C(O)C1-3亚烷基N(R12)2、C1-3亚烷基N(R12)C(O)杂芳基和SR7，其中R7、R13、W′、Y′和M′如上所定义。
本发明的另一个方面涉及结构式(III)化合物和含有结构式(III)化合物的组合物：
其中W′″选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-3烷基；
其中所述芳基可任选被1-4个由R14代表的取代基取代，所述杂芳基可任选被1-4个由R18代表的取代基取代，并且所述杂环烷基和环烷基可任选被1-2个由R19代表的取代基取代；
R14选自卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R16)2、OR16、CO2R16、C(O)N(R16)2、C(O)R16、N(R15)COR16、N(R15)C(O)OR16、N(R16)C(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基C(O)R16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR16、N(R16)C(O)C1-3亚烷基SO2NR16、C1-3亚烷基OR16和SR16；
R15选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；R16选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、SO2R17，和被一个或多个卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R17)2和SO2R17取代的C1-6烷基，C1-3亚烷基芳基、C1-3亚烷基杂芳基、C1-3亚烷基C3-8杂环烷基、C1-3亚烷基SO2芳基、任选取代的C1-3亚烷基N(R17)2、OCF3、C1-3亚烷基N(R17)3+、C3-8杂环烷基和CH(C1-3亚烷基N(R17)2)2，或者两个R16一起形成3-6元脂族环；
R17选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基和SO2C1-6烷基，或者两个R17一起形成任选取代的3-6元环；
R18选自C1-6烷基、芳基、N(R15)2、OR15和卤素，且R19选自卤素和C1-6烷基。
本文所用术语“烷基”包括含有指定数目碳原子的直链和支链烃基，典型地有甲基、乙基以及直链和支链丙基和丁基。除非另有说明，否则烃基可含有最高达20个碳原子。术语“烷基”包括“桥连烷基”，即C6-C16二环或多环烃基，例如降冰片烷基、金刚烷基、二环[2.2.2]辛基、二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基或十氢萘基。烷基可以被例如下列基团取代：羟基(OH)、卤素、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、氨基(N(Ra)2)和磺酰基(SO2Ra)，其中Ra选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基和SO2C1-6烷基，或者两个Ra一起形成任选取代的3-6元环。
术语“环烷基”定义为环状C3-8烃基，例如环丙基、环丁基、环己基和环戊基。“杂环烷基”类似地定义为环烷基，并包括二环和多环基团，但是环中含有1-3个选自氧、氮和硫的杂原子。环烷基和杂环烷基可以是饱和或部分不饱和的环系，所述环系被例如1-3个独立地选自下列的基团取代：C1-4烷基、C1-3亚烷基OH、C(＝O)NH2、NH2、氧代基(＝O)、芳基、三氟乙酰基和OH。杂环烷基可任选在氮上被C1-3亚烷基芳基或C1-3亚烷基杂芳基取代。
术语“链烯基”与“烷基”的定义相同，但是该取代基含有碳碳双键。
术语“炔基”与“烷基”的定义相同，但是该取代基含有碳碳三键。
术语“亚烷基”是指具有取代基的烷基。例如，术语“C1-3亚烷基C(O)OR”是指被-C(O)OR取代的含有1-3个碳原子的烷基。亚烷基可任选被一个或多个芳基、杂芳基和OR7取代，其中R7如下文所定义。
“卤素”在本文中被定义为包括氟、溴、氯和碘。
单独或组合使用的术语“芳基”在本文中定义为单环或多环芳族基团，优选单环或二环芳族基团，例如苯基或萘基。除非另有说明，否则“芳基”可以是未取代的或者被例如一个或多个、特别是1-4个下列基团取代：卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(Ra)2、ORb、CO2Rb、C(O)N(Rb)2、C(O)Rb、N(Ra)CORb、N(Ra)C(O)ORb、N(Ra)C(O)ORb、N(Ra)C(O)C1-3亚烷基C(O)Rb、N(Rb)C(O)C1-3亚烷基C(O)ORb、N(Rb)C(O)C1-3亚烷基ORb、N(Rb)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)ORb、N(Rb)C(O)C1-3亚烷基SO2NRb、C1-3亚烷基ORb和SRb，其中Rb选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、SO2Ra，和被卤素、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(Ra)2或SO2Ra取代的C1-6烷基，且Ra如上所定义。芳基的实例包括苯基、萘基、四氢萘基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-硝基苯基、2-甲氧基苯基、2，4-甲氧基氯苯基等。术语“芳基C1-3烷基”和“杂芳基C1-3烷基”定义为具有C1-3烷基取代基的芳基或杂芳基。
术语“杂芳基”在本文中定义为含有1或2个芳环，并在芳环中含有至少一个氮、氧或硫原子的单环或二环环系，所述杂芳基可以未取代或者被例如一个或多个、特别是1-4个下列取代基取代：例如氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基、N(Ra)2、ORb和卤素，其中Ra和Rb如上所定义。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡啶基、噁唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、三唑基、异噻唑基、异噁唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。
“羟基”定义为-OH。
本文所用术语“3-6元环”是指碳环和杂环脂族或芳族基团，包括但不限于吗啉基、哌啶基、苯基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、嘧啶基和吡啶基，所述基团可任选被一个或多个、特别是1-3个上文在定义“芳基”时所例举的取代基取代。
含烃部分的碳原子含量是通过下标指出的，下标指出了部分中碳原子的最小和最大数目，例如“C1-6烷基”是指具有1-6个、包括1和6个碳原子的烷基。
在本文的结构中，对于没有标明取代基的键，该取代基是甲基，例如
是
当没指出有取代基连接在环的碳原子上时，应当理解，该碳原子含有适当数目的氢原子。此外，当没指出有取代基连接在羰基或氮原子上时，例如，应当理解，该取代基是氢，例如
是和，R-N是R-NH2。
缩写“Me”是甲基。缩写CO和C(O)是羰基(C＝(O))。
符号N(Rx)2，其中x代表α或数值字符，例如Ra、Rb、R4、R12等，是用于表示连接在同一氮原子上的两个Rx基团。当用于这样的符号中时，Rx基团可相同或不同，并选自如通过Rx基团所定义的基团。
本发明还涉及含有一种或多种结构式(II)和(III)化合物的药物组合物，所述化合物和含有这些化合物的组合物在治疗疾病或病症中的应用，以及制备所述化合物和在结构式(II)和(III)化合物的合成中所涉及的中间体的方法。
用于本发明方法的化合物已经证明在体外抑制Chk1中表现出活性。相对于其它蛋白激酶，包括Cdc2、Chk2、Atr、DNA-PK、PKA和CaM KII，已证明本发明化合物表现出对Chk1的选择性。
本发明化合物可用于增强在人或动物癌症和其它细胞增殖病症的治疗中使用的放疗和/或化疗的治疗效果。例如，本发明化合物可用于增强通常用抗代谢药物例如甲氨蝶呤或5-氟尿嘧啶(5-FU)常规治疗的肿瘤的治疗效果。本发明方法包括联合施用Chk1抑制剂化合物和可作用于单链或双链DNA而使其断裂或者可阻断DNA复制或细胞增殖的化疗剂。或者，本发明方法包括联合施用Chk1抑制剂化合物和包括使用具有抑制癌细胞增殖活性的抗体例如herceptin的治疗。因此，癌症，例如结肠直肠癌、头和颈癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、外阴癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌、卵巢癌、脑肿瘤、骨肉瘤和肺癌易于通过联合使用本发明Chk1抑制剂而得到增强的治疗。
肿瘤或新生物包括其中细胞增殖是不受控制和进行性的组织细胞生长。某些这样的生长是良性的，但是其它生长称为“恶性的”，并且可导致生物体死亡。恶性肿瘤或“癌”与良性生长的区别在于，除了表现出进行性细胞增殖以外，它们还可以侵袭周围组织并且转移。此外，恶性肿瘤的特征还在于表现出更大的分化损失(更大的“消分化”)和彼此间以及涉及周围组织的有机化。该性质称为“退行发育”。
可通过本发明治疗的肿瘤还包括实体瘤，即癌和肉瘤。癌包括渗入(即侵袭)周围组织并带来转移的源自上皮细胞的恶性肿瘤。腺癌是源自腺组织或源自形成可识别腺结构的组织的癌。另一大类癌症包括肉瘤，它们是其中细胞包埋在丝状或同质物质例如胚胎结缔组织中的肿瘤。本发明还能够治疗骨髓或淋巴组织系统的癌，包括白血病、淋巴瘤和通常不作为肿瘤实体存在，但是分散在血管或淋巴网状内皮细胞系统中的其它癌。
Chk1活性与各种形式的癌有关，所述癌有例如成人和儿童肿瘤，实体瘤/恶性肿瘤生长，粘液和圆形细胞癌，局部发展的肿瘤，转移性癌，人软组织肉瘤，包括Ewing′s肉瘤，癌转移瘤，包括淋巴转移瘤，鳞状细胞癌，特别是头和颈部的鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌，口腔癌，血细胞癌，包括多发性骨髓瘤，白血病，包括急性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病和毛细胞白血病，渗漏性淋巴瘤(基于体腔的淋巴瘤)，胸腺淋巴细胞肺癌(包括小细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、Hodgkin′s淋巴瘤、非-Hodgkin′s淋巴瘤、肾上腺皮质癌、产生ACTH的肿瘤、非小细胞肿瘤，乳腺癌，包括小细胞癌和导管癌)，胃肠癌(包括胃癌、结肠癌、结肠直肠癌和与结肠直肠瘤形成有关的息肉)，胰腺癌，肝癌，泌尿系统癌(包括膀胱癌例如原发性表面膀胱肿瘤、侵袭性过渡型膀胱细胞癌和肌肉侵袭性膀胱癌)，前列腺癌，女性生殖道恶性肿瘤(包括卵巢癌、原发性腹膜上皮肿瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、子宫癌和卵巢滤泡中的实体瘤)，男性生殖道恶性肿瘤(包括睾丸癌和阴茎癌)，肾癌(包括肾细胞癌)，脑癌(包括固有性脑肿瘤、成神经细胞瘤、星形细胞性脑肿瘤、神经胶质瘤和侵袭到中枢神经系统中的转移性肿瘤细胞)，骨癌(包括骨瘤和骨肉瘤)，皮肤癌(包括恶性黑素瘤、人皮肤角质形成细胞的肿瘤进行和鳞状细胞癌)，甲状腺癌，成视网膜细胞瘤，成神经细胞瘤，腹膜渗漏，恶性胸膜渗漏，间皮瘤，Wilms′s肿瘤，胆囊癌，滋养层肿瘤，血管外皮细胞瘤和Kaposi′s肉瘤。
本发明化合物还可以在炎性疾病的治疗中提高药物的效力。可受益于用适于本发明方法的化合物进行的联合治疗的疾病的实例是类风湿性关节炎、牛皮癣、白癜风、Wegener′s肉芽肿病和全身性红斑狼疮(SLE)。关节炎、Wegener′s肉芽肿病和SLE的治疗经常涉及使用免疫抑制治疗，例如电离放射、甲氨蝶呤和环磷酰胺。这样的治疗一般直接或间接引起DNA损伤。在进攻性免疫细胞内抑制Chk1活性使得细胞对于通过这些标准治疗进行的控制更敏感。牛皮癣和白癜风一般是用紫外线放射(UV)和补骨脂素联合治疗。目前的DNA损伤剂诱导UV和补骨脂素的杀死作用，并提高该治疗方案的治疗指数。在与当前使用的免疫抑制药物联合使用时，可用于本发明方法的化合物一般能提高对炎性疾病细胞的控制。
本发明包括用于本发明方法的结构式(I)、(II)和(III)化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体。本发明不仅包括外消旋化合物，还包括旋光异构体。当需要结构式(I)、(II)或(III)化合物作为单一的对映体存在时，其可以这样获得：将终产物拆分，或者由异构体纯的原料进行立体有择合成，或使用手性辅助试剂来进行立体有择合成，例如参见Z.Ma等人，Tetrahedron：Asymmetry，8(6)，p.883-888(1997)。终产物、中间体或原料的拆分可通过本领域已知的任一合适的方法来实现。此外，当可能存在结构式(I)、(II)和(III)化合物的互变异构体时，本发明包括所有互变异构体形式的这些化合物。如下文所证明的那样，在与化疗或放疗联合使用时，特定的立体异构体可表现出异常的抑制Chk1的能力，并且具有减弱的通常与化疗或放疗有关的不利作用。
结构式(I)、(II)和(III)化合物的组合物的前药也可以用作化合物和用于本发明方法中。充分确认的是，其中化合物衍生成适于配制和/或给药的形式，之后在体内作为药物释放的前药方法已被成功地用来暂时(例如生物可逆地)改变化合物的物理化学性质(参见H.Bundgaard，Ed.，Design of Prodrugs，Elsevier，Amsterdam，(1985)；R.B.Silverman，The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action.AcademicPress，San Diego，第8章，(1992)；K.M.Hillgren等人，Med.Res.Rev.，15，83(1995))。
本发明化合物可含有几个官能团。如果希望或必需的话，则可以修饰所引入的官能团以提供用于配剂制剂和/或给药的前药。合适的前药包括例如酸衍生物，例如酰胺、酯等。本领域技术人员还应当理解，N-氧化物可用作前药。
本文所用术语可药用盐是指含有酸性基团，并与合适的阳离子形成盐的结构式(I)、(II)和(III)化合物。合适的可药用阳离子包括碱金属(例如钠或钾)和碱土金属(例如钙或镁)阳离子。含有碱性中心的结构式(I)、(II)和(III)化合物的可药用盐是与可药用酸形成的酸加成盐。实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡萄糖酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。根据上述内容，本文任何一次所提及的本发明化合物都包括结构式(I)、(II)和(III)化合物及其可药用盐和溶剂化物。
本发明化合物可作为纯净的化学药品在治疗上给药，但是优选将结构式(I)、(II)和(III)化合物作为药物组合物或制剂给药。因此，本发明还提供了含有结构式(I)、(II)和/或(III)化合物或其可药用盐和一种或多种可药用载体以及任选其它治疗和/或预防用组分的药物制剂。在与制剂的其它组分相容并且不给其受者带来伤害这种意义上，载体是“可接受的”。
对关卡激酶的抑制一般是用剂量-反应分析测定的，在这样的测定中，让敏感的测定系统与一定浓度范围的感兴趣化合物接触，包括不能观测到作用或观测到最小作用的浓度，经过能观测到部分作用的较高浓度，以到达能观测到最大作用的饱和浓度。在理论上，这样的抑制剂化合物剂量-反应作用的测定可以描述为表示与浓度有关的抑制程度的半月形曲线。在理论上，该曲线还经过这样的点，其中在该点的浓度足以将关卡酶活性降至是该测定中最小和最大酶活性之间差值的50％的水平。该浓度定义为抑制浓度(50％)或IC50值。IC50值的确定优选使用常规生化(无细胞)测定技术或基于细胞的测定技术来进行。
经常通过比较IC50值来提供抑制剂效力的比较，其中较高的IC50值表示测试化合物的效力比参照化合物弱，较低的IC50值表示化合物的效力比参照化合物更强。当使用剂量-反应分析测定时，用于本发明方法的化合物表现出至少0.1nM的IC50值。优选的化合物表现出低于10μM的IC50值。更优选的化合物表现出低于500nM的IC50值。仍然更优选的本发明化合物表现出低于250nM、低于100nM或低于50nM的IC50值。
适用于本发明的化合物和药物组合物包括其中活性组分是以有效量施用以实现其预期目的的那些。更具体来说，“治疗有效量”是指能有效地抑制所治疗个体的已有症状发展或减轻已有症状的量。本发明技术人员利用其知识能力，尤其是根据本文所提供的详细公开内容，能很容易确定出有效量。
“治疗有效剂量”是指实现所需效果的化合物的量。这样的化合物的毒性和治疗效力可通过标准药物方法在细胞培养物或实验动物中测定，例如通过用于测定LD50(使50％群体死亡的剂量)和ED50(在50％群体中治疗有效的剂量)的标准药物方法测定。毒性与治疗效果之间的剂量比例是治疗指数，其作为LD50与ED50的比例表示。表现出高治疗指数(即中毒剂量显著高于有效剂量)的化合物是优选的。所获得的数据可用于配制在人中使用的剂量范围。这样的化合物的剂量优选在包括具有小的毒性或没有毒性的ED50的循环浓度范围内。根据所用的剂型和所用的给药途径，剂量可在该范围内变化。
确切的制剂、给药途径和剂量由独立医师根据患者的情况来选择。可独立地调节给药剂量和间隔以提供足以保持所需疗效的活性化合物的血浆水平。
可配制本发明药物组合物以使其包含一种或多种可减小可由于单独施用药物组合物而引起或与其有关的不利副作用的细胞因子、淋巴因子、生长因子或其它造血因子。可特别用于本发明药物组合物的细胞因子、淋巴因子、生长因子或其它造血因子包括但不限于M-CSF、GM-CSF、TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IFN、TNF、G-CSF、Meg-CSF、GM-CSF、血小板生成素、干细胞因子、红细胞生成素、血管生成素(angiopoietin)，包括Ang-1、Ang-2、Ang-4、Ang-Y和/或人血管生成素样多肽，血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素、骨形态发生蛋白-1(BMP-1)、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9、BMP-10、BMP-11、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15、BMP受体IA、BMP受体IB、脑衍生神经营养因子、睫状神经营养因子、睫状神经营养因子受体、细胞因子引起的嗜中性白细胞趋化因子1、细胞因子引起的嗜中性白细胞趋化因子2、细胞因子引起的嗜中性白细胞趋化因子2、内皮细胞生长因子、内皮肽1、表皮生长因子、上皮衍生嗜中性白细胞引诱剂、成纤维细胞生长因子(FGF)4、FGF 5、FGF 6、FGF 7、FGF 8、FGF 8b、FGF 8c、FGF 9、FGF 10、酸性FGF、碱性FGF、神经胶质细胞系衍生嗜中性白细胞因子受体1、神经胶质细胞系衍生嗜中性白细胞因子受体2、生长相关蛋白、生长相关蛋白、生长相关蛋白、生长相关蛋白、肝素结合表皮生长因子、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子受体、胰岛素样生长因子I、胰岛素样生长因子受体、胰岛素样生长因子II、胰岛素样生长因子结合蛋白、角质形成细胞生长因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受体、神经生长因子、神经生长因子受体、神经营养蛋白-3、神经营养蛋白-4、胎盘生长因子、胎盘生长因子2、血小板衍生内皮细胞生长因子、血小板衍生生长因子、血小板衍生生长因子A链、血小板衍生生长因子AA、血小板衍生生长因子AB、血小板衍生生长因子B链、血小板衍生生长因子BB、血小板衍生生长因子受体、血小板衍生生长因子受体、前-B细胞生长刺激因子、干细胞因子、干细胞因子受体、转化生长因子(TGF)、TGF、TGF 1、TGF 1.2、TGF 2、TGF3、TGF 5、潜伏TGF 1、TGF、结合蛋白I、TGF结合蛋白II、TGF结合蛋白III、I型肿瘤坏死因子受体、II型肿瘤坏死因子受体、尿激酶型纤溶酶原激活物受体、血管内皮生长因子及其嵌合蛋白和生物或免疫活性片段。
依据本发明使用的化合物可以与促进化合物的在治疗使用方法中有益的任何性质的辅助物缀合或连接。这样的缀合物可增强化合物向特定预期解剖学位点或区域(例如肿瘤)的递送，能够在靶细胞中达到持续的化合物治疗浓度，改变化合物的药动学和药代学特征，和/或提高化合物的治疗指数或安全性。合适的辅助物包括例如氨基酸、低聚肽或多肽，例如抗体如单克隆抗体和其它工程化抗体；和靶细胞或组织中受体的天然或合成配体。其它合适的辅助物包括脂肪酸或脂质物质，以促进靶细胞对化合物的生物分布或摄取(参见例如Bradley等人，Clin.Cancer Res.(2001)7：3229)。
包含一种或多种本发明化合物的组合物的治疗指数可通过将化合物与如上所述的抗肿瘤抗体缀合来提高(例如Pietersz and McKinzie，Immunol.Rev.(1992)129：57；Trail等人，Science(1993)261：212；Rowlinson-Busza and Epenetos，Curr.Opin.Oncol.1992；4：1142)。本发明化合物指向肿瘤的递送能通过将可由放疗或化疗导致的潜在非特异性毒性降至最小来提高有益治疗效果。另一方面，Chk1抑制剂和放射性同位素或化疗剂可缀合到相同抗体分子上。或者，可将缀合着Chk1抑制剂的肿瘤特异性抗体在施用缀合着化疗剂的抗肿瘤抗体或放射免疫治疗之前、期间或之后施用。
本发明化合物可提高放疗和化疗，包括诱导化疗、初级(新辅助性)化疗以及辅助性放疗和辅助性化疗的有益治疗效果。此外，在癌症的治疗中，放疗和化疗经常作为手术的辅助治疗手段。在该辅助治疗安排中，放疗和化疗的目的是，当原始肿瘤已经被控制住后，减小复发的危险性和提高不患疾病的存活率。化疗用作结肠癌、肺癌和乳腺癌的辅助治疗，当疾病是转移性的时，更是经常使用。辅助性放疗在几种疾病中使用，包括如上所述的结肠癌、肺癌和乳腺癌。例如，放疗经常作为直肠癌治疗策略的一部分在手术前和手术后使用。因此，本发明化合物可特别在手术后与放疗和/或化疗联合用于癌症治疗。
本发明化合物还可以放射增敏细胞。本文所用术语“放射增敏”定义为这样的分子、优选低分子量分子，在以治疗有效量施用给人或其它动物时，它们能提高欲放射增敏的细胞对电磁放射的敏感性和/或提高可用电磁放射治疗的疾病的治疗效果。可用电磁放射治疗的疾病包括肿瘤疾病、良性和恶性肿瘤和癌细胞。
本发明还涉及在本文中没有列出的其它疾病的电磁放射治疗。本文所用术语“电磁放射”和“放射”包括但不限于波长为10-2-100米的放射。优选的本发明实施方案采用下列电磁放射：γ-放射(10-20-10-13m)、X-射线放射(10-12-10-9m)、紫外光(10nm-400nm)、可见光(400nm-700nm)、红外线放射(700nm-1.0mm)和微波放射(1mm-30cm)。
目前，许多癌症治疗方案采用通过电磁放射例如X-射线激活的放射增敏剂。X-射线激活的放射增敏剂的实例包括但不限于下列增敏剂：甲硝唑、醚醇硝唑、去甲基米索硝唑(desmethylmisonidazole)、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FUdR)、羟基脲、顺铂和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
癌症的光动力治疗(PDT)使用可见光作为增敏剂的放射激活剂。光动力放射增敏剂的实例包括但不限于下列：血卟啉衍生物、PHOTOFRIN、苯并卟啉衍生物、NPe6、锡初卟啉(SnET2)、pheoborbide-a、菌叶绿素-a、naphthalocyanines、酞菁染料、酞花菁锌和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
放射增敏剂可以与治疗有效量的一种或多种除Chk1抑制剂之外的化合物联合施用，这样的化合物包括但不限于：促进放射增敏剂掺入到靶细胞中的化合物、控制治疗剂流动的化合物、靶细胞的营养物和/或氧、具有或不具有另外的放射作用的作用于肿瘤的化疗剂或用于治疗癌症或其它疾病的治疗有效化合物。可以与放射增敏剂联合使用的附加治疗剂的实例包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、氧、卡波金、红细胞输液、全氟碳(例如FLUOSOLW-DA)、2，3-DPG、BW12C、钙通道阻滞剂、己酮可可碱、抗血管生成化合物、肼酞嗪和L-BSO。
可使用的化疗剂包括但不限于烷化剂、抗代谢药物、激素及其拮抗剂、放射性同位素、抗体、以及天然产物和它们的组合。例如，本发明抑制剂化合物可以与下列药物联合施用：抗生素，例如阿霉素和其它蒽环类似物，氮芥类药物，例如环磷酰胺，嘧啶类似物例如5-氟尿嘧啶，顺铂、羟基脲、紫杉醇及其天然和合成衍生物等。作为另一个实例，对于混合型肿瘤例如乳腺癌的腺癌，当肿瘤包括依赖于促性腺素和不依赖于促性腺素的细胞时，可将化合物与亮丙立德或戈舍瑞林(LH-RH的合成肽类似物)联合给药。其它抗肿瘤方案包括使用抑制剂化合物与另一治疗手段例如手术或放疗，这样的治疗手段在本文中还称为“辅助抗肿瘤治疗手段”。下表中列出了可用于本发明方法的化疗剂的实例。
可特别与放射增敏剂联合使用的化疗剂的实例包括例如阿霉素、喜树碱、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、干扰素(α，β，γ)、白介素-2、伊立替康、多西他赛、紫杉醇、托泊替康和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
本领域技术人员应当理解，本文所提及的治疗包括预防和治疗已确认的疾病或症状。还应当理解，治疗所需的本发明化合物的量将随所治疗病症的性质、患者年龄和身体状况而变，并且最终由临床医师或兽医决定。然而，对于成人治疗，所用的剂量一般是每天0.001mg/kg-约100mg/kg。所需的剂量每天方便地可以一次剂量施用，或者以适当间隔分多次剂量施用，例如分成2、3、4或更多份亚剂量施用。在实际应用中，医师决定最适于个体患者的实际给药方案，并且剂量随特定患者的年龄、体重和反应而变化。上述剂量是平均情况的示例，但是其中采用更高或更低剂量的个别情况也是有可能的，并且在本发明范围内。
本发明制剂可以以标准方式给药来治疗指定的疾病，所述给药方式有例如口服、非胃肠道给药、经粘膜给药(例如舌下给药或经由颊给药)、局部给药、透皮给药、直肠给药、经由吸入给药(例如鼻或深的肺吸入)。非胃肠道给药包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内和关节内给药。非胃肠道给药还可以使用高压技术例如POWDERJECTTM来完成。
对于包括颊给药在内的口服给药，组合物可以呈以常规方式配制成的片剂或锭剂的形式。例如，口服片剂和胶囊可含有常规赋形剂例如粘合剂(例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、淀粉胶浆或聚乙烯吡咯烷酮)、填充剂(例如乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙或山梨醇)、润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(例如土豆淀粉或羟乙酸淀粉钠)或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)。可依据本领域众所周知的方法将片剂包衣。
或者，可将本发明化合物掺入到口服液体制剂例如水或油悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂中。此外，含有这些化合物的制剂可以作为在使用前用水或其它适当载体配制的干燥产品存在。合适的液体制剂可含有常规添加剂例如悬浮剂，如山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖的糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化可食用脂肪；乳化剂例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水载体(可包括食用油)，例如杏仁油、分馏的椰子油、油酯、丙二醇和乙醇；和防腐剂例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯和山梨酸。
这样的制剂还可以配制成栓剂，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯的栓剂。吸入给药用的组合物一般可以以可作为干粉给药的溶液、悬浮液或乳剂的形式或使用常规推进剂例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷的气雾剂的形式提供。典型的局部和透皮给药制剂包含常规水或非水载体例如滴眼剂、霜剂、软膏剂、洗剂和糊剂，或者呈含有药物的硬膏剂、贴剂或膜的形式。
此外，本发明组合物可以配制成通过注射或连续输注来非胃肠道给药的形式。注射制剂可以呈在油或水载体中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，并且可以含有制剂助剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性组分可以呈在使用前用合适的载体(例如无菌、不含热原的水)配制的粉末形式。
本发明组合物还可以配制成贮药库制剂。这样的长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内植入)或肌内注射来给药。因此，可以用合适的聚合或疏水性材料(例如在可接受的油中的乳液)、离子交换树脂配制本发明化合物，或者配制成微溶性衍生物(例如微溶性盐)。
对于兽医应用，式(I)、(II)或(III)化合物或其无毒盐是依据标准兽医实践作为适当可接受的制剂给药。兽医可容易地确定对于特定动物最合适的给药方案和给药途径。
因此，本发明提供了药物组合物，其中包含式(I)、(II)或(III)化合物和用于它们的可药用稀释剂或载体。本发明还提供了制备包含式(I)、(II)或(III)化合物的药物组合物的方法，包括将式(I)、(II)或(III)化合物与用于它们的可药用稀释剂或载体混合在一起。
下面提供结构式(I)、(II)和(III)化合物的具体非限制性实例，它们的合成是依据下面给出的方法进行的。
为了易于理解，将具有特定结构的化合物用在下表中提供的相应化合物序号表示，其中下表总结了可用于本发明方法的某些化合物。例如，以化合物1表示的结构是结构式(IV)化合物，其中R27是氢，且R28是-C(O)NH(CH2)2(2-N-甲基吡咯烷基)。
适于本发明方法的化合物包括但不限于：
杂环取代基：
硫脲化合物：
杂类：
某些优选的化合物包括化合物2、4、6、12、72、76、83、84、88、89和90。
包括结构式(IV)、(V)、(VI)和(VII)化合物在内的结构式(I)、(II)和(III)化合物一般可依据下列合成方案制得。在下述合成方案中，本领域技术人员应当理解，如果需要的话，可依据一般合成化学原则使用保护基。在最后的合成步骤中，可在对于本领域技术人员来说是显而易见的碱性、酸性或氢解条件下除去保护基。通过采用合适的操作和保护任何化学官能团，在本文中没有具体给出的结构式(I)、(II)和(III)化合物的合成可通过类似于下述方案的方法来完成。
除非另有说明，否则所有原料都得自商业供应商，并且不用进一步纯化而直接使用。所有反应和色谱级份都是通过薄层色谱法分析的，所述薄层色谱是在250-mm硅胶板上进行的，用UV(紫外线)光和I2(碘)染色来显形。快速柱色谱是用Biotage 40M硅胶(230-400目)进行的。产物和中间体是通过快速色谱法或反相HPLC纯化的。
如下所示，结构式(I)和(II)化合物可通过下述一般合成方案制得。
一般合成方案1
一般将式Ar-NH2所代表的芳基胺与约0.75-1.25摩尔当量氯甲酸4-硝基苯基酯反应。该反应优选在惰性气氛下例如氮气氛下(N2)进行，并且通常保持在低温(约0℃)下。将所得产物用约0.75-1.25摩尔当量的式HetAr-NH2杂芳基胺优选在惰性气氛中于室温(约25℃)处理，获得了芳基吡嗪二取代的脲化合物粗品。
关于制备标准式(I)和(II)化合物的更具体举例说明可包括例如下述一般合成方案2。
步骤(1)：TMS-重氮甲烷酯化
用1小时向4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(5.0g；30mmol)在无水甲醇(150mL)内的冷的(约0℃)搅拌着的溶液中缓慢地加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(60mL 2.0M己烷溶液，120mmol)。搅拌4小时后，将该反应减压浓缩，溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用10％碳酸钠水溶液和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，获得了所需的酯，为灰白色固体(产率为94％)。
一般合成方案2
步骤(2)：氨基甲酸对硝基苯基酯方法
在氮(N2)气氛下，向3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(5.0g；27.6mmol)在无水二氯甲烷(175mL)内的搅拌着的冷(约0℃)溶液中加入吡啶(2.34mL；29mmol)，然后加入氯甲酸4-硝基苯基酯(5.8g；29mmol)。搅拌8小时后，将该反应用2N盐酸水溶液(2×200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液用乙酸乙酯和己烷(约800mL)稀释直至形成沉淀。通过在布氏漏斗上抽滤来收集固体，风干，获得了所需的氨基甲酸酯，为白色固体(产率为70％)。
步骤(3)：氨基甲酸酯偶联方法
在氮气氛下于室温向4-甲氧基-3-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-苯甲酸甲酯(30g；8.7mmol)在无水N-甲基吡咯烷(50mL)内的搅拌着的溶液中加入氨基吡嗪(0.84g；8.8mmol)。将该反应混合物在80℃加热6小时，然后冷却至室温。用乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)稀释，获得了所需的脲，为白色固体(产率为54％)。
步骤(4)：氢氧化锂水解方法
在室温向4-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸甲酯(1.0g；3.3mmol)在甲醇(35mL)内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂水溶液(5mL2N溶液；10mmol)。将该反应在67℃加热15小时，然后冷却至室温。用水(100mL)稀释该反应，用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤。用2N盐酸水溶液将水层的pH调节至pH5.2，通过在布氏漏斗上抽滤来收集所得沉淀，并风干，获得了所需的酸，为白色固体。
步骤(5)：HBTU偶联方法
在氮气氛下于室温向上述酸(30mg；0.11mmol)在无水N-甲基吡咯烷酮(2mL)内的搅拌着的溶液中加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基(uronium)六氟磷酸盐(HBTU；45mg；0.12mmol)、4-(2-氨基乙基)-吗啉(15.7L；0.12mmol)和二异丙基乙基胺(34L，0.2mmol)。将所得溶液搅拌5小时，然后用乙酸乙酯(30mL)和10％碳酸钠水溶液(30mL)稀释。在室温剧烈搅拌15分钟后，通过在布氏漏斗上抽滤来收集沉淀，并风干，获得了所需的酰胺，为白色固体(产率为59％)。
使用一般合成方案2中所描述的一般方法，但是用下列R基团替代一般合成方案2中所示的R基团，制得了下列化合物：
一般合成方案3
异氰酸酯方法：
在氮气氛下，在反应瓶中，向异氰酸2-甲氧基-5-甲基-苯基酯(43mL；0.3mmol)在无水二氯乙烷(0.4mL)内的搅拌着的溶液中加入2-氨基喹喔啉(43.5mg；0.3mmol)。将该反应瓶塞上盖，在80℃加热过夜(14小时)。然后将该反应混合物过滤，用二氯甲烷洗涤残余物，获得了所需的脲，为白色固体(产率为91％)。
使用一般合成方案3中所描述的方法，但是用下表中的Ar基团替代一般合成方案3中所示的Ar基团，制得了下列化合物：
实施例
实施例1
制备化合物115
1-[2-(1，1-二氟甲氧基)-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲
将异氰酸2-(二氟甲氧基)苯基酯(1.0g，5.4mmol)和氨基吡嗪(0.51g，5.4mmol)在回流的二甲氧基乙烷(20mL)中反应6小时。将该反应混合物冷却至室温以沉淀出产物，通过过滤收集沉淀，用乙酸乙酯洗涤，并真空干燥(765mg，50％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.49(br s，1H)，10.26(s，1H)，8.83(s，1H)，8.35-8.24(m，3H)，7.53-7.00(m，4H).
实施例2
制备化合物165
1-(2-甲硫基苯基)-3-吡嗪-2-基脲
将异氰酸2-(甲硫基苯基)酯(1.0g，6.1mmol)和氨基吡嗪(0.58g，6.1mmol)在回流的二甲氧基乙烷(40mL)中反应16小时。产物从冷却的反应混合物中沉淀出来，通过过滤收集，用二甲氧基乙烷洗涤，并真空干燥(715mg，45％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：10.35(br s，1H)，10.29(s，1H)，8.84(s，1H)，8.33(s，1H)，8.27(s，1H)，8.09(d，1H)，7.45(d，1H)，7.29，(t，1H)，7.10(t，1H)，2.43(s，3H).13C NMR(75Mhz，d6-DMSO)δ：151.8，149.2，140.5，137.5，137.3，135.2，130.1，127.1，126.9，123.7，121.4，16.5.
实施例3
制备化合物159
1-(2-甲氧基-5-硝基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲
将异氰酸2-甲氧基-5-硝基苯基酯(5.0g，25mmol)和氨基吡嗪(2.5g，26mmol)在四氢呋喃(THF，250mL)中的混合物在回流状态下搅拌24小时。产物从冷却的反应混合物中沉淀出来，通过过滤收集，用乙酸乙酯洗涤，并真空干燥(4.3g，57％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)(mixture of rotamers)δ：10.38(br，s，1H)，10.27(s，1H)，9.39，8.88(2个单峰，1H)，9.10(d，H)，8.33(s，1H)，8.26(d，1H)，7.98-8.25(m，1H)，7.97-7.84(m，1H)，4.05，4.03(2个单峰，77：28ratio，3H).
实施例4
制备化合物14
1-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲
在80℃，披钯炭(Pd/C)催化剂(1.6g，10％Pd)存在下，将(2-甲氧基-5-硝基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物159，实施例3)(16.9g，55mmol)在二甲基甲酰胺(DMF，320mL)中的溶液于H2下振摇12小时。再加入一部分催化剂(1.6g)，并在相同温度下继续振摇8小时。将该溶液经由硅藻土垫过滤，使用另外的200mL DMF洗涤。将滤液真空浓缩，用甲醇(100mL)研制残余物。收集固体，在煮沸的甲醇中搅拌，过滤出存在的固体(1.8g)并弃去。将滤液在4℃冷却过夜。通过过滤除去固体(1.4g)，将滤液真空浓缩，获得了黄褐色固体(2.6g)。用THF(200mL)研制固体粗产物，通过过滤收集，并真空干燥，获得了产物，为黄褐色固体(1.85g，13％)。
1H NMR(300Mhz，d6 DMSO)δ：10.10(s，1H)，9.94(br s，1H)，8.89(s，1H)，8.32(s，1H)，8.22(s，1H)，7.58(s，1H)，7.75(d，1H)，6.21(d，1H)，4.70(s，2H)，3.76(s，3H).13CNMR(75Mhz，d6-DMSO)δ：151.4，149.4，142.6，140.9，139.8，137.2，135.2，128.7，112.8，107.7，106.0，56.8.
实施例5
制备化合物48
N-[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-琥珀酰胺酸
在室温将1-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物14，实施例4)(260mg，1mmol)和琥珀酸酐(131mg，1.3mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液搅拌16小时。通过过滤收集所得固体，用氯仿研制，并真空干燥，获得了灰白色产物(175mg，50％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.15(s，1H)，10.05(s，1H)，9.87(s，1H)，8.90(s，1H)，8.33(s，2H)，8.24(s，1H)，7.42(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，6.96(d，J＝8.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，2.54(br s，4H).
实施例6
制备化合物36
(S)-1-(2，2，2-三氟乙酰基)吡咯烷-2-甲酸[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲
基)苯基]-酰胺
在0℃，将1-(5-氨基-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物14，实施例4)(105mg，0.4mmol)在无水吡啶(2mL)中的溶液用N-三氟乙酰基-(S)-脯氨酰氯溶液(0.1M二氯甲烷溶液，4.5mL，0.45mmol)处理，并在室温搅拌2小时。用1N HCl(50mL)中止该反应，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用1N HCl(2×20mL)、水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩，获得了淡棕色固体(60mg)。用乙腈重结晶，获得了固体终产物(30mg，17％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：(10.16-10.06，m，3H)，8.90(s，1H)，8.36-8.30(m，2H)，8.25(d，J＝2.6Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，6.98(d，J＝8.8Hz，1H)，4.57(dd，J＝8.5，4.4Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.73(t，J＝6.5Hz，1H)，2.27-2.21(m，1H)，2.06-1.90(m，3H).LRMS(ESI，正)m/e453.1(M+1).
实施例7
制备化合物16
(S)-吡咯烷-2-甲酸[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯基]-酰胺
将(S)-1-(2，2，2-三氟乙酰基)-吡咯烷-2-甲酸[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯基]-酰胺(化合物36，实施例6)(22mg，0.05mmol)在甲醇(MeOH，5mL)和水(约0.25mL)的混合物中的悬浮液用KOH(100mg，大大过量)处理。在10分钟之内所有组分都溶解在溶液中。用水(20mL)处理该反应混合物，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层合并，用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，获得了黄褐色固体(13mg，75％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：10.13(s，1H)，10.03(s，1H)，9.85(s，1H)，8.90(s，1H)，8.38-8.28(m，2H)，8.25(d，J＝2.6Hz，1H)，7.41(dd，J＝8.8，2.6Hz)，6.98(d，J＝8.8Hz，1H)，3.88(s，3H，3.69(dd，J＝8.7，5.6Hz，1H)，2.94-2.87(m，2H)，2.10-1.97(m，1H)，1.81-1.60(m，3H).LRMS(ESI，正)m/e 357.1(M+1).
实施例8
制备化合物42
N-[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-甲磺酰胺
将1-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物14，实施例4)(260mg，1mmol)在无水吡啶(15mL)中的溶液用甲磺酰氯(0.08mL，1mmol)处理，在室温搅拌16小时。将该反应混合物真空浓缩，用乙醇研制固体残余物，通过过滤收集，并真空干燥，获得了产物(205mg，61％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.16(s，1H)，10.07(s，1H)，9.40(s，1H)，8.92(s，1H)，8.35(s，1H)，8.27(s，1H)，8.19(d，J＝2.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.8Hz，1H)，6.91(dd，J＝8.7，2.4Hz，1H)，3.91(s，3H)，2.91(s，3H).
实施例9
制备化合物65
1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲
将异氰酸2-甲氧基-4-硝基苯基酯(15.0g，77mmol)和氨基吡嗪(7.35g，77mmol)在THF(600mL)中的混合物在回流状态下搅拌24小时。产物从冷的反应混合物中沉淀出来，通过过滤收集，用乙酸乙酯洗涤，用热乙醇研制，并真空干燥(16.3g，73％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.50(br s，1H)，10.42(s，1H)，8.94(s，1H)，8.48(d，1H)，8.39(s，1H)，8.32(d，1H)，7.95(dd，J＝9.1，2.4Hz，1H)，7.84(d，J＝2.4Hz，1H)，4.08(s，3H).
实施例10
制备化合物32
1-(4-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲
在110℃、Pd/C催化剂(1.6g，10％Pd)存在下，将(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物65，实施例9)(7.9g，27mmol)在DMF(300mL)中的溶液在H2下振摇4小时。将该混合物经由硅藻土垫过滤，用另外的200mL DMF洗涤。将滤液真空浓缩，将残余物从乙醇中重结晶(采用热过滤步骤)，获得了浅灰色产物(2.9g，41％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ：9.83(s，1H)，9.50(s，1H)，8.86(s，1H)，8.28(s，1H)，8.19(d，J＝2.5Hz，1H)，7.64(d，J＝8.5Hz，1H)，6.31(d，J＝2.0Hz，1H)，6.13(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，4.92(s，2H)，3.79(s，3H).13C NMR(75Mhz，d5-DMSO)δ：151.6，150.0，149.6，145.2，140.9，136.9，135.1，121.6，116.8，105.5，98.0，55.4.
实施例11
制备化合物3
C-二甲基氨基-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-乙酰胺
在0℃，向N，N-二甲基甘氨酸(124mg，1.2mmol)和三乙胺(0.33mL，2.4mmol)在无水乙腈(5mL)内的溶液中滴加氯甲酸异丁酯(0.16mL，1.2mmol)，并搅拌15分钟。向该混合物中滴加1-(4-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物32，实施例10)(100mg，0.4mmol)在二甲亚砜(DMSO，1mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌3小时，用水(20mL)中止反应，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物溶解在DMSO(1mL)中，通过HPLC(YMC 20×50mm C18 CombiPrep柱，20mL/分钟，2-50％CH3CN/水，6分钟，所有溶剂都含有0.05％三氟乙酸(TFA)，0.35mL注射，检测器在254nm测定，检测器路径长度0.2mm)纯化。将含有产物的级份真空浓缩，获得了三氟乙酸(TFA)盐形式的产物(24mg，17％)。
实施例12
制备化合物8
3-氯-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-丙酰胺
在0℃，将1-(4-氨基-2-甲氧基苯基)-3-吡嗪-2-基-脲(化合物32，实施例10)(259mg，1mmol)在吡啶(3mL)中的溶液用氯乙酰氯(0.29mL，3mmol)处理。将该悬浮液在80℃温热直至大部分固体溶解，将该反应混合物冷却至室温，用乙醚(10mL)使产物沉淀出来。该粗产物不用纯化直接用于进一步的反应，但是取一部分(30mg)粗产物通过HPLC(Luna 10×250mm C18柱，4.7mL/分钟，2-80％CH3CN/水，15分钟，所有溶剂都含有0.05％TFA，0.25mL注射，检测器在254nm测定，检测器路径长度0.3mm)纯化。将含有产物的级份真空浓缩，获得了产物。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.00(s，2H)，9.94(s，1H)，8.87(s，1H)，8.32(dd，J＝2.5，1.5Hz，1H)，8.23(d，J＝2.6Hz，1H)，8.05(d，J＝8.7Hz，1H)，7.49(d，J＝2.1Hz，1H)，7.07(dd，J＝8.7，2.1Hz，1H)，3.90-3.80(m，5H)，2.80(t，J＝6.2Hz，2H).LRMS(ESI，正)-m/e 350，352(M+1).
实施例13
制备化合物4
(环己基-甲基-氨基)-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-丙酰胺
将3-氯-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-丙酰胺(化合物8，实施例12)和N-环己基-甲基胺(0.5mL，大大过量)的混合物在80℃温热1小时，冷却至室温。用乙醚(10mL)沉淀出粗产物，通过过滤收集，并溶解在DMSO(0.5mL)中。取等分试样(约0.25mL)通过HPLC(Luna 10×250mm C18柱，4.7mL/分钟，2-80％CH3CN/水，15分钟，所有溶剂都含有0.05％TFA，检测器在254nm测定，检测器路径长度0.3mm)纯化。将含有产物的级份真空浓缩，获得了TFA盐形式的产物(4.7mg，11％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.18(s，1H)，10.07(s，1H)，9.98(s，1H)，9.04(br s，1H)，8.88(s，1H)，8.33(dd，J＝2.6，1.5Hz，1H)，8.24(d，J＝2.6Hz，1H)，8.08(d，J＝8.7Hz，1H)，7.43(d，J＝2.1Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.7：2.1Hz，1H)，3.90-3.83(m，1H)，3.30-3.16(m，2H)，2.81(t，J＝6.7Hz，1H)，2.74(d，J＝5.0Hz，2H)，2.03-1.89(m，2H)，1.89-1.75(m，2H)，1.70-1.53(m，1H)，1.46-1.10(m，5H).LRMS(ESU，正)m/e 427.2(M+1).
实施例14
制备化合物2
3-环戊基氨基-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-丙酰胺
将3-氯-N-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)苯基]-丙酰胺(化合物8，实施例12)和环戊基胺(0.5mL，大大过量)的混合物在80℃温热1小时，冷却至室温。用乙醚(10mL)沉淀出产物，通过过滤收集，用乙醚洗涤，并真空干燥(24mg，60％)。
1H NMR(300Mhz，d6-DMSO)δ：10.14(s，1H)，10.03(s，1H)，9.93(s，1H)，8.87(d，J＝1.1Hz，1H)，8.31(dd，J＝2.6，1.5Hz.1H)，8.23(d，J＝2.7Hz，1H)，8.03(d，J＝8.7Hz，1H)，7.47(d，J＝2.1Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.7，2.1Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.05(quintet，J＝6.3Hz，1H)，2.80(t，J＝6.6Hz，2H)，2.44(t，J＝6.6Hz，2H)，1.80-1.67(m，2H)，1.65-1.56(m，2H)，1.53-142(m，2H)，1.37-1.27(m，2H).LRMS(ESI，正)m/e 399.1(M+1).
化合物166：
3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸
步骤1：3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯.用1小时向4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(5.0g；30mmol)在无水甲醇(150mL)内的冷的(约0℃)搅拌着的溶液中缓慢地加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(60mL 2.0M己烷溶液，120mmol)。搅拌4小时后，将该反应减压浓缩，溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用10％碳酸钠水溶液和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，获得了所需的酯，为灰白色固体(产率为94％)。
步骤2：4-甲氧基-3-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-苯甲酸甲酯.在氮气氛下，向3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(5.0g，27.6mmol)在无水二氯甲烷(90mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入吡啶(2.34mL，29mmol)，然后加入氯甲酸4-硝基苯基酯(5.8g，29mmol)。搅拌1小时后，用二氯甲烷将该反应稀释至200mL，用2N盐酸水溶液(2×200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液浓缩，获得了相当于所需氨基甲酸酯的白色固体(产率为98％)。
步骤3：3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸甲酯.在室温、氮气氛下，向4-甲氧基-3-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-苯甲酸甲酯(10.64g，30.7mmol)在无水N-甲基吡咯烷酮(31mL)内的搅拌着的溶液中加入氨基吡嗪(2.92g，30.7mmol)，将该反应温热至85℃。6小时后，将该反应冷却至室温，用乙酸乙酯(200mL)研制。过滤出所形成的沉淀，用乙酸乙酯洗涤，获得了所需的脲化合物，为黄褐色固体(产率为66％)。
步骤4：3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸.在室温、氮气氛下，向3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸甲酯(6.07g，20mmol)在200mL 3∶1 MeOH∶H2O内的搅拌着的悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(8.4g，200mmol)，将该反应在65℃加热过夜。然后将该反应冷却至室温，通过旋转蒸发除去大部分甲醇。用浓盐酸将剩余悬浮液中和至pH约为4。通过过滤分离出所形成的沉淀，用H2O洗涤，然后在高度真空下干燥，获得了所需的酸，为白色固体(5.34g，93％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.89(br s，1H)，8.34(s，1H)，8.24(s，1H)，8.16(d，1H)，7.56(s，1H)，7.50(d，1H)，3.91(s，3H)
化合物167：
N-丁基-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
在室温，在塞上盖的反应瓶中，向化合物1xx(32mg，0.11mmol)在1mL NMP内的搅拌着的悬浮液中加入HBTU(0.4M在NMP中的溶液，300μL，0.12mmol)，将该悬浮液搅拌15分钟。加入N-丁基胺(0.4M在NMP中的溶液，300μL，0.12mmol)，然后加入DIEA(38μL，0.22mmol)。将该反应在室温搅拌过夜，然后用EtOAc(20mL)和10％Na2CO3(20mL)稀释，迅速搅拌5分钟。通过过滤分离出所形成的沉淀，用水和EtOAc洗涤。风干后，分离出所需的酰胺，为灰白色固体(12.2mg，32％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(br s，1H)，8.37(br s，2H)，8.23(d，1H)，8.21(s，1H)，7.53(s，1H)，7.47(d，1H)，3.97(s.3H)，3.23(q，2H)，1.52(m，2H)，1.35(m，2H)，0.92(t，3H)
LRMS(apci，正)m/e 344.1(M+1)
化合物168：
N-苄基-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用苄基胺制得了该化合物(产率为39％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.96(t，1H)，8.91(s，1H)，8.56(s，1H)，8.50(s，1H)，8.44(m，1H)，7.58(s，1H)，7.56(d，1H)，7.35(m，4H)，7.23(m，1H)，4.46(d，2H)，3.97，(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 378.1(M+1)
化合物169：
3-甲氧基-N-苯乙基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用苯乙基胺制得了该化合物(产率为49％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(br s，1H)，8.51(t，1H)，8.36(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.22(d，1H)，7.52(s，1H)，7.45(d，1H)，7.36-7.20(m，5H)，3.98(s，3H)，3.46(m，2H)，2.84(dd，2H)
LRMS(apci，正)m/e 392.1(M+1)
化合物170：
3-甲氧基-N-(3-苯基-丙基)-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用苯丙基胺制得了该化合物(产率为71％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(br s，1H)，8.40(t，1H)，8.36(br s，1H)，8.25(d，1H)，8.23(s，1H)，7.52(s，1H)，7.46(d，1H)，7.32-7.18(m，5H)，3.97(s，3H)，3.25(m，2H)，2.61(m，2H)，1.82(m，2H)
LRMS(apci，正)m/e 406.1(M+1)
化合物171：
N-(2-苯磺酰基-乙基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用2-苯磺酰基-乙基胺制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)，8.43(br m，1H)，8.35(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.22(d，1H)，7.96(s，1H)，7.93(s，1H)，7.72(m，1H)，7.63(m，2H)，7.38(s，1H)，7.33(d，1H)，3.95(s，3H)，3.59(m，2H)，3.55(m，2H)
LRMS(apci，正)m/e 456.0(M+1)
化合物172：
N-(4-碘-苄基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用4-碘苄基胺制得了该化合物(产率为66％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.97(t，1H)，8.90(s，1H)，8.36(s，1H)，8.26(d，1H)，8.24(s，1H)，7.69(d，2H)，7.56(m，2H)，7.16(d，2H)，4.41(d，2H)，3.97(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 504.0(M+1)
化合物173：
3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-N-(2-吡啶-2-基-乙基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用2-吡啶-2-基-乙基胺制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)，8.51(br m，2H)，8.36(s，1H)，8.22(m，2H)，7.71(t，1H)，7.48(s，1H)，7.43(d，1H)，7.26(d，1H)，7.21(m，1H)，3.97(s，3H)，3.60(m，2H)，3.00(dd，2H)
LRMS(esi，正)m/e 393.3(M+1)
化合物174：
3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-N-(2-吡啶-4-基-乙基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用2-吡啶-4-基-乙基胺制得了该化合物(产率为45％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.93(s，1H)，8.63(d，2H)，8.51(t，1H)，8.37(s，1H)，8.27(s，1H)，8.24(d，1H)，7.60(d，2H)，7.43(m，2H)，3.97(s，3H)，3.58(m，2H)，3.01(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 393.1(M+1)
化合物175：
N-(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用C-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲基胺制得了该化合物(产率为53％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.35(s，1H)，8.32(d，1H)，8.22 (s，1H)，7.61(m，3H)，7.47(m，2H)，7.12(m，2H)，4.66(s，2H)，3.98(s，3H)
LRMS(esi，正)m/e 418.2(M+1)
化合物176：
N-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用色胺制得了该化合物(产率为74％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.55(br t，1H)，8.26(s，1H)，8.24(d，1H)，8.23(s，1H)，7.60(d，1H)，7.53(s，1H)，7.50(d，1H)，7.26(d，1H)，7.19(s，1H)，7.05(dd，1H)，6.98(dd，1H)，3.97(s，3H)，3.56(m，2H)，2.96(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 431.2(M+1)
化合物177：
3-甲氧基-N-[3-(甲基-苯基-氨基)-丙基]-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用N1-甲基-N1-苯基-丙-1，3-二胺制得了该化合物(产率为68％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.89(s，1H)，8.41(br s，1H)，8.36(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22(s，1H)，7.52(s，1H)，7.49(d，1H)，7.16(m，2H)，6.70(d，2H)，6.59(dd，1H)，3.96(s，3H)，3.38(m，2H)，3.30(m，2H)，2.87(s，3H)，1.77(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 435.2(M+1)
化合物178：
N-(1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用3-氨基-1-苄基吡咯烷制得了该化合物(产率为62％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.88(br s，1H)，8.36(br m，2H)，8.24(d，1H)，8.21(s，1H)，7.51(s，1H)，7.50(d，1H)，7.32(m，4H)，7.22(m，1H)，4.39(br m，1H)，3.96(s，3H)，3.59(s，2H)，2.79(m，1H)，2.62(m，1H)，2.40(m，1H)，2.16(m，1H)，1.81(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 447.2(M+1)
化合物179：
N-(3-(R)-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用3-(R)-氨基-1-苄基吡咯烷制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.83(br s，1H)，8.36-8 24(m，3H)，8.15(m，1H)，7.48(m，2H)，7.32(m，4H)，7.22(m，1H)，4.37(m，1H)，3.96(s，3H)，3.59(s，2H)，2.78(m，1H)，2.63(m，1H)，2.41(m，1H)，2.17(m，1H)，1.80(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 447.1(M+1)
化合物180：
N-(3-(S)-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用3-(S)-氨基-1-苄基吡咯烷制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.85(s，1H)，8.34(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.25(d，1H)，8.19(s，1H)，7.50(m，2H)，7.32(m，4H)，7.22(m，1H)，4.39(m，1H)，3.97(s，3H)，3.59(s，2H)，2.79(m，1H)，2.62(m，1H)，2.41(m，1H)，2.16(m，1H)，1.81(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 447.1(M+1)
化合物181：
N-(2-二甲基氨基-乙基)-3-甲氧基-N-甲基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物167的方法，使用N，N，N′-三甲基乙-1，2-二胺制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ8.17(s，1H)，8.05(s，1H)，7.94(s，1H)，7.76(d，1H)，6.92(m，2H)，3.79(m，2H)，3.75(s，3H)，3.36(m，2H)，2.97(s，3H)，2.88(s，6H)
LRMS(esi，正)m/e 373.2(M+1)
化合物182：
3-甲氧基-N-(3-甲基氨基-丙基)-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用N1-甲基-丙-1，3-二胺制得了该化合物(产率为25％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.93(s，1H)，8.38-8.25(m，4H)，7.59(d，1H)，7.52(m，1H)，3.98(s，3H)，3.92(m，2H)，2.92，(m，2H)，2.50(s，3H)，1.82(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 359.1(M+1)
化合物183：
N-(3-二甲基氨基-丙基)-3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用N，N-二甲基丙二胺制得了该化合物(产率为81％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.93(s，1H)，8.56(t，1H)，8.37(s，1H)，8.25(d，1H)，8.23(s，1H)，7.52(s，1H)，7.50(d，1H)，4.10(m，2H)，3.97(s，3H)，3.35(s，6H)，3.05(m，2H)，1.84(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 373.1(M+1)
化合物184：
N-(3-二甲基氨基-丙基)-3-甲氧基-N-甲基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物167的方法，使用N，N，N′-三甲基丙二胺制得了该化合物(产率为88％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.60(s，1H)，8.33(d，1H)，8.23(s，1H)，8.19(s，1H)，7.01(m，2H)，3.99(s，3H)，3.83(s，3H)，3.59(m，2H)，2.78(m，2H)，2.59(s，6H)，2.22(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 387.1(M+1)
化合物185：
3-甲氧基-N-(3-吗啉-4-基-丙基)-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物167的方法，使用3-吗啉-4-基-丙基胺制得了该化合物(产率为53％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.57(t，1H)，8.36(s，1H)，8.28(d，1H)，8.24(s，1H)，7.52(s，1H)，7.50(d，1H)，3.96(s，3H)，3.61(m，2H)，3.42(m，2H)，3.32(m，4H)，3.10(m，4H)，1.90(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 415.1(M+1)
化合物186：
3-甲氧基-N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物167的方法，使用3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基胺制得了该化合物(产率为63％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.41(m，1H)，8.36(s，1H)，8.24(m，2H)，7.52(s，1H)，7.49(d，1H)，3.97(s，3H)，3.31(m，11H)，2.70(m，2H)，2.41(m，2H)，1.72(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 428.1(M+1)
化合物187：
{2-[3-甲氧基-4-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰基氨基]-乙基}-三甲基氯化铵
依据制备化合物167的方法，使用2-N，N，N-三甲基铵乙基胺制得了该化合物(产率为46％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.77(m，1H)，8.36(s，1H)，8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，7.53(s，1H)，7.51(d，1H)，3.97(s，3H)，3.70(m，2H)，3.50(m，2H)，3.15(s，9H)
LRMS(esi，正)m/e 373.1(M+)
化合物188：
4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸
步骤1：4-甲氧基-3-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-苯甲酸甲酯。向3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(5.0g；27.6mmol)在二氯甲烷(100mL)内的搅拌着的冷的(0℃)溶液中加入吡啶(2.34mL；29mmol)，然后加入氯甲酸4-硝基苯基酯(5.8g；29mmol)。搅拌8小时后，用二氯甲烷(100mL)稀释该反应，用1N盐酸(2×125mL)、10％碳酸钠水溶液(2×125mL)、盐水(1×125mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物置于乙酸乙酯(100mL)中，然后置于己烷(700mL)中。过滤出所形成的沉淀，获得了灰白色固体(产率为80％)。
步骤2：4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸甲酯。向该片状氨基甲酸酯(1.0g；2.9mmol)在N-甲基吡咯烷酮(5mL)内的搅拌着的溶液中加入氨基吡嗪(285mg；3.0mmol)。将该反应加热至85℃，并搅拌12小时。让该反应冷却至室温，然后用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了灰白色固体(产率为55％)。
步骤3：4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸。向4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸甲酯(1.0g；3.3mmol)在甲醇(25mL)内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂(5mL 2M水溶液)。将该反应加热至60℃，并搅拌12小时。让该反应冷却至室温，用盐酸(1N)将pH调节至5.5。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了灰白色固体(产率为58％)。化合物189：
N-丁基-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺向4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酸(32mg；0.11mmol)在N-甲基吡咯烷酮(1mL)内的搅拌着的溶液中加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基六氟磷酸盐(HBTU；45mg；0.12mmol)、丁基胺(12μL，0.12mmol)和二异丙基乙基胺(35μL；0.20mmol)。将该反应在室温搅拌12小时。用乙酸乙酯(20mL)和10％碳酸钠水溶液(20mL)稀释该反应，并搅拌5分钟。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了灰白色固体(产率为49％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.63(s，1H)，8.35(s，1H)，8.23(m，1H)，8.21(s，1H)，7.52(d，1H)，7.06(d，1H)，3.95(s，3H)，3.22(m，2H)，1.50(m，2H)，1.33(m，2H)，0.90(t，3H)
LRMS(apci，正)m/e 344.1(M+1)
化合物190：
N-苄基-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用苄基胺制得了该化合物(产率为70％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.90(br s，1H)，8.73(s，1H)，8.33(s，1H)，8.23(s，1H)，7.60(d，1H)，7.33(m，4H)，7.23(m，1H)，7.12(d，1H)，4.44(s，2H)，3.96(s，3H)
LRMS(apci正)m/e 378.1(M+1)
化合物191：
4-甲氧基-N-苯乙基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用苯乙基胺制得了该化合物(产率为68％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.64(s，1H)，8.40(m，1H)，8.35(s，1H)，8.23(s，1H)，7.52(d，1H)，7.33-7.18(m，5H)，7.08(d，1H)，3.96(s，3H)，3.44(m，2H)，2.82(m，2H)
LRMS(apci 正)m/e 392.1(M+1)
化合物192：
4-甲氧基-N-(3-苯基-丙基)-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用苯丙基胺制得了该化合物(产率为65％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.64(s，1H)，8.36(s，1H)，8.23(s，1H)，7.56(d，1H)，7.32-7.22(m，5H)，7.18(m，1H)，7.10(d，1H)，3.97(s，3H)，3.24(m，2H)，2.62(dd，2H)，1.82(m，2H)
LRMS(apci 正)m/e 406.1(M+1)
化合物193：
N-(2-苯磺酰基-乙基)-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用2-苯磺酰基-乙基胺制得了该化合物(产率为42％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.58(s，1H)，8.38(br s，1H)，8.32(s，1H)，8.23(s，1H)，7.94(d，2H)，7.74(m，1H)，7.65(d，2H)，7.38(d，1H)，7.05(d，1H)，3.95(s，3H)，3.57(m，2H)，3.51(m，2H)
LRMS(apci 正)m/e 456.0(M+1)
化合物194：
4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-N-(2-吡啶-2-基-乙基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用2-吡啶-2-基-乙基胺制得了该化合物(产率为16％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.64(s，1H)，8.52(d，1H)，8.41(m，1H)，8.32(s，1H)，8.21(s，1H)，7.72(m，1H)，7.50(d，1H)，7.28(d，1H)，7.22(m，1H)，7.08(d，1H)，3.96(s，3H)，3.59(m，2H)，2.98(m，2H)
LRMS(esi 正)m/e 415.2(M+1)
化合物195：
4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-N-(2-吡啶-4-基-乙基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用2-吡啶-4-基-乙基胺制得了该化合物(产率为41％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.9 1(s，1H)，8.63(s，1H)，8.46(d，2H)，8.40(m，1H)，8.35(s，1H)，8.24(s，1H)，7.47(d，1H)，7.26(d，2H)，7.08(d，1H)，3.96(s，3H)，3.50(m，2H)，2.84(m，2H)
LRMS(esi正)m/e 415.2(M+1)
化合物196：
N-(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用C-(1H-苯并咪唑-2-基)-甲基胺制得了该化合物(产率为26％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.99(t，1H)，8.91(s，1H)，8.77(s，1H)，8.36(s，1H)，8.23(s，1H)，7.66(d，1H)，7.56(d，1H)，7.44(d，1H)，7.15(m，3H)，4.65(d，2H)，3.97(s，3H)
LRMS(esi 正)m/e 418.1(M+1)
化合物197：
N-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用色胺制得了该化合物(产率为51％)。
1H-NMR(400 MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.69(s，1H)，8.43(t，1H)，8.33(s，1H)，8.24(s，1H)，7.60(d，1H)，7.56(d，1H)，7.35(d，1H)，7.17(s，1H)，7.11(d，1H)，7.07(m，1H)，6.97(m，1H)，3.96(s，3H)，3.54(m，2H)，2.95(m，2H).
LRMS(esi 正)m/e 431.1(M+1)
化合物198：
4-甲氧基-N-[3-(甲基-苯基-氨基)-丙基]-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用N-甲基-N-苯基丙二胺制得了该化合物(产率为81％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.92(s，1H)，8.64(s，1H)，8.37(m，1H)，8.35(s，1H)，8.23(s，1H)，7.55(d，1H)，7.14(m，3H)，6.70(d，2H)，6.58(t，1H)，3.96(s，3H)，3.37(m，2H)，3.25(m，2H)，2.86(s，3H)，1.77(m，2H).
LRMS(esi 正)m/e 435.2(M+1)
化合物199：
N-(1-苄基-吡咯烷-3-基)-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用3-氨基-1-苄基吡咯烷制得了该化合物(产率为48％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.62(s，1H)，8.36(s，1H)，8.30(d，1H)，8.22(s，1H)，7.56(d，1H)，7.32(m，4H)，7.22(m，1H)，7.15(d，1H)，4.37(m，1H)，3.96(s，3H)，3.59(s，2H)，2.79(m，1H)，2.60(m，1H)，2.39(m，1H)，2.14(m，1H)，1.80(m，2H).
LRMS(esi正)m/e 447.2(M+1)
化合物200：
N-(2-二甲基氨基-乙基)-4-甲氧基-N-甲基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物189的方法，使用N，N，N′-三甲基乙二胺制得了该化合物(产率为93％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.39(br s，1H)，8.91(s，1H)，8.35(s，1H)，8.33(d，1H)，8.23(s，1H)，7.16-7.09(m，2H)，3.96(s，3H)，3.76(m，2H)，3.37(m，2H)，2.99(s，3H)，2.85(br s，6H).
LRMS(esi，正)m/e 373.2(M+1)
化合物201：
4-甲氧基-N-(3-甲基氨基-丙基)-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用N-甲基丙二胺制得了该化合物(产率为15％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ7.98(m，2H)，7.91(s，1H)，7.82(s，1H)，7.17(d，1H)，6.73(d，1H)，3.73(s，3H)，3.29(m，2H)，2.98(m，2H)，2.61(s，3H)，1.88(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 359.2(M+1)
化合物202：
N-(3-二甲基氨基丙基)-4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺
依据制备化合物189的方法，使用N，N-二甲基丙二胺制得了该化合物(产率为51％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ7.98(s，1H)，7.96(s，2H)，7.81(s，1H)，7.16(d，1H)，6.72(d，1H)，3.73(s，3H)，3.29(m，2H)，3.09(m，2H)，2.80(s，6H)，1.93(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 373.2(M+1)
化合物203：
N-(3-二甲基氨基-丙基)-4-甲氧基-N-甲基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物189的方法，使用N，N，N′-三甲基丙二胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ8.37(s，1H)，8.19(s，1H)，8.04(s，1H)，7.80(d，1H)，7.13(m，1H)，7.01(m，1H)，3.82(s，3H)，3.51(m，2H)，3.11(m，2H)，2.96(s，3H)，2.80(s，6H)，2.01(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 387.1(M+1)
化合物204：
4-甲氧基-N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物189的方法，使用3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基胺制得了该化合物(产率为57％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ8.18(s，1H)，8.06(s，1H)，8.04(s，1H)，7.96(s，1H)，7.32(d，1H)，6.85(d，1H)，3.79(s，3H)，3.48(br s，8H)，3.36(m，2H)，3.17(m，2H)，2.83(s，3H)，1.96(m，2H)LRMS(esi，正)m/e 428.2(M+1)
化合物205：
{2-[4-甲氧基-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰基氨基]-乙基}-三甲基-氯化
铵
依据制备化合物189的方法，使用2-三甲基铵乙基胺制得了该化合物(产率为63％)。
1H-NMR(400MHz，D2O)δ8.17(s.1H)，8.05(s，1H)，8.03(s，1H)，7.93(s，1H)，7.32(d，1H)，6.84(d，1H)，3.80(s，3H)，3.76(m，2H)，3.44(m，2H)，3.11(s，9H).LRMS(esi，正)m/e 373.0(M+)
化合物206：
4-甲氧基-N-(3-吗啉-4-基-丙基)-3-(3-吡嗪-2-基-脲基)-苯甲酰胺依据制备化合物189的方法，使用3-吗啉-4-基-丙基胺制得了该化合物(产率为69％)。
1H-NMR(400MHz.d6-DMSO)δ8.91(s，1H)，8.63(s，1H)，8.36(s，1H)，8.35(m，1H)，8.23(s，1H)，7.54(d，1H)，7.10(d，1H)，3.96(s，3H)，3.57(m，4H)，3.26(m，2H)，2.34(m，4H)，2.32(m，2H)1.66(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 415.2(M+1)
化合物207：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸
步骤1：(5-甲基-吡嗪-2-基)-氨基甲酸叔丁酯。在室温、氮气氛下，向5-甲基吡嗪甲酸(13.8g，100mmol)在300ml甲苯内的搅拌着的溶液中加入三乙胺(14mL，100mmol)，然后加入二苯基磷酰叠氮(21.6mL，100mmol)。在室温反应30分钟后，加入2-甲基-2-丙醇(19mL，200mmol)，将该溶液浸在90℃的油浴中。2小时后，将该反应冷却至室温，用EtOAc稀释至600mL，用10％Na2CO3(3×60mL)和饱和NaCl(1×600mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了黄色固体(17.5g，83％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.56(br s，1H).2.50(s，3H)，1.55(s，9H).
步骤2：5-甲基-2-氨基吡嗪。在0℃、氮气氛下，向(5-甲基-吡嗪-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(2.1g，10mmol)在30mL CH2Cl2内的搅拌着的溶液中加入三氟乙酸(30mL)。将该溶液温热至室温，并在室温保持过夜。将该溶液旋转蒸发以除去TFA，把残余物再溶解在200mL CH2Cl2中，并与100mL 10％Na2CO3一起搅拌。分离出有机层，用CH2Cl2(3×100mL)萃取水溶液。合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了橙色固体(1g，92％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.46(s，1H)，7.70(s，1H)，2.49(s，3H).
步骤3：3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯。在室温、氮气氛下，向3-甲氧基-4-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-苯甲酸甲酯(11.7g，33.8mmol)在34mL NMP内的搅拌着的溶液中加入5-甲基-2-氨基吡嗪(3.69g，33.8mmol)，将该反应浸在85℃的油浴中。6小时后，让该反应冷却至室温，形成了沉淀。加入EtOAc(200mL)，通过过滤分离出沉淀(4.7g，44％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.79(br s，1H)，8.36(d，1H)，8.23(s，1H)，7.60(d，1H)，7.52(s，1H)，3.98(s，3H)，3.81(s，3H)，2.42(s，3H)
步骤4：3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸。在室温、氮气氛下，向3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯(7.15g，22.6mmol)在3∶1 MeOH∶H2O(226mL)内的搅拌着的悬浮液中加入固体形式的氢氧化锂一水合物(9.5g，226mmol)，将该反应混合物加热至65℃。到达该温度后，悬浮液逐渐变成亮黄色溶液。约4小时后形成了沉淀，但将该反应继续进行过夜。冷却至室温后，通过旋转蒸发除去MeOH，用100mL H2O稀释该含水悬浮液，用浓盐酸中和至pH＝5。在接近pH＝5时，该悬浮液从黄色变为白色。然后在大的陶瓷漏斗上将该悬浮液经由滤纸过滤。该过滤进行得非常缓慢，需要几小时。用水将滤饼洗涤2次。当大部分水被除去时，将残余物在干燥器中于高度真空下干燥过夜，获得了所需的游离酸，为白色固体(6g，88％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.79(br s，1H)，8.36(d，1H)，8.22(s，1H)，7.57(d，1H)，7.51(s，1H)，3.97(s，3H)，2.42(s，3H).
化合物208：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(2-吡啶-2-基-乙基)-苯甲酰
胺
在塞上盖的反应瓶中，在室温向3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸(30mg，0.1mmol)在1mL NMP内的搅拌着的溶液中加入HBTU(42mg，0.11mmol)。将该悬浮液搅拌15分钟，然后依次用2-乙基氨基吡啶(13.2μL，0.11mmol)和Hunigs碱(35μL，0.2mmol)处理。搅拌过夜后，通过在70℃、高度真空下的球间转移来除去NMP，并将残余物与二氯甲烷(10mL)和10％Na2CO3(10mL)的混合物一起搅拌直至完全溶解。分离出有机相，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用EtOAc研制残余物，获得了固体，通过过滤分离(产率为71％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(s，1H)，8.58(d，1H)，8.50(t，1H)，8.23(d，1H)，8.21(s，1H)，7.82(t，1H)，7.48-7.31(m，4H)，3.97(s，3H)，3.62(m，2H)，3.04(m，2H)，2.42(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 407.1(M+1)
化合物209：
N-(1-苄基-哌啶-4-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰
胺
依据制备化合物208的方法，使用4-氨基-1-苄基哌啶，但是在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，使用92.5/7.5 CH2Cl2/MeOH洗脱，制得了该化合物(产率为61％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.44(br s，1H)，8.32(d，1H)，8.09(s，1H)，7.47(s，1H)，7.38-7.28(m，6H)，7.09(d，1H)，4.00(m，1H)，3.99(s，3H)，3.60(s，2H)，2.98(m，2H)，2.52(s，3H)，2.25(m，2H)，2.00(m，2H)，1.64(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 475.2(M+1)
化合物210：
N-(3-二甲基氨基-丙基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰
胺
依据制备化合物208的方法，使用N，N-二甲基丙二胺制得了该化合物(产率为70％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)8.55(t，1H)8.26(d，1H)，8.22(s，1H)，7.52(s，1H)，7 50(d，1H)，3.98(s，3H)，3.32(m，2H)，3.07(m，2H)，2.77(s，6H)，2.41(s，3H)，1.89(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 387.1(M+1)
化合物211：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-吗啉-4-基-丙基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物208的方法，使用3-吗啉-4-基-丙基胺制得了该化合物(产率为79％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)，8.57(t，1H)，8.25(d，1H)，8.21(s，1H)，7.51(s，1H)，7.50(d.1H)，3.97(s，3H)，3.62(m，2H)，3.31(m，8H)，3.12(m，2H)，2.41(s，3H)，1.92(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 429.1(M+1)
化合物212：
N-(2-二甲基氨基-2-苯基-乙基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用N-(2-二甲基氨基)-2-苯基乙基胺，但是在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，使用92.5/7.5CH2Cl2/MeOH洗脱，制得了该化合物(产率为12％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.05(s，1H)，8.88(s，1H)，8.20(m，3H)，7.41-7.19(m，7H)，3.96(s，3H)，3.78(m，1H)，3.70(m，1H)，3.57(m，1H)，3.38(m，1H)，2.50(s，6H)，2.40(s，3H)
LRMS(esi，正)m/e 448.9(M+1)
化合物213：
N-(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用N-(2-二甲基氨基)-1-苯基乙基胺，但是在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，使用92.5/7.5CH2Cl2/MeOH洗脱，制得了该化合物(产率为27％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ11.61(br s，1H)，9.71(br s，1H)，8.42(d，1H)，8.36(s，1H)，8.09(s，1H)，7.52-7.21(m，7H)，5.05(br s，1H)，3.93(s，3H)，2.80(m，1H)，2.52(s，3H)，2.37(s，6H)，1.79(brs，2H)
LRMS(esi，正)m/e 449.0(M+1)
化合物214：
N-(1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-
苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基胺制得了该化合物(产率为27％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.17(br s，1H)，8.90(br s，1H)，8.24(d，1H)，8.23(s，1H)，8.17(d，1H)，7.53(d，1H).7.50(s，1H)，3.98(s，3H)，3.95(m，1H)，3.10(m，1H)，2.90(m，1H)，2.64(m，4H)，2.42(s，3H)，1.87(m，1H)，1.80(m，1H)，1.59(m，2H)，1.31(m，1H).LRMS(esi，正)m/e 411.0(M+1)
化合物215：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-R-1-吡啶-2-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
步骤1：(3-R-1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯.在室温、氮气氛下，向(R)-boc-3-氨基吡咯烷(372.5mg，2mmol)在二氯乙烷(6mL)内的搅拌着的溶液中加入吡啶-2-甲醛(190μL，2mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(593mg，2.8mmol)。将该反应在室温搅拌过夜，然后通过在搅拌下加入饱和碳酸氢钠(6mL)来中止反应，搅拌15分钟。将该反应在CH2Cl2(25mL)与10％Na2CO3(25mL)之间分配。分离出有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了纯的产物(526mg，95％)。
步骤2：3-R-1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐.在塞上盖的烧瓶内，让(3-R-1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(277mg，1mmol)在10mL 4N HCl二氧杂环己烷溶液中的搅拌着的溶液于室温反应过夜。通过在高度真空下旋转蒸发来浓缩该反应，获得了所需的二盐酸盐(250mg，定量产率)。
步骤3：依据制备化合物208的方法进行制备，但是将3-R-1-吡啶-2-基甲基吡咯烷-3-基胺二盐酸盐与过量DIEA(70μL，0.4mmol)在500μL NMP中混合以形成溶液，将该溶液加到酸/HBTU混合物中。在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，用9/1 CH2Cl2/MeOH洗脱(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.57(s，1H)，8.51(d，1H)，8.39(d，1H)，8.17(s，1H)，8.09(s，1H)，7.92(s，1H)，7.64(d，1H)，7.50(s，1H)，7.30(d，1H)，6.70(d，1H)，4.69(m，1H)，4.00(s，3H)，3.66(dd，2H)，2.98(m，1H)， 2.80(m，1H)，2.70(m，1H)，2.53(s，3H)，2.39(m，3H)，1.76(m，1H).
LRMS(esi，正)m/e 462.3(M+1)
化合物216：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-R-1-甲基-吡咯烷-3-基)-苯
甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用3-(R)-氨基-1-甲基吡咯烷制得了该化合物(产率为29％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.78(br s，1H)，8.36(d，1H)，8.22(d，1H)，8.20(s，1H)，7.52(s，1H)，7.50(d，1H)，4.39(m，1H)，3.96(s，3H)，2.64(m，1H)，2.61(m，1H)，2.43.(s，3H)，2.39(m，2H).2.24(s，3H)，2.17(m，1H)，1.76(m，1H).
LRMS(esi，正)m/e 385.3(M+1)
化合物217：
N-(3-R-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯
甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用3-(R)-氨基-1-苄基吡咯烷，但是在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，使用92.5/7.5CH2Cl2/MeOH洗脱，制得了该化合物(产率为54％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.09(br s，1H)，8.43(d，1H)，8.09(s，1H)，8.02(s，1H)，7.57(m，1H)，7 53(s.1H)，7.46(d，1H)，7.33-7.22(m，4H)，4.79(m，1H)，4.00(s，3H)，3.78(dd，2H)，3.13(m，2H)，2.76(m，1H)，2.55(s，3H )，2.44(m，1H)，1.79(m，1H)
LRMS(esi，正)m/e 461.1(M+1)
化合物218：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-R-1-吡啶-4-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-(R)-吡啶-4-基甲基-吡咯烷-3-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.56(d，2H)，8.41(d，1H)，8.21(d，1H)，8.20(s，1H)，8.08(s，1H)，7.52(s，1H)，7.32(d，1H)，7.25(d，2H)，6.71(d，1H)，4.73(m，1H)，4.00(s，3H)，3.66(dd，2H).2.97(m，1H)，2.82(m，1H)，2.71(m，1H)，2.54(s，3H)，2.39(m，2H)，1.78(m，1H).
LRMS(esi，正)m/e 462.3(M+1)
化合物219：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-R-1-噻吩-2-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用(R)-1-噻吩-2-基甲基-吡咯烷-3-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.96(br s，1H)，8.43(d，1H)，8.09(d，2H)，7.57(s，1H)，7.50(d，1H)，7.10(d，1H)，6.91(m，2H)，4.80(m，1H)，4.00(s，3H)，3.96(dd，2H)，3.17(m，1H)，3.08(m，1H)2.71(m，1H)，2.54(s，3H)，2.42(m，2H)，1.80(m，1H).
LRMS(esi，正)m/e 467.2(M+1)
化合物220：
N-(3-R-1-环己基甲基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-
脲基]-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-环己基甲基-吡咯烷-3-R-基胺制得了该化合物(产率为71％)。
1H-NMR(400MHz，CDC13)δ8.89(br s，1H)，8.32(d，1H)，8.23(d，1H)，8.21(s，1H)，7.51(s，1H)，7.49(d，1H)，4.38(m，1H)，3.96(s，3H)，2.76(m，1H)，2.56(m，1H)，2.42(s，3H)，2.38(m，1H)，2.25-2.06(m，3H)，1.77(m，3H)，1.61(m，3H)，1.40(m，1H)，1.19(m，3H)，0.83(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 467.3(M+1)
化合物221：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-R-1-甲基-吡咯烷-3-基)-苯
甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-甲基-吡咯烷-3-R-基胺制得了该化合物(产率为51％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.78(br s，1H)，8.35(d，1H)，8.22(d，1H)，8.21(s，1H)，7.52(s，1H)，7.49(d，1H)，4.39(m，1H)，3.96(s，3H)，2.66(m，1H)，2.61(m，1H)，2.43(s，3H)，2.39(m，2H)，2.24(s，3H)，2.17(m，1H)，1.75(m，1H)
LRMS(esi，正)m/e 385.4(M+1)
化合物222：
N-(3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯
甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-苄基-吡咯烷-3-S-基胺，但是在Biotage 12S柱上通过色谱法纯化粗产物，使用92.5/7.5CH2Cl2/MeOH洗脱，制得了该化合物(54％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.81(br s，1H)，8.43(d，1H)，8.06(d，2H)，7.53(s，1H)，7.42(d，1H)，7.35-7.20(m，5H)，4.78(m，1H)，3.99(s，3H)，3.78(dd，2H)，3.15(m，1H)，3.04(m，1H)，2.77(m，1H)，2.54(s，3H)，2.44(m，1H)，1.79(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 461.1(M+1)
化合物223：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-S-1-吡啶-2-基甲基-吡咯
烷-3-基)苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.56(d，1H)，8.38(s，1H)，8.32(d，1H)，8.06(s，1H)，7.68(t，1H)，7.51(s，1H)，7.40(d，1H)，7.35(d，1H)，7.21(m，1H)，4.72(m，1H)，4.00(s，3H)，3.79(dd，2H)，3.40(m，1H)3.03(m，1H)，2.86(m，1H)，2.64(m，1H)，2.53(s，3H)，2.35(m，1H)，1.78(m，2H)LRMS(esi，正)m/e 4621(M+1)
化合物224：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-S-1-吡啶-3-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-吡啶-3-基甲基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.56(s，1H)，8.51(m，1H).8.39(d，1H)，8.18(s，1H)，8.08(s，2H).7.64(d.1H)，7.50(s，1H)，7.33(d，1H)，6.77(d，1H)，4.72(m，1H)，4.00(s，3H)，3.66(dd，2H)，2.97(m，1H)，2.82(m，1H)，2.71(m，1H)，2.54(s，3H)，2.40(m，2H)，1.76(m，2H)LRMS(esi，正)m/e 462.3(M+1)
化合物225：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-S-1-吡啶-4-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-吡啶-4-基甲基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.56(d，2H)，8.41(d，1H).8.24(s，1H)，8.20(s，1H)，8.08(s，1H)，7.53(s，1H)，7.32(d，1H)，7.24(d，2H)，6.75(d，1H)，4.72(m，1H)，4.00(s，3H)，3.67(dd，2H)，2.98(m，1H)，2.82(m，1H)，2.71(m，1H)，2.54(s，3H)，2.40(m，2H)，1.79(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 462.3(M+1)
化合物226：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(3-S-1-噻吩-2-基甲基-吡咯
烷-3-基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-噻吩-2-基甲基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为55％)。
1H-NMR(400MHz，CDC13)δ8.71(br s，1H)，8.42(d，1H)，8.11(d，2H)，7.55(s，1H)，7.44(d，1H)，7.39(d，1H)，7.20(d，1H)，6.91(m，2H)，4.78(m，1H)，4.00(s，3H)，3.94(dd，2H)，3.17(m，1H)，3.05(m，1H)，2.69(m，1H)，2.53(s，3H)，2，42(m，2H)，1.80(m，2H).LRMS(esi，正)m/e 467.2(M+1)
化合物227：
N-(3-S-1-环己基甲基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-
脲基]-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-环己基甲基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为60％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.78(s，1H)，8.31(d，1H)，8.23(d，1H)，8.20(s，1H)，7.51(s，1H)，7.48(d，1H)，4.37(m，1H)，3.96(s，3H)，2.76(m，1H)，2.56(m，1H)，2.42(s，3H)，2.38(m，1H)，2.25-2.06(m，3H)，1.77(m，3H)，1.61(m，3H)，1.40(m，1H)，1.19(m，3H)，0.83(m，2H).LRMS(esi，正)m/e 467.3(M+1)
化合物228：
N-(3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-三氟甲氧
基-苯甲酰胺
步骤1：4-氨基-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯。在0℃，向4-氨基-3-三氟甲氧基-苯甲酸(1.2g，5.4mmol)在16mL 4∶1 THF∶MeOH内的搅拌着的溶液中滴加TMS-重氮甲烷(2M己烷溶液，6mL，12mmol)，通过TLC(用2/3 EtOAc/己烷展开)监测转化。当转化完全时，将该反应浓缩，获得了与所需甲酯相对应的白色固体(1.27g，定量产率)。
步骤2：4-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯。在0℃、氮气氛下，向4-氨基-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(1.38g，5.9mmol)在18mL CH2Cl2内的搅拌着的溶液中加入吡啶(521μL，6.4mmol)，然后加入氯甲酸对硝基苯基酯(1.18g，5.9mmol)。在0℃反应4小时后，用CH2Cl2将该反应稀释至60mL，用2N HCl(2×60mL)、水(1×60mL)和饱和NaCl(1×60mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了与所需氨基甲酸酯相对应的白色固体(2.1g，89％)。
步骤3：4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯。在室温，在塞上盖的反应瓶中，向4-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(400mg，1mmol)在1mL NMP内的搅拌着的溶液中加入2-氨基-5-甲基-吡嗪(109mg，1mmol)，将该溶液在90℃加热6小时。冷却至室温后，用EtOAc将该溶液稀释至30mL，用10％NaHCO3(4×30mL)洗涤以除去苯酚副产物，用饱和NaCl(1×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用EtOAc研制并过滤，获得了与所需脲酯相对应的淡棕色固体(136mg，37％)。
步骤4：4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-三氟甲氧基-苯甲酸。 在氮气氛下，向4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(136mg，0.37mmol)在4mL 3∶1 MeOH∶H2O内的搅拌着的悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(154mg，3.7mmol)，将该反应加热至65℃。该反应变为黄/绿色，最终成为溶液。搅拌过夜后，将该反应冷却至室温，通过旋转蒸发来部分浓缩以除去大部分MeOH。用2N HCl中和残余的悬浮液直至pH＝6。该反应形成絮状沉淀，将其过滤，用水洗涤，在过度真空下干燥过夜，获得了所需的酸，为白色固体(102mg，78％)。
步骤5：在室温，在塞上盖的反应瓶中，向4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-三氟甲氧基-苯甲酸(102mg，0.29mmol)在2.9mL NMP内的搅拌着的悬浮液中加入HBTU(109mg，0.29mmol)。15分钟后，加入3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(按照类似于化合物215的合成中制备1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-基胺的方法制得的)(73mg，0.29mmol)，然后加入DIEA(200μL，1.2mmol)。将该反应搅拌过夜，然后在高度真空下于70℃除去NMP。将残余物在30mL CH2Cl2与30mL 10％Na2CO3之间分配。分离出有机层，用饱和NaCl(1×30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了与所需酰胺相对应的黄色泡沫状物(103mg，70％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.56(d，1H)，8.37(br s，1H)，8.08(s，1H)，7.84(s，1H)，7.66(d，1H)，7.40-7.28(m，6H)，4.73(m，1H)，3.68(dd，2H)，2.77(dd，2H)，2.53(s，3H)，2.43(m，1H)，2.37(dd，2H)，1.78(m，1H)
LRMS(esi，正)m/e 514.9(M+1)
化合物229：
N-(1-苄基-哌啶-4-基甲基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯
甲酰胺
步骤1：N-苄基六氢异烟酰胺(isonipecotainide)。向六氢异烟酰胺(12.3g，96mmol)在200mL二氯甲烷内的悬浮液中加入苯甲醛(10.6g，100mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(29.7gm，140mmol)，将该混合物在室温搅拌5天。将该浓厚的白色混合物用100mL水稀释，并用EtOAc(2×20mL)萃取。用1N NaOH将水相碱化至pH＞12。通过抽滤收集所得白色沉淀。然后将该白色固体置于50mL EtOAc中，用20mL盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了10.84g(50％)所需产物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(m，5H)，5.45(s，1H)，5.34(s，1H)，3.5(s，2H)，2.93(d，J＝10.96Hz，2H)2.16(t，J＝12.13Hz，12H)，1.87(d，J＝12.52Hz.2H)，1.76(q，J＝12.52Hz，2H).
步骤2：4-氨基甲基-1-苄基哌啶。向N-苄基六氢异烟酰胺(7.34g，34mmol)在60mL无水THF内的溶液中加入LiAlH4(1.9g，51mmol)，将该混合物在室温搅拌10分钟，然后加热回流3小时。通过加入100mL饱和酒石酸钠钾来中止反应，用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取液用20mL水和20mL盐水洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并浓缩，获得了所需产物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.13(m，5H)，3.42(s，2H)，2.91(m，2H)，2.59(m，2H)，1.97(m，2H)，1.62(m，2H)，2.21(m，5H).
步骤3：N-(1-苄基-哌啶-4-基甲基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺。按照制备化合物208的方法由4-氨基甲基-1-苄基哌啶制得了该化合物。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.1(s，2H)，8.81(s，1H)，8.48(s，1H)，8.26(m，2H)，7.52(m，7H)，3.97(s，5H)，3.33(s，3H)，3.18(s，3H)，2.43(s，3H)，1.75(s，3H).1.44(s，2H).MS APCl-pos，M+1＝489.1.
化合物230：
N-[3-S-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷-3-基]-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
基]-苯甲酰胺
步骤1：(3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷.向(3S)-(+)-3-(叔丁氧基羰基氨基)吡咯烷(410mg，2.20mmol)在22mLEtOH内的溶液中加入(288μL，2.31mmol)4-氟苄基溴和(788mg，2.42mmol)碳酸铯细粉。将该搅拌着的反应混合物在80℃于氮气氛下加热3小时，之后，TLC表明反应已完全。将该反应真空浓缩至约5mL，然后用30mL EtOAc稀释，用20mL 5％NH4OH洗涤。用乙醚(3×20mL)萃取水层。将合并的有机层用20mL盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用1∶1乙醚-己烷研制该白色固体粗产物，获得了501mg(77％)所需产物，为白色固体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.2-7.3(m，2H)，6.9-7.1(m，2H)，4.85(br.s，1H，exchanges)，4.18(br.s，1H)，3.55(s，2H)，2.65(br.m，1H)，2.58(m，1H)，2.50(m，1H)，2.2-2.4(m，2H)，1.5-1.7，(m，1H)，1.4(s，9H).
步骤2：(3S)-3-氨基-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷。将(3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷(400mg，1.36mmol)在15mL甲酸中的溶液于室温搅拌。3小时后，将该澄清的无色溶液浓缩至干，将残余物置于20mL EtOAc中，依次用10mL 5％NH4OH和10mL盐水洗涤。然后用MgSO4将该溶液干燥，过滤并浓缩，获得了240mg(91％)产物，为黄色油状物。
1H-NMR(400MHz，CDC13)δ7.28(m，2H)，6 99(m，2H)，3.56(d，J＝6.2Hz，2H)，3.47-3.53(m，1H)，2.67-2.71(m，2H)，2.42-2.48(m，1H)，2.28-2.31(m，1H)，2.21-2.28(m，1H)，1.59(s，2H，NH2)，1.43-1.52(m，1H).
步骤3：N-[(3S)-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷-3-基]-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺。按照制备化合物208的方法，由(3S)-3-氨基-1-(4-氟-苄基)-吡咯烷制得了该化合物。
1H-NMR(400MHz，CDC13)δ10.8(s，2H)，8.8(s，1H)，8.38(s，1H)，8.27(s，1H)，8.24(s，2H)，7.51(s，1H)，7.49(s，1H)，7.37(s，2H)，7.15(m，2H)，4.4(br.s，1H)，3.98(s，3H)，3.6(br.s，2H)，3.06(br.s，1H)，2.65(br.s，1H)，2.81(br.s，1H)，2.43(s，3H)，2.16(s，1H)，1.83(s，1H)MS apci-pos M+1＝479.2.
化合物231：
3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基
酯
步骤1：3-甲氧基-4-硝基-苯甲酰氯。在室温、氮气氛下，将亚硫酰氯3.7mL，(50mmol)滴加到3-甲氧基-4-硝基-苯甲酸(1.0g，5.07mmol)在15mL二氧杂环己烷内的搅拌着的溶液中。滴加完成后，将该反应在室温搅拌1小时。给反应烧瓶装配上蒸馏头，通过在120℃油浴中蒸馏来除去过量亚硫酰氯和约1/2的溶剂。通过旋转蒸发除去剩余溶剂，将残余物置于20mL甲苯中，再通过肿瘤除去约1/2的溶剂。然后将剩余溶液冷却至0℃，通过抽滤收集沉淀出的白色固体，用1-1 Et2O-己烷洗涤。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(d，J＝7.83Hz，1H)，7.82(d，J＝7.83Hz，1H)，7.77(s，1H)，4.04(s，3H).
步骤2：(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-醇。在氮气氛下，将(3S)-3-羟基吡咯烷(2.0g，25mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液冷却至0℃，加入苯甲醛(2.92g，27.5mmol)，然后加入1g 4分子筛粉末。用30分钟分几批加入三乙酰氧基硼氢化钠(7.4gm，35mmol)，将该反应在室温搅拌18小时。再将该反应冷却至0℃，通过加入10mL甲醇来中止反应，然后加入5mL 1N HCl。通过经由玻璃纤维纸过滤来除去分子筛固体，用20mL乙醚萃取滤液。弃去有机相，首先通过加入浓的氢氧化铵将水相碱化，然后用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的萃取液用20mL盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩，获得了3.2g(73％)澄清的黄色油状物，其无需进一步纯化。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.2-7.4(m，5H)，4.33(m，1H)，3.63，(s，2H)，2.83-3.89(m，1H)，2.67(d，J＝9.9Hz，1H)，2.53-2.55(m，1H)，2.23-2.34(m，1H)，2.14-2.20(m，2H)，1.70-1.77(m，1H).
步骤3：3-甲氧基-4-硝基-苯甲酸(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-基酯。在室温，将3-甲氧基-4-硝基-苯甲酰氯(608mg，2.82mmol)在10mL CH2Cl2中的溶液加到500mg(2.82mmol)(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-醇和1mL吡啶在15mL CH2Cl2内的搅拌着的溶液中。搅拌18小时后，用20mL饱和碳酸氢钠水溶液稀释该反应混合物，用CH2Cl2(2×10mL)萃取。将合并的萃取液用20mL盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，获得了780mg(71％)所需的酯，为黄色油状物，该油状物在固定真空下干燥后固化。通过用1∶1乙醚-己烷研制来进一步纯化所得固体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.83(d，J＝7.83Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.68(d，J＝7.83Hz，1H)，7.2-7.4(m，5H)，5.44(br.m，1H)，4.02(s，2H)，3.69(dd，J＝30Hz，J＝13Hz，1H)，2.8-3.0(m，2H)，2.5-2.6(m，1H)，2.3-2.45(m，1H)，2.0-2.1(m，1H)
步骤4：4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-基酯。按照类似于制备用于合成化合物340的4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基胺的方法，通过用硼化镍将3-甲氧基-4-硝基-苯甲酸(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-基酯还原，制得了该苯胺。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.54(d，J＝8.21Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.2-7.4(m，5H)6.65(d，J＝8.21Hz，1H)，5.38(br.m，1H)，4.22(s，1H)，3.90(s，3H)，3.69(q，J＝24.63Hz，1H)，3.0(m，1H)，2.7-2.9(m，2H)，2.52.6(m，1H)，2.3-2.4(m，1H)，1.9-2.1(m，1H).MSapci-pos M+1＝327.2.
步骤5：3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-基酯。按照制备化合物208的方法，由4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸(3S)-1-苄基-吡咯烷-3-基酯制得了该化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.15(s，2H)，8.8(s，1H)，8.35(d，J＝8.61Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.58(d，J＝8.61Hz，1H)，7.5(s，1H)，7.30-7.35(m，4H)，7.26-7.24(m，1H)，5.28(s，1H)，3.99(s，3H)，3.62(s，2H)，2.82(m，1H)，2.74(m，1H)，2.67(m，1H)，2 44(s，3H)，2.28(m，1H)，1.91(m，1H)，MS apci-pos M+1＝462.2.
化合物232：
N-(3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲
基]-苯甲酰胺
步骤1：3-甲氧基-4-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯。
在室温，在塞上盖的反应瓶中，向5-三氟甲基氨基吡嗪(326mg，2mmol)在NMP(2mL)内的搅拌着的溶液中加入4-甲氧基-3-(4-硝基苯基羰基氨基)-苯甲酸甲酯(692mg，2mmol)，将该溶液在85℃加热6小时。将该反应冷却至室温，用EtOAc(5mL)研制，通过过滤分离出所形成的黄褐色固体，用EtOAc洗涤(213mg，28％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.78(s，1H)，10.16(br s，1H)，9.07(s，1H)，8.84(s，1H)，8.37(d，1H)，7.63(d，1H)，7.56(s，1H)，4.01(s，3H)，3.83(s，3H)
步骤2：3-甲氧基-4-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸。在室温、氮气氛下，向3-甲氧基-4-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯(213mg，0.575mmol)在5.75mL 3∶1 MeOH∶H2O内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂一水合物(240mg，5.8mmol)，将该反应温热至65℃。到达该温度后，该悬浮液逐渐变成亮黄色溶液。约4小时后形成了沉淀，但是让该反应继续进行过夜。冷却至室温后，通过旋转蒸发除去MeOH，用浓盐酸将该含水悬浮液中和至pH＝5。在接近pH＝5时，该悬浮液从黄色变为白色。然后在陶瓷漏斗上将该悬浮液经由滤纸过滤。当大部分水被除去时，将残余物在干燥器中于高度真空下干燥过夜(133mg，55％)。
步骤3：在室温，在塞上盖的反应瓶中，向3-甲氧基-4-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸(35mg，0.1mmol)在0.5mL NMP内的搅拌着的溶液中加入HBTU(41mg，0.11mmol)，搅拌15分钟。然后加入作为在含有DIEA(69μL，0.4mmol)的0.5mL NMP中的溶液的1-苄基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(按照类似于制备用于合成化合物215的1-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-3-基胺的方法制得的)(粗产物，0.1mmol)。在室温搅拌过夜后，通过在高度真空下于70℃蒸馏来除去NMP。将残余物溶解在含有少量MeOH的25mL CH2Cl2中，用10％Na2CO3(2×25mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，在biotage 12S柱上通过色谱法纯化残余物，用5/95 MeOH/CH2Cl2洗脱。将所得材料浓缩至干，用Et2O研制/过滤，获得了纯的产物，为白色固体(9.5mg，19％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.53(s，1H)，9.86(br s，1H)，8.57(s，1H)，8 40(d，1H)，8.12(s，1H)，7.56(s，1H)，7.46(m，2H)，7.25(m，4H)，4.79(m，1H)，4.01(s，3H)，3.73(dd，2H)，3.22(m，2H)，2.76(m，1H)，2.47(m，2H)，1.76(m，1H)LRMS(esi，正)m/e 515.1(M+1)
化合物233：
5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(2-吡啶-2-基-乙基)-2-三氟甲
基-苯甲酰胺
步骤1：5-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸和5-氟-3-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸的混合物。在0℃，向3-氟-6-三氟甲基苯甲酸(3.58g，17.2mmol)在17mL浓H2SO4内的搅拌着的溶液中小心地滴加70％HNO3(17mL)。将该反应在100℃加热过夜，然后冷却至室温，在搅拌下倒入250mL H2O/冰中。加入EtOAc(250mL)，搅拌该混合物。分离各层，将有机层用水(1×250mL)和饱和NaCl(1×250mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了油状物，将在静置时固化。该固体是区域异构体的1∶1混合物，并且以粗产物的形式使用。
步骤2：5-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯和5-氟-3-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯的混合物.在0℃，向上述硝基酸(粗产物，17.2mmol)在60mL 4∶1 THF∶MeOH内的搅拌着的溶液中滴加2M TMS-重氮甲烷的己烷溶液，直至持续出现黄色。30分钟后，将该反应浓缩，获得了油状粗产物，将直接用于下一步骤。
步骤3：5-甲氧基-4-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯和5-甲氧基-3-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯的混合物。在室温，向上述氟硝基酯(粗产物，17.2mmol)在22mL MeOH内的搅拌着的溶液中加入150mL 0.5M甲醇钠在MeOH中的溶液。将该红色溶液搅拌30分钟，然后在CH2Cl2(500mL)与H2O(500mL)之间分配。用水(2×500mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了白色固体。
步骤4：5-甲氧基-4-氨基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯.在室温、氮气吹扫下，向上述甲氧基硝基酯(粗产物，17.2mmol)在172mL MeOH内的搅拌着的溶液中小心地加入10％Pd/C(1g)。用氢气给该悬浮液施加3次真空/吹扫循环，然后保持在1大气压的氢气下。搅拌过夜后，将该悬浮液经由GF/F滤纸过滤，获得了澄清的油状物。将该油状物与二氯甲烷直接施加到Biotage 40M柱上，首先用9/1己烷/EtOAc洗脱以将不需要的较高Rf区域异构体洗脱下来，然后用85/15己烷/EtOAc洗脱，以将所需的较低Rf区域异构体洗脱下来。浓缩后，较低Rf异构体固化，形成澄清固体(1.75gm，41％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.33(s，1H)，6.98(s，1H)，3.92(s，3H)，3.85(s，3H)
步骤5：5-甲氧基-4-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯。在0℃、氮气氛下，向5-甲氧基-4-氨基-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯(552mg，2.22mmol)在6.6mL CH2Cl2内的搅拌着的溶液中加入吡啶(180μL，2.22mmol)，然后加入固体形式的氯甲酸对硝基苯基酯(448mg，2.22mmol)。搅拌1小时后，用CH2Cl2将该反应稀释至30mL，并用2N HCl(2×30mL)和水(1×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了作为白色泡沫状物分离出来的所需氨基甲酸对硝基苯基酯(878mg，96％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.57(br s，1H)，8.30(d，2H)，7.77(br s，1H)，7.40(d，2H)，7.37(s，1H)，4.03(s，3H)，3.94(s，3H)
步骤6：5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯。在室温、氮气氛下，向5-甲氧基-4-(4-硝基-苯氧基羰基氨基)-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯(878mg，2.1mmol)在4.2mL NMP内的搅拌着的溶液中加入2-氨基-5-甲基吡嗪(232mg，2.1mmol)，将该反应加热至85℃。6小时后，将该反应冷却至室温，形成了沉淀。用EtOAc(25mL)研制该沉淀，通过过滤分离出所需的脲，为黄褐色固体(470mg，58％)。
步骤7：5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-2-三氟甲基-苯甲酸。在室温、氮气氛下，向5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-2-三氟甲基-苯甲酸甲酯(257mg，0.67mmol)在6.7mL 3∶1 MeOH∶H2O内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂一水合物(281mg，6.7mmol)，将该混合物加热至85℃。搅拌过夜后，将该反应冷却至室温，通过旋转蒸发除去MeOH，用浓盐酸将残余悬浮液中和至pH约为5。过滤该悬浮液，用水洗涤，将滤饼在高度真空下干燥，获得了所需的酸，为白色固体(161mg，61％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)，8.63(s，1H)，8.22(s，1H)，7.38(s，1H)，4.00(s，3H)，2.42(s，3H).LRMS(esi，negative)m/e 369.0(M-1)
步骤8：5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(2-吡啶-2-基-乙基)-2-三氟甲基-苯甲酰胺。在室温，在塞上盖的反应瓶中，向5-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-2-三氟甲基苯甲酸(37mg，0.1mmol)在1mL NMP内的搅拌着的溶液中加入HBTU(42mg，0.11mmol)，将该悬浮液搅拌15分钟。加入2-氨基乙基吡啶(13μL，0.11mmol)，然后加入DIEA(35μL，0.2mmol)，并将该反应搅拌过夜。通过在70℃、高度真空下的球间转移来除去NMP，用EtOAc研制残余物并过滤，获得了所需的酰胺，为黄褐色固体(32mg，68％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.90(br s，1H)，8.66(d，1H)，8.61(s，1H)，8.52(t，1H)，8.23(s，1H)，8.10(br m，1H)，7.61(br d，1H)，7.57(br m，1H)，7.07(s，1H)，4.00(s，3H)，3 62(m，2H)，3.11(m，2H)，2 42(s，3H)
LRMS(esi，正)m/e 475.1(M+1)
化合物234：
3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸
步骤1：3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-硝基-苯甲酸甲酯。向3-羟基-4-硝基苯甲酸甲酯(394mg，2.0mmol)、三苯基膦(525mg，2.0mmol)和3-(二甲基氨基)-丙醇(237μL，2.0mmol)在无水四氢呋喃(5mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(394μL，2.0mmol在1mL四氢呋喃中的溶液)。搅拌12小时后，将该反应用盐酸(30ml 1M溶液)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。用10％碳酸钠水溶液(50mL)将水溶液碱化，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取产物。用盐水(1×30mL)洗涤乙酸乙酯层，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物(产率为86％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81(d，1H)，7.78(s，1H)，7.65(d，1H)，4.23(t，2H)，3.91(s，3H)，2.44(t，2H)，2.22(s，6H)，2.05(m，2H).
步骤2：4-氨基-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-苯甲酸甲酯。向3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-硝基-苯甲酸甲酯(282mg，1.0mmol)在甲醇(2mL)和饱和氯化铵水溶液(1mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入锌粉(2.0mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并且用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需产物，为黄褐色固体(产率为88％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.52(d，1H)，7.48(s，1H)，7.25(s，1H)，6.65(d，1H)，4.29(br s，1H)，4.09(t，2H)，3.85(s，3H)，2.49(t，2H)，2.25(s，6H)，2.00(m，2H).
步骤3：3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯。向4-氨基-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-苯甲酸甲酯(252mg，1.0mmol)在甲苯(3.0mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入三乙胺(139μL，1.0mmol)和三光气(98mg，0.33mmol)。搅拌30分钟后，加入5-甲基-2-氨基吡嗪(109mg，1.0mmol)，将该反应加热至65℃。让该反应冷却至室温，然后用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了所需产物，为白色固体(产率为40％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.62(br s，1H)，8.41(d，1H)，8.19(s，1H)，7.59(d，1H)，7.49(s，1H)，4.15(t，2H)，3.81(s，3H)，2.42(m，5H)，2.18(s，6H)，2.01(m，2H).
步骤4：3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸。向3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酸甲酯(1.0g；3.3mmol)在甲醇(25mL)内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂(5mL 2M水溶液)。将该反应加热至60℃，并搅拌12小时。让该反应冷却至室温，用1N盐酸将pH调节至5.5。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了所需产物，为黄褐色固体(产率为52％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.62(br s，1H)，8.39(d，1H)，8.21(s，1H)，7.59(d，1H)，7.43(s，1H)，4.15(t，2H)，2.42(m，5H)，2.18(s，6H)，2.01(m，2H).
化合物235：
4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸
步骤1：4-硝基-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯。向3-羟基-4-硝基苯甲酸甲酯(394mg，2.0mmol)、三苯基膦(525mg，2.0mmol)和3-吡啶基甲醇(194μL，2.0mmol)在无水四氢呋喃(5mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(394μL，2.0mmol在1mL四氢呋喃中的溶液)。搅拌12小时后，将该反应用盐酸(30mL 1M溶液)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。用10％碳酸钠水溶液(50mL)碱化水溶液，将产物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将乙酸乙酯层用盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物，为灰白色固体(产率为76％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，8.62(d，1H)，7.88(m，3H)，7.79(d，1H)，7.39(M，1H)，5.31(s，2H)，3.98(s，3H).
步骤2：4-氨基-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯。向4-硝基-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯(288mg，1.0mmol)在甲醇(2mL)和饱和氯化铵水溶液(1mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入锌粉(131mg，2.0mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需产物，为黄色固体(产率为97％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.61(d，1H)，7.79(d，1H)，7.59(m，2H)，7.39(m，1H)，6.71(d，1H)，5.18(s，2H)，4.28(br s，2H)，3.85(s，3H).
步骤3：4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯。向4-氨基-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯(258mg，1.0mmol)在甲苯(3.0mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入三乙胺(139μL，1.0mmol)和三光气(98mg，0.33mmol)。搅拌30分钟后，加入5-甲基-2-氨基吡嗪(109mg，1.0mmol)，并将该反应加热至65℃。让该反应冷却至室温，然后用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了所需产物，为白色固体(产率为47％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.29(s，1H)，8.79(s，1H)，8.68(d，1H)，8.59(br s，1H)，8.48(d，1H)，7.70(s，1H)，7.62(d，1H)，7.51(m，1H)，5.32(s，2H)，3.88(s，3H)，2.32(s，3H).
步骤4：4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸。向4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酸甲酯(1.3g；3.3mmol)在甲醇(25mL)内的搅拌着的溶液中加入氢氧化锂(5mL 2M水溶液)。将该反应加热至60℃，并搅拌12小时。让该反应冷却至室温，用1N盐酸将pH调节至5.5。过滤出所形成的沉淀，并减压干燥，获得了所需产物，为黄褐色固体(产率为90％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.29(s，1H)，8.79(s，1H)，8.68(d，1H)，8.59(br s，1H)，8.48(d，1H)，7.70(s，1H)，7.62(d，1H)，7.51(m，1H)，5.32(s，2H)，2.32(s，3H).
化合物236：
3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用氨制得了该化合物(产率为33％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.18(s，1H)，8.56(br s，1H)，8.20(d，1H)，8.11(s，1H)，7.43(d，1H)，7.40(s，1H)，4.03(m，2H)，2.40(m，2H)，2.33(s，3H)，2.05(s，6H)，1.91(m，2H)
LRLCMS(esi，正)m/e 374.2(M+1)
化合物237：
3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-N，N-二甲基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯
甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用二甲基胺制得了该化合物(产率为97％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.30(br s，1H)，8.39(d，1H)，8.29(s，1H)，8.20(s，1H)，7.78(br s，1H)，7.07(s，1H)，7.04(d，1H)，4.16(t，2H)，2.55(s，3H)，2.53(m，2H)，2.26(s，6H)，2.10(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 401.1(M+1)
化合物238：
N-苄基-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰
胺
依据制备化合物208的方法，使用苄基胺制得了该化合物(产率为65％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.43(d，1H)，8.26(s，1H)，8.20(s，1H)，7.91(br s，1H)，7.56(s，1H)，7 38(m，4H)，7.31(m，1H)，6.41(m，1H)，4.64(d，2H)，4 20(t，2H)，2.53(s，3H)，2 52(m，2H)，2.24(s，6H)，2.14(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 463.2(M+1)
化合物239：
N-苄基-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-N-甲基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用N-甲基苄基胺制得了该化合物(产率为68％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.37(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.18(s，1H)，7.37(m，4H)，7.31(m，1H)，7.18(m，2H)，4.67(br m，2H)，4.07(br m，2H)，2.99(br s，3H)，2.53(s，3H)，2.50(br m，2H)，2.24(s，6H)，2.06(br m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 477.2(M+1)
化合物240：
3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(2-吗啉-4-基
-乙基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-吗啉-4-基-乙基胺制得了该化合物(产率为69％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.44(d，1H)，8.31(s，1H)，8.21(s，1H)，7.90(br s，1H)，7.55(s，1H)，7.24(d，1H)，6 76(m，1H)，4.20(t，2H)，3.76(m，4H)，3.56(m，2H)，2.61(m，2H)，2.53(m，7H)，2.24(s，6H)，2.13(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 486.2(M+1)
化合物241：
3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-[2-(1-甲基-
吡咯烷-2-基)-乙基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-(1-甲基-吡咯烷-2-基胺制得了该化合物(产率为68％)。
1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ11.35(br s，1H)，8.42(s，1H)，8.40(s，1H)，8.24(s，1H)，8.20(s，1H)，7.57(s，1H)，7 46(br s，1H)，7.20(m，1H)，4.19(m，2H)，3.76(m，1H)，3.44(m，1H)，3.15(m，1H)，2.54(s，3H)，2.42(m，1H)，2.37(s，3H)，2.25(s，6H)，2.22(m，1H)，2.13(m，2H)，1.90(m，2H)，1.77(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 484.3(M+1)
化合物242：
N-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲基]-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-二甲基氨基-乙基胺制得了该化合物(产率为37％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.38(br s，1H)，8.42(d，1H)，8.30(s，1H)，8.20(s，1H)，7.96(br s，1H)，7.53(s，1H)，7.27(d，1H)，6.79(m，1H)，4.20(m，2H)，3.53(m，2H)，2.52(m，2H)，2.52(s，3H)，2.26(m，2H)，2.24(s，6H)，2.22(s，6H)，2.12(m，2H)
LRMS(esi，正)m/e 444.2(M+1)
化合物243：
N-(3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基)-3-(3-二甲基氨基-丙氧基)-4-[3-(5-甲基-吡
嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-苄基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为20％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.61(br s，1H)，8.45(d，1H)，8.20(s，1H)，8.16(m，1H)，7.51(s，1H)，7.39(d，1H)，7.31(m，4H)，7.16(m，1H)，4.72(m，1H)，4.18(m，2H)，3.72(dd，2H)，3.04(m，1H)，2.96(m，1H)，2.69(m，1H)，2.53(m，2H)，2.51(s，3H)，2.40(m，2H)，2.25(s，6H)，2.11(m，2H)，1.76(m，1H)
LRMS(esi，正)m/e 532.2(M+1)
化合物244：
4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用氨制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.27(s，1H)，8.82(s，1H)，8.66(d，1H)，8.60(br s，1H)，8.29(d，1H)，8.03(m，1H)，8.00(s，1H)，7.76(s，1H)，7.56(d，1H)，7.50(m，1H)，7.37(br m，1H)，7.26(br s，1H)，5.32(s，2H)，2.32(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 379.1(M+1)
化合物245：
N-甲基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用甲基胺制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.25(s，1H)，8.80(s，1H)，8.60(m，3H)，8.26(d，1H)，8.03(d，1H)，7.78(s，1H)，7.52(m，2H)，7.37(m，1H)，5.34(s，2H)，2.79(d，3H)，2.36(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 393.2(M+1)
化合物246：
N，N-二甲基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酰
胺
依据制备化合物208的方法，使用二甲基胺制得了该化合物(产率为88％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.16(s，1H)，8.80(s，1H)，8.66(d，1H)，8.58(s，1H)，8.28(d，1H)，7.96(d，1H)，7.50(m，1H)，7.37(br s，1H)，7.25(s，1H)，7.03(d，1H)，5.30(s，2H)，2.95(s，6H)，2.33(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 407.4(M+1)
化合物247：
N-苄基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用苄基胺制得了该化合物(产率为41％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.23(s，1H)，9.05(t，1H)，8.82(s，1H)，8.67(d，1H)，8.58(br s，1H)，8.33(d，1H)，8.00(d，1H)，7.78(s，1H)，7.59(d，1H)，7.50(m，1H)，7.33(m，4H)，7.25(m，1H)，5.32(s，2H)，4.50(d，2H)，2.32(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 469.1(M+1)
化合物248：
N-苄基-N-甲基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲氧基)-苯
甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用N-甲基苄基胺制得了该化合物(产率为71％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.16(s，1H)，8.76(br s，1H)，8.64(d，1H)，8.57(m，1H)，8.28(brm，1H)，7.95(br m，1H)，7.48(m，1H)，7.40-7.23(br m，7H)，7.06(m，1H)，5.23(br m，2H)，4.62(br m，2H)，2.88(s，3H)，2.33(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 483.3(M+1)
化合物249：
4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-(2-吗啉-4-基-乙基)-3-(吡啶-3-基甲氧
基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-吗啉-4-基-乙基胺制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.27(s，1H)，8.81(s，1H)，8.66(d，1H)，8.61(br s，1H)，8.52(t，1H)，8.29(d，1H)，8.03(d，1H)，7.76(s，1H)，7.52(m，2H)，7.36(m，1H)，5.33(s，2H)，3 56(m，4H)，3.40(m，2H)，2.48(m，2H)，2.43(m，4H)，2.34(s，3H)
LRMS(apci，正)m/e 492.4(M+1)
化合物250：
4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-N-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-3-(吡啶
-3-基甲氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基胺制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.21(s，1H)，8.81(s，1H)，8.64(d，1H)，8.58(br s，1H)，8.49(m，1H)，8.33(d，1H)，8.00(d，1H)，7.70(s，1H)，7.52(m，2H)，7.34(m，1H)，5.33(s，2H)，3.28(m，2H)，2.95(m，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(m，2H)，1.90(m，2H)，1.62(m，2H)，1.44(m，2H)
LRMS(apci，正)m/e 490.3(M+1)
化合物251：
N-(2-二甲基氨基-乙基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基甲
氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物208的方法，使用2-二甲基氨基-乙基胺制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.24(s，1H)，8.82(s，1H)，8.66(d，1H)，8.60(br s，1H)，8.43(t，1H)，8.30(d，1H)，8.02(d，1H)，7.74(s，1H)，7.52(m，2H)，7.35(br m，1H)，5.32(s，2H)，3.36(m，2H)，2.39(m，2H)，2.33(s，3H)，2.18(s，6H)
LRMS(apci，正)m/e 450.2(M+1)
化合物252：
N-(3-S-1-苄基-吡咯烷-3-基)-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-3-(吡啶-3-基
甲氧基)-苯甲酰胺
依据制备化合物215的方法，使用1-苄基-吡咯烷-3-S-基胺制得了该化合物(产率为99％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.26(s，1H)，8.82(s，1H)，8.66(d，1H)，8.60(br s，1H)，8.47(d，1H)，8.28(d，1H)，8.02(d，1H)，7.74(s，1H)，7.55(d，1H)，7.51(m，1H)，7.32(m，4H)，7.24(m，1H)，5.31(s，2H)，4.40(m，1H)，3.60(s，2H)，2.80(m，1H)，2.64(m，1H)，2.45(m，2H)，2.34(s，3H)，2.15(m，1H)，1.85(m，1H)
LRMS(apci，正)m/e 538.2(M+1)
化合物253：
1-[2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲
步骤1：(2-羟基-5-甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯。向2-氨基-4-甲基-苯酚(6.15g；50mmol)在二氧杂环己烷(100mL)内的搅拌着的溶液中加入碳酸二叔丁酯(9.8g；45mmol)，然后加入碳酸氢钠(12.6g；150mmol在75mL H2O中的溶液)。搅拌8小时后，将该反应用100mL乙酸乙酯稀释，并用1N盐酸(2×100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(1×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的(2-羟基-5-甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯，为棕色固体(产率为95％)。
步骤2：[2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁酯。向(2-羟基-5-甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(447mg，2.0mmol)、三苯基膦(525mg，2.0mmol)和3-(二甲基氨基)-1-丙醇(237μL，2.0mmol)在无水四氢呋喃(5mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(394μL，2.0mmol在1mL四氢呋喃中的溶液)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物。
步骤3：2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基胺。向[2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(617mg，2.0mmol)在5mL二氧杂环己烷内的搅拌着的溶液中加入氢氯酸(2mL；4N二氧杂环己烷溶液)。搅拌12小时后，将该反应用20mL 1N盐酸稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)洗涤。然后用10％碳酸钠水溶液(50mL)将水层碱化，并用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。将乙酸乙酯层用盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液浓缩，获得了相应的苯胺。
步骤4：1-[2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲。向2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基胺(208mg，1.0mmol)在甲苯(3.0mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入三乙胺(140μL，1.0mmol)和三光气(98mg，0.33mmol)。搅拌30分钟后，加入氨基吡嗪(95mg，1.0mmol)，将该反应加热至65℃。搅拌4小时后，将该反应冷却至室温，并搅拌8小时。将所形成的沉淀过滤，用甲苯(2×1mL)洗涤，并减压干燥(产率为35％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.45(s，1H)，8.39(br s，1H)，8.22(s，1H)，8.21(d，1H)，8.19(d，1H)，4.09(t，2H)，2.55(t，2H)，2.36(s，3H)，2.26(s，6H)，2.05(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 330.10(M+1)
化合物254：
1-[2-(2-二甲基氨基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲
依据制备化合物253的方法，使用N，N-二甲基乙醇胺制得了该化合物(产率为36％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.79(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.22(s，1H)，8.05(s，1H)，6.95(d，1H)，6.80(d，1H)，4.15(t，2H)，2.55(s，3H)，2.31(t，2H)，2.26(s，6H).
LRMS(esi，正)m/e 316.21(M+1)
化合物255：
1-[5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-羟基甲基吡啶制得了该化合物(产率为10％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.82(s，1H)，8.65(d，1H)，8.35(s，1H)，8.30(s，1H)，8.21(s，2H)，8.05(s，1H)，7.81(m，2H)，7.35(m，1H)，6.9(dd，2H)，5.15(s，2H)，2.39(s，3H).LRMS(esi，正)m/e 336.21(M+1)
化合物256：
1-{5-甲基-2-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-丙氧基]-苯基}-3-吡嗪-2-基-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-丙醇制得了该化合物(产率为10％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.79(s，1H)，8.29(s，1H)，8.25(s，1H)，8.05(s，1H)，6.92(d，1H)，6.79(d，1H)，3.99(t，2H)，3.38(m，4H)，2.22(s，3H)，2.20(t，2H)，2.00(t，2H)，1.91(t，2H)
LRMS(esi，正)m/e 392.2(M+Na)
化合物257：
1-[5-甲基-2-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-3-吡嗪-2-基-脲
依据制备化合物253的方法，使用2-吗啉-4-基-乙醇制得了该化合物(产率为39％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.79(s，1H)，8.29(d，1H)，8.25(d，1H)，8.05(s，1H)，6.95(d，1H).6.79(d，1H)，4.19(t，2H)，3.59(m，4H)，2.80(t，2H)，2.49(m，4H)，2.22(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 358.2(M+1)
化合物258：
1-[5-甲基-2-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-吗啉-4-基-丙醇制得了该化合物(产率为8％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.01(s，1H)，8.62(br s，1H)，8.22(s，1H)，8.19(s，1H)，8.05(s，1H)，6.91(d，1H)，6.79(d，1H)，4.05(t，2H)，3.59(m，4H)，2.48(s，3H)，2.45(t，2H)，2.35(m，4H)，2.21(s，3H)，2.00(t，2H).
LRMS(esi，正)m/e 386.31(M+1)
化合物259：
1-[2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-二甲基氨基-丙醇制得了该化合物(产率为40％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.37(s，1H)，8.19(s，1H)，8.18(s，1H)，8.09(br s，1H)，6.80(dd，2H)，4.05(t，2H)，2.55(t，2H)，2.54(s，3H)，2.36(s，3H)，2.26(s，6H)，2.05(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 344.20(M+1)
化合物260：
1-[5-甲基-2-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物253的方法，使用2-吗啉-4-基-乙醇制得了该化合物(产率为10％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.79(br s，1H)，8.82(s，1H)，8.59(s，1H)，8.19(s，1H)，8.05(s，1H)，6.81(dd，2H)，4.20(t，2H)，3.75(m，4H)，2.91(t，2H)，2.61(m，4H)，2.55(s，3H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 372.1(M+1)
化合物261：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-脲
依据制备化合物253的方法，使用2-羟基甲基吡啶制得了该化合物(产率为21％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.61(d，1H)，8.29(s，1H)，8.11(s，1H)，7.61(t，1H)，7.31(d，1H)，7.18(t，1H)，6.88(d，1H)，6.75(d，1H)，5.18(s，2H)，2.30(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 372.2(M+Na)
化合物262：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-脲
依据制备化合物253的方法，使用4-羟基甲基吡啶制得了该化合物(产率为18％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.84(s，1H)，8.55(d，2H)，7.91(s，1H)，7.47(d，2H)，6.88(d，1H)，6.72(d，1H)，5.28(s，2H)，2.22(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 350.21(M+1)
化合物263：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-羟基甲基吡啶制得了该化合物(产率为10％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.82(s，1H)，8.68(m，2H)，8.25(s，1H)，8.20(s，1H)，7.84(d，1H)，7.38(m，1H)，6.99(s，1H)，6.88(d，1H)，6.80(d，1H)，5.10(s，2H)，2.38(s，3H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 350.21(M+1)
化合物264：
1-[2-(2-二甲基氨基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物253的方法，使用N，N-二甲基乙醇胺制得了该化合物(产率为11％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.69(s，1H)，8.18(s，1H)，8.03(s，1H)，6.95(d，1H)，6.79(d，1H)，4.11(t，2H)，2.72(t，2H)，2.43(s，3H)，2.25(s，3H)，2.22(s，6H).
LRMS(esi，正)m/e 330.20(M+1)
化合物265：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[2-(吡啶-3-基甲氧基)-5-三氟甲基-苯基]-脲
依据制备化合物253的方法，使用3-羟基甲基吡啶和2-羟基-5-三氟甲基苯胺制得了该化合物(产率为40％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.81(s，1H)，8.69(s，1H)，8.65(s，1H)，8.59(br s，1H)，8.01(d，1H)，7.45(t，1H)，7.3(br s，1H)，5.39(s，2H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 404.10(M+1)
化合物266：
1-[5-甲基-2-(6-甲基-吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：(6-甲基-吡啶-3-基)-甲醇。向6-甲基烟酸(5.0mmol)在四氢呋喃(10mL)内的搅拌着的冷的(0℃)溶液中滴加氢化锂铝(20mmoL；20mL1M在四氢呋喃中的溶液)。将该反应搅拌4小时，依次用1mL H2O、1mL 15％氢氧化钠水溶液和3mL H2O处理。将该反应过滤，并用四氢呋喃(3×50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，获得了所需的醇，为澄清粘稠的油状物。
步骤2-3：依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤4：向5-甲基-吡嗪-2-甲酸(138mg，1.0mmol)在甲苯(3.0mL)内的搅拌着的溶液中加入二苯基磷酰叠氮(216μL，1.0mmol)和三乙胺(140μL，1.0mmol)。将该反应置于氮气氛下，在90℃加热15分钟。将温度降至65℃，加入5-甲基-2-(6-甲基-吡啶-3-基甲氧基)-苯基胺(228mg，1.0mmol)。将该反应在该温度下搅拌4小时，然后在室温搅拌8小时。将在反应期间形成的沉淀过滤，用甲苯(2×1mL)洗涤，并减压干燥(产率为36％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.45(br s，1H)，8.65(s，1H)，8.29(s，1H)，8.22(s，1H)，8.20(s，1H)，7.70(d，1H)，7.19(d，1H)，6.9(m，3H)，5.05(s，2H)，2.65(s，3H)，2.4(s，3H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 364.16(M+1)
化合物267：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(2-吡啶-2-基-乙氧基)-苯基]-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用2-(2-吡啶基)-乙醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(2-吡啶-2-基乙氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为37％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.70(br s，1H)，8.65(d，1H)，8.45(br s，1H)，8.21(s，1H)，7.85(s，1H)，7.59(t，1H)，7.29(t，1H)，6.80(dd，2H)，4.49(t，2H)，3.39(t，2H)，2.49(s，3H)，2.39(s，3H)
LRMS(esi，正)m/e 364.14(M+1)
化合物268：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(3-吡啶-2-基-丙氧基)-苯基]-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用3-(2-吡啶基)-丙醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(3-吡啶-2-基-丙氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为5％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.89(br s，1H)，8.59(d，1H)，8.49(s，1H)，8.45(br s，1H)，8.22(s，1H)，8.15(s，1H)，7.59(t，1H)，7.15(d，2H)，6.88(dd，2H)，4.05(t，2H)，3.10(t，2H)，2.45(s，3H)，2.40(t，2H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 378.10(M+1)
化合物269：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(3-吡啶-4-基-丙氧基)-苯基]-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用3-(4-吡啶基)-丙醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(4-吡啶-2-基-丙氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为28％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.15(br s，1H)，8.51(d，2H)，8.25(s，1H)，8.20(s，1H)，7.79(s，1H)，7.75(s，1H)，7.15(d，2H)，6.82(d，1H)，6.75(d，1H)，4.05(t，2H)，2.91(t，2H)，2.40(s，3H)，2.36(s，3H)，2.25(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 378.16(M+1)
化合物270：
1-{2-[2-(苄基-甲基-氨基)-乙氧基]-5-甲基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-
脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用N-甲基-N-苄基乙醇胺进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用2-[2-(苄基-甲基-氨基)-乙氧基]-5-甲基-苯基胺形成所需的脲(产率为17％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.70(br s，1H)，8.49(s，1H)，8.20(s，1H)，7.95(s，1H)，7.85(s，1H)，7.32(m，5H)，6.85(s，2H)，4.15(t，2H)，3.62(s，2H)，2.92(t，2H)，2.49(s，3H)，2.33(s，3H)，2.29(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 406.01(M+1)
化合物271：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用3-羟基甲基-1-甲基哌啶进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为16％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.25(br s，1H)，8.45(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.22(s，2H)，6.80(d，1H)，6.74(d，1H)，3.80(m，2H)，3.15(br d，1H)，2.80(br d，1H)，2.51(s，3H)，2.35(s，3H)，2.30(m，1H)，2.22(s.3H)，1.50-2.00(m，6H)，1.00-1.25(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 370.01(M+1)
化合物272：
1-{2-[2-(4-二甲基氨基-苯基)-乙氧基]-5-甲基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用2-(4-二甲基氨基-苯基)-乙醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用2-[2-(4-二甲基氨基-苯基)-乙氧基]-5-甲基-苯基胺形成所需的脲(产率为10％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.15(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.25(s，1H)，7.80(m，2H)，7.25(m，2H)，6.82(s，2H)，6.75(d，2H)，4.25(t，2H)，3.20(t，2H)，2.99(s，6H)，2.55(s，3H)，2.41(s，3H).LRMS(esi，正)m/e 405.90(M+1)
化合物273：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(3-吡啶-3-基-丙氧基)-苯基]-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用3-(3-吡啶基)-丙醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(3-吡啶-3-基-丙氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为16％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ10.95(br s，1H)，8.51(m，2H)，8.35(s，1H)，8.25(s，1H)，8.15(s，1H)，7.80(s，1H)，7.50(d，1H)，7.21(t，1H)，6.79(d，1H)，6.75(d，1H)，4.09(t，2H)，2.90(t，2H)，2.45(s，3H)，2.35(s，3H)，2.25(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 377.91(M+1)
化合物274：
1-[2-(2-二甲基氨基-1-二甲基氨基甲基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基
-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用1，3-二-二甲基氨基-丙-2-醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用2-(2-氨基-4-甲基苯氧基)-N，N，N′，N′-四甲基-丙-1，3-二胺形成所需的脲(产率为4％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.69(br s，1H)，8.95(br s，1H)，8.19(s，1H)，8.05(s，1H)，6.80(dd，2H)，4.19(m，1H)，4.09(m，1H)，3.05(m，1H)，2.65(m，2H)，2.50(s，3H)，2.45(s，6H)，2.38(s，6H)，2.35(s，3H).
LRMS(esi，正)m/e 386.92(M+1)
化合物275：
1-15-甲基-2-(2-S-1-甲基-吡咯烷-2-基甲氧基)-苯基1-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用1-甲基-吡咯烷-2-S-基甲醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(1-甲基-吡咯烷-2-S-基甲氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为12％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.10(s，1H)，9.85(br s，1H)，9.65(br s，1H)，8.78(s，1H)，8.25(s，1H)，6.90(s，1H)，7.02(d，1H)，6.85(d，1H)，4.33(br s，2H)，3.88(m，1H)，3.59(m，1H)1，3.19(m，1H)，2.99(d，2H)2.70-2.85(m，2H)，2.45(s，3H)，2.29(s，3H)，1.80-2.10(m，3H).
LRMS(esi，正)m/e 355 91(M+1)
化合物276：
1-[2-(2-S-1-苄基-吡咯烷-2-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物253的方法，使用1-苄基-吡咯烷-2-S-基甲醇进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物266的方法，使用5-甲基-2-(1-苄基吡咯烷-2-S-基甲氧基)-苯基胺形成所需的脲(产率为3％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.95(s，1H)，9.90(br s，1H)，9.59(br s，1H)，8.69(s，1H)，8.10(s，1H)，7.89(s，1H)，7.25-7.50(m，6H)，6.96(d，1H)，6.90(d，1H)，4.75(d，2H)，4.33(m，4H)，4.10(m，2H) 2.40(s，3H)，2.25(s，3H)，1.80-2.10(m，3H)，1.10-1.30(m，2H).
LRMS(esi，正)m/e 432.31(M+1)
化合物277：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-脲
依据制备化合物266的方法，使用2-吡咯烷-1-基-乙醇制得了该化合物(产率为28％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.01(s，1H)，9.85(br s，1H)，9.72(br s，1H)，8.75(s，1H)，8.25(s，1H)，8.01(s，1H)，7.01(d，1H)，6.80(d，1H)，4.40(t，2H)，3.62(m，4H)，3.21(m，2H)，2.40(s，3H)，2.25(s，3H)，2.00(m，2H)，1.88(m，2H).
LRMS(ESI，正)m/e 356.2(M+1).
化合物278：
1-{5-甲基-2-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙氧基]-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
依据制备化合物266的方法，使用2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙醇制得了该化合物(产率为32％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.01(s，1H)，9.85(br s，1H)，9.72(br s，1H)，8.75(s，1H)，8.25(s，1H)，8.01(s，1H)，7.01(d，1H).6.80(d，1H)，4.20(m，3H)，3.00-4.00(m，11H)，2.80(d，2H)，2.40(s，3H)，2.25(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 370.2(M+1).
化合物279：
1-[2-(3H-咪唑-4-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物266的方法，使用(3H-咪唑-4-基)-甲醇制得了该化合物(产率为24％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.51(br s，1H)，8.01(s，1H)，7 69(s，1H)，7.20-7.50(m，2H)，7.10(d，1H)，6.75(d，1H)，4.99(s，2H)，2.40(s，3H)，2.25(s，3H)LRMS(ESI，正)m/e 339.1(M+1).
化合物280：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(2-吡啶-3-基-乙氧基)-苯基]-脲
依据制备化合物266的方法，使用2-吡啶-3-基-乙醇制得了该化合物(产率为16％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.98(br s，1H)，8.65(s，1H)，8.49(d，1H)，8.35(s，2H)8.20(s，1H)，7.75(s，1H)，7.65(d，1H)，7.19(m，1H)，6.82(dd，2H)，431(1，2H)，3.21(t，2H)，2.48(s，3H).2.35(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 364.2(M+1).
化合物281：
1-[5-甲基-2-(3-哌啶-1-基-丙氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物266的方法，使用3-哌啶-1-基-丙-1-醇制得了该化合物(产率为33％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.21(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.25(s，2H)，8.15(s，1H)，6.80(dd，2H)，4.15(t，2H)，2.53(t，2H)，2.52(s，3H)，2.45(m，4H)，2.39(s，3H)，2.10(m，2H)，1.61(m，4H)，1.45(m，2H).LRMS(ESI，正)m/e 384.2(M+1)
化合物282：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物266的方法，使用1-甲基-哌啶-4-醇制得了该化合物(产率为4％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ11.22(br s，1H)，8.43(s，1H)，8.25(s，1H)，8.20(s，1H)，8.10(s，1H)，6.81(dd，2H)，4.25(m，1H)，2.8(m，2H)，2.59(s，3H)，2.39(s，3H)，2.36(s，3H)，2.19(m，4H)，1.90(m，2H).LRMS(ESI，正)m/e 355.9(M+1).
化合物283：
1-[2-(1-苄基-哌啶-4-基氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物266的方法，使用1-苄基-哌啶-4-醇制得了该化合物(产率为1％)。
LRMS(ESI，正)m/e 432.0(M+1)。
化合物284：
1-[5-甲基-2-(3-(S)-1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
步骤1：(1-甲基-哌啶-3-(S)-基)-甲醇.向(S)-(+)-N-boc哌啶甲酸(5.0mmol)在四氢呋喃(10mL)内的搅拌着的冷溶液中滴加氢化锂铝(20mL，20mmol，1M的四氢呋喃溶液)。将该反应回流12小时，然后冷却至0℃。用1mL H2O、1mL 15％氢氧化钠水溶液和3mL H2O中止该反应。将该反应过滤，用四氢呋喃(3×50mL)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩，获得了澄清的粘稠油状物。
步骤2-3：5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-(S)-基甲氧基)-苯基胺依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤4：依据制备化合物266的方法制得了所需化合物(产率为33％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.25(br s，1H)，8.45(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.22(s，2H)，6.80(d，1H)，6.74(d，1H)，3.80(m，2H)，3.15(br d，1H)，2.80(br d，1H)，2.51(s，3H)，2.35(s，3H)，2.30(m，1H)，2.22(s，3H)，1.50-2.00(m，6H)，1.00-1.25(m，2H).LRMS(ESI，正)m/e 370.0(M+1).
化合物285：
1-[5-甲基-2-(3-(R)-1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-
基)-脲
步骤1-3：5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-(R)-基甲氧基)-苯基胺
依据制备化合物284的方法，使用(R)-(+)-N-boc哌啶甲酸制得了该化合物。
步骤4：将溶解在无水甲苯中的5-甲基吡嗪-2-甲酰叠氮(1.2当量)(0.1M浓度)加热至90℃。20分钟后，氮气释放已平息，将该酱色反应混合物冷却至60℃，然后加入上面制备的苯胺(在甲苯中的溶液，1当量)。在60℃搅拌4小时后，将该反应混合物冷却至室温并保持过夜。通过过滤收集形成的沉淀(产率为49％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.25(br s，1H)，8.45(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.22(s，2H)，6.80(d，1H)，6.74(d，1H)，3.80(m，2H)，3.15(br d，1H)，2.80(br d，1H)，2.51(s，3H)，2.35(s，3H)，2.30(m，1H)，2.22(s，3H)，1.50-2.00(m，6H)，1.00-1.25(m，2H).LRMS(ESI，正)m/e 370.0(M+1).
化合物286：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(1-吡啶-3-基-乙氧基)-苯基]-脲
步骤1：1-吡啶-3-基-乙醇
向吡啶-3-甲醛(15mmol)在四氢呋喃(40mL)内的搅拌着的冷(-78℃)溶液中加入甲基溴化镁(5mL，15mmol，3M乙醚溶液)。搅拌2小时后，用饱和氯化铵水溶液(5mL)中止该反应。用碳酸钠水溶液将pH调节至约5.0，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取产物。将乙酸乙酯层用盐水(1×100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了黄色油状物。
步骤2-3：5-甲基-2-(1-吡啶-3-基-乙氧基)-苯基胺
依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤4：依据制备化合物285的方法进行脲形成(产率为17％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.81(s，1H)，8.73(s，1H)，8.52(d，1H)，8.35(s，1H)，8.25(s，1H)，8.18(s，1H)，7.80(s，1H)，7.72(d，1H)，7.20(t，1H)，6.70(d，1H)，6.65(d，1H)，5.49(q，1H)，2.50(s，3H)，2.30(s，3H)，1.75(d，3H).LRMS(ESI，正)m/e 363.8(M+1)
化合物287：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-2-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-2-基甲氧基)-苯基胺
依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物285的方法进行脲形成(产率为11％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.90(br s，1H)，8.45(s，1H)，8.21(s，1H)，8.18(s，1H)，7.80(s，1H)，6.80(s，2H)，4.51(m，1H)，2.58-3.00(m，4H)，2.52(s，3H)，2.46(s，3H)，2.35(s，3H)，1.50-2.25(m，7H).
LRMS(ESI，正)m/e 369.9(M+1).
化合物288：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(四氢呋喃-2-基甲氧基)-苯基]-脲
步骤1-2：5-甲基-2-(四氢呋喃-2-基甲氧基)-苯基胺
依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物285的方法进行脲形成(产率为12％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ11.25(br s，1H)，8.49(s，1H)，8.40(s，1H)，8.22(s，1H)，8.18(s，1H)，6.8(s，2H)，4.42(m，1H)，3.80-4.10(m，4H)，2.52(s，3H)，2.35(s，3H)，1.20-2.20(m，4H).LRMS(ESI，正)m/e 342.9(M+1).
化合物289：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：(1-甲基-哌啶-4-基)-甲醇
向1-甲基-哌啶-4-甲酸(5.0mmol)在四氢呋喃(10mL)内的搅拌着的冷溶液中滴加氢化锂铝(20mL，20mmol，1M四氢呋喃溶液)。将该反应搅拌4小时，用1mL H2O、1mL 15％氢氧化钠水溶液和3mL H2O中止该反应。过滤该反应，并用四氢呋喃(3×50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，获得了澄清的粘稠油状物。
步骤2-3：5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-苯基胺
依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤4：依据制备化合物285的方法形成所需的脲(产率为54％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.18(br s，1H)，8.62(br s，1H)，8.38(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.18(s.1H)，6.82(d，1H)，6.78(d，1H)，3.85(d，2H)，2.90(br d，2H)，2.51(s，3H)，2.35(m，6H)，1.50-2.10(m，7H).
LRMS(ESI，正)m/e 369.2(M+1).
化合物290：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基氧基)-苯基胺
依据制备化合物253的方法进行Mitsunobu反应和苯胺脱保护。
步骤3：依据制备化合物285的方法形成所需的脲(产率为3％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.75(br s，1H)，8.59(br s，1H)，8.18(s，1H)，8.05(s，1H)，7.62(s，1H)，6.90(d，1H)，6.80(d，1H)，4.40(m，1H)，2.58(s，3H)，2.39(s，6H)，1.60-2.80(m，8H).
LRMS(ESI，正)m/e 356.1(M+1).
化合物291：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-苯
基]-脲
步骤1：喹啉-3-甲酸甲酯.
在0℃，向喹啉-3-甲酸(346mg，2mmol)在4∶1 THF∶MeOH(6mL)内的搅拌着的溶液中分批加入TMS-重氮甲烷(2M己烷溶液)，直至持续出现重氮甲烷的黄色。将该反应浓缩，获得了所需的甲酯，为黄褐色固体(244mg，65％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.44(s，1H)，8.85(s，1H)，8.17(d，1H)，7.96(d，1H)，7.84(dd，1H)，7.62(dd，1H)，4.02(s，3H)
步骤2：1，2，3，4-四氢-喹啉-3-甲酸甲酯和1-乙基-1，2，3，4-四氢喹啉-3-甲酸甲酯。
在室温，向喹啉-3-甲酸甲酯(244mg，1.3mmol)在冰醋酸(13mL)内的搅拌着的溶液中分批加入NaBH4(345mg，9.1mmol)(剧烈反应)。加入完成后，该反应是深黄色。搅拌3小时后，颜色变成浅黄色。将该反应混合物倒入50mL H2O和50mL CH2Cl2中，快速搅拌15分钟。分离各层，将有机层浓缩至黄色油状物。TLC(用15/85 EtOAc/己烷展开)表明原料已经完全消耗，并且有2个新的较低Rf点。使用Biotage 12M柱(用二氯甲烷负载)通过色谱法纯化该化合物，用15/85 EtOAc/己烷洗脱。较高Rf点对应的是N-乙基化产物(123mg，43％)。较低Rf点对应的是所需的四氢喹啉-3-甲酸甲酯(93mg，37％)。N-乙基衍生物：
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.08(dd，1H)，6.99(d，1H)，6.60(m，2H)，3.73(s，3H)，3.42(m，3H)，3.27(m，1H)，2.98(m，3H)，1.14(t，3H)
N-H衍生物：
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.98(m，2H)，6.62(dd，1H)，6.47(d，1H)，3.71(s，3H)，3.52(m，1H)，3.34(m，1H)，3.00(m，2H)，2.90(m，1H)
步骤3：(1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基)-甲醇。
在0℃、氮气氛下，向1，2，3，4-四氢喹啉-3-甲酸甲酯(93mg，0.49mmol)在1.5mL Et2O内的搅拌着的溶液中滴加LiAlH4(1M的Et2O溶液)，剧烈释放出气体，并且形成了白色沉淀。30分钟后，用15％NaOH(3mL)小心地中止该反应，加入3mL Et2O，将该混合物在室温快速搅拌15分钟。分离各层，用Et2O(1×10mL)萃取水层。合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了所需的醇(64mg，80％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.97(m，2H)，6.62(dd，1H)，6.47(d，1H)，3.66(m，1H)，3.58(m，1H)，3.40(m，1H)，3.08(m，1H)，2.82(m，1H)，2.53(m，1H)，2.18(m，1H).
步骤4：[5-甲基-2-(1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-苯基]-氨基甲酸叔丁酯。
在0℃、氮气氛下，向2-N-Boc-氨基-4-甲基苯酚(88mg，0.39mmol)、(1，2，3，4-四氢喹啉-3-基)-甲醇(64mg，0.39mmol)和三苯基膦(103mg，0.39mmol)在850μL THF内的溶液中加入DIAD(77μL，0.39mmol)在850μL THF中的溶液。将该反应温热至室温并保持过夜，浓缩，用CH2Cl2直接施加到Biotage 12M柱上，用96/4己烷/EtOAc洗脱。分离出了产物，为黄色油状物(129mg，89％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(br s，1H)，7.06(br s，1H)，6.99(m，2H)，6.81(m，1H)，6.73(s，2H)，6.65(dd，1H)，6.51(d，1H)，3.96(m，2H)，3.37(ddd，2H)，2.79(ddd，2H)，2.56(m，1H)，2.28(s，3H)，1.54(s，9H)
步骤5：3-(2-叔丁氧基羰基氨基-4-甲基-苯氧基甲基)-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯。
向[5-甲基-2-(1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-苯基]-氨基甲酸叔丁酯的搅拌着的溶液中。在0℃、氮气氛下向2-N-Boc-氨基-4-甲基苯酚(129mg，0.35mmol)在CH2Cl2(1.5mL)内的搅拌的溶液中加入DIEA(61μL，0.35mmol)，然后加入氯甲酸苄酯(50μL，0.35mmol)和DMAP(4mg，0.035mmol)。24小时后，用CH2Cl2将该反应稀释至30mL，用2N HCl(2×30mL)和饱和碳酸氢钠(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至棕色油状物，其似乎是产物与原料的混合物。
步骤6：3-(2-氨基-4-甲基-苯氧基甲基)-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯。在干燥管下，将3-(2-叔丁氧基羰基氨基-4-甲基-苯氧基甲基)-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯粗产物(粗产物，0.35mmol)在4N HCl的二氧杂环己烷溶液(2mL)中的溶液于室温搅拌过夜。通过旋转蒸发浓缩该悬浮液，用CH2Cl2稀释至30mL，与10％Na2CO3(30mL)一起振摇。分离出有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了与所需苯胺粗产物相对应的棕色油状物，其不用进一步纯化直接用于脲形成反应。
步骤7：3-{4-甲基-2-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯氧基甲基}-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯。
在隔片封闭的反应瓶中，在氮气氛和搅拌下，用甲苯(408μL)稀释0.5M5-甲基-吡嗪-2-甲酰叠氮溶液(204μL)，浸在90℃的油浴中。约20分钟后，氮气释放已停止，让该反应冷却至室温，用3-(2-氨基-4-甲基-苯氧基甲基)-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯粗产物(约0.101mmol)在甲苯(620μL)中的溶液处理。将该混合物在65℃搅拌2小时。将该反应冷却至室温并保持过夜，形成了沉淀。用甲苯将沉淀过滤，所得物质似乎是Cbz-保护和脱保护产物的混合物。
步骤8：1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-苯基]脲。
将3-{4-甲基-2-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯氧基甲基}-3，4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸苄酯粗产物(6.6mg，12μmol)在5mL EtOAc中的搅拌着的悬浮液在加热枪上加热直至形成溶液。将该澄清的溶液冷却至室温，用三乙胺(3.4μL，24μmol)处理，然后用Pearlman′s催化剂(20％以碳为载体的氢氧化钯，9mg)处理。用氢气给该混合物施加3次真空/吹扫循环，然后在1大气压的氢气下保持1小时。将该反应经由GF/F滤纸过滤，用EtOAc洗涤，浓缩，获得了与所需产物相对应的白色固体(4.7mg，100％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.23(s，1H)，8.18(s，1H)，7.96(s，1H)，7.04(t，1H)，6.97(d，1H)，6.81(m，2H)，6.67(t，1H)，6.58(d，1H)，4.04(m，2H)，3.57(d，1H)，3.26(t，1H)，2.92(ddd，2H)，2.64(m，1H)，2.34(s，3H)，2.31(s，3H)LRMS(APCI，正)m/e 404.2(M+1).
化合物292：
1-[2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡
嗪-2-基)脲
步骤1：(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基)-甲醇。
在0℃、氮气氛下，向1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-甲酸甲酯(123mg，0.56mmol)在1.5mL Et2O内的搅拌着的溶液中滴加LAH(1M的Et2O溶液)，剧烈释放出气体，并形成了白色沉淀。30分钟后，TLC(用3/7EtOAc/己烷展开)表明s.m.已完全消失，并出现了清楚的较低Rf点。用15％NaOH(3mL)小心地中止该反应，加入3mL Et2O，将该混合物在室温快速搅拌15分钟。分离各层，用Et2O(1×10mL)萃取水层。合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了与所需醇相对应的澄清油状物(105mg，95％)。
步骤2：[2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁酯。
在0℃、氮气氛下，向(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基)-甲醇(105mg，0.55mmol，在步骤2中制得的，化合物126xx)、2-N-Boc-氨基-4-甲基苯酚(123mg，0.55mmol)和三苯基膦(144mg，0.55mmol)在850μL THF内的搅拌着的溶液中加入DIAD(108μL，0.55mmol)在850μL THF中的溶液。让该反应温热至室温并保持过夜，浓缩，用CH2Cl2直接施加到Biotage 12M柱上，用96/4己烷/EtOAc洗脱，获得了所需的烷基化苯酚，为白色泡沫状物(40mg，18％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(br s，1H)，7.08(dd，1H)，7.02(m，1H)，6.99(d，1H)，6.75(s，2H)，6.62(d，1H)，6.59(dd，1H)，3.98(m，2H)，3.39(m，4H)，3.20(m，1H)，2.79(ddd，2H)，2.58(m，1H)，2.28(s，3H)，1.56(s，9H)，1.16(t，3H).
步骤3：2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基胺。
在室温、干燥管下，将[2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.1mmol)在4N HCl的二氧杂环己烷溶液(2mL)中搅拌过夜。通过旋转蒸发浓缩该悬浮液，用CH2Cl2稀释至30mL，与10％Na2CO3(30mL)一起振摇。分离出有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至棕色油状物，其不用纯化直接用于随后的反应。
步骤4：1-[2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基吡嗪-2-基)-脲。
在隔片封闭的反应瓶中，在氮气氛和搅拌下，用364μL甲苯稀释0.5M酰基叠氮(182μL)溶液，浸在90℃油浴中。约20分钟后，氮气释放停止，让该反应温热至室温，用2-(1-乙基-1，2，3，4-四氢-喹啉-3-基甲氧基)-5-甲基-苯基胺(27mg，0.91mmol)在550μL甲苯中的溶液处理。将该混合物在65℃搅拌2小时。将该反应冷却至室温并保持过夜，形成了沉淀。用甲苯将沉淀过滤，分离出所需的脲，为黄褐色固体(7mg，18％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.34(br s，1H)，8.25(s，1H)，8.21(s，1H)，8.11(br s，1H)，7.83(s，1H)，7.25(m，1H)，7.18(d，1H)，7.12(t，1H)，6.97(d，1H)，6.80(m，2H)，6.70(d，1H)，6.61(t，1H)，4.05(m，2H)，3.52(m，2H)，3.32(t，1H)，3 7(m，1H)，2.91(ddd，2H)，2.69(m，1H)，2.36(s，3H)，2.27(s，3H)，1.04(t，3H).LRMS(APCI，正)m/e 431.9(M+1).
化合物293：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-喹喔啉-2-基-脲
步骤1：喹喔啉-2-甲酰叠氮.
在室温、氮气氛下，将喹喔啉-2-甲酸(348mg，2mmol)在THF(6mL)中的搅拌着的溶液用二异丙基乙基胺(365μL，2.1mmol)处理，然后用二苯基磷酰叠氮(410μL，1.9mmol)处理。搅拌过夜后，用乙醚将该反应稀释至60mL，用2×60mL饱和NaCl洗涤。出现了不溶性棕色油状物，将其从水层中排放出来，假定其是磷酸二苯酯杂质。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了与所需酰基叠氮相对应的黄褐色固体(350mg，92％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.58(s，1H)，8.32(d，1H)，8.21(d，1H)，7.94(m，2H)
步骤2：1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-喹喔啉-2-基-脲。将喹喔啉-2-甲酰叠氮(66mg，0.33mmol)在甲苯(1.7mL)中的溶液于氮气氛下搅拌，并浸在90℃的加热浴中。20分钟后，将该反应冷却至65℃，加入固体5-甲基2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基胺(70mg，0.3mmol)。将该反应在65℃搅拌4小时，然后冷却至室温并保持过夜。通过过滤收集所得沉淀，并用甲苯洗涤(62mg，51％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.58(brs，1H)，9.27(br s，1H)，8.63(s，1H)，8.22(s，1H)，8.03(d，1H)，7.91(d，1H)，7.76(t，1H)，7.61(t，1H)，6.86(m，2H)，4.03(m，2H)，2.91(d，1H)，2.61(d，1H)，2.37(s，3H)，2.25(m，1H)，2.09(s，1H)，1.81(m，3H)，1.57(m，2H)，1.05(m，1H).LRMS(APCI，正)m/e 405.9(M+1).
化合物294：
1-[5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-喹喔啉-2-基-脲步骤1：1-[5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-喹喔啉-2-基-脲.在氮气氛下，将喹喔啉-2-甲酰叠氮(92mg，0.46mmol，如上所述制得的)在1.5mL甲苯中的搅拌着的溶液浸在90℃的加热浴中。20分钟后，将该反应冷却至65℃，用固体5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基胺(90mg，0.42mmol)处理。将该反应在65℃搅拌4小时，然后冷却至室温并保持过夜。通过过滤收集所得沉淀。在Biotage 12M柱上通过色谱法纯化粗产物，用2/3 EtOAc/己烷洗脱，获得了纯的所需脲，为黄褐色固体(20mg，12％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.99(br s，1H)，9.64(brs，1H)，8.76(s，1H)，8.61(s，1H)，8.48(d，1H)，8.24(s，1H)，7.98(d，1H)，7.79(d，1H)，7.55(t，1H)，7.42(t，1H)，7.17(d，1H)，7.12(m，1H)，6.93(m，2H)，5.26(s，2H)，2.41(s，3H).LRMS(APCI，正)m/e 385.9(M+1).
化合物295：
步骤1 Mitsunobo法：
1-[2-(4-甲基-2-硝基-苯氧基)-乙基]-氮杂环丙烷。将2-硝基-4-甲基苯酚(505mg，3.3mmol，1.1当量)和2-氮杂环丙烷-1-基-乙醇(3.0mmol，1当量)在10mL THF中的溶液于0℃搅拌。加入三苯基膦(0.87g，3.30mmol，1.1当量)和偶氮二甲酸二异丙酯(0.67g 3.30mmol，1.1当量)，让该溶液温热至室温。18小时后，用100mL EtOAc稀释该反应混合物，用水(3×20mL)洗涤。再用1N HCl(3×20ml)洗涤有机相。用3N NaOH将水层碱化至pH＞12，用EtOAc(3×50mL)萃取，获得了粗产物。通过快速色谱法纯化终产物，用5-10％MeOH在二氯甲烷中的混合物洗脱。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.66(s，1H)，7.32(d，J＝8.61Hz，1H)，7.01(d，J＝8.61Hz，1H)，4.26(t，J＝5.09Hz，2H)，2.67(t，J＝5.48Hz，2H)，2.34(s，3H)，1.79(m，2H)，1.34(m，2H).
步骤2硝基还原。
2-(2-氮杂环丙烷-1-基-乙氧基)-5-甲基-苯基胺。在300mg 10％Pd/C存在下，将3-硝基-4-烷氧基甲苯(1.0mmol)在20mL EtOH中的溶液于2atm氢化30分钟。通过经由玻璃纤维滤器过滤来除去催化剂，获得了所需产物，将不用进一步纯化而直接使用。
步骤3脲形成
1-[2-(2-氮杂环丙烷-1-基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
将5-甲基吡嗪-2-甲酰叠氮(196mg，1.2mmol，1.2当量)在20mL无水甲苯中的溶液加热至90℃。20分钟后，氮气释放已平息，将该反应混合物冷却至60℃，然后加入苯胺(1.0mmol，1当量)在2mL甲苯中的溶液。在60℃搅拌4小时后，将该反应混合物在50mL EtOAc与饱和NaHCO3之间分配，用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用5％MeOH在二氯甲烷中的混合物洗脱。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10.80(s，1H)，8.64(s，1H)，8.53(s，1H)，8.15(s，1H)，8.07(s，1H)，6.82(m，2H)，4.2(m，2H)，2.7(m，2H)，2.5(s，3H)，2.32(s，3H)，1.89(s，2H)，1.30(m，2H).MS APCI-Pos，M/e 328.0(M+1)
化合物296：
1-[2-(3-二甲基氨基-苄氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
按照上面制备化合物295的方法，由(3-二甲基氨基-苯基)-甲醇制得了该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.69(s，1H)，8.26(s，1H)，8.11(s，1H)，7.93(s，1H)，7.26(m，1H)，6.87(m，6H)，5.01(s，2H)，2.93(s，6H)，2.35(s，6H).MS APCI-Pos，M/e 391.9(M+1)
化合物297：
1-[2-(1-异丙基-吡咯烷-3-基氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
按照上面制备化合物295的方法，由3-羟基-1-异丙基-吡咯烷制得了该化合物。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10.08(s，2H)，8.65(s，1H)，8.14(s，1H)，8.03(s，1H)，6.81(d，J＝7.83Hz，1H)，6.74(d，J＝8.61Hz，1H)，4.85(s，1H)，2.91(m，1H)，2.75(m，2H)，2.48(m，1H)，2.4(s，3H)，2.36(m，1H)，2.27(m，1H)，2.21(s，3H)，1.85(m，1H)，1.01(m，6H).MS APCI-Pos，M/e 369.9(M+1)
化合物298：
1-[5-甲基-2-(1-甲基-吡咯烷-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
按照上面制备化合物295的方法，由(1-甲基-吡咯烷-3-基)-甲醇制得了该化合物。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10.13(s，2H)，8.07(s，1H)，8.15(s，1H)，8.06(s，1H)，6.81(d，J＝8.61Hz，1H)，6.75(d，J＝7.83Hz，1H)，4.88(s，1H)，2.75(m，4H)，2.5(m，2H)，2.43(s，3H)，2.3(s，3H)，2.24(s，3H).MS APCI-Pos，m/e 341.9(M+1)
化合物299：
步骤1：3-羟基甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在0℃，向3-羟基甲基哌啶(403mg，3.5mmol，1当量)在20mL CH2Cl2和5mL饱和碳酸氢钠内的搅拌着的溶液中分几批加入二碳酸二叔丁酯(803mg，3.68mmol，1.05当量)。在0℃搅拌2小时后，用10mL水稀释该溶液，用2×20mL CH2Cl2萃取，将合并的萃取液依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，获得了用于下一步骤的Boc保护的胺。
步骤2-4：3-{4-甲基-2-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯氧基甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯
按照上面制备化合物295所述的方法，由3-羟基甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制得了该化合物。通过快速色谱法纯化，用5％MeOH在二氯甲烷中的混合物洗脱。
步骤5：1-[5-甲基-2-(哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲通过在0℃将上述保护的衍生物(180mg，0.395mmol)在15mL CH2Cl2中的溶液用2mL TFA处理来除去Boc基团。在室温搅拌18小时后，将该反应真空浓缩，把残余物置于20mL EtOAc中，用10mL NaHCO3洗涤。用EtOAc(2×30mL)萃取水相，用20mL盐水洗涤合并的萃取液，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，获得了128mg(91％)所需的胺。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10.16(s，1H)，10.09(s，1H)，8.53(s，1H)，8.11(s，1H)，7.97(s，1H)，6.8(d，J＝7.8Hz，1H)，6.69(d，J＝8.6Hz，1H)，3.77(s，2H)，3.09(m，1H)，2.82(m，1H)，2.34(m，2H)，2.3(s，3H)，2.27(m，1H)，2.15(s，3H)，1.92(m，1H)，1.75(m，1H)，1.53(m，1H)，1.37(1m，H)，1.11(m，1H).MS APCI-Pos，M/e 356.0(M+1)
化合物300：
1-[5-氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：3-(4-氟-2-硝基-苯氧基甲基)-吡啶。
向1，4-二氟-2-硝基-苯(3.0mmol)和3-吡啶基甲醇(3.1mmol)在四氢呋喃(8mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(3.2mmoL；3.2mL 1.0M的四氢呋喃溶液)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物。
步骤2：5-氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基胺。
向4-氟-2-硝基-苯氧基甲基)-吡啶(1.0mmol)在甲醇(2mL)和饱和氯化铵水溶液(1mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入锌粉(2.0mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物。步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为23％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.62(br s，1H)，8.80(s，1H)，8.75(d，1H)，8.43(br s，1H)，8.25(d，1H)，8.15(s，1H)，7.85(d，1H)，7.43(m，1H)，6.95(m，2H)，6.68(m，1H)，5.15(s，2H)，2.43(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 354.10(M+1).
化合物301：
1-[5-氟-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物300的方法，使用1，4-二氟-2-硝基苯和1-甲基-3-羟基甲基哌啶进行制备。
步骤3：依据制备化合物285的方法形成所需的脲(产率为62％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(m，3H)，7.21(m，2H)，6.78(m，2H)，3.85(m，2H)，3.21(m，1H)，2.85(m，1H)，2.52(s，3H)，2.39(s，3H)，1.50-2.30(m，8H).LRMS(ESI，正)m/e 374.21(M+1).
化合物302：
1-[5-氟-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1-2：依据制备化合物300的方法，使用1，4-二氟-2-硝基苯和1-甲基-4-羟基哌啶进行制备。
步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为78％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.89(br s，1H)，8.35(s，1H)，8.22(d，1H)，8.10(s，1H)，6.80(m，1H)，6.70(m，1H)，4.25(m，1H)，2.90(m，2H)，2.55(s，3H)，2.38(s，3H)，2.35(s，3H)，1.80-2.30(m，6H).
LRMS(ESI，正)m/e 359.91(M+1).
化合物303：
1-[4-氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：3-(5-氟-2-硝基-苯氧基甲基)-吡啶
向2-硝基-5-氟-苯酚(2.0mmol)、三苯基膦(2.0mmol)和3-羟基甲基吡啶(2.0mmol)在无水四氢呋喃(5mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(2.0mmol在1mL四氢呋喃中的溶液)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物。
步骤2：4-氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基胺。
依据制备化合物300的方法将硝基还原。
步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为60％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.41(br s，1H)，8.85(s，1H)，8.75(d，1H)，8.40(t，1H)，8.18(s，1H)，7.88(s，1H)，7.80(d，1H)，7.43(t，1H)，7.00(s，1H)，6.80(m，2H)，5.12(s，2H)，2.43(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 354.21(M+1).
化合物304：
1-[4-氟-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物303的方法，使用2-硝基-5-氟苯酚和1-甲基-3羟基甲基哌啶制得了该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.50(br s，1H)，8.19(m，2H)，6.65(m，2H)，3.85(m，2H)，3.60(s，3H)，2.80-3.20(m，2H)，2.54(s，3H)，2.39(s，3H)，1.60-2.10(m，5H).
LRMS(ESI，正)m/e 373.95(M+1).
化合物305：
1-[4-氟-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物303的方法，使用2-硝基-5-氟苯酚和1-甲基-4-羟基哌啶制得了该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.35(br s，1H)，9.49(s，1H)，8.35(m，2H)，8.05(s，1H)，6.65(m，2H)，4.35(m，1H)，2.90(m，2H)，2.54(s，3H)，2.35(s，3H)，1.80-2.30(m，6H).LRMS(ESI，正)m/e 359.93(M+1).
化合物306：
1-[3，4-二氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：3-(2，3-二氟-6-硝基-苯氧基甲基)-吡啶
向2，3-二氟-6-硝基苯酚(2.0mmol)、三苯基膦(2.0mmol)和3-羟基甲基吡啶(2.0mmol)在无水四氢呋喃(5mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(2.0mmol在1mL四氢呋喃中的溶液)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。
将滤液减压浓缩，获得了所需的粗产物。
步骤2：3，4-二氟-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基胺
依据制备化合物300的方法将硝基还原。
步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为20％)。
1H NMR(400MHz.CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.89(s，1H)，8.85(s，1H)，8.65(d，1H)，8.25(s，1H)，8.10(m，1H)，7.88(d，1H)，7.35(t，1H)，7.18(s，1H)，6.98(m，1H)，5.25(s，2H)，2.52(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e372.10(M+1)
化合物307：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-4-基氧基)-苯基]-脲
步骤1：5-甲基-2-(吡啶-4-基氧基)-苯基胺
向2-氨基-4-甲基苯酚(616mg；5.0mmol)和4-氯吡啶(625mg；5.5mmol)在二甲亚砜(5mL)内的搅拌着的溶液中加入氢氧化钠(600mg；15.0mmol，在1mL水中的溶液)。将该反应加热至100℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 40M柱纯化粗产物，用二氯甲烷∶甲醇∶氨(90∶8∶2)洗脱，获得了浅黄色油状物(产率为10％)。
步骤2：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为36％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.41(br s，1H)，8.52(m，3H)，8.33(s，1H)，8.22(s，1H)，7.61(s，1H)，6.80-7.00(m，4H)，2.49(s，3H)，2.45(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 335.91(M+1).
化合物308：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-脲
步骤1：3-(4-甲基-2-硝基-苯氧基)-吡啶
向1-氯-4-甲基-2-硝基苯(686mg；4.0mmol)和吡啶-3-醇(418mg；4.40mmol)在二甲基甲酰胺(5mL)内的搅拌着的溶液中加入碳酸钾(1.22g，8.80mmol)。将该反应加热至50℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 40M柱纯化粗产物，用己烷和乙酸乙酯(1∶1)洗脱，获得了浅黄色油状物(产率为27％)。
步骤2：5-甲基-2-(吡啶-3-基氧基)-苯基胺
向3-(4-甲基-2-硝基-苯氧基)-吡啶(1.0mmol)在甲醇(2mL)和饱和氯化铵水溶液(1mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入锌粉(2.0mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL 10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了棕色油状物(产率为95％)。
步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为45％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.55(s，1H)，8.39(d，1H)，8.35(s，1H)，8.15(s，1H)，8.05(br s，1H)，7.21(m，2H)，6.92(m，2H)，2.49(s，3H)，2.45(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 335.91(M+1).
化合物309：
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-2-基氧基)-苯基]-脲
步骤1：2-(4-甲基-2-硝基-苯氧基)-吡啶
向1-氯-4-甲基-2-硝基苯(686mg；4.0mmol)和吡啶-2-醇(418mg；4.40mmol)在二甲基甲酰胺(5mL)内的搅拌着的溶液中加入碳酸钾(1.22g，8.80mmol)。将该反应加热至50℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 40M柱纯化粗产物，用己烷和乙酸乙酯(1∶1)洗脱，获得了浅黄色油状物(产率为11％)。
步骤2：5-甲基-2-(吡啶-2-基氧基)-苯基胺
向2-(4-甲基-2-硝基-苯氧基)-吡啶(1.0mmol)在甲醇(2mL)和饱和氯化铵水溶液(1mL)内的搅拌着的冷的(约0℃)溶液中加入锌粉(2.0mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用30mL10％碳酸钠水溶液(2×30mL)、盐水(1×30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了白色泡沫状物(产率为77％)。
步骤3：依据制备化合物295的方法形成所需的脲(产率为43％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.51(br s，1H)，8.42(br s，1H)，8.00(s，1H)，7.80(s，1H)，7.51(t，1H)，7.29(d，1H)，7.05(d，1H)，6.95(d，1H)，6.75(d，1H)，6.35(t，1H)，2.49(s，3H)，2.45(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e335.91(M+1)
取代的氨基吡嗪脲。一般方法：
在室温、氮气氛下，向0.3M氨基吡嗪衍生物(1当量)在二氯乙烷内的搅拌着的溶液中加入异氰酸2-甲氧基-5-甲基苯基酯(1当量)。将该反应温热至80℃并保持过夜，然后冷却至室温。在大多数情况下，产物沉淀出来，并通过过滤来分离。或者可通过硅胶色谱分离产物，使用EtOAc/己烷或CH2Cl2/MeOH作为洗脱剂。
化合物310：
3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-1-甲基-1-吡嗪-2-基-脲
步骤1：2-甲基氨基吡嗪。
在室温向2M甲基胺在1mL甲醇内的搅拌着的溶液中加入2-氯吡嗪。将该反应密封，并在60℃加热24小时。将该反应浓缩至原料与所需2-甲基氨基吡嗪的1∶2比例的混合物。该混合物作为粗产物用于脲形成反应。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.97(d，1H)，7.85(s，1H)，7.73(d，1H)，2.96(s，3H)
步骤2：在室温、氮气氛下，向0.3M 2-甲基氨基吡嗪(1当量)在二氯乙烷内的搅拌着的溶液中加入异氰酸2-甲氧基-5-甲基苯基酯(1当量)。将该反应温热至80℃并保持过夜，然后冷却至室温。在大多数情况下，产物沉淀出来，并通过过滤来分离。或者可通过硅胶色谱分离产物，使用EtOAc/己烷或CH2Cl2/MeOH作为洗脱剂。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.57(s，1H)，8.32(s，1H)，8.31(s，1H)，8.17(s，1H)，6.80(m，2H)，3.90(s，3H)，3.56(s，3H)，2.32(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 273.2(M+1).
化合物311：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
依据制备化合物310的一般方法，使用2-氨基-4-甲基吡嗪制得了该化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.12(br s，1H)，8.28(s，1H)，8.17(s，1H)，8.09(s，1H)，6.81(m，2H)，3.91(s，3H)，2.54(s，3H)，2.35(s，3H)，LRMS(ESI，正)m/e 273.2(M+1).
化合物312：
1-(5，6-二甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-5，6-二甲基吡嗪。
在塞上盖的烧瓶中，在-30℃(乙腈/CO2浴)将甘氨酸脒二氢溴酸盐(620mg，2.64mmol)在6mL MeOH中搅拌。单独将丁二酮(232μL，2.64mmol)与乙酸钠(700mg)在6mL水中搅拌直至均匀。通过移液管将该二酮加到所述脒溶液中，然后加入2.5mL 3.6M NaOH。让该黄色溶液缓慢地温热至室温，然后搅拌过夜。通过旋转蒸发除去MeOH，用EtOAc(3×30mL)萃取该水溶液。将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了含有一些杂质的黄色固体。用EtOAc/Et2O研制该固体，过滤，获得了纯的化合物(55mg，17％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.76(s，1H)，4.25(br s，2H)，2.40(s，3H)，2.37(s，3H)
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5，6-二甲基吡嗪制得了所需化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ11.43(br s，1H)，8.23(s，1H)，8.00(s，1H)，7.64(brs，1H)，6.81(m，2H)，3.95(s，3H)，2.59(s，3H)，2.52(s，3H)，2.35(s，3H).LRMS(APCI，正)m/e287.1(M+1).
化合物313：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：2-氨基-5-三氟甲基吡嗪。
依据Miesel，J.的U.S.专利4,293,552(1981)的方法制得。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5-三氟甲基吡嗪制得了所需化合物。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.59(s，1H)，9.78(br s，1H)，9.06(s，1H)，8.80(s，1H)，8.00(s，1H)，6.96(d，1H)，6.81(d，1H)，3.87(s，3H)，2.22(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 327.1(M+1).
化合物314：
1-(5，6-二苯基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-羟基-5，6-二苯基吡嗪.
在0℃，向甘氨酰胺盐酸盐(1.1g，10mmol)在20mL MeOH内的搅拌着的悬浮液中加入20％NaOH(10mL，50mmol)。形成了澄清的溶液，向其中缓慢地分批加入固体偶苯酰(2.1g，10mmol)。将该黄色溶液在0℃搅拌2小时，然后用浓盐酸中和至大约pH＝7。浅黄色消失，形成了黄褐色沉淀。通过过滤分离出沉淀，用MeOH洗涤，用EtOAc研制，获得了2-羟基-5，6-二苯基吡嗪(2g，80％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.24(s，1H)，7.42-7.31(m，4H)，7.39-7.21(m，6H).
步骤2：2-氯-5，6-二苯基吡嗪.
在塞上盖的反应瓶中，将2-羟基-5，6-二苯基吡嗪(430mg，1.7mmol)在5.2mL POCl3内的搅拌着的溶液在100℃加热4小时。将该橙色溶液冷却至室温，在CH2Cl2(100mL)与冰冷的10％Na2CO3(100mL)的混合物中快速搅拌15分钟。分离出有机层，用10％Na2CO3(2×100mL)洗涤。分离出有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了作为白色固体存在的所需氯吡嗪(450mg，定量产率)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.59(s，1H)，7.45-7.39(m，4H)，7.36-7.24(m，6H).
步骤3：2-叠氮基-5，6-二苯基吡嗪。
在室温、氮气氛下，向2-氯-5，6-二苯基吡嗪(45mg，0.17mmol)在500μLDMF内的搅拌着的溶液中加入叠氮化钠(11mg，0.17mmol)，将该反应温热至100℃。搅拌过夜后，将该反应冷却至室温，用EtOAc(30mL)稀释，用水(4×30mL)和饱和氯化钠(1×30mL)洗涤。分离出将有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了作为黄色固体存在的所需2-叠氮基吡嗪(45mg，定量产率)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.73(s，1H)，7.58-7.42(m，6H)，7.36-7.23(m，4H).
步骤4：2-氨基-5，6-二苯基吡嗪。
在室温，向2-叠氮基-5，6-二苯基吡嗪(45mg，0.17mmol)在50mL EtOAc内的搅拌着的溶液中加入三乙胺(100μL)，然后加入Pearlman′s催化剂(50mg)。用氢气给该悬浮液施加3次真空/吹扫循环，然后在1大气压的氢气下保持2小时。将该悬浮液经由GF/F滤纸过滤，用EtOAc洗涤，并浓缩。经由Biotage 12S柱用1/1 EtOAc/己烷洗脱粗产物，获得了纯的产物，为澄清的油状物(25mg，59％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(s，1H)，7.42-7.20(m，10H)，4.62(br s，2H)
步骤5：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5，6二苯基吡嗪制得了所需化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(s.1H)，8.13(s，1H)，7.80(s，1H)，7.46(d，2H)，7.37-7.23(m，10H)，6.81(d，1H)，6.66(d，1H)，3.17(s，3H)，2.33(s，3H)
化合物315：
1-[3-苄基-5-(4-甲氧基-苯基)-吡嗪-2-基]-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-3-苄基-4-(4-甲氧基苯基)吡嗪制得了所需化合物。
1H-NMR(400MHz DCl3)δ8.51(s，1H)，8.11(s，1H)，7.96(s，2H)，7.34(m，5H)，7.03(d，2H)，6.80(m，2H)，4.28(s，2H)，3.95(s，3H)，3.90(s，3H)，2.30(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 477.2(M+1).
化合物316：
1-(6-叠氮基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：四唑并[1，5-a]吡嗪-5-基胺。
依据Shaw，J.T.；等人，J.Heterocyclic Chem.1980，17，11的方法进行制备。
步骤2：依据制备化合物166所述的一般方法(步骤2)，使用氨基甲酸对硝基苯酯和四唑并[1，5-a]吡嗪-5-基胺进行制备。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.72(br s，1H)，8.23(s，1H)，7.97(s，1H)，7.87(s，1H)，7.80(br s，1H)，6.88(d，1H)，6.80(d，1H)，3.84(s，3H)，2.36(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 300.0(M+1).
化合物317：
1-(6-氨基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
在室温，向1-(6-叠氮基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲(8mg，27μmol)在95％EtOH(2mL)内的搅拌着的溶液中加入浓的NH4OH(10μL)和10％Pd/C(25mg)。使用氢气给该悬浮液施加3次真空/吹扫循环，然后保持在50 psi的氢气压力下，并在帕尔窑洞器上振摇。2小时后，重复真空/吹扫循环，将反应在氢气下再保持2小时。然后将该悬浮液经由GF/F滤纸过滤，用EtOH洗涤，并浓缩，获得了黄色薄膜状物(3mg，41％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.19(s，1H)，7.61(s，1H)，7.56(s，1H)，6.83(s，2H)，3.95(s，3H)，2.33(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 274.2(M+1).
化合物318：
1-(6-氯-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
在0℃、氮气氛下，向2-氨基-6-氯吡嗪(130mg，1mmol)在3mL THF内的搅拌着的溶液中加入甲基碘化镁(3M的Et2O溶液，330μL，1mmol)，获得了黄色悬浮液，将其在0℃搅拌15分钟。用纯净的异氰酸酯(147μL，1mmol)处理该悬浮液，让将温热至室温并保持过夜。将该反应在EtOAc(30mL)与10％Na2CO3(30mL)之间分配。分离出有机层，用10％Na2CO3(1×30mL)和饱和NaCl(1×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了粗的残余物，用EtOAc研制，过滤后获得了所需的脲产物，为白色固体(27mg，9％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(s，1H)，8.23(s，1H)，8.17(s，1H)，8.09(br s，1H)，6.84(d，1H)，6.81(d，1H)，3.96(s，3H)，2.35(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 293.0(M+1).
化合物319：
1-(5-溴-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-5-溴吡嗪.向氨基吡嗪(5.0g，52.6mmol)在二氯甲烷(200mL)内的搅拌着的冷的(0℃)溶液中加入N-溴琥珀酰亚胺(9.39g，52.8mmol)。搅拌24小时后，将该反应用10％碳酸钠水溶液(3×50mL)、水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，置于最小所需量的乙酸乙酯(5mL)中，然后加入己烷(200mL)。形成了黄色晶体，将其过滤并干燥(产率为56％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-4-溴吡嗪进行制备。
1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.55(s，1H)，8.32(s，1H)，8.03(s，1H)，6.81(m，2H)，3.92(s，3H)，2.34(s，3H).
化合物320：
1-(3，5-二溴-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-4，6-二溴吡嗪制得了该化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，7.13(s，1H)，6.79(m，2H)，3.83(s，3H)，2.32(s，3H)
化合物321：
1-[5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基甲基)-吡嗪-2-基]-3-(2-甲氧基-5-
甲基-苯基)-脲
步骤1：(5-溴甲基-吡嗪-2-基)-氨基甲酸叔丁酯。
在室温、氮气氛下，向2-Boc-氨基-5-甲基吡嗪(1.34g，6.4mmol)在20mL CCl4内的搅拌着的溶液中加入N-溴琥珀酰亚胺(1.14g，6.4mmol)，然后加入过氧化苯甲酰(125mg)。用100瓦的泛光灯照射该溶液，引起反应剧烈回流。2小时后，将该反应冷却至室温，用二氯甲烷稀释至125mL，用10％亚硫酸氢钠(1×125mL)和饱和NaCl(1×125mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了棕色油状物，用二氯甲烷将该油状物直接施加到Biotage 40S柱上，用15/85 EtOAc/己烷洗脱，获得了所需的苄基溴，为黄色固体(954mg，51％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.22(s，1H)，8.29(s，1H)，7.37(br s，1H)，4.54(s，2H)，1.55(s，9H).
步骤2：[5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基甲基)-吡嗪-2-基]-氨基甲酸叔丁酯。
在室温、氮气氛下，向邻苯二甲酰亚胺(971mg，6.6mmol)和K2CO3粉末(1.37g，9.9mmol)在乙腈(9.9mL)内的搅拌着的溶液中加入固体形式的上述溴化物(954mg，3.3mmol)。将该悬浮液在65℃加热4小时。冷却至室温后，将该反应在EtOAc(60mL)与H2O(60mL)之间分配。分离出将有机层，用水(2×50mL)和饱和氯化钠(1×50mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用CH2Cl2研制粗产物，过滤以除去过量的邻苯二甲酰亚胺固体，将滤液部分浓缩，直接施加到Biotage40S柱上，用3/7 EtOAc/己烷洗脱，获得了所需的邻苯二甲酰亚胺，为白色固体(495mg，42％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.17(s，1H)，8.23(s，1H)，7.85(m，2H)，7.71(m，2H)7.39(br s，1H)，4.97(s，2H)，1.52(s，9H)
步骤3：2-(5-氨基-吡嗪-2-基甲基)-异吲哚-1，3-二酮。
在室温，在塞上盖的烧瓶中，向上述邻苯二甲酰亚胺(495mg，1.4mmol)在7mL CH2Cl2内的搅拌着的溶液中加入三氟乙酸(7mL)。搅拌过夜后，将该反应浓缩以除去过量三氟乙酸，然后溶解在200mL 10/1CH2Cl2/MeOH中，快速搅拌，用10％Na2CO3溶液(200mL)处理。分离出有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得了所需游离氨基吡嗪，为黄色固体(260mg，73％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.25(s，1H)，7.85(m，2H)，7.77(s，1H)，7.74(m，2H)，4.83(s，2H)
步骤4：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-(5-氨基吡嗪-2-基甲基)-异吲哚-1，3-二酮制得了所需产物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.38(s，1H)，8.29(s，1H)，8.03(s，1H)，7.86(m，2H)，7.76(m，2H)，6.81(m，2H)，4.98(s，2H)，3.91(s，3H)，2.31(s，3H)，LRMS(ESI，Positive)m/e 418.1(M+1).
化合物322：
1-(5-氨基甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
在室温，在塞上盖的反应瓶中，向1-[5-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基甲基)-吡嗪-2-基]-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲(16mg，38μmol)在380μL 95％EtOH和100μL DMF内的搅拌着的溶液中加入肼一水合物(3.8μL，76μmol)。在室温搅拌过夜后，形成了白色沉淀。过滤出沉淀，干燥，用EtOAc研制以除去基于邻苯二甲酰亚胺的杂质，获得了产物，为白色固体(7.9mg，72％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.54(s，1H)，8.80(s，1H)，8.46(s，1H)，8.02(s，1H)，6.93(d，1H)，6.79(d，1H)，4.51(d，2H)，4.39(br s，2H)，3.89(s，3H)，2.23(s，3H).LRLCMS(ESI，Positive)m/e 288.2(M+1).
化合物323：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(6-甲氧基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：2-氨基-6-甲氧基吡嗪。
向甲醇(89μL；2.2mmol)在二氧杂环己烷(1mL)内的搅拌着的溶液中加入氢化钠(53mg；2.2mmol)。搅拌30分钟后，加入2-氨基-6-氯吡嗪(258mg；2.0mmol)，将该反应加热至90℃。搅拌12小时后，将该反应冷却至室温，用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)和盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用Biotage 12i柱纯化粗产物，用己烷和乙酸乙酯(3∶1)洗脱，获得了白色固体(产率为11％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-6-甲氧基吡嗪制得了所需产物(产率为8％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.15(s，1H)，8.05(br s，1H)，7.92(s，1H)，7.82(s，1H)，6.89(d，1H)，6.80(d，1H)，4.05(s，3H)，3.81(s，3H)，2.38(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 289.10(M+1).
化合物324：
1-(6-苄氧基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-6-苄氧基吡嗪。
向苄基醇(432μL；4.0mmol)在二氧杂环己烷(2mL)内的搅拌着的溶液中加入氢化钠(96mg；4.0mmol)。搅拌30分钟后，加入2-氨基-6-氯吡嗪(258mg；2.0mmol)，将该反应加热至90℃。搅拌12小时后，将该反应冷却至室温，用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)和盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用Biotage 12i柱纯化粗产物，用己烷和乙酸乙酯(3∶1)洗脱，获得了白色固体(产率为33％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-6-苄氧基吡嗪制得了所需产物(产率为34％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.99(s，1H)，9.18(s，1H)，8.62(s，1H)，7.99(s，1H)，7.95(s，1H)，7.52(d，2H)，7.41(m，3H)，6.92(d，1H)，6 80(d，1H)，5.39(s，2H)，3.80(s，3H)，2.21(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 365.10(M+1).
化合物325：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(5-甲氧基-吡嗪-2-基)-脲
向1-(5-溴-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲(47mg；0.14mmol)在N-甲基吡咯烷酮(300μL)内的搅拌着的溶液中加入甲醇钠(0.5mmol)。将该反应加热至100℃。搅拌12小时后，将该反应冷却至室温，用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用0.5mm制备板纯化粗产物，用己烷和乙酸乙酯(1∶1)洗脱，获得了黄色固体(产率为13％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.12(s，1H)，7.99(s，1H)，7.91(s，1H)，6.80(dd，2H)，3.95(s，3H)，3.89(s，3H)，2.38(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 289.10(M+1).
化合物326：
1-(5-乙炔基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-5-炔基吡嗪。
向5-溴-2-氨基吡嗪(432mg；2.5mmol)、Pd(Ph3P)2Cl2(91mg；0.13mmol)、CuI(1.2g，6.5mmol)在三乙胺(8mL)内的搅拌着的溶液中加入TMS-乙炔。将该反应在60℃搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。在1mL甲醇和氢氧化钠(10mL 1N水溶液)中稀释粗产物。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 12L柱纯化粗产物，用二氯甲烷和甲醇(98∶2)洗脱，获得了灰白色固体(产率为40％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5-炔基吡嗪制得了所需产物(产率为20％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.25(s，1H)，9.80(br s，1H)，8.90(s，1H)，8.50(s，1H)，8.00(s，1H)，6.95(d，1H)，6.82(d，1H)，4.42(s，1H)，3.82(s，3H)，2.22(s，3H).
LRMS(ESI，正)m/e 283.10(M+1).
化合物327：
1-(5-乙基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-5-乙基吡嗪。
向5-乙炔基-2-氨基吡嗪(18mg；0.151mmol)在乙酸乙酯(500μL)内的搅拌着的溶液中加入三乙胺(63μL；0.45mmol)和Pd(OH)2(0.01mmoL；20％wt以碳为载体的催化剂)。将该反应置于45psi的氢气氛下，并振摇6小时。将该反应过滤，减压浓缩，获得了灰白色固体(产率为84％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5-乙基吡嗪制得了所需产物(产率为27％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，8.38(s，1H)，8.18(s，1H)，8.08(s，1H)，6.80(dd，2H)，3.92(s，3H)，2.81(q，2H)，2.39(s，3H)，1.39(t，3H).LRMS(ESl，正)m/e 287.21(M+1).
化合物328：
1-(5-氰基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-5-氰基吡嗪。
向5-溴-2-氨基吡嗪(1.0g，5.8mmol)、CuI(2.76g，14.5mmol)、18-冠-6(121mg；0.46mmol)、氰化钾(943mg；14.5mmol)在二甲基甲酰胺(20mL)内的搅拌着的溶液中加入Pd(PPh3)4(196mg；0.17mmol)。在室温搅拌20分钟后，将该反应在155℃的油浴中放置2小时。让该反应冷却至室温，然后倒入氯仿(300mL)中。过滤出所形成的沉淀，用己烷研制，获得了灰白色固体(产率为60％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5-氰基吡嗪制得了所需产物(产率为30％)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.89(s，1H)，8.79(s，1H)，8.05(s，1H)，6.91(d，1H)，6.80(d，1H)，3.85(s，3H)，2.22(s，3H).LR-MS(ESI，正)m/e 283.91(M+1).
化合物329：
1-(5-苯甲酰基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：5-苯甲酰基-吡嗪-2-甲酸。
向2-吡嗪甲酸(3.0g，24.2mmol)和苯甲醛(7.4mL；73mmol)在50％硫酸水溶液(40mL)和25mL乙酸内的搅拌着的冷的(0℃)溶液中同时加入FeSO4 7H2O(20.3g，73mmol溶解在50mL水中)和叔丁基过氧化物(9.2mL；73mmol)。搅拌1小时后，用200mL处理该反应。过滤出所形成的沉淀，并用二氯甲烷(3×100mL)洗涤，获得了黄褐色固体(产率为36％)。
步骤2：1-(5-苯甲酰基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲。向5-苯甲酰基-吡嗪-2-甲酸(912mg；4.0mmol)和三乙胺(584μL；4.2mmol)在甲苯(12mL)内的搅拌着的溶液中加入二苯基磷酰叠氮(860μL；4.0mmol)。将该反应搅拌30分钟，然后加入叔丁醇(764μL，8.0mmol)。将该反应加热至90℃，并搅拌3小时。将该反应冷却至室温，用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 40M柱纯化产物，用己烷和乙酸乙酯(1∶1)洗脱，获得了灰白色固体(产率为14％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.41(s，1H)，9.01(s，1H)，8 45(s，1H)，8.18(s，1H)，8.08(d，2H)，7.61(t，1H)，7.52(t，2H)，6.90(d，1H)，6.82(d，1H)，3.92(s，3H)，2.39(s，3H).LRMS(ESl，正)m/e 363.21(M+1).
化合物330：
1-[5-(羟基-苯基-甲基)-吡嗪-2-基]-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
向1-(5-苯甲酰基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲(22mg；0.061mmol)在甲醇(1mL)内的搅拌着的溶液中加入硼氢化钠(10mg；0.3mmol)。搅拌12小时后，将该反应用30mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。将滤液减压浓缩，获得了白色固体(产率为91％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.48(br s，1H)，8.39(s，1H)，8.22(s，1H)，8.12(s，1H)，7.25-7.45(m，5H)，6.89(d，1H)，6.80(d，1H)，5.85(d，1H)，3.88(s，3H)，2.37(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 365.24(M+1).
化合物331：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(6-苯基-吡嗪-2-基)-脲Suzuki法
步骤1：向2-氨基-6-氯吡嗪(400mg；3.1mmol)和苯基硼酸(415mg；3.4mmol)在二氧杂环己烷(6mL)和乙醇(3mL)内的搅拌着的溶液中加入碳酸铯(2.28g，7.0mmol在3mL水中的溶液)，然后加入Pd(PPh3)4(185mg；0.16mmol)。将该反应加热至75℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 40M柱纯化产物，用乙酸乙酯洗脱，获得了灰白色固体(产率为84％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-6-苯基吡嗪制得了所需产物(产率为33％)。
1H NMR(400MHz， CDCl3)δ11.11(br s，1H)，8.612(s，1H)，8.29(s，1H)，8.24(s，1H)，8.14(s，1H)，8.03(m，2H)，7.51(m，3H)，6.87(d，1H)，6.77(d，1H).LRMS(ESI，正)m/e 355.6(M+1).
化合物332：
1-(3-溴-5-苯基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-氨基-3-溴-5-苯基吡嗪。
向3，5-二溴-2-氨基吡嗪(200mg；0.79mmol)和苯基硼酸(106mg；0.87mmol)在二氧杂环己烷(4mL)和乙醇(2mL)内的搅拌着的溶液中加入碳酸铯(571mg；1.75mmol在2mL水中的溶液)，然后加入Pd(PPh3)4(46mg；0.04mmol)。将该反应加热至75℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 12L柱纯化产物，用己烷和乙酸乙酯(3∶1)洗脱，获得了灰白色固体(产率为88％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-3-溴-5-苯基吡嗪制得了所需产物(产率为18％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，8.09(s，1H)，7.63(d，2H)，7.59(m，3H)，6.85(dd，2H)，3.92(s，3H)，2.39(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 413.24152(M+1).
化合物333：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-(5-苯基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：2-氨基-5-苯基吡嗪。
向3-溴-5-苯基-2-氨基吡嗪(80mg；0.32mmol)在乙酸乙酯(1mL)内的搅拌着的溶液中加入三乙胺(139μL；1.0mmol)和Pd(OH)2(10mg；20％wt以碳为载体的催化剂)。将该反应置于45psi的氢气氛下，并振摇6小时。将该反应过滤，减压浓缩。使用biotage 12L纯化产物，用乙酸乙酯洗脱，获得了灰白色固体(产率为75％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-5-苯基吡嗪制得了所需产物(产率为25％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，8.22(s，1H)，8.18(s，1H)，7.63(m，2H)，7.59(m，3H)，7.28(br s，1H)，6.82(m，2H)，3.92(s，3H)，2.33(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 335.21(M+1).
化合物334：
1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-3-喹喔啉-2-基-脲
步骤1：向2-氯喹喔啉(1.0g，6mmol)中加入氨的甲醇溶液(8mL 2M溶液)。将该反应密封在瓶中，加热至80℃，搅拌12小时。将该反应冷却至室温，减压浓缩。把残余物置于二氯甲烷中并过滤。加入己烷直至形成沉淀，过滤出沉淀，经测定发现是所需产物(产率为5％)。
步骤2：依据制备化合物310所述的一般方法，使用喹喔啉-2-基胺制得了所需产物(产率为26％)。
1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ11.63(br s，1H)，10.59(br s，1H)，8.80(s，1H)，8.15(s，1H)，7.97(d，1H)，7.81(m，2H)，7.64(m，1H)，6.98(d，1H)，6.82(d，1H)，3.97(s，3H)，2.23(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 309.4(M+1).
化合物335：
1-(3，6-二甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-脲
步骤1：2-叠氮基-3，6-二甲基吡嗪。
向2-氯-3，5-二甲基吡嗪(1.0mL；8.3mmol)在二甲基甲酰胺(10mL)内的搅拌着的溶液中加入叠氮化钠(539mg；8.3mmol)。将该反应加热至100℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 12L柱纯化产物，用己烷和乙酸乙酯(3∶1)洗脱，获得了灰白色固体(产率为42％)。
步骤2：2-氨基-3，6-二甲基吡嗪。
向3-叠氮基-2，5-二甲基吡嗪(100mg；0.66mmol)在甲醇(800μL)内的搅拌着的溶液中加入12N HCl(100μL)和氯化锡二水合物(149mg；0.66mmol)。将该反应加热至60℃，并搅拌12小时。将该反应冷却至室温，用50mL乙酸乙酯稀释，并用10％碳酸钠水溶液(1×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，并过滤。使用biotage 12i柱纯化产物，用乙酸乙酯洗脱，获得了灰白色固体(产率为38％)。
步骤3：依据制备化合物310所述的一般方法，使用2-氨基-3，6-二甲基吡嗪制得了所需产物(产率为15％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(br s，1H)，8.01(s，1H)，6.82(m，2H)，3.92(s，3H)，2.59(s，3H)，2.55(s，3H)，2.38(s，3H).LRMS(ESI，正)m/e 287.20(M+1).
化合物336：
步骤1：2-甲氧基-4-甲氧基甲基-1-硝基-苯
向含有在30mL THF和30mL DMF内的5.4g(39mmol)3-甲氧基-4-硝基苄基醇的250mL圆底烧瓶中加入38g(117mmol，3当量)碳酸铯细粉，然后加入24mL(390mmol，10当量)碘甲烷。将该混合物在室温搅拌18小时，然后在100mL水与100mL乙醚之间分配。用乙醚(2×100mL)萃取水相，将合并的有机萃取液用盐水(2×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，经由短的二氧化硅塞过滤，并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用1∶1 EtOAc-己烷洗脱，获得了6.76g(88％)所需的甲基醚，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.84，(d，J＝8.2Hz，1H)7.10(s，1H)，6.94(d，J＝9.1Hz，1H)，4.51(s，2H)，3.98(s，3H)，3.44(s，3H).
步骤2：2-甲氧基-4-甲氧基甲基-苯基胺。
在250mL Parr装置内，在300mg 10％Pd/C存在下，将2.1g(10.6mmo1)2-甲氧基-4-甲氧基甲基-1-硝基-苯在40mL乙醇中以2atm氢化2.5小时。通过经由玻璃纤维滤器过滤来除去催化剂，将滤液浓缩，获得了1.61g(91％)产物，为浅黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.80(s，1H)，6.74(d，J＝7.8Hz，1H)，6.67(d，J＝7.8Hz)，4.35(s，2H)，3.86(s，3H)，3.78(br d，2H)，3.35(s，3H).MS ESI-pos，M+1＝168.1
步骤3：1-(2-甲氧基-4-甲氧基甲基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
一般二苯基磷酰叠氮偶联方法：向5-甲基吡嗪-2-甲酸(365mg，2.64mmol)在20mL无水甲苯内的溶液中加入二异丙基乙基胺(483μL，2.77mmol)，将该混合物在室温搅拌直至固体溶解。然后加入二苯基磷酰叠氮，将该溶液加热至90℃。20分钟后，氮气释放平息，将该酱色反应混合物冷却至60℃，然后加入2-甲氧基-4-甲氧基甲基苯胺在4mL甲苯中的溶液。在60℃搅拌6小时后，将该混合物冷却至室温，用20mL5％NH4OH稀释，用EtOAc(3×50mL)萃取。用20mL水和20mL盐水洗涤合并的萃取液，然后用MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法纯化纯化棕色残余物(用5％MeOH在CH2Cl2中的混合物洗脱)，获得了219mg(27％)所需产物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ11.36(s，1H)，9.47，(s，1H)8.40，(s，1H)，8.31(s，1H)，8.08(s，1H)，6.95(s，1H)，6.94(d，J＝7.8Hz，1H)，4.45(s，2H)，3.97(s，3H)，3.39(s，3H)，2.52(s，3H).MS ESI-posM+1＝303.2
化合物337：
1-(4-苄氧基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：4-苄氧基甲基-2-甲氧基-1-硝基-苯。
向碳酸铯细粉(8.0g，24.5mmol)的搅拌着的悬浮液中加入3-甲氧基-4-硝基苄基醇(1.5g，8.18mmol)，然后加入苄基溴(2mL，16.4mmol)。在室温搅拌18小时后，用100mL乙醚稀释该悬浮液，并依次用水(3×50mL)和50mL盐水洗涤。用MgSO4干燥有机相，经由二氧化硅塞过滤，并浓缩。通过快速色谱法纯化所得橙色油状物，用2∶1己烷-EtOAc洗脱，获得了1.87g(84％)所需的苄基醚。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.85(d，J＝8.2Hz，1H)7.3-7.4(m，5H)，7.26(s，1H)，6.97(d，J＝8.2Hz，1H)，4.61(s，2H)，4.59(s，2H)，3.96(s，3H).
步骤2：4-苄氧基甲基-2-甲氧基-苯基胺.
将4-硝基-3-甲氧基苄基苄基醚(2.2g，8.1mmol)和乙酸铵(2.46g，32mmol，4当量)在30mL MeOH中的溶液在0℃搅拌，分几批加入1.3g(20mmol，2.5当量)锌粉。1小时后，将该反应混合物在40mL水与40mL乙酸乙酯之间分配。用MgSO4干燥有机相，并浓缩。残余物不用进一步纯化直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.35(m，5H)，6.82(s，1H)，6.77(d，J＝6.3Hz，1H)，6.67(d，J＝7.8Hz，1H)，4.51(s，2H)，4.45(s，2H)，3.85(s，3H)，3.79(s，2H).MS ESI-pos，M+1＝244.2.
步骤3：1-(4-苄氧基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
依据上述对于化合物336所用的一般二苯基磷酰叠氮偶联方法进行制备。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ.11.36，(s，1H)，9 23(s，1H)，8.39(s，1H)，8.32(d，J＝7.8Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.38(m，5H)，6.97，(s，2H)，4.56(s，4H)，3.96(s，3H)，2.53(s，3H).).MS APCI-pos，M+1＝379.3
化合物338：
1-{4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：3-甲氧基-4-硝基-苄基溴。
在0℃，向含有在30mL THF内的10g(54.6mmol)4-硝基-3-甲氧基苄基醇的250mL圆底烧瓶中加入36g(109mmol，2当量)四溴化碳，然后加入15.9g(60mmol，1.1当量)三苯基膦。将该混合物在0℃搅拌3小时。除去溶剂后，通过快速色谱法纯化残余物，用10∶90 EtOAc-己烷洗脱，获得了11g(82％)产物，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.86(s，1H)，7.84(m，1H)，7.12(s，1H)，7.07(m，1H)，4.47(s，2H)，4.00(s，3H).
步骤2：N-苄基-N-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-胺。
向含有在20mL THF内的1.97g(8.0mmol)3-甲氧基-4-硝基-苄基溴的150mL圆底烧瓶中加入2.4g(24mmol，3当量)三乙胺，然后加入2.5g(24mmol，3当量)苄基胺。将该混合物在室温搅拌2小时，然后在50mL乙酸乙酯与盐水之间分配。用MgSO4干燥有机相，并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用1-4％MeOH在二氯甲烷中的混合物洗脱，获得了1.6g(73％)所需的苄基胺，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.84(d，J＝8.61Hz，1H)，7.34(m，5H)，7.16(s，1H)，6.99(d，J＝8.61Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.86(s，2H)，3.81(s，2H).
步骤3：苄基-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯。
向含有在2mL二氯甲烷内的0.92g(3.4mmol，1当量)N-苄基-N-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-胺的150mL圆底烧瓶中加入Boc酸酐(0.74g，3.4mmol，1当量)，然后在室温搅拌18小时。就该反应混合物在40mL水与40mL乙酸乙酯之间分配。用MgSO4干燥有机相，并浓缩。无需进一步纯化。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.81(d，J＝8.61Hz，1H)，7.2-7.3(m，6H)，6.93(m，1H)，6.82(s，1H)，4.39(m，4H)，3.88(s，3H)，1.53(s，9H).
步骤4-6：1-{4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
依据上面详细描述的制备化合物336所用的一般氢化方法将苄基-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯还原成相应的苯胺。所得苯胺粗产物如下所述用于偶联步骤：将5-甲基吡嗪-2-甲酸(34.5mg，0.25mmol)和加入的三乙胺(28mg，0.275mmol)在5mL无水甲苯中的溶液于室温搅拌直至固体溶解。加入二苯基磷酰叠氮(62mg，0.225mmol)，将该溶液在90℃加热20分钟。然后将反应容器转移到60℃的油浴中，加入所得苯胺(0.25mmol)在2mL甲苯中的溶液。在60℃搅拌4.5小时后，将该混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，依次用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。用MgSO4干燥有机相，过滤并浓缩，通过制备TLC纯化所得残余物，用5％MeOH在CH2Cl2中的混合物洗脱，获得了所需的脲。如下所述除去Boc基团：将在15mL CH2Cl2中的Boc保护的胺用3mLTFA处理，在室温搅拌3小时。用EtOAc(50mL)稀释该混合物，依次用20mL饱和碳酸氢钠和20mL盐水洗涤。然后用MgSO4将有机相干燥，过滤并浓缩，获得了所需的游离胺。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ11.35(s，1H)，9.68(s，1H)，8.41(s，1H)，8.28(d，J＝8.21Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.36(s，6H)，6.96(s，1H)，6 94(d，J＝8.21Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.84(s，2H)，3.81(s，2H)，2.52(s，3H)，2.13(s，1H).MS APCI-pos，M+1＝377.9
化合物339：
1-(2-甲氧基-4-甲基氨基甲基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1+2：(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯。
按照类似于上述制备类似的苄基衍生物化合物338的方法，用甲基胺将3-甲氧基-4-硝基-苄基溴烷基化，并将所得仲胺作为Boc衍生物保护起来。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.84(d，J＝8.61Hz，1H)，6.98(s，1H)，6.87(d，J＝8.61Hz，1H)，4.46(s，2H)，3.95(s，7H)，2.85(s，3H)，1.53(s，9H).
步骤3：(4-氨基-3-甲氧基-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯。
在250mL Parr装置内，在300mg 10％Pd/C存在下，将0.98g(3.5mmol)(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯在40mL乙醇中以2atm氢化15分钟。通过经由玻璃纤维滤器过滤来除去催化剂，将滤液浓缩，获得了粗产物，为浅黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.69(m，3H)，3.95(s，2H)，3.84(s，3H)，2.8(m，2H)，2.75(s，3H)，1.51(s，9H).
步骤4+5：1-(2-甲氧基-4-甲基氨基甲基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
按照制备化合物336所详述的一般二苯基磷酰叠氮偶联方法，将(4-氨基-3-甲氧基-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁基酯的溶液转化成脲。依据上述制备化合物338所用的方法除去Boc基团。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.91(s，2H)，8.78(s，1H)，8.21(s，1H)，8.07(d，J＝8.61Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.85(d，J＝8.61Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.59(s，1H)，2.42(s，3H)，2.26(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝301.8.
化合物340：
1-{4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：N-苄基-N-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-甲基-胺。
按照上述制备化合物338所用的方法，用3-甲氧基-4-硝基-苄基溴将N-甲基-苄基胺的溶液烷基化。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.83(d，J＝8.6Hz，1H)，7.35(s，4H)，7.26(s，1H)，7.17(s，1H)，7.01(d，J＝7.04Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.55(s，4H)，2.22(s，3H).
步骤2：4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基胺。硼化镍还原一般方法：在0℃，向氯化镍六水合物(820mg，3.45mmol)在12mL EtOH和3mL THF内的搅拌着的溶液中加入NaBH4(130mg，3.45mmol)。将所得黑色悬浮液在0℃搅拌，同时加入N-苄基-(3-甲氧基4-硝基-苄基)-甲基-胺在5mL THF中的溶液。几分钟后，用10分钟分批加入260mg NaBH4，然后让该反应混合物温热至室温。2小时后，TLC表明已完全转化成新的、极性更强的产物。此时，加入1.5mL 5％NH4OH，并将该反应搅拌约10分钟，直至黑色固体实现了粒状稠度。将该反应经由玻璃纤维滤器过滤，用THF洗涤。将澄清的滤液浓缩至约1/4体积，用30mL水稀释，用EtOAc(3×30mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取液，用MgSO4干燥，经由短的二氧化硅塞过滤，并真空浓缩，获得了575mg(65％)所需产物，为灰白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.2-7.4(m，5H)，7.85(s，1H)，6.85(s，1H)，6 74(d，J＝8.2Hz，1H)，6.66(d，J＝8.2Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.73(br.s.2H)3.49(s，2H)，3.45(s，2H)，2.18(s，3H).MS(APCI-pos)M+1＝256.9
步骤3：1-{4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
在50mL圆底烧瓶内，在氮气氛下，将5-甲基吡嗪-2-甲酸(250mg，1.8mmol)和二异丙基乙基胺(330μL，1.9mmol)在20mL甲苯中搅拌直至酸溶解。加入二苯基磷酰叠氮(523mg，1.9mmol)，就该反应加热至90℃。20分钟后，氮气释放平息，溶液颜色加深而变为酱色。将该反应冷却至65℃，加入4-[(苄基-甲基-氨基)-甲基]-2-甲氧基-苯基胺(486mg，1.9mmol)在5mL甲苯中的溶液。将该反应在65℃搅拌6小时，然后冷却至室温，用30mL EtOAc稀释，并用15mL 5％NH4OH洗涤。用EtOAc(2×20mL)萃取水层，用30mL盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩。通过快速色谱法纯化所得残余物，获得了285mg(40％)所需产物，通过用乙醚研制来进一步纯化。
Mp＝142-143℃.1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.33(s，1H)，9.51(s，1H)，8.41(s，1H)，8.27(d，J＝8.61Hz，1H)，8.08(s.1H)，7.2-7.4(m，5H)，6.96(d，J＝7.83Hz，1H)3.97(s，3H)，3.53(s，4H)，2.53(s，3H)，2.22(s，3H).13C NMR(400MHz，CDCl3)：δ153.70，149.03，147.48，147.4，145.99，138.73，137.38，134.81，129.19，128.42，127.16，121.89，119.81，111.05，104.49，94.98，87.22，61.81，56.37，42.5.MS(APCI-pos)M+1＝392.0.
化合物341：
1-(4-二甲基氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-二甲基-胺。
依据上述制备化合物338的方法，用二甲基胺处理3-甲氧基-4-硝基-苄基溴，获得了所需产物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，7.3(s，1H)，6.98(d，J＝8.6Hz，1H)，4.01(s，3H)，3.5(s，2H)，2.3(s，6H).
步骤2：4-二甲基氨基甲基-2-甲氧基-苯基胺。
依据上述制备化合物340所用的硼化镍方法，将(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-二甲基-胺还原成相应的苯胺，不用进行特征鉴定即用于下一步骤。
步骤3：1-(4-二甲基氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
依据上述制备化合物336所用的二苯基磷酰叠氮方法，将4-二甲基氨基甲基-2-甲氧基-苯基胺转化成(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。通过制备TLC纯化粗产物，用5％MeOH在CH2Cl2中的混合物洗脱。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ11.21(s，1H)，8.95(s，1H)，8.39(s，1H)，8.21(d，J＝7.83Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.01(s，1H)，6.89(d，J＝7.83Hz，1H)，3.98(s，3H)，3.92(s，2H)，2.26(s，3H)，2.24(s，6H).MS APCI-Pos，M+1＝316.0.
化合物342：
1-(4-氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：2-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮。在0℃，向含有在150mL THF内的10g(55mmol)4-硝基-3-甲氧基苄基醇的250mL圆底烧瓶中加入偶氮二甲酸二乙酯(8.03g，54.6mmol，1当量)和三苯基膦(15.0g，57.3mmol)，然后加入11.6g邻苯二甲酰亚胺(57.3mmol)。让该反应逐渐温热至室温并保持过夜。形成了白色沉淀，通过产率来收集沉淀。从乙腈中重结晶，获得了13.8g(81％)所需产物。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ7.79(m， 5H)，7.19(s，1H)，7.08(d，J＝8.80Hz，1H)，4.91(s，2H)，3.87(s，3H).
步骤2：2-(4-氨基-3-甲氧基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮。
在500mL Parr容器中，在250mg 10％Pd-C存在下，将2-(3-甲氧基-4-硝基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮(1.50g，4.80mmol)在100mL EtOH和30mL THF中的部分溶解的悬浮液以2.5atm氢化1小时。通过经由玻璃纤维滤器过滤除去催化剂，将该澄清的浅黄色滤液真空浓缩。用30mL乙醚洗涤该产物，通过抽滤来收集，获得了1.28g(95％)所需的苯胺，为浅绿色细小的针状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.82(m，2H)，7.81(m，2H)，6.93(s，1H)，6.9(d，J＝7.8Hz，1H)，6.63(d，J＝7.8Hz，1H)，4.74(s，2H)，3.84(s，3H).
步骤3：酰基叠氮化物一般偶联方法
1-[4-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基甲基)-2-甲氧基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
在50mL圆底烧瓶内，将5-甲基-吡嗪-2-甲酰叠氮(510mg，3.15mmol)在15mL无水甲苯中的溶液于氮气氛下搅拌。将该烧瓶浸在90℃的油浴中，当内温达到90℃时，有明显的氮气释放，并且该溶液的颜色开始变深。20分钟后，氮气释放平息，该溶液已变成了酱色。将该反应烧瓶转移到65℃的浴中，加入悬浮在甲苯(5mL)中的2-(4-氨基-3-甲氧基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮(884mg，3.15mmol)。将该反应在65℃搅拌6小时，然后冷却至室温。冷却至室温后，产物从溶液中沉淀出来，通过抽滤来收集沉淀。
当产物不从反应混合物中沉淀出来时，采用下述后处理：冷却至室温后，用5％NH4OH水溶液稀释该棕色溶液，用EtOAc萃取(3×)。用盐水洗涤合并的萃取液，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。然后通过快速色谱法纯化残余物，用合适的溶剂系统洗脱。
步骤4：1-(4-氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
在100mL圆底烧瓶内，在搅拌下，将1-[4-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基甲基)-2-甲氧基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲(620mg，1.48mmol)在22mL EtOH中的悬浮液于氮气氛下温热至70℃，加入肼一水合物(1.4mL)，将该反应在70℃搅拌。10分钟后，该反应已经变成了完全均匀的酱色溶液。几分钟后，产物开始从溶液中沉淀出来。20分钟后，将该反应冷却至室温，通过抽滤收集该白色固体产物。将含有某些邻苯二甲酰肼副产物的粗产物置于80mL EtOAc中，并且用水(3×20mL)洗涤。用30mL EtOAc反萃取洗涤液，用盐水洗涤合并的有机物，然后用MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，获得了400mg，(94％)所需的胺。
Mp＝168-169℃.1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.88(br.s，2H)，8.78(s，1H)，8.21(s，1H)，8.05(d，J＝8.2Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.85(d，J＝8.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.68(s，2H)，2.42(s，3H)1.80(br s，2H，NH2).MS(APCI-pos)M-17(-NH3)＝270.1 apci-neg M-1＝285.8
化合物342的烷基衍生物
化合物343：
将1-(4-氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲(0.25mmol，1.0当量)和1mL原甲酸三甲酯在4mL MeOH中的溶液于室温搅拌，加入噻吩-2-甲醛(2.5mmol，10当量)，将该混合物在80℃加热。18小时后，将该反应冷却至室温，并真空浓缩。将所得亚胺置于5mL无水MeOH中，在0℃搅拌。加入硼氢化钠(0.75mmol，3当量)，将该反应在0℃搅拌30分钟，然后用2mL水稀释，在50mL EtOAc与30mL饱和碳酸氢钠之间分配。用盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。如果需要的话，通过快速色谱法纯化产物，用合适的MeOH-CH2Cl2混合物洗脱。
1-(2-甲氧基-4-{[(噻吩-2-基甲基)-氨基]-甲基}-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10.01(s，2H)，8.79(s，1H)，8.23(s，1H)，8.17(d，J＝8.61Hz，1H)，7.59(d，J＝6.26Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.15(m，2H)，7.05(s，1H)，6.97(d，J＝8.61Hz，1H)，4.02(s，2H)，3.91(s，3H)，3.88(s，1H)，3.78(s，1H)，2.43(s，3H).
MS APCI-Pos没有可检测的分子离子。
化合物344：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用噻吩-3-甲醛进行制备。1-(2-甲氧基-4-{[(噻吩-3-基甲基)-氨基]-甲基}-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.92(s，2H)，8.78(s，1H)，8.21(s，1H)，8.07(d，J＝7.81Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.3(s，1H)，7.11(d，J＝4.88Hz，1H)，7.04(s，1H)，6.87(d，J＝7.81Hz，1H)，3.9(s，3H)，3.67(s，2H)，3.65(s，2H)，2.42(s.3H).MS APCI-Neg，M-1＝382.0.
化合物345：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用糠醛进行制备。1-(4-{[(呋喃-2-基甲基)-氨基]-甲基}-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1HNMR(400MHz，MeOD)：δ8.57(s，1H)，8.2(s，1H)，8.1(d，J＝8.61Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.03(s，1H)，6.88(d，J＝8.61Hz，1H)，6.36(s，1H)，6.27(s，1H)，3.96(s，3H)，3.74(s，2H)，3.71(s，2H)，2.48(s，3H).MS APCI-Neg，M-1＝366.0.
化合物346：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用呋喃-3-甲醛进行制备。1-(4-{[(呋喃-3-基甲基)-氨基]-甲基}-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1HNMR(400MHz，MeOD)：δ8.58(s，1H)，8.21(s，1H)，8.13(d，J＝7.83Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.05(s，1H)，6.91(d，J＝7.04Hz，1H)，6.5(s，1H)，3.97(s，3H)，3.78(s，2H)，3.69(s，2H)，2.49(s，3H).MSAPCI-Neg，M-1＝366.0
化合物347：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用2-甲氧基苯甲醛进行制备。
1-{2-甲氧基-4-[(2-甲氧基-苄基氨基)-甲基]-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1HNMR(400MHz，CDC13)：δ11.3(s，1H)，9.97(s，1H)，8.44(s，1H)，8.22(d，J＝7.83Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.28(m，2H)，7.06(s，1H)，6.88(m，3H)，4.08(s，1H)，3.93(s，5H)，3.81(s，5H)，2.5(s，3H).MSAPCI-Pos，M+1＝407.8.
化合物348：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用3-甲氧基苯甲醛进行制备。
1-{2-甲氧基-4-[(3-甲氧基-苄基氨基)-甲基]-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.57(s，1H)，8.20(s，1H)，8.11(d，J＝8.61Hz，1H)，7.22(t，J＝7.83Hz，1H)，7.04(s，1H)，6.91(m，3H)，6.83(d，J＝8.61Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.79(s，3H)，3.75(s，4H)，2.48(s，3H).MS APCI-Neg，M-1＝406.0
化合物349：
依据制备化合物343所述的一般方法，使用4-甲氧基苯甲醛进行制备。
1-{2-甲氧基-4-[(4-甲氧基-苄基氨基)-甲基]-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.91(s，2H)，8.78(s，1H)，8.21(s，1H)，8.07(d，J＝7.81Hz，1H)，7.25(d，J＝8.78Hz，2H)，7.03(s，1H)，6.88(m，2H)，3.89(s，3H)，3.73(s，3H)，3.62(s，2H)，3.6(s，2H)，2.42(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝407.9.
酰基衍生物
化合物350：
将1-(4-氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲(100mg，0.35mmol)在30mL THF和15mL碳酸氢钠水溶液中的溶液用3.7mmol(1.05当量)乙酰氯处理。将该两相反应混合物在室温剧烈搅拌，2小时后，用10mL水稀释，用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥，经由短的二氧化硅塞过滤。将滤液浓缩，用乙醚研制所得残余物。如果需要的话，通过快速色谱法进一步纯化，用合适的甲醇-CH2Cl2溶剂系统洗脱。
N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-乙酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.92(s，2H)，8.75(s，1H)，8.28(t，J＝5.87Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.07(d，J＝8.61Hz，1H)，6.92(s，1H)，6.78(d，J＝8.61Hz，1H)，4.19(s，1H)，4.18(s，1H)，3.87(s，3H)，2.4(s，3H)，1.85(s，3H)MS ESI-pos，M+1＝330.2.
化合物351：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用甲氧基乙酰氯进行制备。
2-甲氧基-N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-乙酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.51(s，2H)，8.34(s，1H)，7.89(t，J＝6.26Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.65(d，J＝7.83Hz，1H)，6.54(s，1H)，6.38(d，J＝7.83Hz，1H)，4.2(s，1H)，4.19(s，1H)，3.82(s，3H)，3.79(s，2H)，3.29(s，3H)，2.35(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝359.9.
化合物352：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用二甲基氨基-乙酰氯进行制备。
2-二甲基氨基-N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-乙酰胺
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.56(s，1H)，8.18(s，1H)，8.09(d，J＝7.83.Hz，1H)，6.97(s，1H)，6.86(d，J＝7.83Hz，1H)，4.37(s，2H)，3.94(s，3H)，3.03(s，2H)，2.47(s，3H)，2.3(s，6H).MS APCI-Neg，M-1＝370.9.
化合物353：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用2-(2-吡啶基)-乙酰氯进行制备。
N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-2-吡啶-2-基-乙酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.94(s，2H)，8.77(s，1H)，8.63(t，J＝5.87Hz，1H)，8.49(s，1H)，8.44(d，J＝6.26Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.08(d，J＝7.83Hz，1H)，7.7(d，J＝10.17Hz，1H)，7.35(q，J＝5.74Hz，1H)，6.87(s，1H)，6.79(d，J＝9.39Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.24(s，1H)，3.82(s，3H)，3.53(s，2H)，2.42(s，3H).MS APCI-Pos M+1＝407.1.
化合物354：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用2-(4-甲氧基苯基)乙酰氯进行制备。
N-{3-甲氧基-4-13-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-2-(4-甲氧基-苯基)-乙酰胺
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.94(s，2H)，8.77(s，1H)，8.54(t，J＝4.7Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.08(d，J＝7.83Hz，2H)，7.89(m，1H)，7.22(t，J＝7.83Hz，1H)，6.89(s，3H)，4.25(s，1H)，4.23(s，1H)，3.8(s，3H)，3.73(s，2H)，3.45(s，2H)，2.42(s，3H).MS(APCI-Pos)M+1＝436.2.
化合物355：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用苯甲酰氯进行制备。N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-苯甲酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.95(s，2H)，9.02(t，J＝5.48Hz，1H)，8.77(s，1H)，8.22(s，1H)，8.1(d，J＝8.61Hz，1H)，7.9(d，J＝7.83Hz，2H)，7.48(m，3H)，7.04(s，1H)，6.88(d，J＝10.17Hz，1H)，4.46(s，1H)，4.44(s，1H)，3.89(s，3H)，2.42(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝391.9.
化合物356：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用吡啶-2-甲酰氯进行制备。
吡啶-2-甲酸3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.94(s，2H)，9.29(t，J＝6.26Hz，1H)，8.77(m，1H)，8.65(m，1H)，8.21(s，1H)，8.05(m，3H)，7.61(m，1H)，7.07(s，1H)，6.89(d，J＝8.61Hz，1H)，4.47(s，1H)，4.45(s，1H)，3.88(s，1H)，2.42(s，3H).
MS APCI-Pos没有可检测的分子离子。
化合物357：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用烟酰氯进行制备。
N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-烟酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ10(s，2H)，9.26(t，J＝5.87Hz，1H)，9.11(s，1H)，8.82(s，1H)，8.77(d，J＝4.7Hz，1H)，8.27(s，2H)，8.16(d，J＝7.83Hz，1H)，7.58(m，1H)，7.09(s，1H)，6.95(d，J＝8.61Hz，1H)，4.53(s，1H)，4.51(s，1H)，3.95(s，3H)，2.47(s，3H).MS APCI-Pos，M-1＝397.9.
化合物358：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用异烟酰氯进行制备。N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-异烟酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.92(s，2H)，9.27(t，J＝5.87Hz，1H)，8.74(s，1H)，8.71(d，J＝6.3Hz，2H)，8.18(s，1H)，8.08(d，J＝8.6Hz，1H)，7.77(d，J＝6.3Hz，2H)，7(s，1H)，6.86(d，J＝8.6Hz，1H)，4.44(s，1H)，4.43(s，1H)，3.86(s，3H)，2.39(s，3H).
MS APCI-Pos没有可检测的分子离子。
化合物359：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用噻吩-2-甲酰氯进行制备。
噻吩-2-甲酸3-甲氧基4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基酰胺
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.96(s，2H)，9.03(t，J＝6.26Hz，1H)，8.78(s，1H)，8.22(s，1H)，8.11(d，J＝7.83Hz，1H)，7.82(d，J＝4.7Hz，1H)，7.77(d，J＝3.91Hz，1H)，7.16(d，J＝3.91Hz，1H)，7.03(s，1H)，6.88(d，J＝10.17Hz，1H)，4.43(s，1H)，4.42(s，1H)，3.89(s，3H)，2.42(s，3H).MS APCI-pos，M-1＝397.9.
化合物360：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用4-二甲基氨基-2-甲酰氯进行制备。
3-二甲基氨基-N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-苯甲酰胺
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.94(s，2H)，8.9(t，J＝5.87Hz，1H)，8.77(s，1H)，8.21(s，1H)，8.09(d，J＝8.61Hz，1H)，7.26(t，J＝7.83Hz，1H)，7.2(s，2H)，7.02(s，1H)，6.87(d，J＝8.61Hz，2H)，4.44(s，1H)，4.42(s，1H)，3.88(s，3H)，2.93(s，6H)，2.42(s，3H).MS APCI-pos，M+1＝434.9.
化合物361：
依据制备化合物350所述的一般方法，使用1-苯基-4-三氟甲基-1H-吡唑-3-甲酰氯进行制备。
1-苯基-4-三氟甲基-1H-吡唑-3-甲酸3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基酰胺。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.96(s，2H)，9.09(t，J＝6.26Hz，1H)，8.78(s，1H)，8.22(s，1H)，8.19(s，1H)，8.12(d，J＝7.83Hz，1H)，7.59(m，6H)，7.02(s，1H)，6.89(d，J＝8.61Hz，1H)，4.43(s，1H)，4.42(s，1H)，3.9(s，3H)，2.42(s，3H).MS TIC-pos M+1＝526.2.
磺酰化衍生物
化合物362：
制备1-(4-氨基甲基-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲(0.25mmol，1.0当量)、4-二甲基氨基吡啶(5mg)、二异丙基乙基胺(36mg，0.275mmol，1.1当量)在THF(5mL)中的溶液，加入噻吩-2-磺酰氯(0.275mmol，1.1当量)。将该混合物在室温搅拌24小时。将该反应混合物在EtOAc(75mL)与饱和碳酸氢钠之间分配。分离各层后。用水、饱和盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，用5％MeOH在二氯甲烷中的混合物洗脱，用乙醚研制，获得了纯产物。
噻吩-2-磺酸3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.96(s，2H)，8.77(s，1H)，8.33(t，J＝7.04Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.07(d，J＝7.83Hz，1H)，7.93(d，J＝4.7Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.18(t，J＝3.91Hz，1H)，6.9(s，1H)，6.8(t，J＝7.04Hz，1H)，4.05(s，1H)，4.03(s，1H)，3.85(s，3H)，2.51(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝433.9.
化合物363：
依据制备化合物362所述的一般方法，使用苯磺酰氯进行制备。
N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-苯磺酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.95(s，2H)，8.77(s，1H)，8.21(s，1H)，8.13(t，J＝6.26Hz，1H)，8.05(d，J＝8.61Hz，1H)，7.81(d，J＝7.04Hz，2H)，7.58(m，3H)，6.85(s，1H)，6.77(d，J＝8.61Hz，1H)，3.96(s，1H)，3.95(s，1H)，3.81(s，3H)，2.42(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝428.2.
化合物364：
依据制备化合物362所述的一般方法，使用2-三氟甲氧基苯磺酰氯进行制备。
N-[3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-2-三氟甲氧基苯磺酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.94(s，2H)，8.77(s，1H)，8.38(s，1H)，8.21(s，1H)，8.02(d，J＝8.61Hz，1H)，7.89(m，1H)，7.72(t，J＝7.83Hz，1H)，7.51(d，J＝7 83Hz，2H)，6.88(s，1H)，6.75(d，J＝10.17Hz，1H)，4.11(s，2H)，3.82(s，3H)，2.42(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝512.0
化合物365：
依据制备化合物362所述的一般方法，使用3-甲氧基苯磺酰氯进行制备。
2-甲氧基-N-{3-甲氧基-4-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基}-苄基}-苯磺酰胺
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.92(s，2H)，8.73(s，1H)，8.17(s，1H)，8.08(s，1H)，8.01(d，J＝7.83Hz，1H)，7.45(t，J＝7.83Hz，1H)，7.34(d，J＝7.83Hz，1H)，7.24(s，1H)，7.14(m，1H)，6.81(s，1H)，6.74(d，J＝7.83Hz，1H)，3.93(s，2H)，3.77(s，3H)，3 76(s，3H)，2.38(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝458.0
化合物366：
依据制备化合物362所述的一般方法，使用4-甲氧基苯磺酰氯进行制备。
4-甲氧基-N-{3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基}-苯磺酰胺
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.93(s，2H)，8.74(s，1H)，8.18(s，1H)，8.02(d，J＝8.61Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.69(d，J＝8.61Hz，2H)，7.05(d，J＝9.39Hz，2H)，6.81(s，1H)，6.74(d，J＝7.83Hz，1H)，3.88(s，2H)，3.79(s，6H)，2.39(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝458.2.
化合物367：
依据制备化合物362所述的一般方法，使用吡啶-2-磺酰氯进行制备。
吡啶-2-磺酸3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苄基酰胺
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.91(s，2H)，8.74(s，1H)，8.68(d，J＝4.7Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.99(m，2H)，7.86(d，J＝7.83Hz，1H)，7.6(s，1H)，6.86(s，1H)，6.74(d，J＝8.61Hz，1H)，4.1(s，2H)，3.80(s，3H)，3.32(s，1H)，2.38(s，3H).MS APCI-Pos，M+1＝428.9
其它优选的本发明化合物包括：
N-(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺(benzamine)；
N-(1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺；
N-(3-R-1-环己基甲基-吡咯烷-3-基)-3-甲氧基-4-[3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯甲酰胺；
1-[2-(2-二甲基氨基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3吡嗪-2-基-脲；
1-2-(3-二甲基氨基-丙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-[5-甲基-2-(吡啶-3-基甲氧基)-苯基]-脲；
1-[2-(2-二甲基氨基-1-二甲基氨基甲基-乙氧基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(2-S-1-甲基-吡咯烷-2-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-{5-甲基-2-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙氧基]苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-{5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(3-(S)-1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(3-(R)-1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-2-基甲氧基)苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-甲基-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-喹喔啉-2-基-脲；
1-[5-甲基-2-(哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-氟-2-(1-甲基-哌啶-3-基甲氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[5-氟-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-[4-氟-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-(2-甲氧基-4-甲基氨基甲基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；
1-(4-{[(呋喃-3-基甲基)-氨基]-甲基}-2-甲氧基-苯基)-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲；和
1-{2-甲氧基-4-[(4-甲氧基-苄基氨基)-甲基]-苯基}-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲。
实施例15
鉴定Chk1抑制剂
按照在1998年9月4日提交的第PCT/US98/18558号国际申请中描述的方法鉴定和克隆人Chk1 cDNA。将FLAG标记物插到具有全长Chk1的氨基末端的读框中。5′引物含有EcoRI位点—一个Kozak序列，并且还编码FLAG标记物以用M2抗体(Sigma，Saint Louis，IL)进行亲和纯化。3′引物含有SalI位点。将PCR扩增的片段克隆到作为EcoRI-SalI片段的pCI-Neo(Invitrogen，Carlsbad，CA)内，然后作为EcoRI-NotI片段亚克隆到pFastBacI(Gibco-BRL，Bethesda，MD)内。如Gibco-BRL Bac-to-Bac手册中所述制备重组杆状病毒，并用于感染在CCM3培养基(HyClone Laboratories，Logan，UT)中生长的Sf-9细胞，以表达FLAG标记的Chk1蛋白。
从杆状病毒感染的SF9细胞的冷冻团中纯化FLAG标记的Chk1蛋白。将冷冻的细胞团与等体积的含有下列组分的2×裂解缓冲液混合：100mM Tris-HCl pH 7.5、200mM NaCl、50mM B-甘油磷酸酯，25mM NaF、4mM MgCl2、0.5mM EGTA、0.2％TWEEN-20、2mM钒酸钠、2mM DTT和蛋白酶抑制剂混合物(Complete mini，BoehringerMannheim 2000 catalog#1836170)。然后用杜恩斯匀浆器的活动杵将细胞匀浆20次，并以48,400×g离心1小时。将M2亲和树脂依次用10倍柱体积的50mM甘油pH3.5、20mM Tris pH7.5、150mM NaCl(交替3次)和Tris NaCl洗液预洗涤。然后用25倍柱体积的20mM Tris pH7.5、150mM NaCl、0.1％TWEEN-20、1mM EGTA、1mM EDTA和1×Complete mini蛋白酶片洗涤该柱。然后将该澄清的裂解液在4℃与M2亲和树脂分批结合4小时。将树脂与裂解液的混合物倒入柱内，收集从头至尾的流出液。用10倍柱体积的20mM Tris pH 7.5、150mMNaCl和3mM N-辛基葡糖苷洗涤树脂。然后用6倍柱体积的冷的20mM Tris pH7.5、150mM NaCl、含有0.5mg/mL FLAG肽(Sigma，2000Catalog#F3290)的3mM N-辛基葡糖苷将FLAG标记的Chk1从柱上洗脱下来。收集3个级份，并分析FLAG标记的Chk1的存在。
使用蛋白激酶来开发Chk1激酶活性的测定，该测定使用100ng纯化的FLAG-Chk1(150pmol ATP/min)、20μm Cdc25C肽(H-leu-tyr-arg-ser-pro-ser-met-pro-glu-asn-leu-asn-arg-arg-arg-arg-OH)(SEQID NO：1)、400μm ATP、2μCi[32P]-gATP、20mM Hepes pH7.2、5mMMgCl2、0.1％NP40和1mM DTT。使用该测定来筛选大约100,000种小分子抑制剂。通过加入含有ATP的反应混合物来开始反应，并在室温进行10分钟。通过加入磷酸(150mM的终浓度)来停止反应，并转移到磷酸纤维素圆盘中。用150mM磷酸将该磷酸纤维素圆盘洗涤5次，并风干。加入闪烁液体，把圆盘在Wallac闪烁计数器中计数。该筛选实验鉴定了多种IC50值在1-100μM之间的Chk1抑制剂。
实施例16
Chk1激酶抑制剂是选择性的
测试本发明Chk1抑制剂对一种或多种其它蛋白激酶，即DNA-PK、Cdc2、酪蛋白激酶I(CKI)、Chk2、p38 MAP激酶、蛋白激酶A(PKA)和钙-钙调蛋白蛋白激酶II(CaM KII)的选择性。除Chk2以外，所有这些激酶的测定方法已经在文献中描述过，包括在2000年9月1日提交的第60/229,899号U.S.临时专利申请和在1994年1月21日提交的第08/184,605号U.S.专利申请，这两篇申请引入本文以供参考。化合物抗Chk2的活性是如下所述测定的：将128ng纯化的His-标记的Chk2与最高达100mM Chk1抑制剂在4mM ATP、1mCi[32P]g-ATP、20mMHepes pH7.5、5mM MgCl2和0.25％NP40存在下于室温培养20分钟。用终浓度为150mM的磷酸停止反应，将5/8该反应混合物转移到磷酸纤维素圆盘上。用150mM磷酸将圆盘洗涤5次，并风干。加入闪烁剂，使用Wallac β计数器计数放射性。p38 MAP激酶、PKA、CaM KII和Cdc2购自New England Biolabs，并且测定是依据制造商的教导，用4-50μM ATP和高达100μM的测试Chk1抑制剂浓度进行的。相对于其它酶，测试的所有抑制剂都表现出对于Chk1的至少5倍的选择性。
实施例17
Chk1抑制剂阻断细胞中的Chk1功能
作为对电离放射和一些化学DNA损伤剂的反应，Chk1被激活。在DNA损伤存在下，Chk1被激活，并且引起细胞周期停滞。在哺乳动物细胞中，对其特征了解最充分的由Chk1引起的细胞周期停滞是G2停滞。通过DNA损伤激活Chk1导致Cdc25C—通常在细胞进入有丝分裂时将细胞周期蛋白B/cdc2去磷酸化的双重特异性磷酸酶(Funari等人，Science，Sep.5，1997；277(5331)1495-7；Sanchez等人；Matsuoka等人；和Blasina等人)的磷酸化和失活。这种Cdc2活性的负调节引起细胞周期停滞，以在DNA损伤或未复制的DNA存在下阻止细胞进入有丝分裂。因此，抑制Chk1就使得细胞在DNA损伤或未复制的DNA存在下进入细胞周期。
为了确认Chk1抑制剂组织细胞中的Chk1功能，在基于细胞的分子测定中测试抑制剂。因为已表明哺乳动物Chk1在体外将Cdc25C磷酸化，这意味着其负调节细胞周期蛋白B/cdc2以作为对DNA损伤的反应，所以分析Chk1抑制剂增强细胞周期蛋白B/cdc2活性的能力。如下所述设计该实验：用800拉德照射HeLa细胞，在37℃培养7小时。因为这些细胞是功能p53负性的，所以它们只在G2中停滞。然后加入诺考达唑至浓度为0.5μg/mL，并在37℃培养15小时。加入诺考达唑是为了捕获经由G2停滞进入M的任何细胞。最后，加入Chk1抑制剂并培养8小时，收获细胞，裂解，使用细胞周期蛋白B1的抗体(New England Biolabs)按照制造商的指导说明免疫沉淀出等量的蛋白。然后通过测定组蛋白H1激酶活性来分析关于和细胞周期蛋白B有关的cdc2激酶活性的IP(Yu等人，J Biol Chem.Dec.11，1998；273(50)：33455-64)。结果表明，化合物29抵消了IR-引起的细胞周期蛋白B/Cdc2的失活。
此外，测试Chk1抑制剂是否废除如通过有丝分裂指数实验所测定的IR-引起的G2 DNA损伤关卡。如上所述处理HeLa细胞(大约1×106个)。通过离心收获细胞，用PBS洗涤一次，然后重新悬浮在2.5mL 75mM KCl中，并再次离心。然后将细胞在3mL新制备的冷的乙酸∶甲醇(1∶3)中固定，并在冰上培养20分钟。将细胞沉淀成团，抽吸出固定溶液，并重新悬浮在0.5mL PBS中。通过将100μL固定的细胞吸移到玻璃显微镜载玻片上，并用1ml固定溶液稀释样本来制备有丝分裂铺展。然后将载玻片风干，用Wrights染色剂(Sigma)染色1分钟，在水中洗涤一次，在50％甲醇中洗涤一次。通过存在凝缩的染色体和缺乏细胞核被膜来认定有丝分裂的细胞。在放射存在下，化合物12和29都表现出有丝分裂细胞数目的增加，这表明废除了IR-引起的G2停滞。
如通过FACS分析DNA含量所证实的那样，大概在DNA损伤存在下，废除IR-引起的G2关卡使得细胞能连续经过细胞周期。用800拉德的电离放射和浓度不断增加(最高达80mM)的某些Chk1抑制剂处理293T细胞。然后收获细胞，用5mL冷的70％乙醇在-20℃固定过夜。通过以1000×g离心10分钟让细胞成团，用1mL含有50mg/mL碘化丙锭和250mg/mL RNase的溶液在室温染色30分钟。然后使用BectonDickinson装置在FL2上通过FACS分析染色的细胞。这些实验证实，单独用放射和载体处理的细胞保持着在G2中的停滞，而用Chk1抑制剂处理的细胞分布在G1和S期。这些数据与上面的数据一起表明，在电离放射存在下，Chk1抑制剂使得细胞能够继续细胞周期。
实施例18
Chk1抑制剂增强癌症治疗的细胞杀死
为了检验抑制Chk1能增强DNA损伤剂的杀死作用的假说，将细胞在选择性Chk1抑制剂和放射或化学DNA损伤剂存在下培养。在含有5％CO2的湿润培养箱内，将以1000-2000个细胞/孔的密度铺在96-孔微量滴定板中的细胞在含有10％FBS、100u/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RMPI 1640中于37℃培养18小时。所测试的细胞包括HeLa、ACHN、786-0、HCT116、SW620、HT29、Colo205、SK-MEL-5、SK-MEL-28、A549、H322、OVCAR-3、SK-OV-3、MDA-MB-231、MCF-7、PC3、HL-60、K562和MOLT4。所有细胞系命名都是指人细胞系，并且是指下列细胞系：
用仅含有化疗药物或含有化疗药物与化合物12和29的培养基处理细胞。将细胞培养大约5天，然后通过确定3H-胸苷摄取水平来测定生长。化疗药物包括依托泊苷、阿霉素、顺铂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶(5-FU)。将细胞生长抑制至未处理对照细胞的90％所需的药物浓度定义为GL90。在低于100μM的浓度，化合物12和29将5-FU的杀死能力提高了2至10倍。
用另外的抗代谢药物，包括甲氨蝶呤、羟基脲、2-氯腺苷、氟达拉滨、氮杂胞苷和吉西他滨测试化合物2和12的增强这些治疗剂杀死作用的能力。结果发现，Chk1抑制剂增强了羟基脲、氟达拉滨、5-氮杂胞苷和甲氨蝶呤杀死细胞的能力，这意味着抑制Chk1与阻断DNA合成的组合导致这些治疗剂致细胞死亡的能力提高了。
此外，测试Chk1抑制剂增强放射杀死作用的能力。结果发现，在HeLa细胞中，化合物12和29将放射杀死能力提高了2-3倍。
实施例19
动物肿瘤模型
为了在小鼠中测试Chk1抑制剂增强5-FU杀肿瘤作用的能力，建立使用结肠癌细胞系的异种移植肿瘤模型。使用Colo205和HT29细胞(人结肠癌)来在6-8周大小的雌性胸腺Balb/c(nu/nu)小鼠中繁殖异种移植肿瘤。将小鼠保持在置于不含病原体的条件下的层流小室中，给它们喂养无菌食物，让它们可随意地获得水。在5％CO2湿润环境下，将细胞系在补充10％FBS、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1.5mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中生长至亚铺满。在CMF-PBS中制备单细胞悬浮液，将细胞浓度调节至1×108个细胞/mL。给小鼠在右胁腹或右腿处皮下(s.c.)接种总共1×107个细胞(100μL)。
将小鼠随机分配成4个治疗组(5只小鼠/组)，并在肿瘤达到75-100mg时使用(通常在接种后7-11天)。用游标卡尺测定肿瘤大小，使用下述经验公式估算肿瘤重量：肿瘤重量(mg)＝肿瘤长度(mm)×肿瘤宽度(mm)2/3.3。治疗包括i)100μL腹膜内(i.p)注射剂量为50mg/kg、100mg/kg或150mg/kg的5-FU。在用5-FU治疗的小鼠中观察到了依赖于剂量的肿瘤生长延迟。在实验期间，每隔一天测定一次肿瘤大小。
很明显，在不背离本发明实质和范围的情况下，可对本发明作很多改进和变化，正如前面所述，并且因而，仅应施加这样的限定，正如所附权利要求书所指出的那样。
机译： Chk1抑制剂芳基和杂芳基脲脲可用作放射增敏剂和化学增敏剂。
机译： 芳基和杂芳基脲Chk1抑制剂，用作放射增敏剂和化学增敏剂
机译： 芳基和杂芳基脲CHK1抑制剂，用作放射增敏剂和化学增敏剂。
